Zmodyfikowane pobieranie krwi z żył ogonowych myszy nieznieczulonych za pomocą próżniowego systemu pobierania krwi i lupy okularowej

Badanie to informuje o pobieraniu próbek krwi z żyły ogonowej u myszy przy użyciu systemu rurek do ekstrakcji próżniowej z lupą okularów. Nasza metoda jest łatwa do przećwiczenia i może być stosowana do powtórnego pobierania próbek krwi u myszy. Na początku mysz jest umieszczana w plastikowym uchwycie przytrzymującym.

Ogon jest czyszczony i przecierany 70% etanolem. Następnie operator zakłada lupę okularową, aby poprawić widoczność ogona myszy. Końcówka igły motylkowej jest następnie wprowadzana do jednej z rozszerzonych bocznych żył ogonowych, a krew jest zbierana do rurki próżniowej przez gumowy koniec igły motylkowej.

Na koniec igła jest usuwana, a proces pobierania krwi jest zakończony. Żyła ogonowa jest preferowanym miejscem do pobierania krwi. Ta metoda pobierania krwi wiąże się z minimalnymi obrażeniami myszy, jednak żyła ogonowa myszy jest bardzo cienka, więc czasami trudno ją przebić, tutaj opisujemy prostą metodę pobierania krwi z żyły ogonowej na myszach testowych laboratoryjnych przy użyciu systemu probówek do ekstrakcji próżniowej.

Ta metoda jest prosta i skuteczna i może być stosowana do wielokrotnego uzyskiwania wymaganej krwi u myszy. Procedura zostanie zademonstrowana przez dwóch członków naszego laboratorium, Xiaoyan Liu i Wusong Zou Na początek umieszczamy plastikowy uchwyt ograniczający, rurki próżniowe z gumowym korkiem i podwójnie spiczastą igłę oraz lupę okularów na sterylnej powierzchni. Następnie umieść mysz w plastikowym uchwycie ograniczającym.

Przednie i tylne łapy myszy powinny znajdować się w wygodnej pozycji. Aby uzyskać próbkę krwi, umyj ogon ciepłą wodą o temperaturze od 20 do 30 stopni Celsjusza, przetrzyj ogon wacikami nasyconymi 70% etanolem, aby rozszerzyć żyłę. Wybierz prawą lub lewą żyłę ogonową do pobrania krwi.

Chwyć delikatnie dolną część ogona i trzymaj ogon prosto podczas pobierania próbki krwi. Załóż lupę okularów, aby poprawić widoczność, aby ułatwić nakłucie żyły ogonowej. Włóż końcówkę igły motylkowej o rozmiarze 22 do jednej z bocznych żył ogonowych około połowy dystalnej od końcówki ogona pod kątem około 10 stopni, przesuwając się w kierunku podstawy ogona dla wielu próbek.

Zebrać krew do probówki do pobrania próżniowego, wkładając gumową końcówkę igły motylkowej do probówki do pobierania krwi próżniowej. Ogon myszy może być używany do kilku pobrań krwi, tak często, jak to konieczne, zgodnie z zatwierdzonym protokołem. Nie zawsze łatwo jest uzyskać wystarczającą objętość krwi z cienkiej i nisko przepływowej żyły ogonowej myszy za pomocą tradycyjnej metody.

Nasza metoda jest prosta i skuteczna i może być stosowana do wielokrotnego uzyskiwania odpowiedniej objętości krwi u myszy. Podaje się, że do 10% całkowitej objętości krwi można bezpiecznie usunąć ze zdrowego zwierzęcia w odstępach dwutygodniowych, dlatego za każdym razem pobierano około 175 mikrolitrów próbki krwi myszy zgodnie z zasadami etyki. Po drugie, ważne jest, aby wysunąć ogon, aby uniknąć jego ruchu w procesie pobierania krwi.

Aby uniknąć krzepnięcia krwi w igle, należy wybrać inną pozycję nakłucia, jeśli krew przestaje wypływać w ciągu 15 sekund. Za udane pobranie krwi uznano uzyskanie każdorazowo 175 mikrolitrów krwi. Maksymalne czasy nakłuwania ustalono na trzy próby.

Jeśli całkowita objętość krwi była mniejsza niż 175 mikrolitrów po trzecim nakłuciu, definiowano to jako nieudane pobranie krwi. Po pobraniu odpowiedniej objętości próbki należy wyjąć igłę z żyły i na krótko przyłożyć nacisk do miejsca wkłucia, aby zatrzymać krwawienie. Aby pobrać osocze, użyj probówek zawierających EDTA, antykoagulant, delikatnie odwróć probówkę kilka razy, aby wymieszać antykoagulant z krwią i umieść próbki pionowo na lodzie.

Obracać probówki do pobierania próbek krwi pełnej w wirówce z chłodzeniem przez 10 minut. Ekstrahować osocze, uważając, aby nie naruszyć warstw czerwonych i białych krwinek. Aby zebrać serynę, użyj probówek bez antykoagulantu.

Oba rodzaje próbek mogą być używane natychmiast lub przechowywane w temperaturze poniżej 80 stopni Celsjusza przez okres do jednego roku. Badanie to miało na celu zbadanie wyższości wielokrotnego pobierania próbek krwi z żyły ogonowej myszy za pomocą próżniowego systemu pobierania krwi i lupy okularowej. Grupa doświadczalna w porównaniu z konwencjonalną metodą pobierania krwi.

W grupie konwencjonalnej, składającej się odpowiednio z początkujących i ekspertów, pobrana objętość krwi i czas pobierania próbek były podobne między dwiema grupami dla ekspertów, jednak w grupie eksperymentalnej zaobserwowano zwiększoną objętość pobranej krwi i krótszy czas pobierania próbek w porównaniu z konwencjonalną grupą dla początkujących. Wyższy wskaźnik sukcesu zaobserwowano również w grupie eksperymentalnej w porównaniu z konwencjonalną grupą dla początkujących. Ta metoda pobierania krwi jest łatwa do opanowania i ma wysoki wskaźnik sukcesu.

Liczba nieudanych nakłuć może być zredukowana do poziomu porównywalnego z tradycyjną metodą. Co więcej, procedura ta powoduje tylko minimalne obrażenia u myszy, to tylko taśma ogonowa myszy bez potrzeby znieczulenia, dzięki czemu można uniknąć wpływu reakcji na stres w środkach znieczulających na próbkę krwi.