Name: Techniczny aspekt automatycznej syntezy i oceny kinetycznej w czasie rzeczywistym 11C SNAP-7941 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Poznaj zautomatyzowaną syntezę [11C]SNAP-7941 do obrazowania PET i analizy kinetyki wiązania w czasie rzeczywistym. Metoda umożliwia badanie ekspresji receptorów w komórkach z i bez P-gp.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Austriacki Fundusz Naukowy (FWF P26502-B24, M. Mitterhauser). Jesteśmy wdzięczni za wsparcie techniczne T. Zenz i A. Krcal. Ponadto dziękujemy K. Pallitschowi za przygotowanie AgOTf i H. Spreitzerowi za dystrybucję prekursora.

<ol><li>Saito, Y., Maruyama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+melanin-concentrating+hormone+receptor+and+its+impact+on+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Zoology%22%5BJournal%5D)">Identification of melanin-concentrating hormone receptor and its impact on drug discovery.</a> Journal of Experimental Zoology. 305, 761-768 (2006).</li>
<li>Philippe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+in+vitro+%26+in+vivo+evaluation+of+%5B11C%5DSNAP-7941+-+the+first+PET+tracer+for+the+melanin+concentrating+hormone+receptor+1%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Preclinical in vitro & in vivo evaluation of [11C]SNAP-7941 - the first PET tracer for the melanin concentrating hormone receptor 1.</a> Nuclear Medicine and Biology. 40, 919-925 (2013).</li>
<li>Philippe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiosynthesis+of+%5B+11C%5DSNAP-7941-the+first+PET-tracer+for+the+melanin+concentrating+hormone+receptor+1+%28MCHR1%29%5BTitle%5D)+AND+%22Applied.+Radiation+and+Isotopes%22%5BJournal%5D)">Radiosynthesis of [ 11C]SNAP-7941-the first PET-tracer for the melanin concentrating hormone receptor 1 (MCHR1).</a> Applied. Radiation and Isotopes. 70, 2287-2294 (2012).</li>
<li>Philippe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SNAPshots+of+the+MCHR1%E2%80%AF%3A+a+Comparison+Between+the+PET-Tracers+%5B+18+F+%5D+FE+%40+SNAP+and+%5B+11+C+%5D+SNAP-7941%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Imaging+Biology%22%5BJournal%5D)">SNAPshots of the MCHR1 : a Comparison Between the PET-Tracers [ 18 F ] FE @ SNAP and [ 11 C ] SNAP-7941.</a> Molecular Imaging Biology. , 1-12 (2018).</li>
<li>Schirmer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Syntheses+of+precursors+and+reference+compounds+of+the+melanin-+concentrating+hormone+receptor+1+%28MCHR1%29+Tracers+%5B11C%5DSNAP-7941+and+%5B18F%5DFE%40SNAP+for+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Syntheses of precursors and reference compounds of the melanin- concentrating hormone receptor 1 (MCHR1) Tracers [11C]SNAP-7941 and [18F]FE@SNAP for positron emission tomography.</a> Molecules. 18, 12119-12143 (2013).</li>
<li>Miller, P. W., Long, N. J., Vilar, R., Gee, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthese+von+11C-%2C+18F-%2C+15O-+und+13N-Radiotracern+f%C3%BCr+die+Positronenemissionstomographie%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie%22%5BJournal%5D)">Synthese von 11C-, 18F-, 15O- und 13N-Radiotracern für die Positronenemissionstomographie.</a> Angewandte Chemie. 120, 9136-9172 (2008).</li>
<li>Pichler, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+on+PET+radiochemistry%3A+part+1+-+covalent+labels+-+18+F%2C+11+C%2C+and+13+N%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">An overview on PET radiochemistry: part 1 - covalent labels - 18 F, 11 C, and 13 N.</a> Journal of Nuclear Medicine. 59, 1350-1354 (2018).</li>
<li>Pichler, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molar+activity+-+The+keystone+in+11C-radiochemistry%3A+An+explorative+study+using+the+gas+phase+method%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Molar activity - The keystone in 11C-radiochemistry: An explorative study using the gas phase method.</a> Nuclear Medicine and Biology. 67, 21-26 (2018).</li>
<li>Larsen, P., Ulin, J., Dahlstrøm, K., Jensen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+%5B11C%5Diodomethane+by+iodination+of+%5B11C%5Dmethane%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Radiation+and+Isotopes%22%5BJournal%5D)">Synthesis of [11C]iodomethane by iodination of [11C]methane.</a> Applied Radiation and Isotopes. 48, 153-157 (1997).</li>
<li>Dahl, K., Halldin, C., Schou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+methodologies+for+the+preparation+of+carbon-11+labeled+radiopharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Translational+Imaging%22%5BJournal%5D)">New methodologies for the preparation of carbon-11 labeled radiopharmaceuticals.</a> Clinical and Translational Imaging. 5, 275-289 (2017).</li>
<li>Raaphorst, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiopharmaceuticals+for+assessing+ABC+transporters+at+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical.+Pharmacollogy+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Radiopharmaceuticals for assessing ABC transporters at the blood-brain barrier.</a> Clinical. Pharmacollogy & Therapeutics. 97, 362-371 (2015).</li>
<li>Nics, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Speed+matters+to+raise+molar+radioactivity%3A+Fast+HPLC+shortens+the+quality+control+of+C-11+PET-tracers%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Speed matters to raise molar radioactivity: Fast HPLC shortens the quality control of C-11 PET-tracers.</a> Nuclear Medicine and Biology. 57, 28-33 (2018).</li>
<li>Zeilinger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+approaches+for+the+reliable+in+vitro+assessment+of+binding+affinity+based+on+high-resolution+real-time+data+acquisition+of+radioligand-receptor+binding+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging+%28Research%29%22%5BJournal%5D)">New approaches for the reliable in vitro assessment of binding affinity based on high-resolution real-time data acquisition of radioligand-receptor binding kinetics.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging (Research). 7, 22(2017).</li>
</ol>

Nie mamy nic do ujawnienia.

