Name: Mysi model wycięcia wyrostka robaczkowego przewlekłego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego poprzez precyzyjną lokalizację łaty kątniczej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 s
Description: Poznaj technikę wycięcia wyrostka robaczkowego u myszy w modelu raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita. Ta metoda umożliwia badanie roli wyrostka w patogenezie chorób przewodu pokarmowego.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca jest częściowo wspierana przez Fundusze Badań Podstawowych dla Uniwersytetu Centralnego (G2018KY0302), Fundusz Rozwoju Badań Podstawowych Uniwersytetu Uniwersyteckiego (KT00062), Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (81870380) oraz Nagrodę za Badania Kliniczne Pierwszego Szpitala Stowarzyszonego Uniwersytetu Xi'an Jiaotong w Chinach (NO. XJTU1AF-CRF-2015-029). Autorzy dziękują dr Chengxin Shi za jego sugestie techniczne podczas wczesnej fazy eksploracji mysiego modelu wycięcia wyrostka robaczkowego, a także patologowi dr Xi Liu za ocenę wyników barwienia H&E zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego. Y.L. przeprowadził demonstrację operacji, przeprowadził analizę danych i napisał szkic rękopisu; J.L., G.L., Z.P. i Y.M. brali udział w przygotowaniu chirurgicznym, pobieraniu tkanek i produkcji wideo; M.Z. wykonał cytometrię przepływową i test ELISA; Q.W. i H.X. zapewnili wsparcie techniczne w zakresie wygenerowania klinicznie istotnego modelu mysiego; R.X.Z. zaprojektował badanie, nadzorował badania oraz napisał i sprawdził manuskrypt; J.S. zrecenzował rękopis.

