Name: Model interfejsu krew-mózg człowieka do badania przekraczania barier przez patogeny lub leki oraz ich interakcji z mózgiem (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-09T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Poznaj model interfejsu krew-mózg człowieka do badania transportu patogenów i leków przez barierę krew-mózg oraz ich interakcji z komórkami neuronalnymi.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie było wspierane przez wewnętrzne granty od Instytutu Pasteura, w tym grant Incitative (PTR 435) oraz przez grant "Contrat de Soutien à la Recherche" udzielony przez Sanofi Pasteur dla Institut Pasteur. A. da Costa był wspierany przez grant Sanofi-Pasteur, a Florian Bakoa jest laureatem grantu doktorskiego przyznanego przez ANRT (Association Nationale de la Recherche et de la Technologie). Jesteśmy wdzięczni pr Pierre-Olivierowi Couraud i dr Florence Miller za pomocne dyskusje.

Własnością intelektualną systemu były patenty, o których mowa w art. 32, 35 i 38.

W tym artykule pokazaliśmy, jak zbudować komórkowy interfejs krew/mózg, BBB-Minibrain, łącząc model BBB i hodowlę mieszanych komórek mózgowych mózgu (Minibrain) w jednym zestawie. System ten jest istotny z biologicznego punktu widzenia, łatwy w konfiguracji i obsłudze dla eksperymentatorów dobrze wyszkolonych w hodowli komórkowych.
Podobnie jak w przypadku każdego innego modelu BBB in vitro, wiarygodne wyniki można uzyskać, stosując drastyczną kontrolę szczelności bariery. Wkładki powinny być ...