Radiosynteza [11C]SNAP-7941 została ustanowiona na komercyjnym module syntezy. Dzięki możliwości pełnej automatyzacji procesu przygotowania, radiosynteza okazała się niezawodna, a także osiągnięto poprawę w zakresie ochrony radiologicznej operatora. Przygotowanie syntezatora ma ogromny wpływ na jakość radioznacznika, szczególnie w zakresie aktywności molowej. W związku z tym niezbędna jest ciągła praca w warunkach obojętnych (np. atmosfera helu) oraz przepłukiwanie wszystkich przewodów znajdujących się przed zbiornikiem reakcyjnym (linia docelowa, cykl produkcyjny [11C]CH3I i reaktor (patrz rysunek 2)). Ponadto podgrzanie odpowiednich pułapek i pieców przed rozpoczęciem syntezy w celu usunięcia wilgoci i węgla atmosferycznego korzystnie zwiększa aktywność molową. Szczególnie kolumna AgOTf, impregnowana grafityzowanym węglem, jest niezwykle wrażliwa na wilgoć. Nawet niewielkie ilości jakiegokolwiek źródła wilgoci zakłócają przemianę [11C]CH3I w [11C]CH3OTf. Przed rozpoczęciem syntezy, pułapka [11C]CO2 i pułapka [11C]CH3I muszą zostać ponownie schłodzone do temperatury pokojowej, aby umożliwić późniejsze wychwytywanie. Ponadto zaleca się rozpuszczenie prekursora na krótko przed rozpoczęciem syntezy i dodanie zasady bezpośrednio do roztworu prekursora.
Kontrola jakości radioznaczników węgla-11 musi być racjonalnie zaprojektowana, aby zapewnić ciągły i szybki przebieg pracy. Jednak najważniejszymi parametrami w badaniach hodowli komórkowych są czystość radiochemiczna i aktywność molowa w celu uzyskania prawidłowych wyników. Prawidłowa ocena aktywności molowej wymaga solidnej analitycznej metody HPLC, a krzywa kalibracyjna musi obejmować zakres stężeń produktu końcowego. Wyzwaniem dla radioznaczników jest osiągnięcie stężenia powyżej granicy oznaczalności (LOQ) ze względu na niewielkie ilości, które są wytwarzane podczas radiosyntezy. W związku z tym sztuka polega na znalezieniu równowagi między wysoką aktywnością molową, aby uniknąć nasycenia receptorów, a wystarczająco wysokimi stężeniami, aby nadal być w stanie określić ilościowo sygnał nieradioaktywny.
[11kategorii]Potwierdzono, że SNAP-7941 jest silnym substratem ludzkiego transportera P-gp, ponieważ nie zaobserwowano akumulacji w nieleczonych lub traktowanych nośnikiem komórkach MDCKII-hMDR1 z powodu szybkiego wypływu. W przeciwieństwie do tego, oba zestawy eksperymentalne (MDCKII-WT lub wstępnie zablokowane komórki MDCKII-hMDR1) dostarczyły podobnych wyników (akumulacja [11C]SNAP-7941), co potwierdza wszechstronność tego testu in vitro. Komórki MDCKII-hMDR1 doskonale nadają się do eksperymentów LigandTracer ze względu na ich stabilną transfekcję, szybki wzrost i odporność na naprężenia ścinające spowodowane przez obracającą się miskę do hodowli komórek. Brak wychwytu [11C]SNAP-7941 w mózgu szczura i myszy może zatem wystąpić spowodowany wypływem przez transporter P-gp. Ze względu na transfekcję komórek nerki psów ludzkim białkiem wielolekooporności 1 (hMDR-1, P-gp), wartość predykcyjna tej metody dla wiązania transportera wypływu u ludzi jest wysoka, co jest korzystne z punktu widzenia przyszłego zastosowania klinicznego. Jednak do tej pory selektywność w stosunku do innych transporterów wypływu nie została zweryfikowana. W związku z tym można wykorzystać inne linie komórkowe, wyrażające różne znaczące transportery wypływu, takie jak białko oporności na raka piersi (BCRP) lub białko oporności wielokrotnej-1 (MRP-1), w celu zbadania interakcji z tymi transporterami. Metoda jest w porównaniu z klasycznymi testami akumulacji lub transportu bardzo prosta i daje natychmiastowe wyniki jakościowe. Co więcej, największą zaletą jest to, że technologia ta umożliwia ocenę bezpośredniej interakcji znacznika PET z celem w czasie rzeczywistym, w przeciwieństwie do konwencjonalnego eksperymentu wykorzystującego pośrednią kwantyfikację (głównie przemieszczenie). Ponadto oprogramowanie do testów radioaktywnych w czasie rzeczywistym zapewnia elastyczność eksperymentalną (np. korekcja rozpadu nuklidów, pomiar czasu i pozycji itp.), a tym samym dużą swobodę dla użytkowników. Z drugiej strony, ograniczenia metody obejmują niską przepustowość próbki, ponieważ jednocześnie można zmierzyć tylko jedną szalkę komórkową. Ponadto należy wziąć pod uwagę kilka innych kwestii technicznych i eksploatacyjnych: opisywana technologia jest bardzo wrażliwa na promieniowanie tła; W związku z tym źródła promieniowania powinny być trzymane w pewnej odległości i należy położyć nacisk na pomiar tła przed eksperymentem. Inną kwestią dotyczącą eksperymentów w temperaturach wyższych niż temperatura pokojowa jest nagrzewanie się pochyłego podłoża: parowanie pożywki do hodowli komórkowej może mieć wpływ na detektor. Zamiast podgrzewać, całe urządzenie najlepiej umieścić w inkubatorze. Co więcej, metoda ogranicza się do przylegających linii komórkowych. Poprzez obracanie naczynia do hodowli komórkowej komórki wrażliwe na naprężenia ścinające mogą odłączyć się od naczynia, co może prowadzić do nieprawidłowych wyników.
Niemniej jednak, jeśli eksperymentator zwróci uwagę na te drobne wady, metoda dostarcza szybkich i wiarygodnych wyników do analizy zachowania kinetycznego przedklinicznych znaczników PET.