Wszystkie procedury dla zwierząt zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu Xi'an Jiaotong (No. XJTULAC2019-1023).
1. Wycięcie wyrostka robaczkowego u myszy
<ol>
	<li>Trzymaj 8-10-tygodniowe samce myszy C57BL/6 w certyfikowanym środowisku wolnym od specyficznych patogenów (SPF) przez 1 tydzień przed operacją.</li>
	<li>Przygotuj następujące sterylne narzędzia chirurgiczne: jedną parę mikronożyczek, jedną parę mikrokleszczyków, dwa rozmiary (4-0 i 8-0) wysterylizowanych niewchłanialnych szwów, elektryczny długopis do krzepnięcia z uchwytem na igłę, 75% alkohol medyczny, peeling na bazie jodu (np. entoidyna) oraz opakowanie sterylnych wacików bawełnianych.</li>
	<li>Napełnij strzykawkę o pojemności 10 ml wstępnie podgrzaną solą fizjologiczną o stężeniu 0,9%, aby przepłukać jamę brzuszną i nawodnić ją podczas operacji.</li>
	<li>Znieczulić mysz na czczo dootrzewnowo (i.p.) 1% pentobarbitalem sodu w dawce 100 mg/kg. Sprawdź głębokość znieczulenia przez brak reakcji na odruchy pedałowania. 
	UWAGA: Pojedyncza dawka środka znieczulającego jest podawana w celu zapewnienia pełnego działania uspokajającego u myszy. W przypadku krótkich zabiegów wystarczające może być 50 mg/kg pentobarbitalu sodu.</li>
	<li>Delikatnie ogol włosy na brzuchu golarką elektryczną.</li>
	<li>Połóż mysz na poduszce grzewczej, aby zapobiec hipotermii.</li>
	<li>Zamocuj mysz na platformie w pozycji leżącej, umieszczając cztery paski medycznej taśmy klejącej w poprzek kończyn, aby zapobiec ruchom posturalnym podczas operacji.</li>
	<li>Delikatnie dotknij całego brzucha, aby poczuć guz. 
	UWAGA: W większości przypadków uczucie guza zawsze wskazuje na dokładne położenie kątnicy. Aby uniknąć możliwego uszkodzenia reszty jelita, ważne jest wstępne zlokalizowanie kątnicy przed nacięciem brzucha.</li>
	<li>Przykryj sterylną serwetą i zdezynfekuj ogolony obszar brzucha, nakładając naprzemiennie peelingi chirurgiczne z roztworu jodu i 75% alkoholu. Powtórz proces 2x.</li>
	<li>Wykonaj podłużne nacięcie w zakresie od 0,5 do 1,0 cm na linii środkowej brzucha.</li>
	<li>Zgodnie z wcześniej ustaloną lokalizacją kątnicy, dotrzyj do kątnicy i delikatnie zewnętrznij (~1 cm), aby zidentyfikować plamę kątnicy. Użyj sterylnego, wstępnie podgrzanego roztworu soli fizjologicznej o fizjologicznym pH, aby nawodnić jelito. 
	UWAGA: Łata kątnicy myszy jest częścią kątnicy i charakteryzuje się obecnością białych jajowatych mieszków włosowych na powierzchni.</li>
	<li>Aby zapobiec potencjalnym powikłaniom krwawienia pooperacyjnego i infekcji, należy podwiązać krezkowe naczynia krwionośne kątnicy za pomocą 8-0 szew. Uwodnić kątnicę sterylnym roztworem soli fizjologicznej.</li>
	<li>Zaznacz obszar resekcji za pomocą szwu 4-0 z otwartą pętlą w pobliżu wierzchołka kątnicy na bliższej części okrężnicy. 
	UWAGA: Oznaczenie kątnicy otwartą pętlą zapobiega również wyciekaniu treści kątnicy z nacięcia.</li>
	<li>Odetnij plaster kątnicy poniżej zaznaczonej resekcji za pomocą mikronożyczek i zetrzyj pozostałą zawartość kątnicy wacikami medycznymi. Następnie zdezynfekuj kikut kątnicy peelingiem na bazie jodu.</li>
	<li>Zamknij kikut za pomocą szwu biegnącego za pomocą 8-0 szew.</li>
	<li>Ostrożnie usuń pętlę z gwintem 4-0, która wcześniej służyła do oznaczania resekcji na kikutu kątnicy.</li>
	<li>Wysterylizuj zszytą pozycję peelingiem na bazie jodu. Ponownie nawodnić miejsce operowane solą fizjologiczną.</li>
	<li>Zamknij warstwę mięśni szwem biegowym za pomocą 8-0 nić do szwów.</li>
	<li>Zamknij warstwy skóry za pomocą przerywanych szwów z nicią 4-0.</li>
	<li>Zdezynfekuj ranę chirurgiczną 2x peelingiem na bazie jodu, a następnie usuń jod za pomocą 75% alkoholu medycznego.</li>
	<li>Delikatnie odwróć mysz do tyłu, podskórnie (s.c.) wstrzyknij 0,1 mg/kg masy ciała buprenorfiny i 0,4 ml soli fizjologicznej i pozwól myszy spocząć na poduszce grzewczej do czasu powrotu do przytomności.</li>
	<li>Umieść mysz z powrotem w sterylnej klatce i uważnie monitoruj oznaki bólu przez 3 dni po operacji, aby zapewnić powrót do zdrowia. 
	UWAGA: Pooperacyjne zastosowanie 0,05 mg/kg buprenorfiny może być konieczne w celu złagodzenia bólu u pojedynczej myszy. Pozwól myszom dojść do siebie przez 7 dni po operacji w celu dalszej indukcji raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego.</li>
</ol>
2. Indukcja przewlekłego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego za pomocą AOM i DSS
UWAGA: Wykonaj tę procedurę 7 dni po wycięciu wyrostka robaczkowego.
<ol>
	<li>Przygotować roztwór podstawowy AOM, rozpuszczając 25 mg AOM w 2,5 ml 0,9% sterylnego roztworu soli fizjologicznej o stężeniu 10 mg/ml. 
	UWAGA: AOM jest wrażliwy na światło.
	<ol>
		<li>Porcję 2,5 ml przygotowanego roztworu podstawowego AOM rozlać do 5 ml szklanych probówek owiniętych folią aluminiową i przechowywać w temperaturze -20 °C za każdym razem po użyciu.</li>
		<li>Rozmrozić jedną porcję AOM i rozcieńczyć ją do stężenia 1 mg/ml 0,9% sterylnym roztworem soli fizjologicznej (w stosunku 1:10). 
		UWAGA: OZUŚ jest wyjątkowo rakotwórczy; W związku z tym całą procedurę przygotowania należy wykonać w dygestorium.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Rozpuścić 4 g proszku DSS w 200 ml autoklawowanej wody, aby przygotować 2% (m/v) roztwór DSS. 
	UWAGA: Stężenie DSS może się różnić w zależności od szczepu myszy, płci i cyklu indukcji; 3% DSS może być stosowany w przypadku innych szczepów myszy.</li>
	<li>Jednocześnie należy podać myszom świeżo przygotowany AOM/DSS. Aby to zrobić, wykonaj poniższe czynności.
	<ol>
		<li>Wstrzyknąć dootrzewnowo 0,01 ml/g świeżo przygotowanego roztworu roboczego AOM dla każdej myszy i zastąpić autoklawowaną wodę 2% roztworem DSS na 5 dni ad libitum. 
		UWAGA: W każdej klatce znajduje się pięć myszy; regularnie sprawdzaj butelkę do picia DSS, aby upewnić się, że w okresie leczenia nie dochodzi do wytrącania się.</li>
		<li>Waż i uważnie monitoruj każdą mysz każdego dnia. 
		UWAGA: Podczas podawania należy poddać eutanazji myszy z utratą masy ciała do 20% w porównaniu z ich początkową wagą lub objawami skulenia, zeza, hipotermii i słabej aktywności.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zapewnij świeżą butelkę autoklawowanej wody w 6 dniu po podaniu AOM/DSS do 21 dnia (<silna klasa="xfig">Rysunek 1B). 
	UWAGA: Jest to jeden pełny cykl składający się z 21 dni.</li>
	<li>Powtórz kroki 2.3–2.4 przez dodatkowe dwa cykle i poświęć myszy w 70 dniu.</li>
</ol>
3. Ocena stanu zapalnego i guza jelita grubego (70 dni po podaniu AOM)
<ol>
	<li>Złożyć ofiary myszy przez wdychanie CO2 z szybkością napełnienia 10% w komorze eutanazji, a następnie zwichnięcie szyjki macicy.</li>
	<li>Zbierz całą okrężnicę od góry połączenia krętniczo-kolkowego z odbytem.</li>
	<li>Odsłoń stronę światła, otwierając okrężnicę wzdłużnie. Pokrój całą okrężnicę na kawałki o długości 10 cm i utrwal tkankę okrężnicy w 10% formalinie przez 72 godziny w celu barwienia hematoksyliną i eozyną (H&E).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Mysi model wycięcia wyrostka robaczkowego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego uzyskano przy użyciu kroków chirurgicznych o wysokim wskaźniku przeżycia u myszy. W większości przypadków, ponieważ kątnica znajdowała się pod ścianą brzucha (tabela uzupełniająca 1, tabela uzupełniająca 2 i ryc. 2), trudno było przewidzieć jego lokalizację bez laparotomii. W tym protokole chirurgicznym wprowadzono łatwy krok dotykania guzka, a także przedstawiono ilościową o...