Mózg jest oddzielony od krążenia ogólnoustrojowego przez nieprzepuszczalną strukturę, która ogranicza wymianę między miąższem mózgu a krwią, zwaną barierą krew-mózg (BBB). Zbudowany głównie z komórek śródbłonka mózgu, BBB dynamicznie oddziałuje z astrocytami, mikroglejem okołonaczyniowym i neuronami sąsiedniego miąższu mózgu. Trzy główne funkcje bariery krew-mózg to tworzenie i utrzymywanie homeostazy jonowej dla funkcji neuronalnych, zaopatrzenie mózgu w składniki odżywcze oraz ochrona przed toksycznymi urazami lub wnikaniem patogenów1,2, które przyczyniają się do utrzymania homeostazy mózgu i jego funkcji3. Bariera ta jest tak skuteczna, że tylko nieliczne leki mogą przekroczyć BBB4,5. Obecnie dostępne metody przewidywania, czy cząsteczka przejdzie przez barierę krew-mózg i dyfundują do mózgu, obejmują badania ex vivo materiału autopsyjnego, śledzenie obrazu w mózgu ochotników za pomocą MRI (rezonans magnetyczny) lub PET (pozycjonowa tomografia emisyjna) lub farmakodynamika i farmakokinetyczne badania przedkliniczne na zwierzętach6,7,8. Te techniki i modele mają pewne ograniczenia, takie jak ograniczona rozdzielczość PET i niska czułość MRI6,8, trudność w ilościowym określeniu cząsteczek (np. cząsteczek opartych na przeciwciałach), które słabo przenikają do mózgu7, a w przypadku badań przedklinicznych ich wysoki koszt i konieczność przeprowadzenia testów na zwierzętach.
Ostatni punkt jest ważny, ponieważ, zgodnie z zasadami 3R (zastąpienie, ograniczenie i udoskonalenie testów na zwierzętach), administracje regulacyjne poprosiły badaczy o pilne opracowanie naukowo dokładnej alternatywy dla eksperymentów na zwierzętach9,10,11,12,13,14,15.
W ciągu ostatnich dziesięcioleci zaproponowano kilka modeli BBB in vitro16,17,18 poprzez hodowlę na wkładkach membranowych komórek śródbłonka różnych gatunków, takich jak myszy, szczury, bydło i świnie. Jeśli chodzi o gatunek ludzki, rzadka i trudna dostępność komórek pierwotnych skłoniła naukowców do opracowania modeli ludzkich opartych na unieśmiertelnionych komórkach śródbłonka mózgu lub komórkach macierzystych pochodzenia ludzkiego19,20,21. Bariery te są właściwymi substytutami BBB in vitro, pod warunkiem, że wyrażają markery komórek śródbłonka, markery połączeń ścisłych, transportery wypływu, nośniki substancji rozpuszczonej, receptory i reagują na bodźce śródbłonka 20. Przebadano kilka modeli BBB wykorzystujących wkładki membrany filtracyjnej pokryte komórkami śródbłonka i innymi typami komórek (tj. astrocytami, neuronami lub perycytami22,23,24). Celem tych kokultur było zwiększenie cech fizycznych bariery krew-mózg poprzez wykorzystanie wydzielania rozpuszczalnych czynników przez astrocyty/neurony lub perycyty.
Niemniej jednak, żaden z tych modeli nie zawiera miąższu mózgu do badania i przewidywania losu kandydata na lek, gdy już przekroczy barierę. Dlatego naszym celem było zbudowanie komórkowego interfejsu krew/mózg, BBB-Minibrain, poprzez połączenie modelu BBB i kultury mieszanych komórek mózgowych w jednym zestawie. BBB-Minibrain wykorzystuje system hodowli składający się z porowatego filtra umieszczonego w studzience wielodołkowej płytki do hodowli komórkowej. Filtr jest pokryty komórkami hCMEC/D3, linią komórkową śródbłonka ludzkiego mózgu, która okazała się wysoce wiarygodna w testach na obecność narkotyków w BBB25,26,27, w celu utworzenia BBB. Minimózg, który jest współzróżnicowaną kulturą ludzkich neuronów i astrocytów pochodzących z linii komórkowej NTera/Cl2.D128,29 zmieszany razem z ludzką linią komórek mikrogleju CHME/Cl530 w stosunku odpowiadającym stosunkom mikrogleju do neuronów-astrocytów mózgu31, jest dobrze uprawiany na dnie płytki.
Oprócz badania przepływu leków przez barierę krew-mózg i ich losu w miąższu, interfejs krew-mózg w modelu celulo może być potężnym narzędziem do rozwiązania problemu wnikania patogenów do mózgu (neuroinwazyjność), dyspersji do mózgu (neurotropizm) i toksyczności (neurowirulencji), jaką mogą wywierać na komórki miąższowe mózgu. Badania nad neurowirulencją i inwazyjnością neuroinwazyjną przyniosłyby korzyści dzięki opracowaniu wydajnego modelu w celulo i byłyby korzystne w zastąpieniu modeli zwierzęcych. Korzystając z zestawu BBB-Minibrain32, zademonstrowaliśmy neuroinwazyjny fenotyp rzadkich mutantów wirusowych, które nagromadziły się we francuskim szczepie wirusa neurotropowego wirusa żółtej gorączki (tj. FNV-YFV33,34) użytym do przygotowania wycofanej żywej szczepionki YFV oraz przejścia neuroregeneracyjnej i neuroprotekcyjnej biomolekuły o nazwie Neurovita (zwanej dalej NV w manuskrypcie)35. Ponieważ NV nie przenika naturalnie przez błonę komórkową ani przez barierę krew-mózg, NV został połączony ze zmienną częścią (VHH) jednołańcuchowego przeciwciała lamy, które przenika przez błony biologiczne, w tym BBB, i działa jako cząsteczka penetrująca komórkę (CPM)36. Właściwość CPM VHH wydaje się zależeć od punktu izoelektrycznego i długości VHH37.
Ten test w celulo powinien umożliwić sortowanie cząsteczek, które potencjalnie mogłyby przekroczyć barierę krew-mózg przed przeprowadzeniem analizy farmakokinetycznej i farmakodynamicznej u zwierząt, a najlepiej w tym samym czasie, aby móc przewidzieć ich zachowanie w miąższu nerwowym. Ten system jest biologicznie istotny i łatwy do skonfigurowania i obsługi przez profesjonalistów dobrze wyszkolonych w hodowlach komórkowych26,29,30,38. Zainteresowanie takimi badaniami na celulo byłoby dwojakie: z jednej strony zmniejszenie kosztów badań przedklinicznych, a z drugiej ograniczenie stosowania testów na zwierzętach.

