Name: Wyprowadzanie i leczenie guza z pierwotnych komórek nowotworowych wyizolowanych z mięsaków prążkowanokomórkowych myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-13T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: Poznaj metodę izolacji pierwotnych komórek mięsaka prążkowanokomórkowego myszy, formowania tumorsfer oraz ich leczenia i przeszczepu allogenicznego. Ta technika umożliwia badanie pochodzenia komórek nowotworowych i przesiewanie leków.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez grant Fundacji Medycznej Ellison AG-NS-0843-11, oraz Grant Pilotażowy NIH w ramach Grantu Wsparcia Centrum Raka NCI P30CA030199 dla A.S.

<ol><li>Dagogo-Jack, I., Shaw, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+heterogeneity+and+resistance+to+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumour heterogeneity and resistance to cancer therapies.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 15 (2), 81-94 (2018).</li>
<li>Wicha, M. S., Liu, S., Dontu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+an+old+idea--a+paradigm+shift%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: an old idea--a paradigm shift.</a> Cancer Research. 66 (4), 1883-1890 (2006).</li>
<li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+National+Academy+of+Science+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proceedings National Academy of Science of the United States of America. 100 (7), 3983-3988 (2003).</li>
<li>Oishi, N., Yamashita, T., Kaneko, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+biology+of+liver+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular biology of liver cancer stem cells.</a> Liver Cancer. 3 (2), 71-84 (2014).</li>
<li>Crous, A. M., Abrahamse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+cancer+stem+cells+and+low-intensity+laser+irradiation%3A+a+potential+future+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Lung cancer stem cells and low-intensity laser irradiation: a potential future therapy.</a> Stem Cell Research & Therapy. 4 (5), 129(2013).</li>
<li>Tomao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+molecular+profiles+of+ovarian+cancer%3A+an+update+on+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Investigating molecular profiles of ovarian cancer: an update on cancer stem cells.</a> Journal of Cancer. 5 (5), 301-310 (2014).</li>
<li>Zhan, H. X., Xu, J. W., Wu, D., Zhang, T. P., Hu, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+cancer+stem+cells%3A+new+insight+into+a+stubborn+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Pancreatic cancer stem cells: new insight into a stubborn disease.</a> Cancer Letters. 357 (2), 429-437 (2015).</li>
<li>Sharpe, B., Beresford, M., Bowen, R., Mitchard, J., Chalmers, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Searching+for+prostate+cancer+stem+cells%3A+markers+and+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews+and+Reports%22%5BJournal%5D)">Searching for prostate cancer stem cells: markers and methods.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 9 (5), 721-730 (2013).</li>
<li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367 (6464), 645-648 (1994).</li>
<li>Lee, C. -H., Yu, C. -C., Wang, B. -Y., Chang, W. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorsphere+as+an+effective+in+vitro+platform+for+screening+anti-+cancer+stem+cell+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Tumorsphere as an effective in vitro platform for screening anti- cancer stem cell drugs.</a> Oncotarget. 7 (2), 1215-1226 (2015).</li>
<li>Sultan, I., Qaddoumi, I., Yaser, S., Rodriguez-Galindo, C., Ferrari, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+adult+and+pediatric+rhabdomyosarcoma+in+the+surveillance%2C+epidemiology+and+end+results+program%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Comparing adult and pediatric rhabdomyosarcoma in the surveillance, epidemiology and end results program.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (20), 3391-3397 (1973).</li>
<li>Blum, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+and+overlapping+sarcoma+subtypes+initiated+from+muscle+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Distinct and overlapping sarcoma subtypes initiated from muscle stem and progenitor cells.</a> Cell Reports. 5 (4), 933-940 (2013).</li>
<li>Rubin, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+an+unanticipated+relationship+between+undifferentiated+pleomorphic+sarcoma+and+embryonal+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Evidence for an unanticipated relationship between undifferentiated pleomorphic sarcoma and embryonal rhabdomyosarcoma.</a> Cancer Cell. 19 (2), 177-191 (2011).</li>
<li>Keller, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+rhabdomyosarcomas+in+conditional+Pax3%3AFkhr+mice%3A+cooperativity%5BTitle%5D)+AND+%22of+Ink4a%2FARF+and+Trp53+loss+of+function.+Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Alveolar rhabdomyosarcomas in conditional Pax3:Fkhr mice: cooperativity.</a> of Ink4a/ARF and Trp53 loss of function. Genes & Development. 18 (21), 2614-2626 (2004).</li>
<li>Tremblay, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Hippo+transducer+YAP1+transforms+activated+satellite+cells+and+is+a+potent+effector+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The Hippo transducer YAP1 transforms activated satellite cells and is a potent effector of embryonal rhabdomyosarcoma formation.</a> Cancer Cell. 26 (2), 273-287 (2014).</li>
<li>Hatley, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+rhabdomyosarcoma+originating+from+the+adipocyte+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A mouse model of rhabdomyosarcoma originating from the adipocyte lineage.</a> Cancer Cell. 22 (4), 536-546 (2012).</li>
<li>Drummond, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Drives+Fusion-Negative+Rhabdomyosarcoma+Initiated+From+Non-myogenic+Endothelial+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Drives Fusion-Negative Rhabdomyosarcoma Initiated From Non-myogenic Endothelial Progenitors.</a> Cancer Cell. 33 (1), 108-124 (2018).</li>
<li>Almazan-Moga, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Inhibition+Hampers+Sphere+and+Holoclone+Formation+in+Rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Inhibition Hampers Sphere and Holoclone Formation in Rhabdomyosarcoma.</a> Stem Cells International. , (2017).</li>
