Name: Ortotopowe modele ksenoprzeszczepów pobrane od pacjentów dla ludzkiego raka urotelialnokomórkowego i raka jelita grubego, wzrostu guza i spontanicznych przerzutów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: Poznaj metodę tworzenia ortotopowych modeli ksenoprzeszczepów pobranych od pacjentów z rakiem urotelialnym i jelita grubego u myszy NOD/SCID. Technika ta umożliwia badanie wzrostu guza i przerzutów.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Autorzy dziękują Brianowi Reuterowi, Danielle Bertoni, Peterowi Millerowi i Shannon McChesney, którzy pomogli zainicjować te badania, za ich doskonałe wsparcie techniczne. Autorzy dziękują również Heather Green Matrana, Margaret Variano, Sunil Talwar i Marii Latsis za pomoc w wyrażeniu zgody na pacjentów i dostarczeniu próbek guza.

Wszystkie metody opisane w tych badaniach na zwierzętach zostały przeprowadzone zgodnie z zatwierdzonymi wytycznymi Instytucjonalnego Komitetu ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt Ochsner Health System oraz zgodnie z wytycznymi badań na zwierzętach. Wszystkie guzy pacjentów do tego badania zostały pobrane od pacjentów, którzy wyrazili zgodę na operacje resekcji raka, zgodnie z Radą Śledczą ds. Systemu Opieki Zdrowotnej Ochsner i standardami etycznymi Instytucjonalnego Komitetu ds. Eksperymentów na Ludziach. Certyfikowani patolodzy z Ochsner Health System określili diagnozy patologiczne próbek pacjentów na podstawie mikroskopijnych cech komórek nowotworowych, ich typu histologicznego i stopnia zaawansowania.
UWAGA: Poniższy protokół opisuje kroki dla dwóch oddzielnych modeli ksenoprzeszczepów, model UCC poprzez elektrokauteryzację ściany pęcherza moczowego w celu wkroplenia komórek UCC oraz doodbytnicze wstrzyknięcie komórek CRC do badania w modelu CRC. Wszystkie etapy przygotowania i monitorowania eksperymentów są identyczne dla obu modeli, natomiast sekcje 7 i 8 szczegółowo opisują procedurę odpowiednio wkraplania UCC i wstrzyknięcia CRC.
1. Hodowla linii komórkowych
<ol>
	<li>Hoduj komórki HK w kompletnym pożywce RPMI-1640 uzupełnionej 10% płodową surowicą bydlęcą, 2 nM glutaminą, 100 U/ml penicyliny G i 100 mg/ml streptomycyny w temperaturze 37 °C w 5% nawilżanym inkubatorzeCO2. 
	UWAGA: Komórki HK są normalnymi ludzkimi pęcherzykowymi komórkami dendrytycznymi i mogą być hodowane i namnażane przez ≤ 15 pasaży in vitro16.</li>
	<li>Aby przygotować się do eksperymentu, trypsynizuj komórki.
	<ol>
		<li>Usuń pożywkę i dodaj 2 ml 1% trypsyny do zbilansowanego roztworu soli Hanka (HBSS) do komórek. Umieścić komórki z powrotem w inkubatorze z wilgotnością 5% CO2 w temperaturze 37 °C na 4 minuty.</li>
		<li>Zebrać komórki z naczynia do probówki o pojemności 15 ml za pomocą ręcznego przystawki do pipetowania z dołączoną pipetą serologiczną o pojemności 10 ml. Dodać 8 ml kompletnej pożywki RPMI-1640.</li>
		<li>Połącz 40 μl komórek i 40 μl błękitu trypanowego w jednym dołku na 96-dołkowej płytce. Dodać 10 μl mieszaniny do hemocytometru i policzyć żywe komórki. Dodaj 1 milion komórek w 25 ml kompletnej pożywce RPMI-1640 do sterylnego naczynia poddanego hodowli tkankowej o średnicy 150 mm, aby kontynuować wzrost komórek. 
		UWAGA: Zawiesinę komórek HK przygotowaną na tym etapie należy zużyć w ciągu godziny w celu zmieszania z komórkami nowotworowymi do wstrzyknięcia.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Pobieranie próbek od pacjentów
<ol>
	<li>Pobrać guzy UCC od pacjenta, który wyraził na to zgodę 15 (BlCaPt15, pT3b N1 M0) i 37 (BlCaPt37, pT3b pN0 M0) podczas operacji resekcji.</li>
	<li>Pobrać guzy CRC od pacjenta, który wyraził na to zgodę 155 (CoCaPt155, T1 N0 M0) i 302 (CoCaPt302, T1 N0 M0) podczas operacji resekcji.</li>
</ol>
3. Ekspansja guza pacjenta
<ol>
	<li>Zbierz guzy podczas operacji w zimnym, sterylnym pożywce McCoya zawierającej penicylinę G (500 U / ml) i streptomycynę (500 mg / ml).</li>
	<li>Wszczepić guzy bezpośrednio w lewą i prawą flankę 6-8 tygodniowych samic myszy NOD / SCID.
	<ol>
		<li>Mechanicznie zmielić tkanki na małe kawałki (~1 mm3) za pomocą małych nożyczek chirurgicznych.</li>
		<li>Implantować tkankę podskórnie na lewym i prawym boku za pomocą igieł do biopsji aspiracyjnej szpiku kostnego 13 G. 
		UWAGA: Implantować o łącznej objętości 8 mm3 podzielonej równomiernie po obu stronach boku.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Znakowanie i wzbogacanie guzów znakowanych lucyferazy
<ol>
	<li>Mierz wzrost guza co dwa tygodnie za pomocą suwmiarki cyfrowej.</li>
	<li>Przy średnicy 1 cm transdukcja guza. Bezpośrednio wstrzyknąć do guza pojedynczą dawką lentiwirusa Luc/czerwonego białka fluorescencyjnego (RFP) (50 μl/guz, rozcieńczenie 1:30 ze skoncentrowanego lentiwirusa o wysokim mianie) za pomocą strzykawki o pojemności 1 cm3 z igłą 27 G. 
	UWAGA: Guz pacjenta zwykle osiąga 1 cm średnicy w ciągu 1-2 miesięcy. Jednak tempo wzrostu jest niezwykle zmienne i opiera się na wielu czynnikach, w tym stopniu i typie guza.</li>
	<li>Monitoruj guz co tydzień za pomocą obrazowania bioluminescencyjnego (BLI) u żywych zwierząt.