[11C]SNAP-7941 został opracowany jako pierwszy znacznik pozytonowej tomografii emisyjnej (PET) ukierunkowany na receptor hormonu koncentracji melaniny 1 (MCHR1) - receptor głównie zaangażowany w centralną regulację apetytu i przyjmowania pokarmu1. Oznaczenie węglem-11 SNAP-7941, dobrze scharakteryzowanego antagonisty MCHR1, dało autentyczny znacznik PET2,3,4,5. Jednak w pełni zautomatyzowana radiosynteza jest bardzo trudna pod względem skuteczności czasowej i odtwarzalności, ponieważ krótkożyciowy radionuklid węgiel-11 oferuje okres półtrwania wynoszący 20 min6. Całkowity czas syntezy powinien być ograniczony do minimum i z reguły nie powinien przekraczać 2-3 okresów półtrwania (tj. około 40-60 minut dla węgla-11)7. W szczególności procedury syntezy radioznaczników ukierunkowanych na systemy receptorowe o niskiej gęstości ekspresji muszą być znacznie zoptymalizowane, aby uzyskać wystarczającą wydajność, a co za tym idzie wysoką aktywność molową8. Strategia syntezy często następuje po produkcji radionuklidów w cyklotronie i uwolnieniu [11C]CO2 do syntezatora. Tam [11C]CO2 jest najpierw redukowany do [11C]CH4, a następnie reagowany z jodem, aby uzyskać [11C]CH3I metodą fazy gazowej9,10. Dalsza obróbka triflatem srebra daje [11C]CH3OTf bezpośrednio on-line. Następnie ten reaktywny produkt pośredni znakowany węglem-11 wprowadza się do roztworu zawierającego cząsteczkę prekursora. Zautomatyzowana radiosynteza obejmuje dodatkowo proces oczyszczania za pomocą półpreparatywnego RP-HPLC, a następnie formułowanie produktu odpowiedniego do badań przedklinicznych i klinicznych.
Niezależnie od okresu półtrwania radionuklidu i czasu potrzebnego na radiosyntezę, farmakokinetyka radiofarmaceutyku jest najbardziej krytycznym elementem do oceny podczas opracowywania znacznika PET. Jeśli chodzi o neuroobrazowanie, głównym warunkiem wstępnym jest wejście do mózgu znacznika PET. Jednak bariera krew-mózg (BBB), "granica bezpieczeństwa" mózgu, wykazuje wysoką ekspresję transporterów wypływu, które mogą rozładowywać małe cząsteczki (np. znaczniki PET) i skutecznie utrudniać ich zastosowanie.
Ogromnym mankamentem podczas oceny przedklinicznej są nieoczekiwane interakcje z tymi transporterami wypływu, które często nie są rozpoznawane w eksperymentach in vitro i prowadzą do niepowodzenia znacznika PET in vivo, jak zaobserwowano dla [11C]SNAP-7941. Obrazowanie μPET u szczurów wykazało niską akumulację w mózgu, która znacznie wzrosła po podaniu inhibitora P-gp tariquidar11. Dane te sugerowały, że [11C]SNAP-7941 jest substratem tego systemu transportera wypływu, utrudniającym wiązanie liganda z centralnym MCHR1. Niestety, nadal brakuje odpowiednich modeli in vitro umożliwiających przewidywanie penetracji BBB we wczesnym etapie rozwoju znacznika.
Tutaj opisujemy automatyczną syntezę [11C]SNAP-7941 przy użyciu syntezatora do metylacji węgla-11. Nacisk kładziony jest na przedstawienie przeglądu tego, jak zorganizować kolejne podejście eksperymentalne, w tym automatyczną syntezę, kontrolę jakości, a także sukcesywną ocenę in vitro z bardzo krótkożyciowym nuklidem węgla-11.
Po pierwsze, opisane są kluczowe kroki do udanej radiosyntezy przy minimalnym nakładzie czasu i maksymalnej wydajności. Następnie ustalana jest wiarygodna procedura kontroli jakości, dzięki której radioznacznik jest dostępny do potencjalnych badań klinicznych i spełnia kryteria Farmakopei Europejskiej12. Kwantyfikacja stężenia molowego i obliczenie odpowiedniej aktywności molowej jest podstawowym wymogiem dla kolejnych pomiarów kinetycznych.
Na koniec, przedstawiono nową i prostą metodę in vitro oceniającą interakcje [11C]SNAP-7941 z transporterem wypływu, P-gp (hMDR1). Proponowany model kinetyczny wykorzystuje łatwe w obsłudze urządzenie, które umożliwia natychmiastową interpretację danych i wymaga minimalnego wysiłku związanego z hodowlą komórkową13.

