Name: Ocena zachowań seksualnych samców myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-05T12:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 38 s
Description: Poznaj metodę oceny zachowań seksualnych samców myszy w modelu behawioralnym. Technika obejmuje indukcję rui u samic i rejestrację aktywności w otwartym polu, umożliwiając analizę wzorców behawioralnych w badaniach neurobiologicznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dziękujemy Lu Cong, Zhang Hongxia, Zhang Beiyue i Hu Mi za ich sugestie dotyczące eksperymentów.

Wszystkie eksperymenty zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi Zasad Opieki nad Zwierzętami Laboratoryjnymi (Publikacja NIH nr 80-23, poprawiona w 1996 roku) oraz za zgodą i nadzorem Akademii Zwierząt Doświadczalnych Instytutu Rozwoju Roślin Leczniczych (Chiny).
1. Hodowla zwierząt
<ol>
	<li>Trzymanie samic i samców myszy w temperaturze 25 °C przez 12 godzin światła/12 godzin ciemności.</li>
	<li>Zapewnij swobodny dostęp do wody i standardową dietę granulowaną.</li>
	<li>Pozwól myszom zaaklimatyzować się w środowisku przez 7 dni przed operacją, jeśli są transportowane z innego obiektu.</li>
</ol>
2. Owariektomia u samic myszy
<ol>
	<li>Znieczulić samicę (8 tygodni po porodzie, nie mniej niż 6 tygodni) izofluranem (~4−5% do indukcji, ~1−2% do konserwacji) w 100% tlenu za pomocą maski stożkowej na twarz.</li>
	<li>Sprawdź, czy osiągnięto odpowiednią głębokość znieczulenia, upewniając się, że przez ponad 30 s nie ma żadnych ruchów dobrowolnych, w połączeniu z odpowiednią częstością oddechów (np. 1 oddech na 2 s lub dłużej). Alternatywnie, przetestuj reakcję myszy na delikatny nacisk na palce tylnych łap. 
	UWAGA: Normalna częstość oddechów wynosi ~180/min. Spadek szybkości o 50% jest dopuszczalny podczas znieczulenia17.
	<ol>
		<li>Używaj maści okulistycznej, aby zapobiec wysuszeniu rogówki i urazom oka podczas znieczulenia.</li>
		<li>Utrzymuj temperaturę ciała myszy na poziomie lub wyższym niż 36 °C. W razie potrzeby zapewnij dodatkowe wsparcie cieplne w okresie znieczulenia.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przed użyciem wysterylizuj i zdezynfekuj wszystkie narzędzia chirurgiczne i twarde powierzchnie stołu operacyjnego za pomocą 75% etanolu.</li>
	<li>Umieść zwierzę na sterylnej zasłonie.</li>
	<li>Ogol futro obustronnie nad kręgosłupem lędźwiowym na grzbiecie myszy, aby odsłonić skórę.</li>
	<li>Wysterylizuj odsłoniętą skórę 75% etanolem.</li>
	<li>Wykonaj pojedyncze nacięcie w linii środkowej (około 0,5 cm długości) na grzbiecie od środka dwóch nasady ud w kierunku głowy w odległości ~1 cm (pozycja jest pokazana w <silna klasa="xfig">Rysunek 1).</li>
	<li>Użyj małych nożyczek, aby wniknąć w skórę, aby delikatnie uwolnić tkankę podskórną z leżącego poniżej mięśnia w celu odsłonięcia warstwy mięśniowej.</li>
	<li>Zlokalizuj jajnik pod cienką warstwą mięśniową i wykonaj małe nacięcie (o długości około 5 mm), aby uzyskać dostęp do jamy otrzewnej.
	<ol>
		<li>Użyj małej pęsety, aby lekko pociągnąć tkankę po lewej stronie jamy brzusznej, aby pokazać jajnik lewej ręki owijający się wokół białej tkanki tłuszczowej (półprzezroczysta, nieregularna masa widoczna gołym okiem, patrz <silna klasa="xfig">Ryc. 1).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Cofnij poduszeczkę tłuszczową jajnika otaczającą jajnik kleszczami, aby odsłonić jajowód.</li>
	<li>Wykonaj pojedynczą ligaturę wokół jajowodu, aby zapobiec krwawieniu.</li>
	<li>Użyj małych nożyczek, aby delikatnie odciąć jajowód i usunąć jajnik.</li>
	<li>Sprawdź dokładnie jajowód, aby upewnić się, że wszystkie tkanki jajnika zostały usunięte. Jajnik ma około 5 mm × 4 mm × 3 mm z nieregularnymi guzkami na powierzchni.</li>
	<li>Umieść pozostałą część jajowodu z powrotem w jamie brzusznej.</li>
	<li>Zszyj warstwę mięśniową szwami wchłanialnymi.</li>
	<li>Pociągnij skórę w prawą stronę, aby odsłonić warstwę mięśniową po prawej stronie i usuń prawy jajnik, powtarzając kroki 2.9–2.16.</li>
	<li>Zamknij nacięcie skóry za pomocą wchłanialnych szwów.
	<ol>
		<li>Wstrzyknąć każdej myszy dootrzewnowo sól sodową penicyliny (10 000 jednostek/10 g na mysz), aby zapobiec infekcji.</li>
		<li>Lidokainę należy wstrzyknąć (4 mg/kg, 0,4 ml/kg 1% roztworu) pod skórę w miejscu nacięcia. Podawaj również ibuprofen (50-60 mg/kg/dzień; 10 ml Children's Motrin w 500 ml wody) w sposób ciągły w wodzie do picia przez 3 dni w celu leczenia bólu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Umieść każdą mysz w wysterylizowanej klatce indywidualnie.</li>
	<li>Trzymać pod ścisłą obserwacją przez około 1-2 godziny, aż do całkowitego wyzdrowienia ze znieczulenia.