<table><tbody><tr><td>Płytki 12-dołkowe</td><td>Corning</td><td>3336</td><td></td></tr><tr><td>5-fluoro-2' deoksyurydyna</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>F0503</td><td></td></tr><tr><td>85mm Petri Dish</td><td>Sarstedt</td><td>83-3902-500</td><td></td></tr><tr><td>Anti-NF200</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>N4142</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-mercapto-etanol</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>CHME/Cl5</td><td>Unit&eacute; de Neuroimmunologie Virale</td><td>Na życzenie do Dr Lafon</td><td></td></tr><tr><td>CMC</td><td>Calbiochem</td><td>217274</td><td></td></tr><tr><td>Cytozyna &beta;-D-arabinofuranozyd</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>C1768</td><td></td></tr><tr><td>Ciemne płytki 96-dołkowe</td><td>Corning</td><td>3915</td><td></td></tr><tr><td>DMEM F12</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>31330-038</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Endogro IV</td><td>Millipore</td><td>SCME004</td><td>pożywka z komórek śródbłonka</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Carlo Erba</td><td>529121</td><td></td></tr><tr><td></td><td>FBS Hyclon</td><td>SV30015-04</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyd</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>252549</td><td></td></tr><tr><td>GIEMSA Diagnostyka</td><td>RAL</td><td>320310</td><td></td></tr><tr><td>Koza-Anty Mysz</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>115-545-003</td><td></td></tr><tr><td>Koza-Anty Królik</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>R37117</td><td></td></tr><tr><td>HBSS z Ca2+-Mg2+</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>14025-100</td><td></td></tr><tr><td>hCMEC/D3</td><td>Cedarlane</td><td>CLU512</td><td></td></tr><tr><td>Hepes 1M</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>15630-070</td><td></td></tr><tr><td>Hoescht 33342</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>33263</td><td></td></tr><tr><td>Laminine</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>L6274</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamina</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Lucyfer Żółty</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>L0259</td><td></td></tr><tr><td>MEM 10X</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>21430</td><td></td></tr><tr><td>MEM 1X</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>42360</td><td></td></tr><tr><td>Ntera/Cl2D.1</td><td>ATCC</td><td>CRL-1973</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehydowa</td><td>mikroskopia elektronowa Sciences</td><td>15714</td><td></td></tr><tr><td>PBS bez Ca2+-Mg2+</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>PBS-Ca2+-Mg2+</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>14040-091</td><td></td></tr><tr><td>Długopis/paciorkowiec</td><td>Eurobio</td><td>CXXPES00-07</td><td></td></tr><tr><td>Poly-d-Lizyna</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>P1149</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Gold</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>P36930</td><td></td></tr><tr><td>Qiashredder</td><td>QIAGEN</td><td>79656</td><td></td></tr><tr><td>Kolagen szczurzy I</td><td>Cultrex</td><td>3443-100-01</td><td></td></tr><tr><td>Kwas retinowy All-Trans</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>R2625</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do oczyszczania</td><td>RNA QIAGEN</td><td>74104</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>L4509</td><td></td></tr><tr><td>Wodorowęglan sodu 5,6%</td><td>Eurobio</td><td>CXXBIC00-07</td><td></td></tr><tr><td>Pirogronian sodu</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>11360</td><td></td></tr><tr><td>T75 Cell+ Kolba</td><td>Sarstedt</td><td>83-1813-302</td><td>Kolba polistyrenowa do hodowli tkankowych ze specjalną obróbką powierzchniową (Cell+) do wrażliwych komórek przylegających</td></tr><tr><td>Transwell</td><td>Corning</td><td>3460</td><td>Poliestrowe porowate wkładki do hodowli</td></tr> membranowych <tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>T3924</td><td></td></tr><tr><td>Ultra czysta woda</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>10977-035</td><td></td></tr><tr><td>Uridine</td><td>Merck-Sigma Aldrich</td><td>U3750</td><td></td></tr><tr><td>Versene</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>15040-033</td><td>EDTA</td></tr><tr><td>YFV-FNV</td><td>IP Dakar</td><td>Fiolka</td><td></td> szczepionki Dakar</tr></tbody></table>