<li>Walter, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD133+positive+embryonal+rhabdomyosarcoma+stem-like+cell+population+is+enriched+in+rhabdospheres%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">CD133 positive embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population is enriched in rhabdospheres.</a> PLoS One. 6 (5), (2011).</li>
<li>Ciccarelli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+role+of+MEK%2FERK+pathway+in+sustaining+tumorigenicity+and+in+vitro+radioresistance+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+stem-like+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer%22%5BJournal%5D)">Key role of MEK/ERK pathway in sustaining tumorigenicity and in vitro radioresistance of embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population.</a> Molecular Cancer. 15, (2016).</li>
<li>Deel, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Transcriptional+Coactivator+TAZ+Is+a+Potent+Mediator+of+Alveolar+Rhabdomyosarcoma+Tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The Transcriptional Coactivator TAZ Is a Potent Mediator of Alveolar Rhabdomyosarcoma Tumorigenesis.</a> Clinical Cancer Research. 24 (11), 2616-2630 (2018).</li>
<li>Boscolo Sesillo, F., Fox, D., Sacco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+Stem+Cells+Give+Rise+to+Rhabdomyosarcomas+in+a+Severe+Mouse+Model+of+Duchenne+Muscular+Dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Muscle Stem Cells Give Rise to Rhabdomyosarcomas in a Severe Mouse Model of Duchenne Muscular Dystrophy.</a> Cell Reports. 26 (3), 689-701 (2019).</li>
<li>Chamberlain, J. S., Metzger, J., Reyes, M., Townsend, D., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin-deficient+mdx+mice+display+a+reduced+life+span+and+are+susceptible+to+spontaneous+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Dystrophin-deficient mdx mice display a reduced life span and are susceptible to spontaneous rhabdomyosarcoma.</a> The FASEB Journal. 21 (9), 2195-2204 (2007).</li>
<li>Kessel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput+3D+Tumor+Spheroid+Screening+Method+for+Cancer+Drug+Discovery+Using+Celigo+Image+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Technology%22%5BJournal%5D)">High-Throughput 3D Tumor Spheroid Screening Method for Cancer Drug Discovery Using Celigo Image Cytometry.</a> SLAS Technology. 22 (4), 454-465 (2017).</li>
<li>Johnson, S., Chen, H., Lo, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Tumorsphere+Formation+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-Protocol%22%5BJournal%5D)">In vitro Tumorsphere Formation Assays.</a> Bio-Protocol. 3 (3), (2013).</li>
<li>Zhu, Z. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+three-dimensional+tumorsphere+culture+system+for+the+efficient+and+low-cost+enrichment+of+cancer+stem+cells+with+natural+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">A novel three-dimensional tumorsphere culture system for the efficient and low-cost enrichment of cancer stem cells with natural polymers.</a> Experimental and Therapeutic. 15 (1), 85-92 (2018).</li>
<li>Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downstream+molecular+pathways+of+FLT3+in+the+pathogenesis+of+acute+myeloid+leukemia%3A+biology+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Jornal+of+Hematology+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Downstream molecular pathways of FLT3 in the pathogenesis of acute myeloid leukemia: biology and therapeutic implications.</a> Jornal of Hematology and Oncology. 4, (2011).</li>
<li>Laouar, Y., Welte, T., Fu, X. Y., Flavell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT3+is+required+for+Flt3L-dependent+dendritic+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">STAT3 is required for Flt3L-dependent dendritic cell differentiation.</a> Immunity. 19 (6), 903-912 (2003).</li>
<li>Ogawa, M., Bergsagel, D. E., McCulloch, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+melphalan+on+mouse+myeloma+%28adj.+PC-5%29+and+hemopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Differential effects of melphalan on mouse myeloma (adj. PC-5) and hemopoietic stem cells.</a> Cancer Research. 31 (12), 2116-2119 (1971).</li>
<li>Hamburger, A. W., Salmon, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+bioassay+of+human+tumor+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Primary bioassay of human tumor stem cells.</a> Science. 197 (4302), 461-463 (1977).</li>
<li>Hamburger, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+tumor+clonogenic+assay+as+a+model+system+in+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Cell+Cloning%22%5BJournal%5D)">The human tumor clonogenic assay as a model system in cell biology.</a> The International Journal of Cell Cloning. 5 (2), 89-107 (1987).</li>
<li>Jimenez-Hernandez, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NRP1-positive+lung+cancer+cells+possess+tumor-initiating+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Reports%22%5BJournal%5D)">NRP1-positive lung cancer cells possess tumor-initiating properties.</a> Oncology Reports. 39 (1), 349-357 (2018).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).</li>
<li>Kimlin, L. C., Casagrande, G., Virador, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+three-dimensional+%283D%29+models+in+cancer+research%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">In vitro three-dimensional (3D) models in cancer research: an update.</a> Molecular Carcinogenesis. 52 (3), 167-182 (2013).</li>
<li>Salerno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphere-forming+cell+subsets+with+cancer+stem+cell+properties+in+human+musculoskeletal+sarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Sphere-forming cell subsets with cancer stem cell properties in human musculoskeletal sarcomas.</a> International Journal of Oncology. 43 (1), 95-102 (2013).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Do izolacji i charakterystyki TPC z heterogenicznych populacji komórek nowotworowych zastosowano wiele metod: testy klonogenne guza, izolację FACS i test tworzenia guza. Test klonogenny guza został po raz pierwszy opisany w 1971 roku, wykorzystany do badań nad komórkami macierzystymi, a dopiero później zastosowany w biologii raka29,30. Metoda ta opiera się na wewnętrznej właściwości rakowych komórek macierzystych do niekontrolowanego namnażania się w kulturach mi...

