Name: Izolacja i hodowla pierwotnych komórek śródbłonka aorty od miniaturowych świń (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Poznaj skuteczną metodę enzymatyczną izolacji pierwotnych komórek śródbłonka aorty od miniaturowych świń. Technika ta umożliwia uzyskanie czystych pAECs do badań nad odpowiedzią immunologiczną i koagulacyjną w ksenotransplantacji.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Praca była wspierana przez granty Fundacji Nauk Przyrodniczych Prowincji Guangdong, numer grantu/nagrody: 2016A030313028; Fundacja Medycznych Badań Naukowych Prowincji Guangdong, numer grantu/nagrody: B2018003; Shenzhen Foundation of Science and Technology, numer grantu/nagrody: JCYJ20180306172449376, JCYJ20180306172459580, JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425103000011 i JCYJ20160428142040945; Fundacja Nauki i Technologii Dystryktu Shenzhen Longhua, numer grantu/nagrody: 2017013; Krajowy Kluczowy Program Badawczo-Rozwojowy Chin, numer grantu/nagrody: 2017YFC1103704; Sanming Project of Medicine w Shenzhen, numer grantu/nagrody: SZSM201412020; Specjalne fundusze na budowę szpitali wysokiego szczebla w prowincji Guangdong (2019 r.); Fundusz na rzecz Budowy Dyscypliny Medycznej Wysokiego Szczebla w Shenzhen, numer grantu/nagrody: 2016031638; Shenzhen Foundation of Health and Family Planning Commission, numer grantu/nagrody: SZXJ2017021 i SZXJ2018059. Dziękujemy Hancheng Zhang i Zhicheng Zou z Uniwersytetu w Shenzhen za pomoc w przygotowaniu manuskryptu.

