Name: Identyfikacja i sekcja różnorodnych mysich magazynów tłuszczowych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 31 s
Description: Poznaj metodę identyfikacji i izolacji różnorodnych magazynów tłuszczowych u myszy, w tym tkanki brunatnej i podskórnej. Standardizowany protokół umożliwia analizy histologiczne oraz badania ekspresji genów i białek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

O.A.M. jest wspierany przez granty NIH DK062876 i DK092759; D.P.B. jest wspierany przez University of Michigan Medical Scientist Training Program (T32GM007863), University of Michigan Training Program in Organogenesis (T32HD007605), University of Michigan Rackham Merit Fellowship oraz Tylenol Future Care Fellowship.

<ol><li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adipose+organ+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">The adipose organ at a glance.</a> Disease Models & Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).</li>
<li>Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+we+talk+about+when+we+talk+about+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">What we talk about when we talk about fat.</a> Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).</li>
<li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+lineages%3A+tracing+back+the+origins+of+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Adipocyte lineages: tracing back the origins of fat.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1842 (3), 340-351 (2014).</li>
<li>Bagchi, D. P., Forss, I., Mandrup, S., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SnapShot%3A+Niche+Determines+Adipocyte+Character+I%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">SnapShot: Niche Determines Adipocyte Character I.</a> Cell Metabolism. 27 (1), 264-264 (2018).</li>
<li>Tchkonia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+metabolic+implications+of+regional+differences+among+fat+depots%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and metabolic implications of regional differences among fat depots.</a> Cell Metabolism. 17 (5), 644-656 (2013).</li>
<li>Kajimura, S., Spiegelman, B. M., Seale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+and+Beige+Fat%3A+Physiological+Roles+beyond+Heat+Generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Brown and Beige Fat: Physiological Roles beyond Heat Generation.</a> Cell Metabolism. 22 (4), 546-559 (2015).</li>
<li>Frontini, A., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+and+development+of+brown+adipocytes+in+the+murine+and+human+adipose+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Distribution and development of brown adipocytes in the murine and human adipose organ.</a> Cell Metabolism. 11 (4), 253-256 (2010).</li>
<li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Adipose+Tissue+Atlas%3A+An+Image-Guided+Identification+of+Human-like+BAT+and+Beige+Depots+in+Rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">An Adipose Tissue Atlas: An Image-Guided Identification of Human-like BAT and Beige Depots in Rodents.</a> Cell Metabolism. 27, 252-262 (2018).</li>
<li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocytes+arise+from+multiple+lineages+that+are+heterogeneously+and+dynamically+distributed%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Adipocytes arise from multiple lineages that are heterogeneously and dynamically distributed.</a> Nature Communications. 5, 4099(2014).</li>
<li>Li, Z., Hardij, J., Bagchi, D. P., Scheller, E. L., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development%2C+regulation%2C+metabolism+and+function+of+bone+marrow+adipose+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Development, regulation, metabolism and function of bone marrow adipose tissues.</a> Bone. 110, 134-140 (2018).</li>
<li>Scheller, E. L., Cawthorn, W. P., Burr, A. A., Horowitz, M. C., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marrow+Adipose+Tissue%3A+Trimming+the+Fat%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Marrow Adipose Tissue: Trimming the Fat.</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 27 (6), 392-403 (2016).</li>
<li>Alexander, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dermal+white+adipose+tissue%3A+a+new+component+of+the+thermogenic+response%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Dermal white adipose tissue: a new component of the thermogenic response.</a> The Journal of Lipid Research. 56 (11), 2061-2069 (2015).</li>
<li>Kruglikov, I. L., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dermal+Adipocytes%3A+From+Irrelevance+to+Metabolic+Targets%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Dermal Adipocytes: From Irrelevance to Metabolic Targets?</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 27 (1), 1-10 (2016).</li>
<li>Iacobellis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+systemic+effects+of+the+multifaceted+epicardial+adipose+tissue+depot%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Local and systemic effects of the multifaceted epicardial adipose tissue depot.</a> Nature Reviews Endocrinology. 11 (6), 363-371 (2015).</li>
<li>Addison, O., Marcus, R. L., LaStayo, P. C., Ryan, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermuscular+Fat%3A+A+Review+of+the+Consequences+and+Causes%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Intermuscular Fat: A Review of the Consequences and Causes.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 1-11 (2014).</li>