<table><tbody><tr><td>Tabela 1: Wykaz materiałów i oprzyrządowania w pełni zautomatyzowanej radiosyntezy katalizatora [11C]SNAP-7941</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ni</td><td>Shimadzu, Kioto, Japonia</td><td></td><td>Szimalilt Ni zredukowany, 80/100 mesh</td></tr><tr><td>Jod</td><td>Merck, Darmstadt, Niemcy</td><td></td><td>1.04761.0100</td></tr><tr><td>Acetonitryl</td><td>Merck, Darmstadt, Niemcy</td><td></td><td>do syntezy DNA, < 10 ppm H2O</td></tr><tr><td>Acetonitryl</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Octan amonu</td> klasy <td>HPLC Merck, Darmstadt, Niemcy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kwas octowy</td><td>Merck, Darmstadt, Niemcy</td><td></td><td>Lodowaty</td></tr> etanol <tr><td></td><td>Merck, Darmstadt, Niemcy</td><td></td><td>96%</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>B. Braun, Melsungen, Niemcy</td><td></td><td>0,9% </td></tr><tr><td>Wodorotlenek tetrabutyloamonu</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Stany Zjednoczone</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kartridż SPE</td> klasy HPLC <td>Waters, Milford, MA, USA</td><td></td><td>SepPak C18plus</td></tr><tr><td>Półpreparatywna kolumna RP-HPLC</td><td>Merck, Darmstadt, Niemcy</td><td></td><td>Chromolith SemiPrep RP-18e, 100-10 mm</td></tr><tr><td>Kolumna</td> <td>wstępnaMerck, Darmstadt, Niemcy</td><td></td><td>Chromolith Guard RP-18e, 5-4,6 mm</td></tr><tr><td>Prekursor</td><td>Uniwersytet Wiedeński, Austria</td><td></td><td>Kwas SNAP</td></tr><tr><td>Związek referencyjny</td><td>Uniwersytet Wiedeński, Austria</td><td></td><td>SNAP-7941</td></tr><tr><td>Trifluorometanosulfonian srebra</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Graphpa GC</td><td>Alltech, Deerfield, IL, USA</td><td></td><td>80/100 mesh</td></tr><tr><td>PET ślad 860 cyklotron</td><td>GE Healthcare, Uppsala, Szwecja</td><td></td><td></td></tr><tr><td>[11C]CO2 wysokociśnieniowy cel</td><td>Air Liquide, Wiedeń, Austria</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TRACERlabFX2 C</td><td>GE Healthcare, Uppsala, Szwecja</td><td></td><td></td></tr><tr><td>N2 + 1% O2</td><td>Air Liquide, Wiedeń, Austria</td><td></td><td>Celowy gaz</td></tr><tr><td><silny>Nazwa<</td><td>strong>Firma</td><td>Numer katalogowy</td><td>Uwagi</td></tr><tr><td>Tabela 2: Wykaz materiałów i oprzyrządowania kontroli jakości [11C]SNAP-7941.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Merck Hitachi LaChrom, L-7100</td><td>Hitachi Vantara Austria GmbH (Wiedeń, Austria)</td><td></td><td>Pompa HPLC</td></tr><tr><td>Merck Hitachi, L7400</td><td>Hitachi Vantara Austria GmbH (Tokio, Japonia)</td><td></td><td>Detektor UV</td></tr><tr><td>NaI-radiodetektor</td><td>Raytest (Straubenhardt, Niemcy)</td><td></td><td>Radiodetektor NaI</td></tr><tr><td>Chromolith Performance RP-18e, 100-4,6 mm</td><td>Merck (Darmstadt, Niemcy)</td><td></td><td>Kolumna HPLC</td></tr><tr><td>430-GC</td><td>Bruker (Brema, Niemcy)</td><td></td><td>Chromatograf gazowy</td></tr><tr><td>Kolumna kapilarna ID-BP20; 12 mx0,22 mmx0,25 mm</td><td>SGE Ananlytical Science Pty. Ltd. (Victoria, Australia)</td><td></td><td>Kapilara gazowa</td></tr><tr><td>Wesco, osmometr Vapro 5600</td><td>Sanoya Medical Systems (Wiedeń, Austria)</td><td></td><td>Osmometr</td></tr><tr><td>spektrometr</td><td></td><td></td><td>g</td></tr><tr><td>Oprogramowanie sterujące chromatografią gazową</td><td>VARIAN (Palo Alto, Kalifornia, USA)</td><td></td> <td>Galaxie Wersja 1.9.302.952</td></tr><tr><td>Oprogramowanie sterujące spektrometrem gamma</td><td>ORTEC (Oak Ridge, Tenessee, USA)</td><td></td><td>Maestro dla systemu Windows Wersja 6.06</td></tr><tr><td>Oprogramowanie do przywoływania widma gamma</td><td>ORTEC (Oak Ridge, Tenessee, USA)</td><td></td><td>Winplots wersja 3.21</td></tr><tr><td>Oprogramowanie sterujące HPLC</td><td>Raytest (Straubenhardt, Niemcy)</td><td></td><td>Gina Star Wersja 5.9</td></tr><tr><td>inolab 740</td><td>WTW (Weilheim, Niemcy)</td><td></td><td>pH-metr</td></tr><tr><td><silny>Nazwa</silny></td><td><silny>Firma</silny></td><td><silny>Numer katalogowy</td><td>Komentarze</td></tr><tr><td>Tabela 3: Wykaz materiałów i oprzyrządowania do oceny zachowania kinetycznego w czasie rzeczywistym [11C]SNAP-7941.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Madin-Darby Canine Kidney cell line (MDCKII-hMDR1)</td><td>Netherlands Cancer Institute (NKI, Amsterdam, Holandia)</td><td></td><td>Ekspresja ludzkiej glikoproteiny P (hMDR1)</td></tr><tr><td>Linia komórkowa Madin-Darby Canine Kidney (MDCKII-WT)</td><td>Holenderski Instytut Raka (NKI, Amsterdam, Holandia)</td><td></td><td>Wildtype (WT)</td></tr><tr><td>DMEM GlutaMAX</td><td>VWR International GmbH, Wiedeń, Austria</td><td></td><td>Gibco 61965-026</td></tr><tr><td>Surowica cielęca płodu (FCS)</td><td>VWR International GmbH, Wiedeń, Austria</td><td></td><td>Gibco 10270-106</td></tr><tr><td>Penicylina/Streptomycyna</td><td>VWR International GmbH, Wiedeń, Austria</td><td></td><td>Gibco 15140</td></tr><tr><td>Naczynie do hodowli komórkowych</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Niemcy</td><td></td><td>Cellstar 100 mm x 20 mm, Mfr.No. 664160</td></tr><tr><td>Eksperymenty</td><td></td><td></td><td></td>in vitro</tr><tr><td>DMEM GlutaMAX</td><td>VWR International GmbH, Wiedeń, Austria</td><td></td><td>Gibco 61965-026</td></tr><tr><td>(&plusmn;)-Chlorowodorek werapamilu</td><td>Sigma Aldrich (St. Louis, Missouri, USA)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma Aldrich (St. Louis, Missouri, USA)</td><td></td><td>276855-100 mL</td></tr><tr><td>Naczynie do hodowli komórkowych</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Niemcy</td><td></td><td>Cellstar 100 mm x 20 mm, Mfr.No. 664160</td></tr><tr><td>Sterylne jednorazowe pipety plastikowe</td><td>VWR International GmbH, Wiedeń, Austria</td><td></td><td>Sterilin, 5 ml &ndash; 25 mL</td></tr><tr><td>Sterylne końcówki do pipet</td><td>VWR International GmbH, Wiedeń, Austria</td><td></td><td>Eppendorf epT.I.P.S. Biopur 20 &mikro; L &ndash; 200 i mikro; L</td></tr><tr><td>Kolby do hodowli komórkowych</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Niemcy</td><td></td><td>Cellstar 250 mL, 75 cm2 czerwona nakrętka filtra, nr nr mfr.658175</td></tr><tr><td>Sterowanie LigandTracer Wersja 2.2.2</td><td>Ridgeview Instruments AB, Uppsala, Szwecja.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LigandTracer Yellow</td><td>Ridgeview Instruments AB, Uppsala, Szwecja.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LigandTracer White</td><td>Ridgeview Instruments AB, Uppsala, Szwecja.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 6.0</td><td>Oprogramowanie GraphPad, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ręczny automatyczny licznik komórek</td><td>Millipore Corporation Billerica MA01821</td><td></td><td>Scepter (Cat.No. PHC00000)</td></tr> <tr><td>Czujniki licznika komórek</td><td>Millipore Corporation Billerica MA01821</td><td></td><td>Scepter Sensor 60 i mikro; m (Cat.No. PHCC60050)</td></tr></tbody></table>

techniczny aspekt automatycznej syntezy i oceny kinetycznej w czasie rzeczywistym [11c]snap-7941