Rak jest chorobą niejednorodną; ponadto, ten sam typ nowotworu może wykazywać różne mutacje genetyczne u różnych pacjentów, a u jednego pacjenta guz składa się z wielu populacji komórek1. Heterogeniczność stanowi wyzwanie w identyfikacji komórek odpowiedzialnych za inicjowanie i rozprzestrzenianie się raka, ale ich charakterystyka jest niezbędna do opracowania skutecznych metod leczenia. Pojęcie komórek rozmnażających się nowotwory (TPC), rzadkiej populacji komórek, które przyczyniają się do rozwoju nowotworu, było wcześniej szeroko analizowane2. Pomimo faktu, że TPC zostały scharakteryzowane w wielu typach nowotworów, identyfikacja markerów do ich niezawodnej izolacji pozostaje wyzwaniem dla kilku typów nowotworów3,4,5,6,7,8,9. Tak więc metoda, która nie opiera się na markerach molekularnych, ale raczej na właściwościach funkcjonalnych TPC (wysoka samoodnowa i zdolność do wzrostu w warunkach niskiego przyłączenia), znana jako test tworzenia się guza, może być szeroko stosowana do identyfikacji TPC z większości nowotworów. Co ważne, test ten może być również wykorzystany do ekspansji TPC, a tym samym bezpośrednio zastosowany do badań przesiewowych leków przeciwnowotworowych i badań nad opornością na raka1,10.
Mięsak prążkowanokomórkowy (RMS) to rzadka forma mięsaka tkanek miękkich, najczęściej występująca u małych dzieci11. Chociaż RMS można zidentyfikować histologicznie poprzez ocenę ekspresji markerów miogennych, komórka RMS, z której pochodzi, nie została jednoznacznie scharakteryzowana ze względu na wiele podtypów guza i wysoką heterogeniczność bodźców rozwojowych guza. Rzeczywiście, ostatnie badania wywołały znaczącą dyskusję naukową na temat tego, czy RMS jest pochodzenia miogennego czy niemiogennego, co sugeruje, że RMS może pochodzić z różnych typów komórek w zależności od kontekstu12,13,14,15,16,17. Przeprowadzono liczne badania na liniach komórkowych RMS z wykorzystaniem testu tworzenia nowotworów w celu identyfikacji szlaków zaangażowanych w rozwój guza i charakterystyki markerów związanych z populacjami o wysokim stopniu samoodnawiania się18,19,20,21.
Jednakże, pomimo potencjału testu tworzenia się guza do identyfikacji komórek RMS pochodzenia, nie opisano jeszcze niezawodnej metody, która może być zastosowana na pierwotnych komórkach RMS. W tym kontekście, w niedawnym badaniu przeprowadzonym przez naszą grupę zastosowano zoptymalizowany test tworzenia guza w celu identyfikacji komórek RMS pochodzenia w mysim modelu dystrofii mięśniowej Duchenne'a (DMD)22. Wiele typów komórek przednowotworowych, wyizolowanych z tkanek mięśniowych, jest testowanych pod kątem ich zdolności do wzrostu w warunkach niskiego przywiązania, co pozwala na identyfikację komórek macierzystych mięśni jako komórek pochodzenia RMS w kontekstach dystroficznych. Opisany tutaj jest powtarzalny i wiarygodny protokół testu tworzenia się guza (<silna klasa="xfig">Rysunek 1), który został z powodzeniem zastosowany do identyfikacji niezwykle rzadkich populacji komórek, które są odpowiedzialne za rozwój RMS myszy.