	<ol>
		<li>Zważ myszy. Wstrzyknąć przytomnej myszy 150 mg/kg lucyferyny dootrzewnowo i odczekać 5 minut, aż substrat zacznie krążyć w ciele myszy.</li>
		<li>Znieczulij mysz 2,5% izofluranem w 100% tlenie, 1 l/min w komorze indukcyjnej.</li>
		<li>Umieść mysz na brzuchu w maszynie do obrazowania BLI z przepływającym izofluranem i obrazem. Wykonaj sekwencyjne obrazy, aby potwierdzić obecność dodatnich regionów guza Luc/RFP (obraz bioluminescencyjny o sztucznych kolorach). Przywróć mysz do klatki po zakończeniu obrazowania.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. Wybierz odpowiednią porcję guza do trawienia enzymatycznego
<ol>
	<li>W dniu zabiegu UCC lub CRC, obraz myszy z lucyferazy oznaczony guzem, jak w krokach 4.3.1−4.3.3. 
	UWAGA: Czas wzrostu guza podskórnego zależy od szybkości wzrostu guza i planowanej liczby zwierząt, które mają zostać wstrzyknięte w eksperymencie.</li>
	<li>Zbierz guza z boku myszy i obrazu.
	<ol>
		<li>Eutanazja myszy przez wdychanie CO2 po obrazowaniu. Umieść mysz w komorze CO2, włącz gaz z prędkością 1,4 l/min aż do zatrzymania oddechu i pozostaw włączoną na 3 minuty. Następnie należy przeprowadzić zwichnięcie szyjki macicy.</li>
		<li>Oczyść skórę 70% etanolem. Skóra namiotu bezpośrednio nad guzem. Za pomocą nożyczek chirurgicznych wykonaj małe nacięcie w skórze. Oddziel skórę od guza nożyczkami.</li>
		<li>Usuń guz i umieść w sterylnej szalce Petriego. Zobrazuj całą miskę w maszynie do obrazowania.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Użyj sterylnych nożyczek lub skalpela, aby oddzielić skrawki lucyferazy ujemne od sekcji lucyferazy dodatniej w guzie i ponownie zobrazować.</li>
	<li>Powtarzaj, aż pozostaną tylko najbardziej dodatnie fragmenty guza.</li>
</ol>
6. Trawienie enzymatyczne guza
<ol>
	<li>Pod kapturem z przepływem laminarnym zmielić kawałki guza z dodatnim wynikiem lucyferazy (krok 5.4) na najmniejsze możliwe kawałki za pomocą sterylnych nożyczek chirurgicznych i umieścić je w sterylnej stożkowej probówce o pojemności 50 ml. 
	UWAGA: Rozdrobnienie guza na najmniejsze możliwe kawałki pozwoli uzyskać więcej pojedynczych komórek.</li>
	<li>Przygotuj roztwór trawiący, dodając 10 ml kolagenazy IV (1,5 mg/ml), 80 μl hialuronidazy (20 mg/ml) i 160 μl dezoksyrybonukleazy I (0,1 mg/ml) do 40 ml HBSS. Wymieszaj roztwór, odwracając.</li>
	<li>Dodaj 35-40 ml roztworu trawiącego do zmielonego guza. Inkubować w temperaturze 37 °C z ciągłą rotacją przez 2 godz. 
	UWAGA: Energicznie potrząsaj probówką okresowo przez cały okres inkubacji, aby zapobiec zlepianiu się tkanki nowotworowej.</li>
	<li>Przefiltruj całe trawienie przez sterylne sitko komórkowe 100 μm, a następnie sitko do komórek 40 μm, aby usunąć zanieczyszczenia. Zachowaj przepływ i wyrzuć zanieczyszczenia.</li>
	<li>Umyć wolne komórki, dodając 20 ml HBSS i odwirować przy 329 x g przez 5 minut. Odessać supernatant i ponownie zawiesić osad w 30 ml HBSS.</li>
	<li>Połączyć 10 μl roztworu komórkowego i 90 μl błękitu trypanowego w jednym dołku na 96-dołkowej płytce. Policz żywe komórki za pomocą hemekytometru.</li>
	<li>Przenieś 1 x 104 do 1 x 106 komórek nowotworowych na mysz do sterylnej stożkowej probówki o pojemności 15 ml. Dodaj 3 x 10 komórek5 HK z kroku 1.2.3 na mysz do tej samej probówki z komórkami nowotworowymi. 
	UWAGA: Użyj sterylnej probówki stożkowej o pojemności 50 ml, jeśli całkowita objętość przekracza 15 ml. Należy zawsze obliczać więcej dawek dla dodatkowych zwierząt w grupie badanej, aby uwzględnić utratę płynów podczas używania strzykawki. Na przykład, jeśli grupa zawiera 5 myszy, utwórz wystarczającą ilość komórek dla 6 lub 7 myszy.</li>
	<li>Wirować przy 329 x g przez 5 minut. Odrzucić supernatant przez zasysanie lub pipetowanie.</li>
	<li>Zawieś komórki w 50 μl na mysz w przypadku modelu UCC lub 10 μl na mysz w modelu CRC w kompletnych pożywkach RPMI. Zawiesinę komórkową należy przechowywać na lodzie, aż będzie gotowa do użycia.</li>
</ol>
7. Model myszy UCC
<ol>
	<li>Przygotowanie myszy do zabiegu
	<ol>
		<li>Uzyskaj sześcio- do ośmiotygodniową samicę myszy NOD/SCID. Ogol dolną część pleców myszy za pomocą kremu do depilacji. Znieczulij mysz w komorze indukcyjnej izofluranem (2,5% w 100% tlenu, 1 l/min).</li>
		<li>Po uspokojeniu umieść mysz w pozycji leżącej z pyskiem w stożku nosowym z izofluranem i gołymi plecami mocno uziemionymi na elektrodzie dyspersyjnej. 
		UWAGA: Mysz jest całkowicie uspokojona, jeśli nie reaguje na szczypanie palców.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wkroplić komórki UCC przygotowane w kroku 6.9 do pęcherza moczowego za pomocą angiocewnika (ryc. 1Aa,Ab).
	<ol>
		<li>Ustaw monopolarną maszynę do elektrokoagulacji i ustaw ją na moc 4 W. Nasmaruj sterylny angiocewnik 24 G galaretką smarującą i włóż przez cewkę moczową samicy myszy. 
		UWAGA: Może być wyczuwalny lekki opór. Delikatnie popchnij do przodu lub wyjmij angiocewnik i powtórz czynność. Nie używać siły. Jeśli cewnik wygina się przy wejściu, włóż sterylny drut doprowadzający (patrz 7.2.2) do połowy cewnika, aby zapewnić stabilność.</li>