Wykorzystanie zwierząt zostało zatwierdzone przez Komisję Oceny Etyki Drugiego Szpitala Ludowego w Shenzhen, zgodnie z zasadami dobrostanu zwierząt.
1. Przygotowanie zwierząt, podłoża i
<ol>
	<li>Przygotuj miniaturową świnkę. 
	UWAGA: Wszystkie miniaturowe świnki były chińskimi świniami Wuzhishan lub Bama (samcami). Wiek i masa ciała świń wynosiły odpowiednio 100 dni ± 8 dni i 5,7 kg ± 1,0 kg (średnia ± SD, n = 3).</li>
	<li>Przygotować pożywkę: pożywkę z komórek śródbłonka (ECM) uzupełnioną 10% (v/v) inaktywowaną termicznie płodową surowicą bydlęcą (FBS), 1% (v/v) penicyliny/streptomycyny (P/S) i 1% (v/v) suplementem wzrostu komórek śródbłonka (ECGS).</li>
	<li>Przygotować bufor do przemywania : 1x roztwór PBS (pH 7,4) z 1% (v/v) P/S.</li>
	<li>Przygotuj 0,005% roztwór trawienny kolagenazy dożylnie: 1 mg proszku kolagenazy dożylnej w 20 ml roztworu PBS. Przed trawieniem podgrzej roztwór trawienny kolagenazy w temperaturze 37 °C.</li>
	<li>Przygotuj bufor zatrzymujący: zmodyfikowane podłoże Eagle's (DMEM) firmy Dulbecco uzupełnione 10% inaktywowanym termicznie FBS i 1% P/S.</li>
</ol>
2. Chirurgia i przygotowanie do izolacji komórek śródbłonka aorty świń
<ol>
	<li>Dezynfekcja sali operacyjnej światłem UV przez 1 h oraz płynem do dezynfekcji medycznej 84 (dostępna zawartość chloru to 4,0% - 5,0%, Tabela Materiałów) przed wykonaniem zabiegu.</li>
	<li>Po tym, jak miniaturowa świnia otrzymała wstrzyknięcie domięśniowe składające się z 15 mg/kg ketaminy, 15 mg/kg chlorowodorku ksylazyny i 0,05 mg/kg chlorowodorku fenacetyny (Objętości: 100 μL/kg, Tabela materiałów) (Rysunek 1A), potwierdź stan znieczulenia zwierzęcia, sprawdzając bolesny bodziec świń (np. szczypanie jednego ucha lub potrząsanie jedną kończyną przednią) i wskaźnik fizjologiczny (np. ciśnienie krwi, tętno i częstość oddechów). 
	UWAGA: Kolejne pół dawki wstrzyknięcia można podać świni, jeśli wykazuje oznaki przebudzenia. </li>
	<li>Przeciąć brzuch skalpelem, odsłonić żyłę główną dolną i w konsekwencji wstrzyknąć heparynę sodową (5000 j., tabela materiałów) do żyły głównej dolnej za pomocą strzykawki o pojemności 5 ml.</li>
	<li>Pięć minut później włóż cewnik do aorty brzusznej do krwi, przetnij skórę klatki piersiowej i nacinaj przeponę skalpelem, a następnie odetnij lewą komorę. 
	UWAGA: Upewnij się, że świnia została poddana eutanazji, sprawdzając puls aorty po przekrwieniu i przecięciu serca. </li>
	<li>Żebra należy wyciąć kleszczami do kości (tabela materiałów) i odsłonić serce i płuca. Znajdź aortę za sercem i płucami i zaciśnij oba końce. Przemyj aortę raz wstępnie schłodzonym buforem do płukania (<silna klasa="xfig">Rysunek 1B,C).</li>
	<li>Wytnij aortę nożyczkami i trzymaj aortę zaciśniętą na każdym końcu. Wytnij nadmiar tkanki wokół aorty za pomocą sterylnych kleszczy i nożyczek. Umieść aortę w probówce wirówkowej o pojemności 50 ml, przemyj aortę wstępnie schłodzonym buforem myjącym 3x (30 ml na płukanie) i przenieś aortę do laboratorium (<klasa silna = "xfig">Rysunek 1D).</li>
</ol>
3. Izolacja komórek śródbłonka aorty świń
<ol>
	<li>W warunkach aseptycznych wyjmij aortę świni z bufora do płukania i umieść ją na szalce Petriego o średnicy 150 mm (<silna klasa="xfig">Rysunek 2A).</li>
	<li>Delikatnie odetnij dwa końce aorty i ponownie wytnij nadmiar tkanki wokół aorty za pomocą sterylnych kleszczy i nożyczek (<silna klasa="xfig">Rysunek 2B). Przemyć zewnętrzną i wewnętrzną stronę aorty (nad naczyniem hodowlanym w temperaturze pokojowej) za pomocą 20−50 ml buforu do mycia. 
	UWAGA: Staraj się ciąć tylko obszar, w którym umieszczono zaciski podczas operacji, ponieważ niektóre EC zostały uszkodzone w tym obszarze, i usuń nadmiar tkanek i bocznych gałęzi tętnic.</li>
	<li>Przeprowadź szew chirurgiczny przez aortę, a następnie zawiąż jeden koniec aorty za pomocą szwu chirurgicznego (5-0, 90 cm, tabela materiałów). Utrzymuj szew chirurgiczny po wewnętrznej stronie aorty (<silna klasa="xfig">Rysunek 2C,D).</li>
	<li>Delikatnie przymocuj aortę w pobliżu zawiązanego końca za pomocą kleszczy, a następnie powoli pociągnij szew chirurgiczny, aby odwrócić aortę, aż powierzchnia śródbłonka aorty zostanie odsłonięta (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2E-G). 
	UWAGA: Upewnij się, że aorta jest zamocowana w pobliżu zawiązanego końca i nie mocuj aorty mocno, w przeciwnym razie aorty nie można odwrócić, pociągając za szew chirurgiczny.</li>
	<li>Przemyj powierzchnię śródbłonka aorty buforem do przemywania 3x (10 ml na płukanie), a następnie wyrzuć ten roztwór. Umieść aortę w probówce wirówkowej o pojemności 15 ml i przykryj aortę 10 ml 0,005% roztworu trawiennego kolagenazy dożylnej w probówce (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2H). 
	UWAGA: Przed strawieniem podgrzej 0,005% roztwór trawienny kolagenazy dożylnie w temperaturze 37 °C.</li>
	<li>Inkubować w temperaturze 37 °C przez 15 minut. Umieścić strawioną aortę i roztwór trawienny w naczyniu hodowlanym o średnicy 100 mm i zatrzymać działanie 0,005% kolagenazy dożylnie, dodając 10−15 ml wstępnie schłodzonego buforu zatrzymującego. 
	UWAGA: Zalecany czas trawienia wynosi od 10 do 20 minut. Upewnij się, że powierzchnia śródbłonka aorty jest pokryta buforem zatrzymującym.</li>
	<li>Delikatnie zeskrob pAEC z wewnętrznej powierzchni aorty za pomocą skrobaka komórkowego (<silna klasa="xfig">Rysunek 2I). Przemyj zeskrobaną aortę 3x buforem do przemywania (5 ml na raz). Umieść roztwór z naczynia hodowlanego do probówki wirówkowej o pojemności 50 ml. Umyj dno naczynia hodowlanego 2x buforem myjącym (5 ml na raz) i ponownie umieść roztwór w probówce wirówkowej o pojemności 50 ml. 
	UWAGA: Delikatnie zeskrobać w jednym kierunku i nie ściskać. Nie dotykaj chusteczki w pobliżu krawędzi i otworów. Zaleca się skrobanie 5−8x.</li>
	<li>Odwirować probówkę o stężeniu 600 x g przez 6 minut w temperaturze 4 °C. Odrzucić supernatant i pozostawić 10 ml roztworu na dnie probówki wirówkowej o pojemności 50 ml. Dodać 20 ml buforu myjącego do probówki wirówkowej o pojemności 50 ml i ponownie zawiesić granulki. Na tym etapie unikaj bąbelków.</li>
	<li>Wirować przy 600 x g przez 6 minut w temperaturze 4 °C. Powoli wyrzucić supernatant. Zawiesić osady komórkowe w 1 ml pożywki hodowlanej i dobrze wymieszać. 
	UWAGA: Uzyskana średnia liczba EC na cm aorty wynosi 1,9 x 105 ± 1,4 x 104 (średnia ± SD, n = 3).</li>
	<li>Policz komórki za pomocą licznika komórek. Płytkie i hodowla komórek w naczyniu bez powlekania jakimikolwiek materiałami zgodnie z numerem komórki. Jeśli liczba komórek jest mniejsza lub równa 1,0 x 106, hodować komórkiw kolbie o średnicy 25 cm2. Jeśli liczba komórek jest większa niż 1,0 x 106, hoduj komórki w kilku kolbach o długości25 cm 2 (1,0 x 106 komórek na kolbę). Umieścić kolbę w inkubatorze (bez wstrząsania) w temperaturze 37 °C z 5% CO2 i wymieniać pożywkę co 2-3 dni. 
	UWAGA: Niektóre ogniwa są uszkodzone przez skrobak do komórek. Test żywotności komórek wykazał, że odsetek żywych komórek wynosi 95,7% ± 1,7% (średnia ± SD, n = 3). Czas podwajania izolowanych komórek wynosi około 1−2 dni.</li>
</ol>
4. Pozyskiwanie i charakterystyka czystych komórek śródbłonka
<ol>
	<li>Pozostaw komórki na około 4-5 dni. Gdy komórki osiągną 80% konfluencji (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 3A), trawią komórki 0,25% trypsyny i przechodzą przez komórki. Następnie zbierz niektóre z wyizolowanych komórek (Dzień 3, Pasaż 1 i Fragment 2) i Zidentyfikuj za pomocą cytometrii przepływowej (z przeciwciałem anty-CD31).</li>
	<li>Wyznakowane izolowane pAEC (numer komórki: 1 x 105) (dzień 3, pasaż 1 i pasaż 2) za pomocą przeciwciała sprzężonego z izotiocyjanianem CD31-fluoresceiny (FITC) przeciwko świniom (10 μl przeciwciała na 100 μl komórek, barwione przez 30 minut w temperaturze 4 °C) do analizy metodą cytometrii przepływowej.</li>
	<li>Bramka całkowita populacji żywych komórek z poletkiem rozproszonym do przodu, niebarwiona próbka jako kontrola ujemna. Następnie przedstaw komórki CD31-dodatnie komórek bramkowanych z histogramem. 
	UWAGA: Skuteczność komórek CD31-dodatnich wynosi odpowiednio 97,4% ± 1,2% (dzień 3), 94,4% ± 1,1% (P1) i 92,4% ± 1,7% (P2) (średnia ± SD) (<silna klasa = "xfig">Figura 3B).</li>
</ol>