<li>Pond, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue+and+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins%2C+Leukotrienes%2C+and+Essential+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue and the immune system.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 17-30 (2005).</li>
<li>Kloppenburg, A. I. -F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+emerging+player+in+knee+osteoarthritis%3A+the+infrapatellar+fat+pad%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">An emerging player in knee osteoarthritis: the infrapatellar fat pad.</a> Arthritis Research & Therapy. 15 (225), 1-9 (2013).</li>
<li>Mann, A., Thompson, A., Robbins, N., Blomkalns, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization%2C+Identification%2C+and+Excision+of+Murine+Adipose+Depots%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52174(2014).</li>
<li>Casteilla, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling%3A+factors+in+selection+and+depot+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods in Molecular Biology. 155, 1-22 (2008).</li>
<li>de Jong, J. M., Larsson, O., Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stringent+validation+of+mouse+adipose+tissue+identity+markers%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">A stringent validation of mouse adipose tissue identity markers.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (12), E1085-E1105 (2015).</li>
<li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adipose+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins%2C+Leukotrienes%2C+and+Essential+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">The adipose organ.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 9-15 (2005).</li>
<li>Parlee, S. D., Lentz, S. I., Mori, H., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+size+and+number+of+adipocytes+in+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Quantifying size and number of adipocytes in adipose tissue.</a> Methods in Enzymology. 537, 93-122 (2014).</li>
<li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Region-specific+variation+in+the+properties+of+skeletal+adipocytes+reveals+regulated+and+constitutive+marrow+adipose+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Region-specific variation in the properties of skeletal adipocytes reveals regulated and constitutive marrow adipose tissues.</a> Nature Communications. 6, 7808(2015).</li>
<li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+osmium+tetroxide+staining+with+microcomputerized+tomography+to+visualize+and+quantify+bone+marrow+adipose+tissue+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Use of osmium tetroxide staining with microcomputerized tomography to visualize and quantify bone marrow adipose tissue in vivo.</a> Methods in Enzymology. 537, 123-139 (2014).</li>
<li>Lukjanenko, L., Brachat, S., Pierrel, E., Lach-Trifilieff, E., Feige, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+profiling+reveals+that+transient+adipogenic+activation+is+a+hallmark+of+mouse+models+of+skeletal+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Genomic profiling reveals that transient adipogenic activation is a hallmark of mouse models of skeletal muscle regeneration.</a> PLoS One. 8 (8), e71084(2013).</li>
<li>Pagano, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+Regeneration+with+Intermuscular+Adipose+Tissue+%28IMAT%29+Accumulation+Is+Modulated+by+Mechanical+Constraints%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Muscle Regeneration with Intermuscular Adipose Tissue (IMAT) Accumulation Is Modulated by Mechanical Constraints.</a> PLoS One. 10 (12), e0144230(2015).</li>
<li>Khan, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermuscular+and+perimuscular+fat+expansion+in+obesity+correlates+with+skeletal+muscle+T+cell+and+macrophage+infiltration+and+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Obesity%22%5BJournal%5D)">Intermuscular and perimuscular fat expansion in obesity correlates with skeletal muscle T cell and macrophage infiltration and insulin resistance.</a> International Journal of Obesity. 39 (11), 1607-1618 (2015).</li>
<li>Sulston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+Circulating+Adiponectin+in+Response+to+Thiazolidinediones%3A+Investigating+the+Role+of+Bone+Marrow+Adipose+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Increased Circulating Adiponectin in Response to Thiazolidinediones: Investigating the Role of Bone Marrow Adipose Tissue.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 128(2016).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Ponieważ coraz częściej uznaje się znaczenie różnorodnych cech molekularnych i funkcjonalnych dyskretnych klastrów adipocytów, ważne jest, aby badacze w tej dziedzinie jednolicie identyfikowali i wycinali magazyny tłuszczu do dalszych analiz. Do tej pory istnieje niewiele protokołów do ustandaryzowanej lokalizacji i izolacji szerokiej gamy mysich magazynów tłuszczu. Wcześniej publikowane metody koncentrują się głównie na jednym lub dwóch magazynach i brakuje im szczegółów niezbędnych do jednolitej identyfikacji i wyodręb...