		<li>Całkowicie włóż prosty drut prowadzący z rdzeniem stałym 0,025" 1 mm za końcem angioctiwa. 
		UWAGA: Drut jest oznaczany taśmą przed zabiegiem, aby wskazać punkt zatrzymania 1 mm i zapewnić spójność.</li>
		<li>Przytrzymaj kołek monopolarny do przewodu doprowadzającego przez 1 s, co pozwala na elektryczne podrażnienie błony śluzowej pęcherza.</li>
		<li>Podłączyć świeży sterylny angiocewnik do strzykawki luer-lok o pojemności 1 ml i pobrać 200 μl pobranych komórek z kroku 6.9. 
		UWAGA: Co najmniej 100 μl jest tracone z angiocewnika do strzykawki. Kompensacja objętości strat przy obliczaniu potrzebnej objętości zawiesiny komórek.</li>
		<li>Usuń prowadnik i angiocewnik z cewki moczowej myszy. Wprowadzić angiocewnik ze strzykawką z komórkami podłączonymi do cewki moczowej. 
		UWAGA: Awans powinien być łatwiejszy niż wcześniej.</li>
		<li>Wkraplanie 50 μl komórek do pęcherza moczowego myszy. Odczekaj kilka sekund przed usunięciem angiocewnika, aby komórki przylgnęły do ściany pęcherza. 
		UWAGA: Komórki pozostają w pęcherzu moczowym i przekształcają się w guz pierwotny.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wyjmij mysz ze stożka nosowego izofluranu i podkładki uziemiającej. Obserwuj mysz przez 1 godzinę zgodnie z procedurą. Szukaj oznak niepokoju, np. zgarbionych pleców, ciężkiego oddychania itp.</li>
</ol>
8. Model myszy CRC
<ol>
	<li>Znieczulenie sześcio- do ośmiotygodniowego samca myszy NOD/SCID izofluranem (2,5% w 100% tlenu, 1 l/min) w komorze indukcyjnej. Potwierdź sedację szczyptą palca u nogi.</li>
	<li>Umieść znieczuloną mysz w pozycji leżącej pod mikroskopem preparacyjnym, upewniając się, że jej pysk jest przymocowany do nosa z izofluranu i zabezpieczyłeś przednie kończyny taśmą zapewniającą stabilność. 
	UWAGA: Lupy mogą być używane zamiast mikroskopu preparacyjnego. Mały przedmiot może być użyty do poprawy widoczności i kąta po umieszczeniu pod podstawą ogona, podnosząc odbyt. Zazwyczaj małe odcinki gazy są zwijane w kształt walca o średnicy 1 cala.</li>
	<li>Rozszerz kanał odbytu za pomocą zakrzywionych, nasmarowanych, tępo zakończonych kleszczy, aby odsłonić dystalną błonę śluzową odbytu i odbytnicy. Usuń kał.</li>
	<li>Za pomocą sterylnej wyjmowanej igły 30 G na szklanej strzykawce o pojemności 50 l wstrzyknąć 10 μl komórek nowotworowych i HK (od kroku 6.9) do dystalnej tylnej błony podśluzowej odbytnicy 1 do 2 mm powyżej kanału odbytu. Skos igły powinien być pokryty błoną śluzową. Uważaj, aby nie dostać się do jamy miednicy.</li>
	<li>Usuń mysz ze stożka nosowego izofluranu. Obserwuj mysz przez 1 godzinę zgodnie z procedurą. Szukaj oznak niepokoju, np. zgarbionych pleców, ciężkiego oddychania itp.</li>
</ol>
9. Obrazowanie bioluminescencyjne
<ol>
	<li>Monitoruj co tydzień pierwotne obciążenie przerzutami do wątroby i płuc za pomocą bioluminescencyjnego systemu obrazowania pod kątem aktywności lucyferazy.
	<ol>
		<li>Zdobądź mysz z eksperymentu UCC lub CRC i zważ. Wstrzyknąć dootrzewnowo 150 mg/kg lucyferyny i odczekać 5 minut, aż substrat zacznie krążyć w organizmie myszy.</li>
		<li>Znieczulić mysz 2,5% izofluranem w 100% tlenie, 1 l/min w komorze indukcyjnej.</li>
		<li>Umieść mysz w maszynie do obrazowania BLI z nosem zamocowanym w stożku nosowym. Podczas naświetlania obrazu upewnij się, że obszar zainteresowania jest skierowany w stronę aparatu. W przypadku wstrzyknięć UCC i CRC strona brzuszna powinna być skierowana w stronę kamery dla każdego obrazu. Mysz obrazkowa w pozycji leżącej.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
10. Pobieranie organów i nowotworów
<ol>
	<li>Gdy pierwotne promieniowanie luminescencji guza osiągnie 1 x 1011 fotonów lub jeśli myszy wykazują oznaki niepokoju (tj. utrata masy ciała, zgarbione plecy, szorstki/ciężki oddech itp.), należy poddać myszy eutanazji przez wdychanie CO2 (jak w kroku 5.2.1) po wstrzyknięciu lucyferyny i obrazowaniu całego ciała.</li>
	<li>Usunąć wątrobę i płuca, umieścić na szalce Petriego i wykonać zdjęcie, aby zidentyfikować przerzuty. Usuń guza, zważ i obraz. Utrwal narządy i guz w 10% neutralnej buforowanej formalinie przez 48 godzin w temperaturze otoczenia. 
	UWAGA: Wyczyść/wytrzyj nożyczki i kleszcze między każdym narządem, aby uniknąć przeniesienia tkanki.</li>
</ol>
11. Ocena histologiczna
<ol>
	<li>Zanurz tkanki utrwalone w formalinie w parafinie i pokrój tkanki o grubości 5 μm na mikrotomie w celu barwienia hematoksyliną i eozyną (H&E) oraz immunohistochemiczną (IHC). 
	UWAGA: Wszystkie barwienia H&E preparatów parafinowych zostały wykonane w laboratorium patologicznym Ochsner Health System, a wszystkie barwienia IHC w tym artykule zostały wykonane w laboratorium badawczym Ochsner Health System po pobraniu antygenu w wysokiej temperaturze przy użyciu przeciwciał Ki67 i cytokeratyny 20, a następnie biotynylowanego przeciwciała drugorzędowego i kompleksów awidyna-biotyna-peroksydaza zgodnie z instrukcjami producenta13, 17.</li>
</ol>