<ol><li>Zhang, G. Y., Liao, T., Fu, X. B., Li, Q. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+transplantation+in+China%3A+concerns+remain%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Organ transplantation in China: concerns remain.</a> Lancet. 385 (9971), 854-855 (2015).</li>
<li>Ekser, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+xenotransplantation%3A+the+next+medical+revolution%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Clinical xenotransplantation: the next medical revolution?</a> Lancet. 379 (9816), 672-683 (2012).</li>
<li>Cooper, D. K., Ekser, B., Ramsoondar, J., Phelps, C., Ayares, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+genetically+engineered+pigs+in+xenotransplantation+research%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">The role of genetically engineered pigs in xenotransplantation research.</a> The Journal of Pathology. 238 (2), 288-299 (2016).</li>
<li>Pober, J. S., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolving+functions+of+endothelial+cells+in+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Evolving functions of endothelial cells in inflammation.</a> Nature Reviews Immunology. 7 (10), 803-815 (2007).</li>
<li>McGill, S. N., Ahmed, N. A., Christou, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells%3A+role+in+infection+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells: role in infection and inflammation.</a> World Journal of Surgery. 22 (2), 171-178 (1998).</li>
<li>Ekser, B., Cooper, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+the+barriers+to+xenotransplantation%3A+prospects+for+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Overcoming the barriers to xenotransplantation: prospects for the future.</a> Expert Review of Clinical Immunology. 6 (2), 219-230 (2010).</li>
<li>Yeom, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+aortic+endothelial+cell+genes+responsive+to+selected+inflammatory+stimulators%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Veterinary+Medical+Science%22%5BJournal%5D)">Porcine aortic endothelial cell genes responsive to selected inflammatory stimulators.</a> The Journal of Veterinary Medical Science. 71 (11), 1499-1508 (2009).</li>
<li>Beigi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+method+for+isolating+highly+purified+and+functional+porcine+aortic+endothelial+and+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Optimized method for isolating highly purified and functional porcine aortic endothelial and smooth muscle cells.</a> Journal of Cellular Physiology. 232 (11), 3139-3145 (2017).</li>
<li>Jansen of Lorkeers, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenotransplantation+of+Human+Cardiomyocyte+Progenitor+Cells+Does+Not+Improve+Cardiac+Function+in+a+Porcine+Model+of+Chronic+Ischemic+Heart+Failure.+Results+from+a+Randomized%2C+Blinded%2C+Placebo+Controlled+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Xenotransplantation of Human Cardiomyocyte Progenitor Cells Does Not Improve Cardiac Function in a Porcine Model of Chronic Ischemic Heart Failure. Results from a Randomized, Blinded, Placebo Controlled Trial.</a> PLOS One. 10 (12), e0143953(2015).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+Antigens+Involved+in+Delayed+Xenograft+Rejection+in+a+Ggta1%2FCmah+Dko+Pig-to-Monkey+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Potential Antigens Involved in Delayed Xenograft Rejection in a Ggta1/Cmah Dko Pig-to-Monkey Model.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10024(2017).</li>
<li>Paris, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ASGR1+expressed+by+porcine+enriched+liver+sinusoidal+endothelial+cells+mediates+human+platelet+phagocytosis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">ASGR1 expressed by porcine enriched liver sinusoidal endothelial cells mediates human platelet phagocytosis in vitro.</a> Xenotransplantation. 18 (4), 245-251 (2011).</li>
<li>Paris, L. L., Chihara, R. K., Sidner, R. A., Tector, A. J., Burlak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+human+and+porcine+platelet+oligosaccharides+may+influence+phagocytosis+by+liver+sinusoidal+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Differences in human and porcine platelet oligosaccharides may influence phagocytosis by liver sinusoidal cells in vitro.</a> Xenotransplantation. 19 (1), 31-39 (2012).</li>
<li>Bernardini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+protein+70%2C+heat+shock+protein+32%2C+and+vascular+endothelial+growth+factor+production+and+their+effects+on+lipopolysaccharide-induced+apoptosis+in+porcine+aortic+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stress+%26+Chaperones%22%5BJournal%5D)">Heat shock protein 70, heat shock protein 32, and vascular endothelial growth factor production and their effects on lipopolysaccharide-induced apoptosis in porcine aortic endothelial cells.</a> Cell Stress & Chaperones. 10 (4), 340-348 (2005).</li>
<li>Endemann, D. H., Schiffrin, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%3A+JASN%22%5BJournal%5D)">Endothelial dysfunction.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 15 (8), 1983-1992 (2004).</li>
<li>Graupera, M., Claret, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+Cells%3A+New+Players+in+Obesity+and+Related+Metabolic+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+and+Metabolism%3A+TEM%22%5BJournal%5D)">Endothelial Cells: New Players in Obesity and Related Metabolic Disorders.</a> Trends in Endocrinology and Metabolism: TEM. 29 (11), 781-794 (2018).</li>
<li>Kawamoto, A., Asahara, T., Losordo, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+endothelial+progenitor+cells+for+therapeutic+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Radiation+Medicine%22%5BJournal%5D)">Transplantation of endothelial progenitor cells for therapeutic neovascularization.</a> Cardiovascular Radiation Medicine. 3 (3-4), 221-225 (2002).</li>
<li>Rafii, S., Lyden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+stem+and+progenitor+cell+transplantation+for+organ+vascularization+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Therapeutic stem and progenitor cell transplantation for organ vascularization and regeneration.</a> Nature Medicine. 9 (6), 702-712 (2003).</li>
<li>Jain, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+death%2C+angiogenesis%2C+and+microvascular+function+after+castration+in+an+androgen-dependent+tumor%3A+role+of+vascular+endothelial+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell death, angiogenesis, and microvascular function after castration in an androgen-dependent tumor: role of vascular endothelial growth factor.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (18), 10820-10825 (1998).</li>
<li>Pratumvinit, B., Reesukumal, K., Janebodin, K., Ieronimakis, N., Reyes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+characterization%2C+and+transplantation+of+cardiac+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Isolation, characterization, and transplantation of cardiac endothelial cells.</a> BioMed Research International. 2013, 359412(2013).</li>
<li>Crouch, E. E., Doetsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS+isolation+of+endothelial+cells+and+pericytes+from+mouse+brain+microregions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">FACS isolation of endothelial cells and pericytes from mouse brain microregions.</a> Nature Protocols. 13 (4), 738-751 (2018).</li>
<li>Nakano, H., Nakano, K., Cook, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Purification+of+Epithelial+and+Endothelial+Cells+from+Mouse+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Isolation and Purification of Epithelial and Endothelial Cells from Mouse Lung.</a> Methods in Molecular Biology. 1799, 59-69 (2018).</li>
<li>Naschberger, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Human+Endothelial+Cells+from+Normal+Colon+and+Colorectal+Carcinoma+-+An+Improved+Protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of Human Endothelial Cells from Normal Colon and Colorectal Carcinoma - An Improved Protocol.</a> Journal of Visualized Experiments. (134), e57400(2018).</li>
<li>Yu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+endothelial+colony-forming+cells+from+mononuclear+cells+of+rat+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of endothelial colony-forming cells from mononuclear cells of rat bone marrow.</a> Experimental Cell Research. 370 (1), 116-126 (2018).</li>
<li>Chi, L., Delgado-Olguin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Culture+of+Mouse+Placental+Endothelial+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Isolation and Culture of Mouse Placental Endothelial Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1752, 101-109 (2018).</li>
<li>Hawthorne, W. J., Lew, A. M., Thomas, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+strategies+to+bring+islet+xenotransplantation+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Genetic strategies to bring islet xenotransplantation to the clinic.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 21 (5), 476-483 (2016).</li>
<li>Yi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+Forces+Accelerate+Collagen+Digestion+by+Bacterial+Collagenase+in+Lung+Tissue+Strips%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mechanical Forces Accelerate Collagen Digestion by Bacterial Collagenase in Lung Tissue Strips.</a> Frontiers in Physiology. 7, 287(2016).</li>
<li>Masson-Pevet, M., Jongsma, H. J., De Bruijne, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagenase-+and+trypsin-dissociated+heart+cells%3A+a+comparative+ultrastructural+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Collagenase- and trypsin-dissociated heart cells: a comparative ultrastructural study.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 8 (10), 747-757 (1976).</li>
<li>Yonenaga, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+conditions+of+collagenase+treatment+for+isolation+of+articular+chondrocytes+from+aged+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Therapy%22%5BJournal%5D)">Optimal conditions of collagenase treatment for isolation of articular chondrocytes from aged human tissues.</a> Regenerative Therapy. 6, 9-14 (2017).</li>
<li>French, M. F., Mookhtiar, K. A., Van Wart, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+proteolysis+of+type+I+collagen+at+hyperreactive+sites+by+class+I+and+II+Clostridium+histolyticum+collagenases%3A+complementary+digestion+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Limited proteolysis of type I collagen at hyperreactive sites by class I and II Clostridium histolyticum collagenases: complementary digestion patterns.</a> Biochemistry. 26 (3), 681-687 (1987).</li>
<li>Hara, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+investigation+of+pig+cells+for+resistance+to+human+antibody-mediated+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+International%3A+Official+Journal+of+the+European+Society+for+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">In vitro investigation of pig cells for resistance to human antibody-mediated rejection.</a> Transplant International: Official Journal of the European Society for Organ Transplantation. 21 (12), 1163-1174 (2008).</li>
<li>Takashima, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+fibroblast+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Establishment of fibroblast cultures.</a> Current Protocols in Cell Biology. Chapter 2, 2.1.1-2.1.12 (2001).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Komórki śródbłonka są powszechnie wykorzystywane w badaniach nad dysfunkcją naczyń krwionośnych, cukrzycą, regeneracją tkanek, transplantacją i nowotworami 14,15,16,17,18. Aby zrozumieć i scharakteryzować biologię i funkcję EC w tych chorobach, opisano liczne metody izolowania EC różnych chorych narządów lub tkanek<sup class=...