Kliniczne wycięcie wyrostka robaczkowego to standardowa procedura chirurgiczna polegająca na usunięciu wyrostka robaczkowego, głównie z powodu stanu zapalnego (np. zapalenia wyrostka robaczkowego)1,2,3. Jednak biologiczna funkcja ludzkiego wyrostka robaczkowego pozostaje kontrowersyjna4,5,6. Wyrostek robaczkowy został uznany za szczątkową pozostałość wystającą z jelita ślepego w jelicie grubym. Do niedawna badania ewolucyjne, immunologiczne, morfologiczne i mikrobiologiczne sugerowały, że wyrostek robaczkowy może pełnić różne funkcje. Role te obejmują produkcję immunoglobin (np. IgA i IgG), różnych limfocytów B i limfocytów T krytycznych dla adaptacyjnych odpowiedzi immunologicznych w tkankach limfoidalnych związanych z jelitami (GALT) oraz uzupełnianie jelita grubego mikrobiotami komensalnymi6,7,8,9,10,11,12.
Kliniczne badania epidemiologiczne pacjentów z wcześniejszą operacją wyrostka robaczkowego lub ostrym zapaleniem wyrostka robaczkowego również ujawniły jego potencjalne role w patogenezie chorób ludzkich, takich jak nieswoiste zapalenie jelit (IBD), rak jelita grubego i zaburzenia pozażołądkowo-jelitowe (np. choroba Parkinsona i choroby układu krążenia)13,14,15,16,17,18. Na przykład duże badanie kohortowe populacji azjatyckiej z udziałem 75 979 pacjentów po wycięciu wyrostka robaczkowego wykazało istotny związek między wycięciem wyrostka robaczkowego a późniejszym rozwojem raka jelita grubego, jednego z najczęstszych nowotworów złośliwych o wysokiej częstości występowania i śmiertelności14,19. W związku z tym ustalenie odpowiedniego modelu wyrostka robaczkowego u zwierząt, który przypomina człowieka, będzie pomocne w badaniu funkcji biologicznych i mechanizmów molekularnych wyrostka robaczkowego w patogenezie choroby.
Wiele ssaków posiada wyrostek robaczkowy lub organ podobny do wyrostka robaczkowego, w tym naczelne, zajęczaki (np. króliki), niektóre gryzonie i torbacze20. Dla małych i powszechnie używanych zwierząt laboratoryjnych królik posiada robakowaty wyrostek robaczkowy morfologicznie przypominający human21,22, ale GALT u królika jest niezwykle duży w porównaniu do tego u ludzi, ponieważ większość tkanek limfatycznych znajduje się również w łatach Peyera znajdujących się zarówno w jelicie cienkim, jak i grubym21. Dodatkowo królik wykazuje inną strukturę pęcherzyków limfatycznych, rozmieszczenie limfocytów T i gęstość immunoglobulin niż człowiek, co sprawia, że badanie ich wyrostków robaczkowych jest niewłaściwe21.
Myszy są najczęściej używanym modelem zwierzęcym do badania patofizjologii człowieka i testowania różnych istniejących i nowatorskich terapii23,24,25. Uważa się, że pojedyncze białe, duże skupisko limfoidalne na wierzchołku kątnicy u myszy, znane jako łata kątnicy, pełni funkcje podobne do ludzkiego wyrostka robaczkowego26,27,28. Jednak oddzielenie łaty kątnicy od kątnicy u myszy jest praktycznie trudne. Do tej pory powszechne procedury chirurgiczne wywoływania zapalenia wyrostka robaczkowego w modelu mysim obejmują stosunkowo duże nacięcie (np. 1–2 cm) przez ścianę brzucha w celu uzyskania dostępu do całej kątnicy (Tabela uzupełniająca 1)29,30,31,32,33,34,35,36.
Tutaj, aby wygenerować model wycięcia wyrostka robaczkowego związany z chorobą przewodu pokarmowego, ten raport przedstawia łatwy protokół chirurgiczny do usuwania łaty kątniczej u myszy. Następnie podaje się w skojarzeniu czynnik genotoksyczny AOM i środek prozapalny DSS w celu indukcji raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego, podobnego do obserwowanego u ludzi. Wykazano, że IBD jest czynnikiem ryzyka raka jelita grubego37,38. Kombinacja przewlekłego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego wywołanego przez AOM/DSS jest dobrze znana, a czytelnicy mogą zapoznać się z Neufert et al. oraz Thaker et al. w celu uzyskania szczegółowych procedur39,40. Ten powtarzalny i szybki model mysiego wycięcia wyrostka robaczkowego może być wykorzystany do badania zapalenia jelit i mikrobioty jelita grubego modulowanego przez wyrostek robaczkowy, zwłaszcza w rozwoju i progresji IBD i raka jelita grubego.