<table><tbody><tr><td>Odczynnik do dysocjacji komórek Accutase</td><td>Gibco</td><td>A1110501</td><td>Odłącz przylegające komórki i zdysocjuj guzy</td></tr><tr><td>Celigo</td><td>Nexcelom</td><td>Celigo Microwell</td><td>cytometr obrazowy na płytce do komórek przylegających i zawiesinowych</td></tr><tr><td>Kolagenaza, typ II</td><td>Life Technologies</td><td>17101015</td><td>Enzym trawienia tkanek</td></tr><tr><td>Dispase II, proteaza</td><td>Life Technologies</td><td>17105041</td><td>Enzym trawienia tkankowego</td></tr><tr><td>DMEM pożywka o wysokiej zawartości glukozy</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>Składnik pożywki dla komórek nowotworowych</td></tr><tr><td>DMEM/F12 Media</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td>Składnik pożywki tumosferowej</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>ThermoFisher</td><td>S312500</td><td>Składnik buforu FACS</td></tr><tr><td>Rekombinowane białko myszy EGF</td><td>Gibco</td><td>PMG8041</td><td>Składnik pożywki</td></tr> <tr><td>tumosferyFACSAria II Cytometria przepływowa</td><td>BD Biosciences</td><td>650033</td><td>Sortownik komórek aktywowany fluorescencyjnie</td></tr><tr><td>Surowica bydlęca</td><td>płodu Omega Scientific</td><td>FB-11</td><td>Składnik pożywki dla komórek nowotworowych</td></tr><tr><td>Fluriso (izofluory) środek znieczulający</td><td>MWI Vet Supply</td><td>502017</td><td>Odczynnik znieczulający dla zwierząt</td></tr><tr><td>FxCycle Violet Stain</td><td>Life Technologies</td><td>F10347</td><td>Rozróżnianie żywych i martwych komórek</td></tr><tr><td>Goat Serum</td><td>Life Technologies</td><td>16210072</td><td>Składnik buforu FACS</td></tr><tr><td>Ham's F10 Media</td><td>Life Technologies</td><td>11550043</td><td>Składnik buforu FACS</td></tr><tr><td>Horse Serum</td><td>Life Technologies</td><td>16050114</td><td>Składnik pożywki do izolacji komórek</td></tr><tr><td>Odczynnik do transfekcji Lipofectamine 3000</td><td>Odczynnik</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>do transfekcji ThermoFisher L3000015Matrigel membrane matrix</td><td>Corning</td><td>CB40234</td><td>Zapewnia wsparcie dla komórek przesiewanych</td></tr><tr><td>N-2 Supplemtns (100X)</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>Składnik pożywki tumosferycznej</td></tr><tr><td>Neomycyna-Siarczany polimyksyny B-Bacytracyna Maść</td> cynkowa <td>MWI Vet Supply</td><td>701008</td><td>Maść do oczu</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>Składnik bufora FACS i stosowany do mycia komórek</td></tr><tr><td>pEGFP-C1</td><td>Addgene</td><td>6084-1</td><td>Plazmid GFP</td></tr><tr><td>Penicylina - Streptomyocin</td><td>Life Technologies</td><td>15140163</td><td>Składnik pożywki dla komórek nowotworowych i tumosfery</td></tr><tr><td>Rekombinowany człowiek i beta; FGF-basic</td><td>Peprotech</td><td>10018B</td><td>Składnik pożywki tumosfery</td></tr><tr><td>Rekombinowane mysie białko ligandu Flt-3</td><td>R& D Systems</td><td>427-FL-005</td><td>Rekombinowane białko</td></tr><tr><td>błękit trypanowy</td><td>ThermoFisher</td><td>15250061</td><td>Rozróżnianie żywych i martwych komórek</td></tr></tbody></table>