<ol><li>Sundlisaeter, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphangiogenesis+in+colorectal+cancer--prognostic+and+therapeutic+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer.+Journal+international+du+cancer%22%5BJournal%5D)">Lymphangiogenesis in colorectal cancer--prognostic and therapeutic aspects.</a> International Journal of Cancer. Journal international du cancer. 121, 1401-1409 (2007).</li>
<li>Gout, S., Huot, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+cancer+microenvironment+in+metastasis%3A+focus+on+colon+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Microenvironment%22%5BJournal%5D)">Role of cancer microenvironment in metastasis: focus on colon cancer.</a> Cancer Microenvironment. 1, 69-83 (2008).</li>
<li>National Cancer Institute. SEER Stat Fact Sheets: Bladder Cancer. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://seer.cancer.gov/statfacts/html/urinb.html">http://seer.cancer.gov/statfacts/html/urinb.html</a> (2018).</li>
<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2018%5BTitle%5D)+AND+%22CA%3A+a+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2018.</a> CA: a Cancer Journal for Clinicians. 68, 7-30 (2018).</li>
<li>Hautmann, R. E., de Petriconi, R. C., Pfeiffer, C., Volkmer, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radical+cystectomy+for+urothelial+carcinoma+of+the+bladder+without+neoadjuvant+or+adjuvant+therapy%3A+long-term+results+in+1100+patients%5BTitle%5D)+AND+%22European+Urology%22%5BJournal%5D)">Radical cystectomy for urothelial carcinoma of the bladder without neoadjuvant or adjuvant therapy: long-term results in 1100 patients.</a> European Urology. 61, 1039-1047 (2012).</li>
<li>Stein, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radical+cystectomy+in+the+treatment+of+invasive+bladder+cancer%3A+long-term+results+in+1%2C054+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Radical cystectomy in the treatment of invasive bladder cancer: long-term results in 1,054 patients.</a> Journal of Clinical Oncology. 19, 666-675 (2001).</li>
<li>Lerner, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rationale+for+en+bloc+pelvic+lymph+node+dissection+for+bladder+cancer+patients+with+nodal+metastases%3A+long-term+results%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">The rationale for en bloc pelvic lymph node dissection for bladder cancer patients with nodal metastases: long-term results.</a> The Journal of Urology. 149, discussion 764-755 758-764 (1993).</li>
<li>Poulsen, A. L., Horn, T., Steven, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radical+cystectomy%3A+extending+the+limits+of+pelvic+lymph+node+dissection+improves+survival+for+patients+with+bladder+cancer+confined+to+the+bladder+wall%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Radical cystectomy: extending the limits of pelvic lymph node dissection improves survival for patients with bladder cancer confined to the bladder wall.</a> The Journal of Urology. 160, 2015-2019 (2020).</li>
<li>National Cancer Institute. SEER Stat Fact Sheets: Colon and Rectum Cancer. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://seer.cancer.gov/statfacts/html/colorect.html">http://seer.cancer.gov/statfacts/html/colorect.html</a> (2017).</li>
<li>Margolin, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+stromal+cells+enhance+drug-resistant+colon+cancer+cell+tumor+formation+through+SDF-1alpha%2FCXCR4+paracrine+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Lymph node stromal cells enhance drug-resistant colon cancer cell tumor formation through SDF-1alpha/CXCR4 paracrine signaling.</a> Neoplasia. 13, 874-886 (2011).</li>
<li>Vermeulen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+activity+defines+colon+cancer+stem+cells+and+is+regulated+by+the+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Wnt activity defines colon cancer stem cells and is regulated by the microenvironment.</a> Nature Cell Biology. 12, 468-476 (2010).</li>
<li>Margolin, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+critical+roles+of+tumor-initiating+cells+and+the+lymph+node+stromal+microenvironment+in+human+colorectal+cancer+extranodal+metastasis+using+a+unique+humanized+orthotopic+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">The critical roles of tumor-initiating cells and the lymph node stromal microenvironment in human colorectal cancer extranodal metastasis using a unique humanized orthotopic mouse model.</a> FASEB Journal. 29, 3571-3581 (2015).</li>
<li>Gills, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+patient-derived+orthotopic+xenograft+model+enabling+human+high-grade+urothelial+cell+carcinoma+of+the+bladder+tumor+implantation%2C+growth%2C+angiogenesis%2C+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">A patient-derived orthotopic xenograft model enabling human high-grade urothelial cell carcinoma of the bladder tumor implantation, growth, angiogenesis, and metastasis.</a> Oncotarget. 9, 32718-32729 (2018).</li>
<li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+models%3A+an+emerging+platform+for+translational+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discovery. 4, 998-1013 (2014).</li>
<li>Hiroshima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+mouse+models+of+cancer+need+to+be+orthotopic+in+order+to+evaluate+targeted+anti-metastatic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Patient-derived mouse models of cancer need to be orthotopic in order to evaluate targeted anti-metastatic therapy.</a> Oncotarget. 7, 71696-71702 (2016).</li>
<li>Kim, H. S., Zhang, X., Klyushnenkova, E., Choi, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulation+of+germinal+center+B+lymphocyte+proliferation+by+an+FDC-like+cell+line%2C+HK%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Stimulation of germinal center B lymphocyte proliferation by an FDC-like cell line, HK.</a> The Journal of Immunology. 155, 1101-1109 (1995).</li>
<li>Hite, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Optimal+Orthotopic+Mouse+Model+for+Human+Colorectal+Cancer+Primary+Tumor+Growth+and+Spontaneous+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Diseases+of+the+Colon+and+Rectum%22%5BJournal%5D)">An Optimal Orthotopic Mouse Model for Human Colorectal Cancer Primary Tumor Growth and Spontaneous Metastasis.</a> Diseases of the Colon and Rectum. 61, 698-705 (2018).</li>
<li>Jager, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound-guided+intramural+inoculation+of+orthotopic+bladder+cancer+xenografts%3A+a+novel+high-precision+approach%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Ultrasound-guided intramural inoculation of orthotopic bladder cancer xenografts: a novel high-precision approach.</a> PloS One. 8, e59536(2013).</li>
<li>Schirner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrin+alpha5beta1%3A+a+potent+inhibitor+of+experimental+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Integrin alpha5beta1: a potent inhibitor of experimental lung metastasis.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 16, 427-435 (1998).</li>
<li>Ricci-Vitiani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+expansion+of+human+colon-cancer-initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification and expansion of human colon-cancer-initiating cells.</a> Nature. 445, 111-115 (2007).</li>
<li>Todaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colon+cancer+stem+cells+dictate+tumor+growth+and+resist+cell+death+by+production+of+interleukin-4%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Colon cancer stem cells dictate tumor growth and resist cell death by production of interleukin-4.</a> Cell Stem Cell. 1, 389-402 (2007).</li>
<li>Lee, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+establishment+features+of+orthotopic+murine+bladder+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Tumor establishment features of orthotopic murine bladder cancer models.</a> Korean Journal of Urology. 53, 396-400 (2012).</li>
<li>Hadaschik, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumour+inoculation+and+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU International. 100, 1377-1384 (2007).</li>
<li>Silinsky, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD+133%2B+and+CXCR4%2B+colon+cancer+cells+as+a+marker+for+lymph+node+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">CD 133+ and CXCR4+ colon cancer cells as a marker for lymph node metastasis.</a> The Journal of Surgical Research. 185, 113-118 (2013).</li>
</ol>