<table><tbody><tr><td>Azoksymetan(AOM)</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>A5486</td><td></td></tr><tr><td>Sól sodowa siarczanu dekstranu (DSS)</td> <td>MP Biomedicals, Inc.</td><td>160110</td><td></td></tr><tr><td>Entoiodine</td><td>Shanghai likon high technology dezynfekcja co. LTD</td><td>310102</td><td></td></tr><tr><td>suwmiarka cyfrowa</td><td>Ningbo yuanneng trading co., LTD</td><td>4859263</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Jedwabne szwy</td><td>Yuanlikang co., LTD</td><td>20172650032</td><td></td></tr><tr><td>8-0 Szwy prolenowe</td><td>Yuanlikang co. LTD</td><td>20172650032</td><td></td></tr><tr><td>Elektryczny długopis do koagulacji</td><td>Chuang mei medical equipment co., LTD</td><td>28221777292</td><td></td></tr><tr><td>jednorazowa strzykawka 1 ml</td><td>Shengguang medical products co., LTD</td><td>3262-2014</td><td></td></tr><tr><td>jednorazowa strzykawka 10 ml</td><td>Shengguang medical products co., LTD</td><td>3262-2014</td><td></td></tr><tr><td>75% alkoholu medycznego</td><td>Shandong anjie high-tech technologia dezynfekcji co., LTD</td><td>371402AAJ008</td><td></td></tr><tr><td>Sól</td> <td>sodowa pentobarbitaluSigma-Aldrich, Inc.</td><td>57-33-0</td><td></td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna</td><td>Shandong qidu pharmaceutical co. LTD</td><td>H37020766</td><td></td></tr><tr><td>Chłonny wacik bawełniany</td><td>Henan ruike medical co., LTD</td><td>RK051</td><td></td></tr><tr><td>Instrumenty chirurgiczne - okulistyczne</td><td>Jinzhong Shanghai co. Sp. z o.o</td><td>. WA3050</td><td></td></tr></tbody></table>