Technical Aspect of the Automated Synthesis and Real-Time Kinetic Evaluation of [11C]SNAP-7941

Pozytonowa tomografia emisyjna (PET) jest podstawową techniką obrazowania molekularnego, dostarczającą wglądu w szlaki i wykorzystującą specyficzne radioligandy do badań in vivo. W ramach tego protokołu opisano solidną i niezawodną, zdalnie sterowaną radiosyntezę [11C]SNAP-7941, antagonisty receptora hormonu koncentrującego melaninę 1. Radiosynteza rozpoczyna się od cyklotronu wytworzonego przez [11C]CO2 , który jest następnie dalej reagowany poprzez przejście w fazie gazowej do [11C]CH3OTf. Następnie ten reaktywny produkt pośredni jest wprowadzany do roztworu prekursora i tworzy odpowiedni radioznacznik. Czystość chemiczną i radiochemiczną określa się za pomocą RP-HPLC, rutynowo wdrażanej w procesie kontroli jakości radiofarmaceutyków. Dodatkowo obliczana jest aktywność molowa, ponieważ jest ona niezbędna do następujących badań kinetycznych w czasie rzeczywistym. Ponadto [11C] SNAP-7941 stosuje się do komórek MDCKII-WT i MDCKII-hMDR1 w celu oceny wpływu ekspresji glikoproteiny P (P-gp) na akumulację komórek. Z tego powodu linia komórkowa z ekspresją P-gp (MDCKII-hMDR1) jest stosowana bez lub z blokadą przed eksperymentami za pomocą substratu P-gp (±)-werapamilu, a wyniki są porównywane z wynikami obserwowanymi dla komórek typu dzikiego. Ogólne podejście eksperymentalne pokazuje, jak ważne jest precyzyjne zarządzanie czasem, które jest niezbędne w każdym badaniu przedklinicznym i klinicznym z wykorzystaniem znaczników PET znakowanych radioaktywnie krótkożyciowymi nuklidami, takimi jak węgiel-11 (okres półtrwania: 20 min).

W pełni zautomatyzowana radiosynteza [11C]SNAP-7941 pozwoliła uzyskać 5,7 ± 2,5 GBq (4,6 ± 2,0% w EOB, 14,9 ± 5,9% w odniesieniu do [11C]CH3OTf; n = 10) sformułowanego produktu. Całkowity czas syntezy wyniósł około 40 min, z czego 15 min wymaganych było na przygotowanie [1C]CH3OTf via metodą fazy gazowej, kolejne 5 min było koniecznych do radiomarkowania prekursora, po czym nastąpiły 10 min oczyszczania metodą półpreparatywnej RP-HPLC oraz 10 min ekstrakcji w fazie stałej na wkładzie C18 i formułowania. Następnie niewielka porcja (ok. 100-20 µL) została dostarczona osobie odpowiedzialnej za kontrolę jakości, natomiast oryginalna fiolka z gotowym do użycia znakownikiem przekazana została badaczowi przeprowadzającemu analizę kinetyczną w czasie rzeczywistym.
Kontrola jakości została przeprowadzona w ciągu 10 min po zakończeniu syntezy. Aktywność molowa mieściła się w zakresie 72 ± 41 GBq/µmol (n = 10), a czystość radiochemiczna zawsze wynosiła &gt; 95%. Wszystkie pozostałe parametry (pH, osmolalność, pozostałości rozpuszczalników) spełniały kryteria zwolnienia. Do analizy kinetycznej w czasie rzeczywistym wybrano trzy różne układy doświadczalne: (A) komórki MDCKII-WT traktowane i nietraktowane (vehicle), (B) komórki MDCKII-hMDR1 nietraktowane lub traktowane vehicle oraz (C) tę drugą linię komórkową z blokowaniem przed analizą kinetyczną transportera w czasie rzeczywistym przy użyciu (±)-werapamilu. Zastosowanie [11C]SNAP-7941 do linii komórkowej dzikiej typu MDCKII-WT (niewyrażającej P-gp) oraz MDCKII-hMDR1 (wyrażającej P-gp) wykazuje różną charakterystykę kinetyczną, ponieważ w linii dzikiej typu obserwuje się szybką akumulację, podczas gdy w przypadku komórek MDCKII-hMDR1 nie stwierdzono akumulacji. Jednakże zablokowanie transportera efleksowego P-gp w komórkach MDCKII-hMDR1 za pomocą (±)-werapamilu doprowadziło do uzyskania kinetyki w czasie rzeczywistym porównywalnej z tą zaobserwowaną dla linii dzikiej typu (Rysunek 5).
<img alt="Schemat procesu radiosyntezy; przedstawia etapy przygotowania syntezatora, naświetlania oraz oceny in vitro." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig1.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Rycina 1"> 
Rysunek 1: Przegląd schematu pracy. Schemat radiostyntezy, kontroli jakości oraz przeprowadzania pomiarów kinetycznych w czasie rzeczywistym [11C]SNAP-7941. Czarne strzałki wskazują drogę transportu radioaktywności. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig1large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Schemat Tracerlab FX2 C; konfiguracja syntezy radiow oznaczania z kolumną HPLC i wkładem SPE." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig2.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rycina 2: Schemat radiosyntezy w zautomatyzowanym syntezatorze. Układ przełączający automatycznego syntezera, zaczynając od jednostki cyrkulacyjnej dla [11C]CH3I/[11C]CH3produkcja OTf, reaktor do wprowadzania aktywności do roztworu prekursora oraz oczyszczanie metodą SPE (SPE = ekstrakcja do fazy stałej; PCV = fiolka do zbierania produktu). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig2large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Chromatogram HPLC wykazujący piki detekcji SNAP-7941; detektory UV i gamma; analiza związku." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig3.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rycina 3: Reprezentatywne chromatogramy w pełni zautomatyzowanej radiosyntezy [11C]SNAP-7841. Na górze przedstawiono półpreparatywny chromatogram RP-HPLC, a na dole chromatogram analityczny po oczyszczaniu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig3large.jpg" target="_blank">Prosimy o kliknięcie tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej figury.</a>
<img alt="Metoda hodowli komórkowej, schemat wysiewania pod kątem i wymiany pożywki; ilustracja procesu inkubacji." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig4.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Rycina 4"> 
Rycina 4: Przygotowanie naczynia do hodowli komórkowej do eksperymentów w czasie rzeczywistym. Krok 1 obejmuje wysiew 2,5 x 105 do 1 x 106 w zależności od rodzaju komórek i tempa ich wzrostu. Następnie naczynie hodowlane umieszcza się pod kątem (około 30-45°). W związku z tym w inkubatorze można wykorzystać dołączoną aparaturę metalową lub pokrywkę naczynia do hodowli komórkowej, aby ustabilizować naczynie w pozycji skośnej. Następnego dnia (po 24 h) naczynie ustawia się poziomo i dodaje świeżą pożywkę do hodowli komórek, tak aby całkowicie pokryła powierzchnię komórek. W dniu eksperymentu bada się żywotność oraz konfluencję komórek. Zgodnie z protokołem eksperymentalnym komórki płucze się DPBS, pożywkę wymienia na pożywkę bezsurowiczą (2 ml), a naczynie do hodowli ponownie ustawia się w pozycji skośnej aż do rozpoczęcia doświadczeń. Następnie komórki można poddać działaniu inhibitora lub nośnika. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig4large.jpg" target="_blank">Prosimy o kliknięcie tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Wykres wzrostu komórek MDCKII; czas vs. krotność przyrostu; WT, hMDR1, z blokowaniem wstępnym; analiza naukowa." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig5.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Rycina 5"> 
Rysunek 5: Kinetyczne pomiary w czasie rzeczywistym [11C]SNAP-7941. Reprezentatywna kinetyka w czasie rzeczywistym dla [11C]SNAP-7941 przedstawiono w trzech różnych konfiguracjach: przy użyciu komórek MDCKII-WT; komórek MDCKII-hMDR1 uprzednio zablokowanych (±)-werapamilem jako inhibitorem P-gp oraz komórek MDCKII-hMDR1 bez blokowania. Oś y przedstawia tempo wzrostu w przypadku zablokowanych komórek MDCKII-hMDR1 i komórek WT w porównaniu do wyników dla komórek MDCKII-MDR1 niepoddanych działaniu inhibitora lub leczonych nośnikiem, odpowiednio (brak poboru, 0%). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig5large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>