model interfejsu krew-mózg człowieka do badania przekraczania barier przez patogeny lub leki oraz ich interakcji z mózgiem

A Human Blood-Brain Interface Model to Study Barrier Crossings by Pathogens or Medicines and Their Interactions with the Brain

Wczesne badanie przesiewowe leków dla układu nerwowego na odpowiednim i wiarygodnym modelu BBB w celulonie pod kątem ich penetracji i interakcji z barierą i miąższem mózgu jest nadal niezaspokojoną potrzebą. Aby wypełnić tę lukę, zaprojektowaliśmy model 2D z celulo, BBB-Minibrain, łącząc kulturę z poliestrowej porowatej membrany z ludzkim modelem BBB z Minimózgiem utworzonym przez trójkulturę ludzkich komórek mózgowych (neuronów, astrocytów i komórek mikrogleju). BBB-Minibrain pozwolił nam przetestować transport kandydata na lek neuroprotekcyjny (np. Neurovita) przez barierę krew-mózg, aby określić specyficzne ukierunkowanie tej cząsteczki na neurony i pokazać, że właściwości neuroprotekcyjne leku zostały zachowane po przekroczeniu bariery krew-mózg. Wykazaliśmy również, że BBB-Minibrain stanowi interesujący model do wykrywania przechodzenia cząsteczek wirusa przez barierę komórek śródbłonka i monitorowania infekcji Minibrain przez neuroinwazyjne cząsteczki wirusa. BBB-Minibrain to niezawodny system, łatwy w obsłudze dla badaczy przeszkolonych w technologii hodowli komórkowych i przewidujący fenotypy komórek mózgowych po leczeniu lub zniewadze. Zainteresowanie takimi badaniami na bazie celulo byłoby dwojakie: z jednej strony wprowadzenie etapów zmniejszania ryzyka na wczesnym etapie opracowywania leku, a z drugiej strony ograniczenie stosowania testów na zwierzętach.

BBB-Minibrain jest modelem eksperymentalnym in cellulo interfejsu krew-mózg.
BBB-Minibrain jest przygotowany na systemie wkładów hodowlanych z membrany poliestrowej, aby naśladować przedział naczyniowy na poziomie górnym oraz przedział mózgu na poziomie dolnym interfejsu krew-mózg (Rysunek 2A,B). Składa się on z przedziału luminalnego z komórkami śródbłonka hCMEC/D3...

Tutaj prezentujemy protokół opisujący ustawienie systemu hodowli z porowatej membrany poliestrowej BBB (bariera krew-mózg) w celulonowym systemie hodowli w celu oceny transportu biomolekuł lub czynników zakaźnych przez ludzki BBB i ich fizjologicznego wpływu na sąsiednie komórki mózgowe.

Model interfejsu krew-mózg człowieka do badania przekraczania barier przez patogeny lub leki oraz ich interakcji z mózgiem

The early screening of nervous system medicines on a pertinent and reliable in cellulo BBB model for their penetration and their interaction with the ...