Niedobór dostępnych organów do przeszczepów jest nierozwiązanym problemem na całym świecie1. Według Chińskiego Towarzystwa Czerwonego Krzyża tylko niewielka liczba pacjentów ze schyłkową niewydolnością narządów otrzymała odpowiedni narząd w Chinach w 2018 roku.
Ksenotransplantacja jest obiecującym sposobem na rozwiązanie problemu niedoboru narządów. Narządy świni są uważane za najbardziej odpowiednie narządy dla ludzi ze względu na podobieństwa anatomiczne i fizjologiczne2,3. Niepowodzenie ksenoprzeszczepu świni jest w dużej mierze związane z reakcją naczelnych na odrzucenie układu immunologicznego i krzepnięcie. Komórki śródbłonka świń (EC) mają kluczowe znaczenie, ponieważ komórki te jako pierwsze wchodzą w interakcję z układem odpornościowym naczelnych, który obejmuje przeciwciała, dopełniacz, cytokiny i komórki odpornościowe (np. Limfocyty T, limfocyty B i makrofagi)4,5. EC świń odgrywają istotną rolę w ksenotransplantacji narządów świń i wysp trzustkowych6,7. W związku z tym EC są ważnymi komórkami do badania reakcji odrzucenia i krzepnięcia przeszczepu świni. Do badań nad ksenotransplantacją wymagana jest izolacja wysokiej jakości EC świń.
W próbach izolacji EC z różnych narządów (np. serca, nerek, wątroby i aorty), zgłoszono kilka protokołów w warunkach ksenotransplantacji8,9,10,11,12. Jednak utrzymanie ultraczystej hodowli wyizolowanych EC jest nierozwiązanym problemem w standardowych protokołach. Zwiększone stężenie strawionego roztworu, niewłaściwy czas trawienia i intensywność skrobania mogą przyczyniać się do zwiększonego zanieczyszczenia fibroblastami w obecnych badaniach8,10,13. Poza tym metoda izolowania pAEC od miniaturowych świń jest mniej zbadana. W tym miejscu opisujemy zoptymalizowaną metodę enzymatyczną izolowania wysoko oczyszczonych pAEC od miniaturowych świń (Wuzhishan lub Bama). W protokole zaprojektowano kilka etapów w celu zmniejszenia zanieczyszczenia fibroblastami i uzyskania EC o wysokiej czystości.