Badanie to było częściowo wspierane przez Ochsner Translational Medicine Research Initiative Grant 2014. Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Choroba z przerzutami jest odpowiedzialna za większość zgonów pacjentów z rakiem. W przedklinicznych testach terapeutycznych kluczowe znaczenie ma ustalenie modeli mysich, które najwierniej naśladują wzrost ludzkiego guza ze spontanicznymi przerzutami do odległych narządów. Wykorzystanie mysich modeli z wszczepionymi komórkami nowotworowymi pochodzącymi z nowotworu (ksenoprzeszczepami) pacjenta pozwala na lepsze zrozumienie biologii guza i biomarkerów predykcyjnych, a także testowanie i przewidywanie skutków przeciwnowot...

Wykazano, że przerzuty do węzłów chłonnych (LN) są słabym wskaźnikiem prognostycznym w wielu nowotworach złośliwych narządów litych, w tym w raku urotelialnym (UCC) pęcherza moczowego i raku jelita grubego (CRC) o wysokim stopniu złośliwości1,2. U ponad połowy pacjentów z inwazyjnym UCC mięśni (MIUCC), pomimo leczenia klinicznie zlokalizowanej choroby, rozwiną się przerzuty i umrą w ciągu 5 lat. CRC z przerzutami jest główną przyczyną zgonów związanych z rakiem w USA.
Szacuje się, że w 2018 roku w Stanach Zjednoczonych wystąpi około 81 190 nowych pacjentów i 17 240 zgonów związanych z rakiem z powodu UCC pęcherza moczowego3,4. Podczas gdy u pacjentów przeważa (70%) choroba nieinwazyjna mięśni, u 30% występuje MIUCC5. Pomimo terapii leczniczej (radykalna cystektomia [RC] z chemioterapią ogólnoustrojową lub bez niej) w klinicznie zlokalizowanej chorobie, połowa pacjentów z MIUCC pęcherza moczowego nadal będzie miała przerzuty i umrze w ciągu 5 lat3. Zajęcie węzłów chłonnych stwierdza się u około 20%−25% pacjentów, którzy przeszli RC6,7,8. Pięcioletni wskaźnik przeżycia u pacjentów z dodatnim wynikiem LN wynosi mniej niż 35% nawet po RC, co sugeruje, że zaangażowanie LN jest kluczowym negatywnym czynnikiem prognostykującym u pacjentów z UCC.
Rak jelita grubego jest trzecim najczęściej diagnozowanym nowotworem zarówno u mężczyzn, jak i u kobiet w Stanach Zjednoczonych. Wyniki leczenia pacjentów w dużej mierze zależą od charakterystyki guza i mikrośrodowiska guza, takiego jak głębokość inwazji, zajęcie LN i przerzuty do odległych narządów. Chociaż śmiertelność w CRC zmniejszyła się w ciągu ostatniej dekady dzięki badaniom przesiewowym i skutecznym operacjom, szacuje się, że u prawie 50% pacjentów z CRC rozwiną się przerzuty lub nawrót choroby9.
Małe modele zwierzęce stanowią szybką, powtarzalną i modyfikowalną platformę do badania progresji guza i różnych wzorców przerzutów. Obecnie nie ma opisanych modeli ksenoprzeszczepów, które konsekwentnie naśladowałyby przerzuty CRC i UCC obserwowane u pacjentów. Pierwotną drogą przerzutów odległych raka jest rozprzestrzenianie się limfy. Nowe badania sugerują, że LN zapewniają nowotworom unikalne mikrośrodowisko i są nie tylko po prostu stacjonarnymi celami, przez które komórki rakowe przejściowo przechodzą, ale także odgrywają integralną rolę, wchodząc w interakcję z komórkami rakowymi w procesie przerzutowym. Rzeczywiście, nasze badania wykazały, że oprócz edukacji i promowania progresji guza i przerzutów, mikrośrodowisko zrębu LN jest również odpowiedzialne za oporność na leki w CRC10,11. Nasze laboratorium niedawno potwierdziło rakotwórczy wpływ komórek zrębu LN (LNSC) na CRC i UCC przy użyciu mysich modeli ksenoprzeszczepu ortotopowego (PDOX) pochodzących od pacjenta12,13.