Ten model interfejsu krew-mózg jest przydatny do badania transferu cząsteczek do układu nerwowego. Jak również do badania drobnoustrojów dotrzeć do zakażonego guza bólu mózgu. Dodanie mini mózgu do tej bariery krew-mózg lub modelu BBB pozwala na badanie naszych patogenów i cząsteczek, które powodują zachowanie bariery krew-mózg w mózgu.Demonstracją procedury będzie Florian Bakao, doktorant z mojego laboratorium. Aby skonfigurować urządzenie do wstawiania mini hodowli z membraną poliestrową BBB mózgu, rozcieńczyć komórki do pięć razy 10 do czwartej komórki na stężenie intezy niekompletnej pożywki komórek śródbłonka i dodać odpowiednią objętość komórek do każdej wkładki do hodowli z membrany poliestrowej na płytce 12-dołkowej. Następnie umieść wkładki i inkubator do hodowli komórkowych, aż komórki osiągną 100% zbieżność.Trzymaj 12-dołkową płytkę z jednym mililitrem poli-D-lizyny przez cztery godziny w temperaturze pokojowej. Następnie jeden mililitr lamininy na studzienkę przez noc. Zastąp lamininę jednym mililitrem pożywki z komórek śródbłonka uzupełnionej 5% płodową surowicą bydlęcą lub FBS.Umieść to miejsce w inkubatorze na godzinę. Aby przygotować mini ziarno, delikatnie trypsynizuj astrocyty ludzkich neuronów w klonowaniu CHME pięciu komórek. Powiąż granulki komórkowe z kompletną pożywką komórkową śródbłonka.Po policzeniu 3,6 razy 10 do piątego neuronu i astrocytów do 0,4 razy 10 do piątego klonu CHME, pięć komórek na studzienkę ma 12-dołkową płytkę. I wysiej 12-dołkową płytkę. Aby skonstruować mini mózg BBB, 24 godziny po wysiewie zastąp zużytą pożywkę świeżą, kompletną pożywką komórkową śródbłonka i przenieś wkładki hodowli z błony poliestrowej pokrytej mikronaczyniowymi komórkami śródbłonka mózgu na mini komórki mózgowe.Następnie umieść urządzenie BBB many brain w inkubatorze. Aby potwierdzić przepuszczalność śródbłonka mózgu w kształcie litery BBB, dodaj 1,5 mililitra bufora transportowego na studzienkę do nowej płytki 12-dołkowej. I odwróć każdy filtr do góry nogami, aby ostrożnie usunąć pożywkę bez wpływu na barierę komórkową śródbłonka.Umieść każdy filtr w jednej studzience płyty wypełnionej buforem transportowym i dodaj 0,5 mililitra żółtego Lucyfera do każdej studzienki. Następnie umieść płytkę w inkubatorze na 10 minut przed przeniesieniem filtrów do nowej 12-dołkowej płytki wypełnionej buforem transportowym. Po skonfigurowaniu urządzenia z wieloma mózgami BBB, jak pokazano, dodaj 3500 jednostek platformowych francuskiego szczepu wirusa neurotroficznego wirusa żółtej gorączki rozcieńczonego i 50 mikrolitrów pożywki z komórkami śródbłonka 2% FPS, bardzo ostrożnie, na wierzchu przedziału luminalnego.Zaszczep kontrolny mini mózg BBB za pomocą 50 mikrolitrów 2% pożywki z komórek śródbłonka FBS bez wirusa. Następnie umieść w inkubatorze na 24 godziny urządzenie do wystawiania wirusa na krew-mózg wielu mózgów. Następnego dnia usuń wkładki, aby określić przepuszczalność komórek śródbłonka i towarzysza, tak jak pokazano.Zachowaj jeden mililitr próbki z każdej studzienki, aby określić miano wirusa w środkowej komorze. Delikatnie pod wkładką, aby uniknąć przeciekania komory oświetleniowej do komór abluminalnych. Aby zbadać transport neuronu ukierunkowanego biomolekularnie przez barierę krew-mózg, dodaj interesującą biocząsteczkę do wkładek i włóż płytkę z powrotem do inkubatora hodowli komórkowych.Po 24 godzinach zdalnie wstawia się i określa przepuszczalność śródbłonka. Następnie wybarwić wiele komórek mózgowych odpowiednim przeciwciałem w celu wykrycia obecności interesującej nas biocząsteczki w mini mózgu. Ludzkie mikronaczyniowe komórki śródbłonka mózgu wyrażają wszystkie podzbiory odbiorników, transporterów Efflux lub transporterów, które są kluczowymi białkami istotnymi dla ich funkcji biologicznych.Niektóre francuskie szczepy wirusa neurotropikalnego wirusa żółtej febry mogą przekroczyć barierę krew-mózg w ciągu 24 godzin. Wirusy następnie namnażają się przez następne dwa dni poprzez namnażanie się wirusa wewnątrz komórek mózgowych. Co więcej, ekspresja specyficznych biomarkerów wirusowych jest stymulowana, gdy ta neuroinwazyjna populacja wirusów jest seryjnie pasażowana na mini komórkach mózgowych i ściśle koreluje z wiremią.Po dodaniu do limitu cząsteczki penetrującej komórki przedziału, Neuro-Tag Neurovita przekracza barierę krew-mózg i jest w stanie celować w ludzkie neurony. Cząsteczka penetrująca komórkę neuro tag Delta neurovita przenika przez barierę komórkową śródbłonka, ale mniej skutecznie celuje w ludzkie neurony. Po dodaniu do małego środkowego przedziału, penetrująca komórki cząsteczka Neuro-Tag Neurovita przekracza barierę krew-mózg i jest w stanie zregenerować aksony ludzkich neuronów po zranieniu.W przeciwieństwie do cząsteczki penetrującej komórki Neuro-Tag Neurovita Delta, nieaktywna forma Neurovita. Neuro-Tag Neurovita, zastosowana po zaszczepieniu w aksonie drapiącym komórki, wyzwala neuroochronę uszkodzonych neuronów i regenerację strefy X. Wyłącznie ze względu na dobre praktyki.nie nadużywaj przejść I-komórkowych. Staraj się zachować pozory pożywki i regionów i sprawdź, czy nie ma mykoplazmy. Interakcje między mini mózgiem a lekami są drobnoustrojami będącymi przedmiotem zainteresowania, które mogą być dalej badane za pomocą transkryptu, który chemizuje to lub klasycznej biologii zwanej technikami.