Tkanka tłuszczowa odgrywa kluczową rolę w homeostazie całego organizmu, w tym w magazynowaniu i uwalnianiu energii w odpowiedzi na potrzeby lokalne i ogólne, termoregulacji oraz wydzielaniu adipokin regulujących bilans energetyczny, metabolizm i odpowiedzi immunologiczne1,2. Adipocyty są rozmieszczone w całym organizmie w postaci oddzielnych depot i w niektórych przypadkach pełnią wyspecjalizowane funkcje w ramach swoich mikrośrodowisk3,4,5. Historycznie badania nad tkanką tłuszczową koncentrowały się na białej tkance tłuszczowej (WAT) i jej roli w utrzymaniu homeostazy energetycznej. Większość adipocytów jest rozmieszczona w organizmie w podskórnych i trzewnych depot WAT. Charakterystyka tych depot ma istotne znaczenie dla zróżnicowanej podatności na choroby metaboliczne. Adipocyty podskórne, znajdujące się pod skórą, są wiązane z ochronnymi efektami metabolicznymi5. Adipocyty trzewne, które otaczają organy żywotne i znajdują się w depot gonadalnych, okołonerkowych, zaotrzewnowych, sieciowych i osierdziowych, są powszechnie wiązane z zaburzeniami metabolicznymi, w tym z cukrzycą typu 2 i chorobami układu sercowo-naczyniowego2. Szeroko badana była również brunatna tkanka tłuszczowa (BAT). Adipocyty brunatne i brunatno-podobne wykazują ekspresję białka rozprzęgającego 1 (UCP1) i odgrywają istotną rolę w adaptacyjnej termogenezie oraz homeostazie glukozy6,7. Klasyczne adipocyty brunatne znajdują się w międzyłopatkowym depot BAT8. Gromady adipocytów brunatnych występują również w innych lokalizacjach, w tym w depot nadobojczykowych, podłopatkowych, szyjnych, przykręgowych i okołoaortycznych8,9.
Oprócz lokalizacji w głównych depot WAT i BAT, adipocyty występują w odrębnych niszach w całym organizmie4, gdzie mogą pełnić wyspecjalizowane funkcje w ramach swoich odpowiednich mikrośrodowisk. Na przykład tkanka tłuszczowa szpiku kostnego (BMAT) służy jako rezerwuar lipidów, jest głównym źródłem krążącej adiponektyny i ściśle oddziałuje z osteoblastami, osteoklastami oraz komórkami krwiotwórczymi10,11. Adipocyty skórne uczestniczą w rozległych procesach, w tym w gojeniu ran, odpowiedzi immunologicznej, termoregulacji i wzroście mieszków włosowych12,13. Ponadto adipocyty epikardialne mogą produkować szereg adipokin i chemokin, które wywierają lokalny i systemowy wpływ na rozwój i progresję choroby wieńcowej14. Ekspansja WAT między- i wewnątrzmięśniowego wykazuje dodatnią korelację ze zwiększoną otyłością, systemową insulinoopornością oraz zmniejszeniem siły i mobilności mięśni15. Dodatkowo adipocyty podkolanowe służą jako rezerwuar lipidów dla ekspansji limfatycznej podczas infekcji16. Choć specyficzne role różnych depot stawowych są zazwyczaj nieznane, uważa się obecnie, że depot Hoffy (podrzepkowy) w kolanie przyczynia się do patologii, w tym do przedniego bólu kolana i choroby zwyrodnieniowej stawów17.
Podczas gdy regionalne różnice w charakterystyce i funkcji adipocytów są przedmiotem intensywnych badań, dziedzina ta jest obecnie ograniczona brakiem zestandaryzowanego protokołu identyfikacji i wycinania różnorodnych depot mysich. Wcześniej opublikowane metody zazwyczaj opisywały izolację jednego lub dwóch konkretnych depot i nie zawierały poziomu szczegółowości wymaganego do jednolitego wycięcia18,19. Protokół opisany w niniejszym manuskrypcie stanowi kompleksowy przewodnik po konkretnych lokalizacjach anatomicznych i etapach izolacji wielu różnych depot tkanki tłuszczowej myszy. Choć głównym przedmiotem niniejszego manuskryptu są depot WAT, szczegółowo opisano również wycięcie międzyłopatkowego BAT. Tkanki tłuszczowe wycięte zgodnie z tym protokołem mogą być wykorzystane w szerokiej gamie punktów końcowych eksperymentów, w tym w badaniach eksplantów, histologii oraz analizach ekspresji genów.
Celem niniejszej publikacji jest dostarczenie badaczom szczegółowego protokołu pozwalającego na jasną i precyzyjną identyfikację oraz izolację zarówno głównych, jak i słabiej przebadanych depot tłuszczowych myszy (Rycina 1). Zasób ten ułatwi pełniejsze zbadanie cech rozwojowych, molekularnych i funkcjonalnych adypocytów w różnych niszach.
<img alt="Schemat rozmieszczenia tkanki tłuszczowej u myszy z opisanymi depotami tłuszczowymi, naukowe badanie otyłości." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig1.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1: Schematyczne przedstawienie depotów tłuszczowych myszy wyizolowanych w niniejszym protokole. Obraz został zaadaptowany z pracy Bagchi i wsp., 20184. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59499/59499fig1large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>