mysi model wycięcia wyrostka robaczkowego przewlekłego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego poprzez precyzyjną lokalizację łaty kątniczej

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

Ostatnio zaintrygowano ludzki wyrostek robaczkowy jako ważny biologiczny czynnik odgrywający ważną biologiczną rolę w patogenezie różnych złożonych chorób, takich jak rak jelita grubego, nieswoiste zapalenie jelit i choroba Parkinsona. Aby zbadać funkcję wyrostka robaczkowego, ustalono model wycięcia wyrostka robaczkowego związanego z chorobą jelit, a jego protokół krok po kroku opisano tutaj. Niniejszy raport przedstawia łatwy protokół usuwania łaty ślepej u myszy, a następnie chemicznej indukcji przewlekłego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego przy użyciu kombinacji siarczanu dekstranu sodu (DSS) i azoksymetanu (AOM). Komórki specyficzne dla IgA i stężenie IgA uległy znacznemu zmniejszeniu po usunięciu łaty kątniczej u samców myszy C57BL / 6 w porównaniu z tymi w grupie pozorowanej. Jednoczesne podanie 2% DSS i AOM spowodowało przeżycie prawie 80% myszy zarówno w grupie pozorowanej, jak i wyrostka robaczkowego bez znaczącej utraty masy ciała. Wyniki histologiczne potwierdziły stan zapalny jelita grubego i gruczolakorak różnego stopnia. Model ten może być wykorzystany do badania funkcjonalnej roli wyrostka robaczkowego w utrzymaniu homeostazy i patogenezy mikrobioty jelitowej oraz patogenezy zapalenia jelita grubego i nowotworów złośliwych, a także do potencjalnego rozwoju terapii ukierunkowanych na leki.

Ustanowienie mysiego modelu appendektomii
Ten mysi model appendektomii w raku jelita grubego związanym z przewlekłym zapaleniem jelita grubego można stworzyć, postępując zgodnie z sekwencyjnymi krokami chirurgicznymi i indukcyjnymi przedstawionymi na Rysunku 1. Najczęstsze położenie kątnicy występuje w lewym i prawym dole biodrowym, a następnie w linii środkowej brzucha (Rysunek 2). Skuteczność wstępnej lokalizacji ką...

Prezentowany protokół opisuje łatwe chirurgiczne usunięcie wyrostka robaczkowego (łaty kątniczej) u myszy, a następnie indukcję raka jelita grubego związanego z chorobą jelit grubego. Ten mysi model wyrostka robaczkowego umożliwia badanie biologicznej roli wyrostka robaczkowego w patogenezie chorób przewodu pokarmowego u ludzi.