wyprowadzanie i leczenie guza z pierwotnych komórek nowotworowych wyizolowanych z mięsaków prążkowanokomórkowych myszy

Tumorsphere Derivation and Treatment from Primary Tumor Cells Isolated from Mouse Rhabdomyosarcomas

Mięsak prążkowanokomórkowy (RMS) jest najczęstszym mięsakiem tkanek miękkich u dzieci. Chociaż znaczne wysiłki umożliwiły identyfikację powszechnych mutacji związanych z RMS i umożliwiły rozróżnienie różnych podtypów RMS, nadal istnieją poważne wyzwania związane z opracowaniem nowych metod leczenia w celu dalszej poprawy rokowania. Chociaż zidentyfikowano go na podstawie ekspresji markerów miogennych, nadal istnieją poważne kontrowersje co do tego, czy RMS ma pochodzenie miogenne czy niemiogenne, ponieważ komórka pochodzenia jest nadal słabo poznana. W niniejszym badaniu przedstawiono wiarygodną metodę oznaczania guza dla myszy RMS. Test opiera się na właściwościach funkcjonalnych komórek nowotworowych i umożliwia identyfikację rzadkich populacji w guzie o funkcjach rakotwórczych. Opisano również procedury testowania białek rekombinowanych, integracji protokołów transfekcji z testem guza oraz oceny genów kandydujących zaangażowanych w rozwój i wzrost guza. Dalej opisano procedurę przeszczepu allogenicznego guzów myszom biorcom w celu potwierdzenia funkcji nowotworowej in vivo. Ogólnie rzecz biorąc, opisana metoda pozwala na wiarygodną identyfikację i badanie rzadkich populacji rakotwórczych RMS, które można zastosować do RMS powstających w różnych kontekstach. Wreszcie, protokół może być wykorzystany jako platforma do badań przesiewowych leków i przyszłego rozwoju środków terapeutycznych.