a-human-blood-brain-interface-model-to-study-barrier-crossings

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

W tym filmie opisujemy kompleksowy protokół do stworzenia modelu in vitro naśladującego barierę krew-mózg. Model ten jest obiecujący, jeśli chodzi o zrozumienie sposobu dostarczania środków terapeutycznych w leczeniu guzów mózgu.

Bariera nowotworowa krew-mózg lub model BBTB: adaptacja bariery krew-mózg lub model BBB w celu oceny dostarczania leków do guza

Ten film przedstawia model in vitro do badania patogenów przekraczających barierę krew-mózg (BBB). Komórki śródbłonka mikronaczyniowego, które wyrażają ścisłe połączenia, tworzą warstwę śródbłonka w górnej komorze, podczas gdy neurony, astrocyty i mikroglej reprezentują miąższ mózgu w dolnej komorze, oddzielony porowatą błoną. Zakażenie wirusem w modelu BBB naśladuje patogen przechodzący z krwi do mózgu. Po wprowadzeniu wirusa neurotropowego przenika on przez barierę krew-mózg poprzez...

Model in vitro do badania przenikania patogenów przez barierę krew-mózg i infekcji komórek mózgowych

Stworzenie ludzkich modeli bariery krew-mózg (BBB) może przynieść korzyści badaniom nad chorobami mózgu związanymi z niewydolnością bariery krew-mózg. Opisujemy tutaj ulepszoną technikę przygotowania kontaktowego modelu BBB, która umożliwia kokulturację ludzkich astrocytów i komórek śródbłonka mózgu po przeciwnych stronach porowatej błony.