<table><tbody><tr><td>BD FACSAria II</td><td>BD Bioscience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Boneforceps</td><td>Pekin HeLi KeChuang Technology Development CO., Ltd. Chiny</td><td>HL-YGQ&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Jednorazowa strzykawka BOON (10 ml)</td> <td>Jiangsu Yile medical Article Co., Ltd. Chiny</td> CD31-FITC <td></td><td></td></tr><tr><td>przeciwciało</td><td>Bio-Rad</td><td>MCA1746F</td><td></td></tr><tr><td>Skrobak do komórek</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3010#</td><td></td></tr><tr><td>Kolagenaza IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138#-1G</td><td></td></tr><tr><td>Związek ketaminy do wstrzykiwań&nbsp;</td><td>Weterynaryjna fabryka farmaceutyczna w Shenyang, Chiny</td><td></td><td>Chlorowodorek ketaminy?0,3 g / 2 ml, chlorowodorek ksylazyny: 0,3 g / 2 ml, chlorowodorek fenacetyny?1 mg / 2 ml</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-diamidino-2-fenyloindol, dichlorowodorek)</td> <td>Life Technologies</td><td>D1306#</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Life Technologies</td><td>11965118#</td><td></td></tr><tr><td>ECM</td><td>Sciencell</td><td>1001#</td><td></td></tr><tr><td>ECGS</td><td>Sciencell</td><td>1052#</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Mikroprobówka zatrzaskowa (1.5 ml)&nbsp;</td><td>AXYGEN</td><td>MCT-150-C#</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 100mm Naczynie do hodowli komórkowych</td><td>Corning</td><td>353003#</td><td></td></tr><tr><td>Surowica bydlęca</td><td>płodu GIBCO</td><td>10270-106#</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze Flowjo v10.0</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Instrumenty medyczne ShangHai Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparyna sodowa</td><td>Jiangsu WanBang biopharmaceutical Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nalewka jodowa</td><td>Guilin LiFeng Medical Supplies Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Miniaturowa świnia (Bama lub Wuzhishan)</td> <td>Kang Yi Ecological Agriculture Co., Ltd, Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Mshot&nbsp;</td><td>Guangzhou Micro-shot Technology Co., Ltd.</td><td>M152</td><td></td></tr><tr><td>Szalki Petriego (150 x 15 mm)</td><td>Biologixgroup</td><td>66-1515#</td><td></td></tr><tr><td>Penicylina/Streptomycyna</td><td>Life Technologies</td><td>15070063#</td><td></td></tr><tr><td>Prostokątna kolba do hodowli komórek z szyjką skośną z nasadką odpowietrzającą ? Zobacz materiał T25?</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3289#</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki</td><td>Instrumenty medyczne ShangHai Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Serologiczne pipety transferowe (10 ml)</td> <td>JET Biofil</td><td>GSP010010#&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sterylna pipeta Pasteura</td><td>GeneBrick</td><td>GY0025#</td><td></td></tr> <tr><td>Sterylny filtr strzykawkowy (0,22 i mikro; m)</td> <td>Millipore</td><td>SLGV033RS#</td><td></td></tr><tr><td>Skalpel chirurgiczny</td><td>ShangHai medical instruments Co., Ltd.China</td><td>22#</td><td></td></tr><tr><td>Szew chirurgiczny</td><td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd</td><td>5-0#</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka?5mL?</td><td>Shengguang Medical Instrument Co., Ltd. Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsyna-EDTA (0,25%), czerwień fenolowa</td><td>GIBCO</td><td>25200056#</td><td></td></tr><tr><td>75% Alkohol medyczny</td><td>Guilin LiFeng Medical Supplies Co., Ltd.China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>20 x roztwór PBS (pH 7,4, bez nukleaz)</td><td>Sangon Biotech</td><td>B540627#</td><td></td></tr><tr><td>Medyczny środek dezynfekujący 84 płyn</td><td>Prowincja Syczuan Yijieshi Medical Technology Co., Ltd</td><td>450 ml / butelkę</td><td></td></tr></tbody></table>