<table><tbody><tr><td>10% neutralna buforowana formalina</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-110-869</td><td></td></tr><tr><td>Płytki 24-dołkowe, nieobrobione</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3738</td><td></td></tr><tr><td>70% etanolu (rozcieńczony od 95%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>04-355-226</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze preparacyjne z zakrzywionymi końcówkami</td><td>VWR</td><td>89259-946</td><td></td></tr><tr><td>Patelnia sekcyjna</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td></td><td></td>629004</tr><tr><td>Nożyczki preparacyjne (ostra/końcówka)</td><td>VWR</td><td>82027-588</td><td></td></tr><tr><td>Gąbki z gazy</td><td>Vitality Medical</td><td>2634</td><td>Curity Gąbka z gazy 4 cale x 4 cale, 12-warstwowe</td></tr><tr><td>szpilki Handi-Pins do preparacji</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td></td> 629132 <td></td></tr><tr><td>Nożyczki do przysłony (proste)</td><td>VWR</td><td>470018-890</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>VetOne</td><td></td><td></td>501017</tr><tr><td>Skalpel</td><td>VWR</td><td>100499-578</td><td>Rękojeść z pióra z ostrzem, jednorazowa</td></tr></tbody></table>

identyfikacja i sekcja różnorodnych mysich magazynów tłuszczowych

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

Tkanki tłuszczowe to złożone organy o szerokim wachlarzu funkcji, w tym magazynowaniu i mobilizacji energii w odpowiedzi na lokalne i globalne potrzeby, rozłączaniu metabolizmu w celu generowania ciepła oraz wydzielaniu adipokin w celu regulacji homeostazy całego ciała i odpowiedzi immunologicznej. Nowe badania identyfikują ważne różnice regionalne w profilach rozwojowych, molekularnych i funkcjonalnych adipocytów zlokalizowanych w dyskretnych magazynach w całym ciele. Różne właściwości magazynów są istotne z medycznego punktu widzenia, ponieważ choroby metaboliczne często wykazują skutki specyficzne dla zajezdni. Protokół ten zapewni badaczom szczegółowy atlas anatomiczny i przewodnik po sekcjach w celu powtarzalnej i dokładnej identyfikacji i wycinania różnych tkanek tłuszczowych myszy. Standaryzowana sekcja dyskretnych magazynów tłuszczowych pozwoli na szczegółowe porównania ich cech molekularnych i metabolicznych oraz udziału w lokalnych i ogólnoustrojowych stanach patologicznych w różnych warunkach żywieniowych i środowiskowych.