Tutaj reprezentujemy protokół do w pełni zautomatyzowanego znakowania radioaktywnego [11C]SNAP-7941 i analizy kinetyki w czasie rzeczywistym tego znacznika PET na komórkach wykazujących ekspresję i nieeksprymujących P-gp.

Techniczny aspekt automatycznej syntezy i oceny kinetycznej w czasie rzeczywistym [11C]SNAP-7941

Positron emission tomography (PET) is an essential molecular imaging technique providing insights into pathways and using specific targeted radioligands ...

Znakowanie radioaktywne węglem-11 pozwala na stosowanie małych związków do pozytonowej tomografii emisyjnej lub PET bez zmiany cząsteczki. Jest to niezbędne do badania poziomów ekspresji receptorów. Zaletą znakowania radioaktywnego węglem-11 jest to, że możemy użyć PET do bezpośredniej oceny kinetyki wiązań SNAP z receptorem hormonu koncentrującego melaninę w czasie rzeczywistym.SNAP jako antagonista receptora hormonalnego koncentrującego melaninę przyczyni się do lepszego zrozumienia tego receptora i jego związku z chorobami metabolicznymi, takimi jak otyłość i cukrzyca. Transportery wypływu ulegające ekspresji na barierze krew-mózg mogą znacznie utrudniać stosowanie radiofarmaceutyków do obrazowania ekspresji receptorów centralnych. Dlatego tak ważna jest ocena śladów in vitro.Zautomatyzowana radiosynteza SNAP ma szerokie zastosowanie do znakowanych radioaktywnie związków o niskiej masie cząsteczkowej z łatwą do oceny grupą metylową. Po ustaleniu procedura ta może być dostosowana do innych związków. W pokazie wezmą udział doktorantki Sarah Pfaff i Theresa Balber.Aby rozpocząć syntezę węgla-11 SNAP, należy skonfigurować moduł automatycznej syntezy czystego węgla-11 z odpowiednimi odczynnikami i materiałami. Rozpocznij proces syntezy SNAP na komputerze modułu, który rozpocznie się od sprawdzenia i kondycjonowania systemu. Na około 30 do 40 minut przed tym, jak moduł będzie gotowy do dostarczenia C-11, wybierz cel dwutlenku węgla C-11 na cyklotronie i uruchom wiązkę przy natężeniu 65 mikroamperów.Gdy moduł będzie gotowy do dostawy, zamknij okno wewnętrzne i drzwi zewnętrzne. Upewnij się, że pułapka CO2 ostygła do co najmniej 40 stopni Celsjusza i że pułapka metanu zaczęła się ochładzać. Gdy cyklotron wytworzy około 120 gigabekereli CO2 C-11, kliknij OK w oprogramowaniu modułu, aby otworzyć drogę od celu przez pułapkę CO2.W komputerze cyklotronowym zacznij dostarczać CO2 C-11 do modułu. Monitoruj transfer aktywności na komputerze modułu i upewnij się, że po trzech minutach przechodzi on do redukcji CO2 do metanu. Monitoruj proces, gdy powstały metan jest wypłukiwany do metanowcy i przekształcany w jodek metylu przez cyrkulację przez piec jodowy.Na końcu sekwencji konwersji poczekaj, aż produkty uboczne zostaną wypłukane z pułapki jodku metylu do wyczerpania, a następnie potwierdź, że reaktor jest gotowy do przyjęcia aktywności, klikając przycisk OK. Monitoruj system, gdy jodek metylu jest uwalniany z pułapki, przepłukiwany przez piec triflate metylu i uwięziony w reaktorze. Gdy aktywność w reaktorze ustabilizuje się, upewnij się, że pułapkowanie zostało zakończone. Poczekaj, aż mieszanina reakcyjna zareaguje w temperaturze 75 stopni Celsjusza przez trzy minuty.Następnie monitoruj system, gdy mieszanina reakcyjna jest schładzana do temperatury poniżej 35 stopni Celsjusza i schładzana 1,5 mililitra wody. Monitorować system, gdy mieszanina reakcyjna jest ładowana do pętli iniekcyjnej HPLC i jest wstrzykiwana do półprzygotowawczej kolumny HPLC. Obserwuj ślady detektora UV i gamma w miarę postępu chromatografii.Gdy szczyt produktu zacznie pojawiać się ręcznie, rozpocznij zbieranie produktu z kolby zbiorczej z okrągłym dnem w module. Ręczne zakończenie zbierania, gdy sygnał gamma spadnie poniżej około 400 zliczeń na sekundę. Obserwuj poziom płynu w kolbie okrągłodennej, gdy produkt jest ładowany do wkładu ekstrakcyjnego do fazy stałej pod ciśnieniem helu.Gdy kolba jest pusta, a płyn przejdzie przez wkład SPE, kliknij OK, aby rozpocząć mycie produktów uwięzionych na wkładzie. Następnie należy monitorować aktywność w fiolce do pobierania produktów, ponieważ produkt jest najpierw eluowany z wkładu do fiolki, a następnie rozcieńczany 0,9% roztworem soli fizjologicznej. Obserwuj, jak roztwór produktu jest przenoszony do fiolki z produktem przez sterylny filtr pod ciśnieniem helu.Po zakończeniu przenoszenia zamknij zawór