izolacja i hodowla pierwotnych komórek śródbłonka aorty od miniaturowych świń

Isolation and Culture of Primary Aortic Endothelial Cells from Miniature Pigs

Ksenotransplantacja jest obiecującym sposobem na rozwiązanie problemu niedoboru ludzkich organów dla pacjentów ze schyłkową niewydolnością narządów, a świnia jest uważana za odpowiednie źródło narządów. Odrzucenie immunologiczne i krzepnięcie to dwie główne przeszkody dla powodzenia ksenotransplantacji. Uszkodzenia i dysfunkcje komórek śródbłonka naczyń krwionośnych (EC) są ważne dla rozwoju odpowiedzi zapalnej i krzepnięcia w ksenotransplantacji. W związku z tym izolacja komórek śródbłonka aorty świń (pAEC) jest niezbędna do zbadania odpowiedzi na odrzucenie immunologiczne i krzepnięcie. W tym miejscu opracowaliśmy proste podejście enzymatyczne do izolacji, charakterystyki i ekspansji wysoko oczyszczonych pAEC od miniaturowych świń. Najpierw miniaturowa świnia została znieczulona ketaminą i wycięto odcinek aorty. Po drugie, śródbłonkową powierzchnię aorty wystawiono na działanie 0,005% roztworu trawiennego kolagenazy dożylnej przez 15 minut. Po trzecie, powierzchnia śródbłonka aorty została zeskrobana tylko w jednym kierunku za pomocą skrobaka do komórek (<10 razy) i nie została ściśnięta podczas procesu skrobania. Wreszcie, izolowane pAEC dnia 3 oraz po pasażu 1 i pasażu 2 zidentyfikowano za pomocą cytometrii przepływowej z przeciwciałem anty-CD31. Odsetek komórek CD31-dodatnich wynosił odpowiednio 97,4% ± 1,2%, 94,4% ± 1,1% i 92,4% ± 1,7% (średnia ± SD). Stężenie kolagenazy IV, czas trawienia, kierunek oraz częstotliwość i intensywność skrobania mają kluczowe znaczenie dla zmniejszenia zanieczyszczenia fibroblastami i uzyskania wysokiej czystości i dużej liczby EC. Podsumowując, nasza metoda enzymatyczna jest wysoce skuteczną metodą izolowania EC z miniaturowej aorty świni, a komórki mogą być namnażane in vitro w celu zbadania odpowiedzi immunologicznych i krzepnięcia w ksenotransplantacji.

Nasza metoda ma na celu zapewnienie skutecznego sposobu izolacji wysokiej czystości komórek śródbłonka (ECs) z aorty minipigów. Proces operacji aorty przedstawiono na Ryc. 1. Pierwszym krokiem jest wycięcie całej aorty ze świni. Bardzo ważne jest zapobieganie kontaminacji innymi komórkami lub bakteriami. W związku z tym należy unikać uszkadzania innych organów lub tkanek, aby nie doprowadzić do zanieczyszczenia aorty niepożądanymi komórkami lub bakteriami, a następnie przemyć aortę trzy razy...

Opisana jest skuteczna metoda enzymatyczna do izolacji pierwotnych komórek śródbłonka aorty świńskiej (pAEC) od miniaturowych świń. Wyizolowane pierwotne pAEC mogą być wykorzystane do zbadania odpowiedzi immunologicznej i krzepnięcia w ksenotransplantacji.

Izolacja i hodowla pierwotnych komórek śródbłonka aorty od miniaturowych świń

Xenotransplantation is a promising way to resolve the shortage of human organs for patients with end-stage organ failure, and the pig is considered as a ...