Pomyślną identyfikację i izolację różnych depot tłuszczowych myszy można przeprowadzić zgodnie z opisanym powyżej protokołem. Makroskopowe lokalizacje anatomiczne depot podskórnych (A, E-F), brunatnych (B), trzewnych (C, D, G-J) oraz podkolanowych (K) przedstawiono na Rysunku 2.
<img alt="Schemat sekcji pokazujący organy wewnętrzne gryzonia do badań anatomicznych, widoczne opisane części." class="xf...

Adipocyty istnieją w oddzielnych magazynach i pełnią różne role w swoich unikalnych mikrośrodowiskach. W miarę odkrywania regionalnych różnic w charakterze i funkcji adipocytów, ustandaryzowana identyfikacja i izolacja magazynów ma kluczowe znaczenie dla postępu w tej dziedzinie. W niniejszym artykule przedstawiamy szczegółowy protokół wycinki różnych magazynów tłuszczu myszy.

Identyfikacja i sekcja różnorodnych mysich magazynów tłuszczowych

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...

Ustandaryzowana metodologia identyfikacji i preparowania magazynów tłuszczowych w całym ciele ma kluczowe znaczenie dla badania różnic w charakterze i funkcji adipocytów w dyskretnych niszach anatomicznych. Główną zaletą tej techniki jest to, że jest to niezawodna i dokładna metoda identyfikacji i wycinania zarówno powszechnych, jak i mniej zbadanych magazynów tłuszczu gryzoni. W celu identyfikacji i wyizolowania międzyłopatkowego BAT użyj nożyczek do tęczówki, aby przeciąć poziomo wzdłuż dolnej krawędzi przedniej tkanki podskórnej myszy poddanej eutanazji wzdłuż naturalnej granicy magazynu.Wykonaj dwa pionowe nacięcia wzdłuż bocznych krawędzi magazynu, podążając za naturalnymi granicami tkanki. Użyj kleszczy, aby ostrożnie podnieść magazyn, aby odsłonić brązową tkankę tłuszczową w kształcie motyla w kształcie motyla osadzoną w białej tkance tłuszczowej. Następnie ostrożnie odciąć BAT od otaczającego WAT.Tkanki tłuszczowe należy przechowywać w odpowiednich pojemnikach do dalszej analizy. W celu identyfikacji i wyizolowania tylnego podskórnego WAT należy umieścić mysz w pozycji leżącej na plecach i zabezpieczyć kończyny zwierzęcia. Użyj kleszczy, aby podnieść skórę u podstawy mostka i wykonać jednomilimetrowe nacięcie skóry.Włóż jedno ostrze nożyczek do tęczówki do nacięcia i wykonaj nacięcie skóry w linii środkowej od czterech do pięciu centymetrów, zaczynając od podstawy mostka i wznosząc się do podstawy ogona. Następnie wykonaj dwa jednocentymetrowe poziome nacięcia u góry początkowego pionowego nacięcia rozciągającego się bocznie od linii środkowej. Za pomocą kleszczy ostrożnie odkleić skórę od jamy otrzewnej, za pomocą nogi zlokalizować tylną podskórną część WAT, która powinna pozostać połączona ze skórą.Przypnij rozciągniętą skórę i całkowicie wytnij trójkątny pachwinowy magazyn WAT od podstawy kończyny tylnej brzusznie w poprzek pachwiny. W celu identyfikacji i izolacji trzewnej WAT należy użyć kleszczy, aby podnieść cienką ścianę jamy otrzewnej u podstawy mostka i wykonać jednomilimetrowe nacięcie w tkance namiotu. Włóż jedno ostrze nożyczek do tęczówki do nacięcia i wykonaj pionowe nacięcie o długości od czterech do pięciu centymetrów w dół od górnej części jamy otrzewnej do odbytnicy.Wykonaj dwa jednocentymetrowe poziome nacięcia u góry i u dołu pionowego nacięcia wystające bocznie od linii środkowej i użyj kleszczy, aby odkleić otrzewną, aby odsłonić zawartość jamy brzusznej. Następnie przypnij rozciągniętą otrzewną do miski rozbiorowej, aby zebrać zapasy WAT znajdujące się w jamie otrzewnej. W celu identyfikacji i wyizolowania trzewnych gonad WAT, zlokalizuj gonady i użyj kleszczy, aby podnieść powiązany gonady WAT, a następnie użyj nożyczek do tęczówki, aby ostrożnie wyciąć WAT z gonad.Aby wyciąć magazyn okołonerkowy, zlokalizuj nerkę i użyj kleszczy, aby podnieść tkankę nerkową. Pociągnij nerkę do linii środkowej, aby zobaczyć wyraźny podział między magazynami okołoonerkowymi i zaotrzewnowymi i wyciąć WAT bezpośrednio związany z nerkami. Następnie usuń nadnercza znajdujące się nad nerkami z WAT.W celu identyfikacji i izolacji zaotrzewnowej WAT ponownie podnieś nerkę do linii środkowej i użyj nożyczek do tęczówki, aby ostrożnie wypreparować zaotrzewnową WAT z tylnej ściany otrzewnej. Aby odizolować podkolanowy WAT, umieść rzepkę na misce preparacyjnej, uważając, aby dół podkolanowy z tyłu kolana był skierowany do góry. Użyj nożyczek do tęczówki, aby ostrożnie usunąć skórę od podstawy kończyny tylnej do stopy.Użyj nożyczek do tęczówki, aby wykonać cięcie na dolnej granicy przyśrodkowej i bocznej głowy mięśnia brzuchatego łydki, użyj kleszczy, aby podnieść mięsień, aby odsłonić trójkątny magazyn podkolanowy. Następnie użyj nożyczek do tęczówki, aby wyciąć magazyn wzdłuż naturalnych granic tkanek. Tutaj pokazano ogólne lokalizacje anatomiczne mysich magazynów podskórnych, brązowych, trzewnych i podkolanowych.Charakterystykę histologiczną podskórnych, brązowych, trzewnych, podkolanowych, konstytutywnych i regulowanych magazynów tłuszczu szpikowego, śródmięśniowego i podrzepkowego można ocenić za pomocą standardowych protokołów barwienia hematoksyliną i eozyną. Tkanki tłuszczowe wyizolowane przy użyciu tego protokołu mogą być wykorzystywane do wielu różnych eksperymentalnych punktów końcowych, w tym do analizy histologicznej, badań molekularnych oraz analizy ekspresji genów i białek. Standaryzacja w całej dziedzinie identyfikacji różnorodnych magazynów tłuszczowych niewątpliwie pomoże nam lepiej zrozumieć ich cechy molekularne i metaboliczne oraz ich zróżnicowany wkład w lokalne i systematyczne stany patologiczne.