Wykrywanie tumorsfer 
Izolację komórek zoptymalizowano tak, aby uzyskać maksymalną heterogenność populacji komórkowych obecnych w tkance nowotworowej. Po pierwsze, ponieważ izolowane tkanki wykazywały morfologicznie odmienne obszary, w celu zwiększenia szans na wyizolowanie jednorodnych, rzadkich populacji komórek, pobieranie próbek przeprowadzano z wielu obszarów guza (Rycina 1A, pierwszy panel od lewej). Po drugie, mechaniczną dysocjację...

Ten protokół opisuje powtarzalną metodę izolacji komórek pierwotnych mięsaka prążkowanokomórkowego u myszy, tworzenia i leczenia guza oraz przeszczepu allogenicznego, zaczynając od hodowli guzów.

Wyprowadzanie i leczenie guza z pierwotnych komórek nowotworowych wyizolowanych z mięsaków prążkowanokomórkowych myszy

Rhabdomyosarcoma (RMS) is the most common soft tissue sarcoma in children. Although significant efforts have enabled the identification of common ...

Mięsak prążkowanokomórkowy jest rzadką postacią mięsaków tkanek miękkich, charakteryzującą się histologicznie morfologią tkanek i ekspresją markerów miogennych. Jednak biorąc pod uwagę istnienie różnych podtypów tych nowotworów i niejednorodność bodźców, które przyczyniają się do ich powstawania, identyfikacja komórki pochodzenia była bardzo trudna. Tutaj opisujemy powtarzalne i wiarygodne metody identyfikacji komórki pochodzenia mięsaków prążkowanokomórkowych, zaczynając od świeżo pobranych tkanek nowotworowych od myszy, a test ten jest testem tworzenia guza.Głównymi zaletami testu tworzenia guza jest to, że opiera się on na właściwościach komórkowych, o których wiadomo, że są obecne w komórkach pochodzących z nowotworu, a także może być stosowany do ekspansji i wzbogacania określonej populacji komórek. Co więcej, jego sferoidalna struktura naśladuje środowisko guza, dzięki czemu mogą być wykorzystywane jako badania przesiewowe leków. Metoda ta ma potencjał do zastosowania w innych typach nowotworów, ponieważ nie wymaga wcześniejszej wiedzy na temat markerów molekularnych, ale może wymagać optymalizacji warunków hodowli.Uformowanie się guza może zająć trochę czasu, zwłaszcza jeśli

tumorsphere-derivation-treatment-from-primary-tumor-cells-isolated

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetyka

Niniejszy protokół opisuje izolację, wzbogacanie i utrzymanie komórek macierzystych nowotworu medulloblastoma pochodzących od mutantowych myszy z ektopową aktywnością szlaku Sonic hedgehog.

Izolacja, namnażanie i utrzymanie komórek macierzystych medulloblastomy

Opisano metodę propagacji ludzkich guzów siatkówczaka u myszy. Komórki nowotworowe są wstrzykiwane bezpośrednio do oczu myszy z niedoborem odporności. Guzy wtórne zostały pomyślnie wywołane z wykorzystaniem zarówno komórek pobranych bezpośrednio z ludzkich guzów, jak i hodowanych tumorsfer.

Ustanowienie i propagacja guzów retinoblastomy ludzkiej u myszy z niedoborem odporności

Niniejszy protokół wideo demonstruje izolację i ekspansję komórek macierzystych z chirurgicznie wyciętej tkanki guza glejaka wielopostaciowego (GBM) u człowieka przy użyciu metody hodowli neurosfer.