Mysi model wycięcia wyrostka robaczkowego przewlekłego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego poprzez precyzyjną lokalizację łaty kątniczej

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

Ogólny protokół opisuje łatwe do wykonania zabiegi chirurgiczne polegające na usunięciu wyrostka robaczkowego znanego jako plaster kątniczy u myszy. Mysi model wyrostka robaczkowego może być wykorzystany do badania biologicznych ról wyrostka robaczkowego w patogenezie choroby przewodu pokarmowego człowieka. Wyrostek robaczkowy człowieka jest narządem spornym.Ostatnie badania sugerują, że wyrostek robaczkowy odgrywa ważną rolę w utrzymaniu zdrowia jelit. Aby zbadać biologiczną funkcję wyrostka robaczkowego, kluczowe znaczenie ma wygenerowanie modelu zwierzęcego związanego z wycięciem wyrostka robaczkowego związanego z chorobą. W tym protokole opiszemy prosty i bezpieczny etap chirurgiczny usuwania wyrostka robaczkowego, znany jako plaster kątniczy u myszy.Aby zapewnić sukces tego modelu, należy wykonać trzy kluczowe kroki, jak zobaczysz w poniższym filmie. Najpierw zlokalizuj kątnicę myszy przed operacją. Po drugie, wykonaj małe nacięcie w jamie brzusznej.Po trzecie, zdezynfekuj i zamknij kikut kątnicy. Pierwsza część, wycięcie wyrostka robaczkowego myszy. Przed zabiegiem należy przygotować sterylne narzędzia chirurgiczne i roztwory czyszczące.Znieczulij i zabezpiecz mysz na platformie w pozycji leżącej, umieszczając cztery paski medycznej taśmy klejącej w poprzek kończyn, aby zapobiec ruchom posturalnym podczas operacji. Delikatnie dotknij całego brzucha myszy, aby poczuć guz. Przykryj serwetkę i zdezynfekuj ogolony obszar brzucha myszy tak szeroko, jak to możliwe, używając dwóch razy entojodu.Wykonaj podłużne nacięcie w zakresie od 0,5 centymetra do jednego centymetra na linii środkowej brzucha. Zgodnie z wcześniej ustalonym położeniem kątnicy, poszukaj kątnicy i delikatnie wyeksterioryzuj ją na około jeden centymetr długości, aby zidentyfikować plamę kątnicy. Użyj wstępnie podgrzanej i sterylnej soli fizjologicznej, aby nawodnić jelito.Aby zapobiec potencjalnym powikłaniom krwawienia pooperacyjnego i infekcji, należy podwiązać krezkowe naczynia krwionośne kątnicy za pomocą 8-0 szew. Uwodnić kątnicę solą fizjologiczną. Zaznacz obszar resekcji za pomocą szwu 4-0 z otwartą pętlą w pobliżu wierzchołka kątnicy na bliższej części okrężnicy.Odetnij plaster kątnicy poniżej zaznaczonej resekcji za pomocą mikronożyczek i zetrzyj pozostałą zawartość kątnicy wacikami medycznymi. Zdezynfekuj kikut kątnicy entojodyną. Zamknij kikut szwem biegnącym za pomocą 8-0 szew.Ostrożnie usuń pętlę z gwintem 4-0, wcześniej używaną do oznaczania resekcji na kikutu kątnicy. Wysterylizuj zszytą pozycję za pomocą entoilu. Ponownie nawodnić obszar cięcia solą fizjologiczną.Zamknij warstwę mięśni szwem biegowym za pomocą 8-0 nić do szwów. Zamknij warstwy skóry za pomocą przerywanych szwów z nicią 4-0. Dwukrotnie zdezynfekuj cięcie chirurgiczne entojodem.Następnie usuń jod za pomocą 75% alkoholu medycznego. Delikatnie odwróć mysz do tyłu. Podskórnie wstrzyknąć 0,1 miligrama na kilogram masy ciała buprenorfiny i 0,4 mililitra soli fizjologicznej.I oprzyj mysz na poduszce grzewczej, aż odzyska przytomność. Umieść mysz z powrotem w sterylnej klatce i uważnie monitoruj mysz pod kątem oznak bólu przez trzy dni po operacji, aby zapewnić jej powrót do zdrowia. Część druga: Indukcja raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego za pomocą azoksymetanu, AOM i siarczanu sodu dekstranu, DSS, siedem dni po wycięciu wyrostka robaczkowego.Rozmrozić jedną porcję AOM i rozcieńczyć ją do 1 miligrama na mililitr przy użyciu 0,9% soli fizjologicznej. Cały proces przygotowania odbywa się w dygestorium. Rozpuść cztery gramy proszku DSS w 200 mililitrach autoklawizowanego roztworu wodnego, aby przygotować 2% DSS.W każdej klatce znajduje się pięć myszy. Wykonaj dootrzewnowe wstrzyknięcie OZUŚ w ilości 0,01 mililitra na gram na mysz w zależności od jej wagi. Zastąp wodę w autoklawie 2% DSS na pięć dni.Myszy będą karmione wodą w autoklawie przez dodatkowe dwa cykle. Część trzecia: Wyniki. Wyniki przepływu i testu ELISA wskazują na pomyślne usunięcie łaty kątniczej.Procedura ta może przyczynić się do znacznego zmniejszenia liczby komórek plazmatycznych swoistych dla IgA, oczywistej zmiany wydzielniczej IgA w jelicie grubym, w porównaniu do 3% DSS, który ma wysoką śmiertelność i znaczną zmianę masy ciała z powodu ciężkiego krwawego stolca, wypadania odbytu i ropnia brzucha. 2% DSS jest odpowiedni dla całego procesu ze względu na wysoki wskaźnik przeżycia do prawie 80% i rozsądną zmianę masy ciała zarówno w grupach pozorowanych, jak i po wycięciu wyrostka robaczkowego. Jak pokazano na tych obrazach, udało nam się wywołać guzy jelita grubego związane z zapaleniem jelita grubego.Na obrazach barwienia H&E strzałka oznacza owrzodzenie błony śluzowej, grot strzałki oznacza gruczolakoraka, a biała strzałka oznacza naciek neutrofili między gruczołami. Różne stadia gruczolakoraka można zaobserwować zarówno w grupach pozorowanych, jak i wyciętych wyrostka robaczkowego. Ten ekonomiczny model wycięcia wyrostka robaczkowego u myszy może być wykorzystany do udzielenia odpowiedzi na kilka ważnych pytań, takich jak: jaka jest rola wyrostka robaczkowego w regulacji bakterii jelitowych i jak uczestniczy w odpowiedzi immunologicznej w tkance limfatycznej związanej z jelitami.Pamiętaj, że aby uniknąć uszkodzenia zrostu jelita, ważne jest wstępne położenie kątnicy i małe nacięcie skóry. Ponadto użyliśmy 2%DSS do wywołania zapalenia jelita grubego. Ale wyższe stężenie DSS może być stosowane w przypadku innych szczepów myszy.