Metoda ta jest wysoce skuteczną metodą izolowania komórek śródbłonka od miniaturowej świni. Komórki mogą być również namnażane, badać odpowiedź immunologiczną i krzepnięcia w ksenotransplantacji. Główną zaletą tej techniki jest to, że nie tylko łatwo i bardzo skutecznie wyizolować wysoko oczyszczone komórki śródbłonka od świni, ale także lepiej nadaje się do utrzymania innych pAEC podczas pasażu.Po potwierdzeniu braku reakcji na odruch bólowy u znieczulonej świni, należy trzykrotnie przemyć ścianę brzucha świni 75% alkoholem medycznym i jedną nalewką jodu. Po ostatnim umyciu użyj skalpela, aby wykonać nacięcie brzucha, aby odsłonić żyłę główną dolną i użyj pięciomililitrowej strzykawki, aby wstrzyknąć 5000 jednostek heparyny sodowej do żyły głównej dolnej. Po pięciu minutach wprowadź cewnik do aorty brzusznej i użyj skalpela, aby naciąć przeponę.Z pomocą drugiego badacza usuń lewą komorę i użyj kleszczy kostnych, aby wyciąć żebra, aby odsłonić serce i płuca. Zlokalizuj aortę za sercem i płucami i zaciśnij końce. Użyj nożyczek, aby wyciąć aortę i umyj ją jeden raz schłodzonym buforem do mycia.Usuń nadmiar tkanki wokół aorty za pomocą sterylnych kleszczy i nożyczek i umieść naczynie w 50-mililitrowej probówce wirówkowej zawierającej świeży, wstępnie schłodzony bufor do płukania w celu przeniesienia do laboratorium. W celu izolacji komórek śródbłonka aorty świń przenieś aortę świni na 150-milimetrową szalkę Petriego w warunkach aseptycznych i delikatnie usuń oba końce naczynia. Przytnij nadmiar tkanki w miejscu, w którym naczynie zostało zaciśnięte, sterylnymi kleszkami i nożyczkami, a następnie użyj 20 do 50 mililitrów świeżego buforu do płukania do przepłukania zewnętrznej i wewnętrznej strony aorty.Następnie przełóż szew chirurgiczny przez aortę i luźno zawiąż jeden koniec naczynia, utrzymując szew w świetle. Delikatnie przymocuj aortę w pobliżu zawiązanego końca za pomocą kleszczy, a następnie powoli pociągnij szew chirurgiczny, aby odwrócić aortę, aż powierzchnia śródbłonka aorty zostanie odsłonięta. Umyj powierzchnię śródbłonka aorty trzy razy 10 mililitrami świeżego buforu do płukania na płukanie i umieść aortę w 15-mililitrowej probówce wirówkowej.Przykryj próbkę 10 mililitrami rozgrzanego 0,005% roztworu trawiennego kolagenazy IV o temperaturze 37 stopni Celsjusza i inkubuj tkankę w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 15 minut. Pod koniec inkubacji przenieść całą zawartość probówki do 100-milimetrowego naczynia hodowlanego i zatrzymać trawienie za pomocą 10 do 15 mililitrów wstępnie schłodzonego buforu zatrzymującego. Za pomocą skrobaka do komórek delikatnie usuń komórki śródbłonka aorty z wewnętrznej powierzchni naczynia i umyj naczynie trzy razy pięcioma mililitrami buforu płuczącego na mycie.Po ostatnim płukaniu przenieś supernatant do 50-mililitrowej probówki wirówkowej i umyj dno naczynia hodowlanego dwa razy pięcioma mililitrami świeżego bufora do płukania na pranie, wciągając popłuczyny do probówki o pojemności 50 mililitrów. Zebrać komórki przez odwirowanie i odrzucić wszystkie oprócz ostatnich 10 mililitrów supernatantu. Dodaj 20 mililitrów buforu myjącego, aby ponownie zawiesić osad, uważając, aby uniknąć pęcherzyków, i zbierz komórki za pomocą kolejnego wirowania.Zawiesić osad w jednym mililitrze pożywki do hodowli komórkowej w celu policzenia i poszczepić komórki w stężeniu kolby raz dziesięć do sześciu komórek na 25 centymetrów kwadratowych. Następnie umieść komórki w inkubatorze do hodowli komórkowych w temperaturze 37 stopni Celsjusza w 5% dwutlenku węgla, odświeżając pożywkę co dwa do trzech dni. Po izolacji komórki śródbłonka są badane w dniu zero, pierwszym i drugim, a po pasażach pierwszym i drugim pod kątem zanieczyszczenia i oceny morfologicznej.Analiza cytometryczna przepływowa przy użyciu przeciwciała anty-CD31-FITC wskazuje na zazwyczaj większą niż 97% populację z dodatnim markerem komórek śródbłonka w trzecim dniu hodowli, która utrzymuje się na poziomie ponad 90% czystości nawet po dwóch pasażach. Powierzchnia śródbłonka aorty była zeskrobywana tylko w jednym kierunku, za pomocą skrobaka komórkowego, mniej niż 10 razy i nie była ściskana podczas procesu skrobania. Najlepszą odpowiedzią, zoptymalizowaną metodą izolacji pAEC, możemy użyć oczyszczonych pAEC do przeprowadzenia indywidualnych eksperymentów i zbadania odpowiedzi na odrzucenie immunologiczne i krzepnięcie w ksenotransplantacji.

isolation-culture-primary-aortic-endothelial-cells-from-miniature

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Przedstawiamy metodę izolacji i hodowli czystych populacji komórek śródbłonka zastawek serca (VEC). Komórki VEC można izolować z obu stron cuspisu lub płatka zastawki, a bezpośrednio po tym procesie możliwe jest łatwe wyizolowanie znajdujących się pod nimi komórek śródmiąższowych (VIC).