wyjściowy produktu. Gdy radioznacznik dotrze do fiolki z produktem, należy zmierzyć bezwzględną wydajność radioaktywną. Następnie użyj strzykawki z osłoną ołowiu, aby przenieść 100 mikrolitrów znacznika do małej fiolki w celu kontroli jakości.Przynieś próbkę kontroli jakości do osłoniętego obszaru roboczego kontroli jakości. Pobrać 40 mikrolitrów próbki kontroli jakości do gazoszczelnej strzykawki, załadować ją do przygotowanego przyrządu HPLC wyposażonego w kolumnę analityczną i wstrzyknąć produkt. Wykonaj inne pomiary kontroli jakości podczas przebiegu HPLC.Po zakończeniu cyklu HPLC należy zintegrować wszystkie piki w chromatogramie z detektora radioaktywności, aby określić, czy czystość chemiczna radiowa SNAP jest większa niż 95%Zintegruj piki w chromatogramie UV, aby określić czystość chemiczną produktu. Użyj obszaru pod szczytem produktu UV, aby obliczyć określoną aktywność. Gdy potwierdzimy, że produkt spełnia wymagania dotyczące użycia, należy zwolnić radioznacznik do laboratorium eksperymentów kinetycznych w czasie rzeczywistym.Co najmniej 30 minut przed eksperymentem należy przemyć przygotowane komórki typu dzikiego lub transfekowanego DPBS i dodać dwa mililitry pożywki wzrostowej bez surowicy. Aby zablokować transfekowane komórki, dodaj 0,98 mikrolitra 20,4 milimolowego roztworu racemicznego chlorowodorku werapamilu w dimetylosulfotlenku. Inkubuj komórki na ukośnej płaszczyźnie przez 30 minut.Następnie włącz przyrząd do oznaczania w czasie rzeczywistym i powiązany z nim komputer. Otwórz oprogramowanie sterujące i wybierz jeden cel. Ustaw liczbę pozycji na dwa, czas wykrywania na trzy sekundy, czas opóźnienia wykrywania na dwie sekundy, a nazwę pierwszej fazy na linię bazową.Włóż naczynie do hodowli komórkowych do pochyłego wspornika urządzenia z drążkiem komórkowym na spodzie. Upewnij się, że biegun komórkowy jest pokryty pożywką do hodowli komórkowych. Rozpocznij 10-minutowy pomiar tła i ustaw nazwę pliku oraz ścieżkę.Ustaw skalę czasu na minuty, a zbiór nuklidów na węgiel-11. Skonfiguruj wykres tak, aby pokazywał tło, element docelowy i odjęte dane docelowe w tle. Po dostarczeniu radioznacznika i zatwierdzeniu go do użytku należy pobrać małą próbkę do testu.Obliczyć potrzebną objętość roztworu radioznacznika i przygotować pipetę. W oprogramowaniu przyrządu wstrzymaj pracę i poczekaj, aż obrót naczynia się zatrzyma. Otwórz pokrywę urządzenia, obróć wspornik o 90 stopni w lewo, dodaj radioznacznik z przygotowaną pipetą i przywróć urządzenie do pozycji wyjściowej.Zamknij pokrywę urządzenia i natychmiast wznów eksperyment. Pozwól eksperymentowi działać przez 20 minut przed jego zakończeniem. Przetwarzanie i analizowanie danych w celu oceny wychwytu SNAP w komórkach.Teraz procedurę można powtórzyć dla kontrolnej naczyń do hodowli komórek traktowanych DMSO i linii komórkowej typu dzikiego. Testy kinetyczne w czasie rzeczywistym przeprowadzono na komórkach typu dzikiego bez ekspresji PGP, komórkach eksprymujących PGP wstępnie zablokowanych werapamilem jako inhibitorem PGP i niezablokowanych komórkach PGP. Nie zaobserwowano istotnej różnicy między komórkami nieleczonymi a komórkami traktowanymi podłożem.Węgiel-11 SNAP szybko gromadził się w komórkach typu dzikiego, podczas gdy nie zaobserwowano akumulacji w komórkach wykazujących ekspresję PGP. Wstępne zablokowanie transportera wypływu PGP za pomocą werapamilu spowodowało akumulację SNAP w komórkach PGP porównywalną z komórkami typu dzikiego. W połączeniu z pomiarami kinetycznymi w czasie rzeczywistym, układ ten umożliwia szerokie zrozumienie farmakokinetyki związków o niskiej masie cząsteczkowej i dlatego jest bardzo ważny dla przedklinicznego rozwoju radiofarmaceutyków.Czas i organizacja są głównymi składnikami udanej radiosyntezy węgla-11 z późniejszymi eksperymentami kinetycznymi w czasie rzeczywistym, ponieważ okres połowicznego rozpadu węgla-11 wynosi tylko 20 minut. Ze względu na krótki okres półtrwania węgla-11 wiele części tej procedury jest wykonywanych jednocześnie. Ważne jest, aby wszystkie zaangażowane osoby rozumiały zakres i czas swojej roli.Zarówno bezpieczeństwo produktu, jak i ochrona przed promieniowaniem mają kluczowe znaczenie dla przygotowania radiofarmaceutyków. Wszystkie eksperymenty muszą być prowadzone zgodnie z zasadą ALARA lub zasadą ALARA, aby ograniczyć narażenie operatora na promieniowanie.