murine-appendectomy-model-chronic-colitis-associated-colorectal

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przedstawiamy protokół, w którym podanie genotoksycznego czynnika azoksymetanu (AOM), a następnie trzy cykle podania prozapalnego dekstranu siarczanu sodu (DSS), pozwala na szybkie i powtarzalne wywołanie guzów okrężnicy u myszy, wykazujących podobieństwa morfologiczne i molekularne do nowotworów związanych z zapaleniem jelita grubego u ludzi.

Modelowanie raka związanego z zapaleniem jelita grubego z wykorzystaniem azoksymetanu (AOM) i dekstranu siarczanowego sodu (DSS)

W tym filmie opisujemy procedurę chirurgiczną polegającą na generowaniu pętli proksymalnej okrężnicy myszy lub segmentu pcLoop, po której następuje doświetlna iniekcja markerów fluorescencyjnych do segmentu w celu zbadania przepuszczalności nabłonka jelitowego.

Generowanie mysiego modelu pętli proksymalnej jelita grubego: procedura chirurgiczna mająca na celu wygenerowanie pętli proksymalnej jelita grubego i pomiar przepuszczalności jelit poprzez wykrycie markerów fluorescencyjnych w surowicy po wstrzyknięciu doświetlnym

W ciągu ostatnich kilku lat, endoskopy nowej generacji stały się ważnymi diagnostycznymi pomocami badawczymi do oceny mysiego zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego. Przedstawiamy tutaj szczegółowy protokół endoskopowej oceny stanu zapalnego i guzów jelita grubego u myszy, a także nowatorski system punktacji, który wykorzystuje identyfikatory dziesiętne do dokumentowania endoskopowego nasilenia zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego.