Rozwijanie modeli PDOX stanowi ważną platformę do translacyjnych badań nad rakiem14,15. Zachowując główne cechy histologiczne i genetyczne guza dawcy, modele PDOX pozostają stabilne we wszystkich przejściach i stanowią dobre platformy do translacyjnych badań nad rakiem12,15. Modele PDOX są wykorzystywane do przedklinicznej oceny leków, identyfikacji biomarkerów i przedklinicznej oceny strategii medycyny spersonalizowanej, co pozwala na przewidywanie wyników klinicznych. Obecnie nie ma opisanych modeli ksenoprzeszczepów, które uwzględniałyby znaczenie udziału LN i są zdolne do konsekwentnego odtwarzania guza pierwotnego i przerzutów do odległych narządów w CRC i UCC. W tym badaniu opisano rozwój modeli PDOX u myszy NOD/SCID z rozmnażaniem przerzutowych chorób CRC i UCC z udziałem LNSC.

<table><tbody><tr><td>Peroksydaza awidyny-biotyny</td><td>Vector Labs Inc</td><td>PK-6100</td><td></td></tr><tr><td>Biotynylowane przeciwciało wtórne</td><td>Vector Labs Inc</td><td>BA-1000</td><td></td></tr><tr><td>Kolagenaza IV (1,5 mg / ml)</td> <td>Worthington Biochemical Corporation</td><td>LS004189</td><td></td></tr><tr><td>Deoksyrybonukleaza I (0,1 mg / ml)</td> <td>Sigma</td><td>D4263</td><td></td></tr><tr><td>D-Lucyferyna (150 mg / kg)</td> <td>Perkin Elmer</td><td></td><td></td>122796</tr><tr><td>Formalina (10% neutralna buforowana)</td><td>Leica</td><td>46129</td><td></td></tr><tr><td>glutamina (2 nM)</td><td>Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Krem do depilacji</td><td>Church & Dwight Co., Inc</td><td>1 (800) 248-8820</td><td></td></tr><tr><td>Zbilansowany roztwór soli Hanks (HBSS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH30016.02</td><td></td></tr><tr><td>Hialuronidaza (20 mg / ml)</td> <td>Sigma</td><td>H3884</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Henry Schein Zdrowie zwierząt</td><td>108333</td><td></td></tr><tr><td>Luc / RFP-lentivirus</td><td>Od naszych współpracowników. Patrz odniesienie 13: Gills, J. et al. Ortotopowy model ksenoprzeszczepu uzyskany od pacjenta umożliwiający implantację, wzrost, angiogenezę i przerzuty ludzkiego raka urotelialnego o wysokim stopniu złośliwości guza pęcherza moczowego. Oncotarget. 9, 32718-32729, doi:10.18632/oncotarget.26024 (2018).</td><td></td><td></td></tr><tr><td>McCoy' s medium</td><td>Life Technologies</td><td>110862</td><td></td></tr><tr><td>penicylina/streptomycyna 100 ml (100 U/ml)</td><td>Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 Średnia</td><td>kolekcja kultur typu amerykańskiego</td><td>110636</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sigma</td><td>T6146</td><td></td></tr><tr><td>Trypsyna/EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>15400-054</td><td></td></tr><tr><td>Nazwa</td><td>Firma<</td><td>strong>Numer katalogowy</td><td>Komentarze</td></tr><tr><td>Gas </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>100% Oxygen</td><td>Airgas Inc</td><td>OX USP200</td><td></td></tr><tr><td>100% CO2</td><td>Airgas Inc</td><td>CD USPE</td><td></td></tr><<tr><td>strong>Nazwa</td><td>Company</td><td>Numer katalogowy</td><td>Komentarze</td></tr><tr><td>Myszy</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-8 tygodniowe myszy NOD/SCID (samiec)</td><td>Jackson Lab</td><td>001303</td><td></td></tr><tr><td>6-8 tygodniowe myszy NOD/SCID (samica)</td><td>Jackson Lab</td><td>001303</td><td></td></tr><tr><td>Nazwa</td><td>Firma</td><td>Numer katalogowy</td><td>Uwagi</td></tr><tr><td>Immunohistochemia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Sigma</td><td>GHS232</td><td></td></tr><tr><td>Ki-67 Przeciwciało monoklonalne królika</td><td>Thermo Scientific</td><td>RM-9106-S</td><td></td></tr><tr><td>Nazwa</td><td>Firma</td><td>Numer katalogowy</td><td>Komentarze</td></tr><tr><td>Narzędzia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>40 &mikro; m sitko komórkowe</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-1</td><td></td></tr><tr><td>100 &mikro; m sitko do komórek</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-19</td><td></td></tr><tr><td>15 ml Rurka stożkowa</td><td>Sarstedt</td><td>11799</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Rurka stożkowa</td><td>Sarstedt</td><td>15762</td><td></td></tr><tr><td>150 mm Naczynie do hodowli tkankowych</td><td>USA Scientific Inc</td><td>CC7682-3614</td><td></td></tr><tr><td>96 Płytka studzienkowa</td><td>USA Scientific Inc</td><td>CC7682-7596</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze</td><td>Symmetry Surgical Inc</td><td>06-0011</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki chirurgiczne</td><td>Symmetry Surgical Inc</td><td>02-2011</td><td></td></tr><tr><td>Nazwa</td><td>Firma</td><td>Numer katalogowy</td><td>Komentarze</td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5% CO2 nawilżany inkubator</td><td>Thermo Scientific</td><td>3110</td><td></td></tr><tr><td>Maszyna do obrazowania bioluminescencyjnego (BLI)</td><td>Perkin Elmer</td><td>CLS136334</td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie maszyny do obrazowania BLI</td><td>Wirówka Perkin Elmer</td><td>CLS136334</td><td></td></tr><tr><td>Beckman</td><td></td><td>366830</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop dekonwolucyjny</td><td>Inteligentne innowacje w obrazowaniu</td><td>Mariany</td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie do obrazowania mikroskopem dekonwolucyjnym</td> Innowacje w zakresie <td>inteligentnego obrazowania</td><td>+1 (303) 607-9429 x1</td><td></td></tr><tr><td>Suwmiarka cyfrowa</td><td>Fowler Narzędzia i instrumenty</td><td>54-115-330</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop preparacyjny</td><td>Precision Instruments LLC</td><td>(504) 228-0076</td><td></td></tr><tr><td>Generator elektrochirurgiczny</td><td>ValleyLab</td><td>FORCE1C20</td><td></td></tr><tr><td>Komora</td> <td>indukcyjna izofluranuPerkin Elmer</td><td>119038</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>American Optical Corporation</td><td>829</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Aid</td><td>Fisher Healthcare</td><td>13-681-15E</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta serologiczna (10 ml)</td><td>Sarstedt</td><td>86.1254.001</td><td></td></tr></tbody></table>

ortotopowe modele ksenoprzeszczepów pobrane od pacjentów dla ludzkiego raka urotelialnokomórkowego i raka jelita grubego, wzrostu guza i spontanicznych przerzutów