technical-aspect-automated-synthesis-real-time-kinetic-evaluation

Research

JoVE Journal

Chemistry

Chemia

Reakcja Ugiego okazała się wygodnym sposobem na szybkie tworzenie zróżnicowanych bibliotek związków. Polega ona na reakcji aminy, aldehydu, kwasu karboksylowego i izonitrilego, zazwyczaj w metanolu w temperaturze pokojowej. W tym filmie wykorzystujemy 48-miejscowy blok Mettler-Toledo MiniBlock wyposażony w rurki filtracyjne oraz zautomatyzowany dozownik cieczy Mettler-Toledo MiniMapper do dostarczania odczynników i rozpuszczalnika. Parametrami poddanymi analizie były stężenie, skład...

Optymalizacja reakcji Ugiego z wykorzystaniem syntezy równoległej i automatycznej obsługi cieczy

Fotostabilne barwniki cyjaninowe są dołączane do oligonukleotydów w celu monitorowania hybrydyzacji poprzez transfer energii.

Synteza sond hybrydyzacyjnych DNA zmieniających długość fali przy użyciu fotostabilnych barwników cyjaninowych

Demonstrujemy półautomatyczną syntezę radiochemiczną [18F]3F4AP i procedury kontroli jakości.

Zautomatyzowana synteza radiochemiczna [18F]3F4AP: nowy znacznik PET do obrazowania chorób demielinizacyjnych

Protokół syntezy peptydu modyfikowanego 1,2-ditiolanem i charakterystyka struktur supramolekularnych wynikających z samoorganizacji peptydu.

Synteza i charakterystyka samoorganizujących się peptydów modyfikowanych 1,2-ditiolanem

Miejsca obrazowania pozytonowej tomografii emisyjnej (PET), które biorą udział w wielu wczesnych badaniach klinicznych, wymagają solidnych i wszechstronnych możliwości produkcji radioznaczników. Na przykładzie radioznacznika [18F] Klofarabiny ilustrujemy, jak zautomatyzować syntezę radioznacznika za pomocą elastycznego radiosyntezatora opartego na kasecie i zwalidować syntezę do użytku klinicznego.

Automatyzacja protokołu syntezy radioznacznika metodą pozytonowej tomografii emisyjnej (PET) do produkcji klinicznej

Informujemy o skutecznej technice radioznakowania węglem-11 w celu wytworzenia klinicznie istotnych znaczników dla pozytonowej tomografii emisyjnej (PET) przy użyciu wkładów do ekstrakcji do fazy stałej. 11Czynnik metylujący C przepuszcza się przez kartridż, który jest wstępnie załadowany prekursorem, a następująca po nim elucja za pomocą wodnego roztworu etanolu dostarcza chemicznie i radiochemicznie czyste znaczniki PET o wysokiej wydajności radiochemicznej.

Metylacja C w fazie stałej 11, oczyszczanie i formulacja do produkcji znaczników PET

Tutaj opisujemy test biologiczny z użyciem bromku 3-(4′,5′-dimetylotiazol-2′-ylo)-2,5-difenylotetrazolowego (MTT) do testowania wcześniej zsyntetyzowanych oksymów spirocyklicznych.

Funkcjonalizowana spirocykliczna synteza heterocykliczna i test cytotoksyczności

Ta metoda opisuje użycie nowatorskiej metodologii wysokoprzepustowej, opartej na reakcjach chemicznych kropelk, do szybkiej i ekonomicznej optymalizacji radiofarmaceutyków przy użyciu nanomolowych ilości odczynników.

Optymalizacja reakcji radiochemicznych z wykorzystaniem matryc kropelkowych

Tutaj opisujemy protokół optymalizacji i parametryzacji reszt aminokwasowych modyfikowanych reaktywnymi gatunkami karbonylowymi, które można dostosować do systemów białkowych. Etapy protokołu obejmują projektowanie i optymalizację struktury, przypisywanie ładunków, konstrukcję parametrów i przygotowanie układów białkowych.

Synteza aminokwasów modyfikowanych reaktywnymi karbonylkami in silico w celu oceny efektów strukturalnych przy użyciu symulacji dynamiki molekularnej

Ten protokół przedstawia szczegółową procedurę przygotowania czterech radioznaczników węgla-11 za pomocą "metody pętlowej" [11C]metylacji. Opisujemy procedurę syntezy [11C]ER-176, z danymi dla trzech dodatkowych radioznaczników: [11C]MRB, [11C]mHED i [11C]PiB. Metoda pętlowa zapewnia wydajną syntezę ze zwiększoną wydajnością radiochemiczną w porównaniu z tradycyjną metylacją naczynia reakcyjnego [11C].

Zwiększenie wydajności i wydajności znakowania radioligandów węgla-11 w badaniach klinicznych z wykorzystaniem metody pętli

To badanie opisuje zautomatyzowany proces produkcji [68Ga]Ga-3BP-3940 za pomocą syntezatora GAIA V2, do obrazowania PET białka aktywującego fibroblasty. Przedstawiono również wyniki badań kontroli jakości przeprowadzonych na trzech seriach testowych.

Automatyczne przygotowanie [68Ga]GA-3BP-3940 na module syntezy do obrazowania PET mikrośrodowiska guza

Poznaj zautomatyzowaną syntezę [11C]SNAP-7941 do obrazowania PET i analizy kinetyki wiązania w czasie rzeczywistym. Metoda umożliwia badanie ekspresji receptorów w komórkach z i bez P-gp.

Techniczny aspekt automatycznej syntezy i oceny kinetycznej w czasie rzeczywistym [¹¹C]SNAP-7941

Przeglądaj więcej filmów