identification-and-dissection-of-diverse-mouse-adipose-depots

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

W tym filmie pokazujemy procedurę chirurgiczną polegającą na izolowaniu podskórnej białej tkanki tłuszczowej i brązowej tkanki tłuszczowej między łopatkami od nowonarodzonej myszy.

Kolekcja White and Brown Adipose Depot od Mouse Pup: procedura chirurgiczna mająca na celu zebranie białej tkanki tłuszczowej i brązowej tkanki tłuszczowej od szczeniaka myszy

Ze względu na drastyczny i negatywny związek między otyłością a innymi chorobami współistniejącymi, uzasadnione są badania nad rolą tłuszczu w chorobach i ogólnym zdrowiu. Przedstawiamy protokół izolacji i wycinania magazynów tłuszczowych pozwalający na badanie tkanki tłuszczowej metodami in situ i in vitro.

Lokalizacja, identyfikacja i wycięcie mysich magazynów tłuszczu

Tkanka tłuszczowa (AT) może wpływać na homeostazę całego organizmu, dlatego zrozumienie molekularnych mechanizmów różnicowania i funkcji adipocytów jest ważne. Udostępniamy protokół uzyskiwania nowych informacji na temat tych procesów poprzez analizę homeostazy, różnicowania i ekspozycji na niedotlenienie adipocytów jako modelu indukowanej apoptozy adipocytów.