Izolacja i ekspansja komórek nowotworowych glejaka wielopostaciowego człowieka z wykorzystaniem testu neurosferycznego

Obecność nowotworowych komórek macierzystych (CSC) w mięsakach kostnych została ostatnio powiązana z ich patogenezą. W artykule przedstawiono izolację CSCs z pierwotnych kultur komórkowych uzyskanych z ludzkich biopsji konwencjonalnego kostniakomięsaka (OS) z wykorzystaniem zdolności CSC do wzrostu w warunkach niezakaźnych.

Ustanowienie hodowli nowotworowych komórek macierzystych z ludzkiego konwencjonalnego kostniakomięsaka

Poniższy protokół skupia się na ustanowieniu pierwotnej hodowli mięsaka tkanek miękkich (STS) pochodzącego od pacjenta. Model ten może pomóc nam lepiej zrozumieć podłoże molekularne i profil farmakologiczny tych rzadkich nowotworów złośliwych i może stanowić punkt wyjścia do dalszych badań mających na celu poprawę leczenia STS.

Ustanowienie pierwotnej hodowli mięsaka tkanek miękkich pochodzącego od pacjenta

Opisujemy szczegółowy protokół izolacji komórek inicjujących nowotwór z ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów z ludzkim mięsakiem poprzez sortowanie komórek aktywowane fluorescencją, przy użyciu ludzkiego antygenu leukocytów-1 (HLA-1) jako markera ujemnego, oraz dla dalszej walidacji i charakterystyki tych komórek inicjujących HLA-1-ujemny nowotwór.

Izolacja i charakterystyka komórek inicjujących nowotwór z ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów z mięsakiem

Celem tej metodologii jest identyfikacja komórek macierzystych raka (CSC) w liniach komórek rakowych i pierwotnych próbkach guzów ludzkich za pomocą protokołu formowania kuli, w solidny sposób, przy użyciu testów funkcjonalnych i charakterystyki fenotypowej za pomocą cytometrii przepływowej i Western blot.

Pozyskiwanie kulek komórek macierzystych raka z guzów ginekologicznych i raka piersi

W tym protokole opisujemy mysi model niekompletnej chirurgicznej resekcji mięsaka tkanek miękkich do testowania terapii (neo)adjuwantowych.

Mysi model niekompletnie wyciętego mięsaka tkanek miękkich do testowania terapii (neo)adjuwantowych

Modele przerzutów do kości nie rozwijają przerzutów równomiernie ani ze 100% częstością. Bezpośrednie wstrzyknięcie do komórek nowotworowych kości może spowodować embolizację płuc. Przedstawiamy naszą technikę modelowania pierwotnych guzów kości i przerzutów do kości z wykorzystaniem implantacji przeszczepu guza litego do kości, prowadzącej do powtarzalnego wszczepienia i wzrostu.

Modelowanie pierwotnych guzów kości i przerzutów do kości z implantacją przeszczepu guza litego do kości

Prezentowany tutaj jest protokół do użycia kontrolowanej hipertermii, generowanej przez ultradźwięki o wysokiej intensywności sterowane rezonansem magnetycznym, do wywołania uwalniania leku z liposomów wrażliwych na temperaturę w modelu myszy mięsaka prążkowanokomórkowego.

Hipertermia ultradźwiękowa o wysokiej intensywności sterowana rezonansem magnetycznym: wykonalna metoda leczenia w modelu mysiego mięsaka prążkowanokomórkowego

Obecny protokół opisuje generowanie modeli hodowli 3D guzów z pierwotnych komórek nowotworowych i ocenę ich wrażliwości na leki za pomocą testów żywotności komórek i badań mikroskopowych.

Ustalanie trójwymiarowych sferoid na podstawie próbek guza pochodzących od pacjentów i ocena ich wrażliwości na leki

Poznaj metodę izolacji pierwotnych komórek mięsaka prążkowanokomórkowego myszy, formowania tumorsfer oraz ich leczenia i przeszczepu allogenicznego. Ta technika umożliwia badanie pochodzenia komórek nowotworowych i przesiewanie leków.

Wyprowadzanie i leczenie guza z pierwotnych komórek nowotworowych wyizolowanych z mięsaków prążkowanokomórkowych myszy

Przeglądaj więcej filmów