Izolacja komórek śródbłonka zastawek

Opisano metodę zasiewania autologicznymi komórkami biomateriałów tytanowych mających kontakt z krwią oraz testowania ich biokompatybilności. Metoda ta wykorzystuje komórki progenitorowe śródbłonka oraz rurki tytanowe, zasiewane na kilka minut przed chirurgiczną implantacją do żył głównych świni. Technika ta może zostać dostosowana do wielu innych implantowalnych urządzeń biomedycznych.

Technologia zasiewiania autologicznych komórek progenitorowych śródbłonka oraz badanie biokompatybilności urządzeń sercowo-naczyniowych w modelu dużych zwierząt

W tym filmie demonstrujemy procedurę chirurgicznego usuwania aorty u miniaturowych świń. Komórki śródbłonka pobrane z tych izolowanych aort mogą być dalej hodowane w warunkach in vitro w celu zbadania krzepnięcia i odpowiedzi immunologicznej.

Izolacja aorty świń: zabieg chirurgiczny polegający na wycięciu aorty piersiowej od miniaturowych świń w celu dalszej analizy

W tym filmie pokazujemy izolację komórek śródbłonka z aorty brzusznej modelu świni za pomocą jednoetapowego trawienia kolagenazy. Komórki śródbłonka mogą być hodowane do dalszych zastosowań.

Izolacja komórek śródbłonka aorty świń (pAEC): oparta na enzymach metoda izolowania komórek śródbłonka z pobranej aorty brzusznej świni

Zdolność do izolowania komórek śródbłonka zastawki serca (VEC) jest kluczowa dla zrozumienia mechanizmów rozwoju, utrzymania i choroby zastawki.  W tym miejscu opisujemy izolację VEC od embrionalnych i dorosłych myszy Tie2-GFP za pomocą FACS, co pozwoli na badania określające udział VEC w procesach rozwojowych i chorobowych.

Izolacja komórek śródbłonka mysiej zastawki

Komórki śródbłonka naczyniowego odgrywają znaczącą rolę w wielu ważnych zaburzeniach sercowo-naczyniowych. W tym artykule opisano prostą metodę izolowania i rozszerzania komórek śródbłonka z aorty myszy bez użycia specjalnego sprzętu. Nasz protokół zapewnia skuteczny sposób identyfikacji mechanizmów w fizjopatologii komórek śródbłonka.

Izolacja i pierwotna hodowla komórek śródbłonka aorty myszy

Potrzebne są nowatorskie metody izolacji pierwotnych komórek śródbłonka z naczyń krwionośnych. Protokół ten opisuje nową technikę, która całkowicie odwraca naczynia krwionośne będące przedmiotem zainteresowania, wystawiając tylko stronę śródbłonka na trawienie enzymatyczne. Uzyskana w ten sposób hodowla czystych komórek śródbłonka może być wykorzystana do badania chorób sercowo-naczyniowych, modelowania chorób i angiogenezy.

Izolacja i hodowla pierwotnych komórek śródbłonka z tętnic i żył psów

Kilka protokołów zostało opracowanych i opisanych do izolacji różnych typów komórek serca z serca szczura. W tym miejscu opisano zoptymalizowany protokół, który pozwala na izolację wysokiej jakości głównych typów komórek serca (kardiomiocytów, komórek śródbłonka i fibroblastów) z jednego preparatu, zmniejszając koszty eksperymentu.

Jednoczesna izolacja wysokiej jakości kardiomiocytów, komórek śródbłonka i fibroblastów z serca dorosłego szczura

Prezentujemy model in vitro, który pozwala na badanie i analizę krzepnięcia w pełnej, nieantykoagulowanej krwi. Antykoagulacja w ustroju zależy od naturalnego działania przeciwzakrzepowego zdrowych komórek śródbłonka, a aktywacja komórek śródbłonka spowoduje krzepnięcie.

Ocena właściwości przeciwzakrzepowych i przeciwzapalnych komórek śródbłonka z wykorzystaniem hodowli komórkowej 3D i nieantykoagulowanej krwi pełnej

Ten protokół opisuje zbieranie ludzkich zastawek aortalnych pobranych podczas zabiegów chirurgicznej wymiany zastawki aortalnej lub z tkanki zwłok, a następnie izolację, rozszerzanie i charakterystykę specyficznych dla pacjenta komórek śródbłonka i śródmiąższu pierwotnej zastawki. Uwzględniono ważne szczegóły dotyczące procesów potrzebnych do zapewnienia żywotności komórek i swoistości fenotypu.

Izolacja ludzkich pierwotnych komórek zastawki do modelowania chorób in vitro

W tym artykule, pierwotne komórki śródbłonka płuc zostały wyizolowane i wyhodowane od nowonarodzonych myszy.

Izolacja pierwotnych komórek śródbłonka płuc myszy

Poznaj skuteczną metodę enzymatyczną izolacji pierwotnych komórek śródbłonka aorty od miniaturowych świń. Technika ta umożliwia uzyskanie czystych pAECs do badań nad odpowiedzią immunologiczną i koagulacyjną w ksenotransplantacji.

Izolacja i hodowla pierwotnych komórek śródbłonka aorty od miniaturowych świń

Przeglądaj więcej filmów