Mechanizm regulacji liczby adipocytów w organizmach dorosłych poprzez różnicowanie i homeostazę apoptozy

Celem tego artykułu jest przedstawienie krok po kroku procedury pobierania różnych białych tkanek tłuszczowych od myszy, przetwarzania próbek tłuszczu i ekstrakcji RNA.

Pobieranie i przetwarzanie tkanki tłuszczowej myszy do analizy RNA

Ten protokół opisuje techniczne podejście do izolowania subpopulacji komórek zrębu adipogennych i włóknisto-zapalnych z mysich magazynów białej tkanki tłuszczowej (WAT) w jamie brzusznej poprzez sortowanie komórek aktywowane fluorescencją lub separację kulek immunomagnetycznych.

Izolacja adipogennych i włóknisto-zapalnych subpopulacji komórek zrębu z mysich wewnątrzbrzusznych magazynów tłuszczu

Tutaj opisujemy prostą, tanią i szybką metodę oczyszczania struktury 3D zarówno mysjej, jak i ludzkiej białej tkanki tłuszczowej za pomocą kombinacji markerów do wizualizacji układu naczyniowego, jąder, komórek odpornościowych, neuronów i białek płaszcza lipidowo-kropelkowego za pomocą obrazowania fluorescencyjnego.

Badanie struktury tkanki tłuszczowej poprzez oczyszczanie salicylanu metylu i obrazowanie 3D

Ten raport opisuje protokół jednoczesnej izolacji pierwotnych brązowych i białych preadipocytów od nowonarodzonych myszy. Wyizolowane komórki można hodować w hodowli i indukować do różnicowania się w pełni dojrzałe białe i brązowe adipocyty. Metoda umożliwia genetyczną, molekularną i funkcjonalną charakterystykę pierwotnych komórek tłuszczowych w hodowli.

Izolacja i różnicowanie pierwotnych białych i brązowych preadipocytów od nowonarodzonych myszy

Ten protokół szczegółowo opisuje metodę preparacji mysich magazynów tłuszczu oraz izolacji i trawienia odpowiednich tętnic w celu uwolnienia, a następnie zidentyfikowania populacji komórek śródbłonka. Świeżo wyizolowane komórki wykorzystywane w dalszych zastosowaniach przyczynią się do lepszego zrozumienia biologii komórek naczyniowych i mechanizmów dysfunkcji naczyń krwionośnych.

Izolacja i identyfikacja komórek śródbłonka naczyń krwionośnych z różnych magazynów tłuszczu do dalszych zastosowań

Preadipocyty są izolowane z frakcji naczyniowej zrębu międzyłopatkowej brązowej tkanki tłuszczowej od nowonarodzonych myszy i różnicowane w komórki, które gromadzą kropelki lipidów, wyrażają markery molekularne i pokazują morfologię mitochondriów dojrzałych brązowych adipocytów. Komórki te są dalej analizowane za pomocą immunofluorescencji i transmisyjnej mikroskopii elektronowej.

Różnicowanie i obrazowanie brązowych adipocytów z frakcji zrębowej naczyniowej tkanki tłuszczowej śródłopatkowej od nowonarodzonych myszy

Tutaj oferujemy praktyczną procedurę preparowania i przeprowadzania analiz histologicznych oraz analiz ekspresji genów mysiej brunatnej tkanki tłuszczowej nadobojczykowej.

Rozwarstwienie, przetwarzanie histologiczne i analiza ekspresji genów mysiej brunatnej tkanki tłuszczowej nadobojczykowej

Rozmiar i kruchość dojrzałych adipocytów ograniczyły dostępne techniki i narzędzia do ich badania i izolacji. W tym miejscu opisano protokół izolacji dojrzałych mysich adipocytów, który można łatwo dostosować do różnych magazynów tłuszczowych i diety myszy.

Izolacja i hodowla pierwotnych mysich adipocytów od myszy chudych i otyłych

Poznaj metodę identyfikacji i izolacji różnorodnych magazynów tłuszczowych u myszy, w tym tkanki brunatnej i podskórnej. Standardizowany protokół umożliwia analizy histologiczne oraz badania ekspresji genów i białek.

Identyfikacja i sekcja różnorodnych mysich magazynów tłuszczowych

Przeglądaj więcej filmów