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Pacjenci z rakiem mają złe rokowania, gdy zajęcie węzłów chłonnych (LN) występuje zarówno w raku urotelialnym (HG-UCC) pęcherza moczowego (CRC) o wysokim stopniu złośliwości, jak i w raku jelita grubego (CRC). Ponad 50% pacjentów z inwazyjnym UCC mięśni, pomimo leczenia klinicznie zlokalizowanej choroby, rozwinie przerzuty i umrze w ciągu 5 lat, a przerzutowa CRC jest główną przyczyną zgonów związanych z rakiem w USA. Potrzebne są modele ksenoprzeszczepów, które konsekwentnie naśladują przerzuty UCC i CRC obserwowane u pacjentów. Badanie to ma na celu wygenerowanie pochodzących od pacjentów modeli ksenoprzeszczepu ortotopowego (PDOX) UCC i CRC dla pierwotnego wzrostu guza i spontanicznych przerzutów pod wpływem komórek zrębu LN, naśladujących progresję ludzkich chorób przerzutowych do badań przesiewowych leków. Świeże guzy UCC i CRC uzyskano od pacjentów, którzy wyrazili na to zgodę, poddawanych resekcji odpowiednio z powodu HG-UCC i gruczolakoraka jelita grubego. Współinokulowane komórkami HK analogowymi komórkami zrębu LN (LNSC), komórki UCC znakowane lucyferazą zostały wszczepione dopęcherzowo (IB) samicom myszy z cukrzycą / ciężkim złożonym niedoborem odporności (NOD / SCID), a komórki CRC wstrzyknięto doodbytniczo (IR) samcom myszy NOD / SCID. Wzrost guza i przerzuty monitorowano co tydzień za pomocą obrazowania bioluminescencyjnego (BLI). Po złożeniu ofiary, pierwotne guzy i narządy myszy zostały pobrane, zważone i utrwalone formaliną pod kątem barwienia hematoksyliną i eozyną oraz immunohistochemii. W naszych unikalnych modelach PDOX guzy ksenoprzeszczepu przypominają guzy przedimplantacyjne pacjenta. W obecności komórek HK oba modele mają wysokie wskaźniki implantacji guza mierzone BLI i masą guza, 83,3% dla UCC i 96,9% dla CRC, oraz wysokie wskaźniki przerzutów do odległych narządów (33,3% wykryło przerzuty do wątroby lub płuc dla UCC i 53,1% dla CRC). Ponadto oba modele mają zerową śmiertelność z powodu zabiegu. Stworzyliśmy unikalne, powtarzalne modele PDOX dla ludzkich HG-UCC i CRC, które pozwalają na badania powstawania, wzrostu i przerzutów guza. Dzięki tym modelom testowanie nowych leków terapeutycznych może być przeprowadzane w sposób efektywny i kliniczno-mimetyczny.

W modelu UCC PDOX komórki BlCaPt15 lub BlCaPt37 pobrane od pacjentów z UCC wprowadzano drogą wewnątrz pęcherzową (IB) w obecności komórek HK do pęcherza samic myszy NOD/SCID (Rycina 1A). U dwudziestu pięciu z trzydziestu (83,3%) zwierząt rozwinęły się guzy pierwotne, wykazując zależny od czasu wzrost guza pierwotnego na podstawie cotygodniowego obrazowania BLI (Rycina 1B,C oraz Tabela 1). Podobni...

Ten protokół opisuje generowanie modeli ortotopowych ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów poprzez dopęcherzowe wkraplanie komórek raka urotelialnego o wysokim stopniu złośliwości lub dodoodbytnicze wstrzykiwanie komórek raka jelita grubego do myszy z nieotyłym cukrzycą/ciężkim złożonym niedoborem odporności (NOD/SCID) w celu pierwotnego wzrostu guza i spontanicznych przerzutów pod wpływem komórek zrębu węzłów chłonnych, co naśladuje postęp ludzkich chorób przerzutowych.

Ortotopowe modele ksenoprzeszczepów pobrane od pacjentów dla ludzkiego raka urotelialnokomórkowego i raka jelita grubego, wzrostu guza i spontanicznych przerzutów

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Modele są potrzebne do konsekwentnego naśladowania przerzutów raka poprzez interakcję z węzłami chłonnymi. U pacjentów zarówno z rakiem jelita grubego, jak i rakiem urotelialnokomórkowym pęcherza moczowego. Nasze ortotopowe modele ksenograficzne opisane w tym artykule mogą pomóc odpowiedzieć na te ważne pytania biologiczne i przetestować nowe terapie skutecznie i w sposób klinicznie istotny.Nasze ortotopowe guzy ksenoprzeszczepu wytwarzane u myszy przypominają guza pacjenta. W obecności komórek zrębu węzłów chłonnych oba modele mają wyższą implantację guza i wskaźniki przerzutów do odległych narządów oraz lokalizacje, które naśladują ludzkie wzorce przerzutów. Ponadto oba modele zwierzęce mają zerową śmiertelność związaną z procedurami.Po usunięciu guzów pochodzących od pacjenta od myszy poddanych eutanazji, użyj sterylnych nożyczek chirurgicznych, aby zmielić kawałki guza z dodatnim wynikiem lucyferazy tak małe, jak to możliwe, na szalce Petriego pod kapturem z przepływem laminarnym. Przenieś kawałki guza do sterylnej stożkowej probówki o pojemności 50 ml. Aby przygotować roztwór trawiący, dodać 10 ml kolagenazy typu 4, 80 mikrolitrów hialuronidazy i 160 mikrolitrów dezoksyrybonuk

patient-derived-orthotopic-xenograft-models-for-human-urothelial-cell

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Ten film opisuje protokół generowania mysiego modelu ortotopowego ksenoprzeszczepu jelita grubego pochodzącego od pacjenta do badania progresji komórek raka jelita grubego u myszy bez otyłości z cukrzycą/ciężkim złożonym niedoborem odporności (NOD/SCID). Ten mysi model pomaga w zrozumieniu wzorca wzrostu guza pierwotnego i przerzutów.