Elastyczna kolonoskopia u myszy w celu oceny ciężkości zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego przy użyciu zwalidowanego systemu punktacji endoskopowej

Techniki obrazowania małych zwierząt pozwalają na seryjne badania diagnostyczne i interwencje terapeutyczne in vivo. W ostatnim czasie zakres zastosowań znacznie się poszerzył i obecnie obejmuje ocenę rozwoju guza jelita grubego, gojenie się ran oraz monitorowanie stanu zapalnego. Protokół ten ilustruje te różnorodne potencjalne zastosowania endoskopii mysiej skóry.

Endoskopia mysia do multimodalnego obrazowania in vivo kancerogenezy i oceny gojenia się ran jelitowych i stanów zapalnych

Resekcja jelitowo-kolkowa jest powszechnie wykonywana w wielu chorobach ludzkich; jednak niewiele wiadomo na temat wpływu resekcji jelita na choroby chirurgiczne. Niniejszy artykuł zawiera instrukcje dotyczące wykonywania zabiegu na myszach z dużym powodzeniem, zapewniając środki do badania skutków resekcji krętniczo-okrężnicy w modelach choroby.

Mysia resekcja jelita krętniczo-okrężniczego z zespoleniem pierwotnym

Opisujemy metody długotrwałego monitorowania skuteczności terapii w leczeniu patologii jelita grubego u myszy za pomocą sztywnego endoskopu. Protokół ten może być z łatwością wykorzystany do scharakteryzowania odpowiedzi terapeutycznej pojedynczego guza u żywych myszy, a także do monitorowania potencjalnego nawrotu choroby.

Nieinwazyjna ocena skuteczności nowych terapii patologii jelitowych za pomocą seryjnego obrazowania endoskopowego żywych myszy

Przedstawiono protokół tworzenia genetycznie modyfikowanego mysiego modelu raka jelita grubego poprzez segmentowe zakażenie adeno-cre i jego nadzorowanie za pomocą kolonoskopii o wysokiej rozdzielczości.

Genetycznie zmodyfikowany mysi model sporadycznego raka jelita grubego

Mysia kolostomia dystalna, nowy model dywersyjnego zapalenia jelita grubego u myszy C57BL / 6

Nieszczelność zespolenia lub awaria po operacji jest główną przyczyną zachorowalności i śmiertelności pooperacyjnej. Nasz zabieg chirurgiczny do tworzenia zespolenia jelita grubego jest wiarygodną i powtarzalną metodą badania mechanizmów gojenia się zespoleń.

Tworzenie zespolenia okrężnicy u myszy

Ten protokół dostarcza mysi model wrzodziejącego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego wywołanego przez azmetan w połączeniu z siarczanem dekstranu sodu. Model został wykorzystany do oceny skuteczności związków tradycyjnej medycyny chińskiej w profilaktyce i leczeniu raka jelita grubego.

Opracowanie modelu raka jelita grubego u myszy i ocena efektu terapeutycznego medycyny chińskiej

Ten protokół opisuje metodę tworzenia szczurzego modelu zapalenia torebki. Model worka jelita krętego powstał poprzez wykonanie operacji zespolenia jelita krętego z odbytem (IPAA) z wykorzystaniem technik mikrochirurgicznych. Po operacji szczur był leczony 4% siarczanem dekstranu sodu (DSS) przez 4 dni.

Szczurzy model zapalenia torebki po proktokolektomii i zespoleniu jelita krętego z odbytem przy użyciu siarczanu dekstranu sodu

Poznaj technikę wycięcia wyrostka robaczkowego u myszy w modelu raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita. Ta metoda umożliwia badanie roli wyrostka w patogenezie chorób przewodu pokarmowego.

Mysi model wycięcia wyrostka robaczkowego przewlekłego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego poprzez precyzyjną lokalizację łaty kątniczej (Wideo) | JoVE Journal

Mysi model wycięcia wyrostka robaczkowego przewlekłego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego poprzez precyzyjną lokalizację łaty kątniczej

Przeglądaj więcej filmów