Ulepszona metoda przygotowania opartego na komórkach ludzkich, kontaktowego modelu bariery krew-mózg

Tutaj opisujemy model ludzkiej bariery krew-mózg, umożliwiający badanie transmigracji limfocytów do ośrodkowego układu nerwowego in vitro.

Analiza wynaczynienia limfocytów przy użyciu modelu in vitro ludzkiej bariery krew-mózg

Izolowane naczynia włosowate mózgu z ludzkiej tkanki mózgowej mogą być użyte jako model przedkliniczny do badania funkcji bariery w warunkach fizjologicznych i patofizjologicznych. Tutaj przedstawiamy zoptymalizowany protokół izolowania naczyń włosowatych mózgu od świeżej ludzkiej tkanki mózgowej.

Izolacja naczyń włosowatych mózgu ze świeżej ludzkiej tkanki mózgowej

Ludzka bariera krew-mózg selektywnie zapobiega przenikaniu hydrofilowych cząsteczek i patogenów do mózgu. Kilka patologii, w tym zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych i majaczenie pooperacyjne, wiąże się ze zwiększoną przepuszczalnością bariery krew-mózg. W tym miejscu opisujemy model hodowli komórek śródbłonka w celu zbadania przepuszczalności bariery przez przenikanie drobnoustrojów.

Analiza przepuszczalności bariery krew-mózg przez przenikanie drobnoustrojów przez komórki śródbłonka mikronaczyniowego

Bariera krew-mózg (BBB) to wielokomórkowa jednostka nerwowo-naczyniowa ściśle regulująca homeostazę mózgu. Łącząc ludzkie iPSC i technologie narządów na chipie, stworzyliśmy spersonalizowany chip BBB, odpowiedni do modelowania chorób i przewidywania penetracji leków do OUN. Opisano szczegółowy protokół generowania i działania chipa BBB.

Generacja ludzkiego chipa bariery krew-mózg opartego na iPSC

Ten protokół opisuje metodę tworzenia ludzkiej bariery krew-mózg (BBB) w modelu in vitro. Komórki śródbłonka i perycyty są wysiewane po obu stronach wkładki filtracyjnej (przedział krwi), a astrocyty są wysiewane w dolnej studzience (przedział mózgowy). Scharakteryzowany model wykorzystano w eksperymentach z transportem nanocząstek.

System potrójnej hodowli komórkowej modelujący ludzką barierę krew-mózg

Ten raport zawiera protokoły montażu, hodowli komórek i testów na platformie μSiM do budowy modeli bariery krew-mózg.

Wykorzystanie platformy tkankowej bariery mikroSiM (μSiM) do modelowania bariery krew-mózg

Bariera krew-mózg (BBB) odgrywa kluczową rolę w utrzymaniu stabilnego i zdrowego środowiska mózgu. Dysfunkcja bariery krew-mózg jest związana z wieloma chorobami neurologicznymi. Opracowaliśmy trójwymiarowy model bariery krew-mózg pochodzący z komórek macierzystych, aby zbadać patologię naczyń mózgowych, integralność bariery krew-mózg oraz sposób, w jaki bariera krew-mózg jest zmieniona przez genetykę i chorobę.

Rekonstrukcja bariery krew-mózg in vitro w celu modelowania i terapeutycznego ukierunkowania choroby neurologicznej

Ten protokół opisuje niezawodny i skuteczny model in vitro bariery mózgowo-krwiennej. Metoda wykorzystuje mysie komórki śródbłonka naczyniowego mózgu bEnd.3 i mierzy transbłonowy opór elektryczny.

Zapis integralności funkcjonalnej bariery na komórkach śródbłonka naczyniowego bEnd.3 poprzez transśródbłonkową detekcję oporu elektrycznego

Poznaj model interfejsu krew-mózg człowieka do badania transportu patogenów i leków przez barierę krew-mózg oraz ich interakcji z komórkami neuronalnymi.

Model interfejsu krew-mózg człowieka do badania przekraczania barier przez patogeny lub leki oraz ich interakcji z mózgiem

Przeglądaj więcej filmów