Generowanie mysiego modelu raka jelita grubego PDOX: badanie progresji raka jelita grubego w modelu mysim

Ten film opisuje protokół tworzenia mysiego modelu spontanicznych przerzutów ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów z rakiem jelita grubego lub PDX. Te modele ksenoprzeszczepów częściowo naśladują cechy ludzkich nowotworów i rozumieją krytyczne aspekty nowotworów złośliwych u ludzi, w tym inwazję i przerzuty.

Mysie modele spontanicznych przerzutów: platforma do badania potencjału przerzutowego komórek raka jelita grubego wstrzykiwanych ortotopowo

Ten film opisuje procedurę generowania eksperymentalnego modelu mysiego ksenoprzeszczepu, który może być wykorzystany do badania progresji raka urotelialnokomórkowego.

Ksenografacja guza pochodząca od pacjenta: technika generowania eksperymentalnego modelu myszy do oceny raka urotelialnego

Implantacja komórek nowotworowych do narządu pochodzenia może służyć jako użyteczny model przedkliniczny do oceny nowych terapii. Komórki raka pęcherza moczowego MB49 mogą być hodowane w pęcherzu moczowym po wkropleniu dopęcherzowym. Protokół ten demonstruje cewnikowanie pęcherza myszy w celu implantacji guza i dostarczenia adenowirusa.

Ortotopowy model raka pęcherza moczowego do badań nad dostarczaniem genów

Sprawdzona technika szczepienia pierwotnych inwazyjnych ksenoprzeszczepów raka ortotopowego pęcherza moczowego wymaga laparotomii i mobilizacji pęcherza. Procedura ta powoduje znaczną zachorowalność u myszy, jest technicznie trudna i czasochłonna. W związku z tym opracowaliśmy wysoce precyzyjne, przezskórne podejście wykorzystujące kontrolę ultrasonograficzną.

Małoinwazyjne założenie mysich ortotopowych ksenoprzeszczepów pęcherza moczowego

Rak prostaty jest drugą najczęstszą przyczyną zgonów związanych z rakiem w Stanach Zjednoczonych. Ortotopowy model raka stanowi użyteczne podejście do zrozumienia biologii raka prostaty i oceny skuteczności schematów terapeutycznych. Protokół ten opisuje szczegółowe kroki niezbędne do ustalenia ortotopowego modelu myszy raka prostaty.

Przedkliniczny ortotopowy mysi model ludzkiego raka prostaty

Zdolność klonów przerzutowych do kolonizacji odległych miejsc zależy od ich zdolności do proliferacji i/lub zdolności do przetrwania w mikrośrodowisku gospodarza bez znaczącej proliferacji. W tym miejscu przedstawiamy model zwierzęcy, który umożliwia ilościową wizualizację obu typów kolonizacji wątroby przez klony z przerzutami.

Zaawansowany zwierzęcy model przerzutów jelita grubego w wątrobie: techniki obrazowania i właściwości klonów z przerzutami

Aby umożliwić bardzo czułe wykrywanie komórek kolonizujących tkanki ludzkiego raka jelita grubego (CRC), pokazujemy protokół efektywnej transdukcji cząsteczek lentiwirusa z zielonym białkiem fluorescencyjnym (GFP) do komórek organoidowych CRC pochodzących z PDX przed ich wstrzyknięciem myszom biorcy, z obserwacją mikroskopową stereofluorescencji.

Wysoka czułość wykrywania mikroprzerzutów generowanych przez organoidy transdukowane przez GFP lentiwirus hodowane z guza jelita grubego pochodzącego od pacjenta

Tutaj prezentujemy protokół wykorzystania wspomaganego ultradźwiękami wstrzykiwania komórek nerwiaka zarodkowego (NB) i mięsaka Ewinga (ES) (ustalone linie komórkowe i komórki nowotworowe pochodzące od pacjenta) w biologicznie istotnych miejscach do tworzenia wiarygodnych modeli przedklinicznych do badań nad rakiem.

Wykorzystanie implantacji komórkowej sterowanej tkankami pod kontrolą ultradźwięków do ustalenia biologicznie istotnych ksenoprzeszczepów nowotworowych z przerzutami

Ortotopowe modele myszy z przerzutowym czerniakiem błony naczyniowej oka ludzkiej wątroby zostały stworzone przy użyciu technik chirurgicznej implantacji ortotopowej z technikami wstrzykiwania kawałków guza pochodzących od pacjenta i igieł z hodowanymi ludzkimi liniami komórkowymi czerniaka błony naczyniowej gałki ocznej.

Generowanie ortotopowej platformy ksenoprzeszczepu ludzkiego czerniaka błony naczyniowej gałki ocznej wątroby u myszy z niedoborem odporności

Ten protokół opisuje ortotopową implantację komórek nowotworowych pochodzących od pacjenta w ścianie jelita ślepego myszy z niedoborem odporności. Model podsumowuje zaawansowany rak jelita grubego, chorobę z przerzutami i pozwala na ocenę nowych leków terapeutycznych w klinicznie istotnym scenariuszu przerzutów do płuc i wątroby.

Ortotopowa implantacja komórek nowotworowych pochodzących od pacjenta u myszy podsumowuje zaawansowanego raka jelita grubego

Poznaj metodę tworzenia ortotopowych modeli ksenoprzeszczepów pobranych od pacjentów z rakiem urotelialnym i jelita grubego u myszy NOD/SCID. Technika ta umożliwia badanie wzrostu guza i przerzutów.

Ortotopowe modele ksenoprzeszczepów pobrane od pacjentów dla ludzkiego raka urotelialnokomórkowego i raka jelita grubego, wzrostu guza i spontanicznych przerzutów (Wideo) | JoVE Journal

Ortotopowe modele ksenoprzeszczepów pobrane od pacjentów dla ludzkiego raka urotelialnokomórkowego i raka jelita grubego, wzrostu guza i spontanicznych przerzutów

Przeglądaj więcej filmów