	<ol>
		<li>Odzyskuj zwierzęta na ręcznikach papierowych w czystej klatce bez ściółki. Ten krok minimalizuje ryzyko niedrożności tchawicy lub zapalenia płuc. Zapewnij dodatkowe wsparcie cieplne podczas rekonwalescencji anestezjologicznej. Monitoruj miejsce operacji, aby zapobiec pęknięciu rany.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Po okresie rekonwalescencji (około 24 godziny po zabiegu) umieść myszy z powrotem w ich klatce domowej.</li>
	<li>Nie należy wykonywać eksperymentu przez co najmniej 2 tygodnie po zabiegu.</li>
</ol>
3. Ruja wywołana hormonami u kobiet
<ol>
	<li>Określ stadium rujowe samic, wykonując wymaz z pochwy zgodnie z opisem w McLean et al.18. Brak zmiany cyklu rui wskazuje, że wycięcie jajników u kobiety zakończyło się sukcesem.</li>
	<li>Wstrzyknąć benzoesan estradiolu (20 μg na mysz, rozpuszczony w 0,1 ml wysterylizowanej oliwy z oliwek, dootrzewnowo) 48 godzin przed testem zachowań seksualnych.</li>
	<li>Wstrzyknąć progesteron (500 μg na mysz, rozpuszczony w 0,1 ml oleju, dootrzewnowo) 4 godziny przed testem zachowań seksualnych. 
	UWAGA: Kwalifikacja samicy w rui zależy od tego, czy samica zaakceptuje wprowadzenie narządów płciowych samca myszy 3 lub więcej razy, gdy współżyją one z aktywnym seksualnie i doświadczonym samcem w jednej klatce.</li>
</ol>
4. Przygotowanie do testu zachowań seksualnych
<ol>
	<li>Przeprowadź test zachowań seksualnych samców myszy w prostokątnym i otwartym pudełku polowym (40 cm x 40 cm x 40 cm) ze ściankami z czarnej pleksi, z wyjątkiem przezroczystej przedniej ścianki, która pozwala na obserwację ruchu myszy.</li>
	<li>Ustaw ogólne oświetlenie pomieszczenia na 650 luksów. 
	UWAGA: Myszy nie powinny być oświetlane bezpośrednio, aby uniknąć nieprawidłowych wzorców zachowań.</li>
	<li>Użyj kamery cyfrowej połączonej z komputerem, aby nagrać ruch i zachowanie myszy.</li>
	<li>Wykonaj test behawioralny na samcach myszy w pierwszych godzinach ciemnego cyklu.</li>
</ol>
5. Przyzwyczajenie
<ol>
	<li>Utrzymuj ciszę w pomieszczeniu do eksperymentów.</li>
	<li>Umieść myszy do testowania na środku pudełka na otwartym polu, pozwalając im swobodnie eksplorować otoczenie przez 30 minut.</li>
	<li>Przyzwyczajaj myszy przez 2 kolejne dni przed dniem testu w aparacie, aby zapobiec stresowi spowodowanemu nowym środowiskiem. 
	UWAGA: Myszy powinny swobodnie się poruszać i eksplorować bez odczuwania stresu. Zarówno samce, jak i samice myszy muszą być przyzwyczajone do środowiska testowego.</li>
</ol>
6. Testy behawioralne
<ol>
	<li>Włącz aparat przed rozpoczęciem testu.</li>
	<li>Umieść mysz do testowania na środku otwartego pola w pudełku testowym, umożliwiając swobodną eksplorację przez 5 minut w celu zaaklimatyzowania się w środowisku.</li>
	<li>Umieść samicę w rui w pudełku testowym.</li>
	<li>Rejestruj zachowania społeczne i godowe oraz interakcje między samcami i samicami myszy przez 30 minut.</li>
	<li>Wyłącz kamerę i upewnij się, że wideo zostało zapisane.</li>
	<li>Wyjmij samicę z pudełka testowego i zapisz tworzenie się czopa dopochwowego. 
	UWAGA: Samica myszy, która zaakceptowała krycie, nie może być wykorzystana w innym teście zachowań seksualnych w ciągu jednego dnia.</li>
	<li>Umieść samicę z powrotem w jej klatce domowej.</li>
	<li>Przywróć samca do jego klatki domowej.</li>
	<li>Oczyść mocz, kał i wyściółkę w aparacie.</li>
	<li>Usuń zapach badanych myszy za pomocą 75% etanolu.</li>
	<li>Rozpocznij test następnej myszy płci męskiej, powtarzając kroki 6.1–6.10.</li>
</ol>
7. Ekstrakcja danych behawioralnych
<ol>
	<li>Odtwórz nagranie wideo i wyodrębnij parametry zachowania (patrz <silna klasa="xfig">Rysunek 2).
	<ol>
		<li>Nagraj liczbę montaży w ciągu 30 minut.</li>
		<li>Zapisz liczbę wprowadzeń w ciągu 30 minut. Policz pchnięcie miednicą jako intromisję.</li>
		<li>Zapisz czas od wprowadzenia samicy do pierwszego montażu jako opóźnienie montażu.</li>
		<li>Zapisz czas od wprowadzenia samicy do pierwszej intromisji jako opóźnienie intromisji.</li>
		<li>Zapisz czas od pierwszego wprowadzenia do pierwszego wytrysku jako opóźnienie wytrysku.</li>
		<li>Zapisz czas od wytrysku do następnego montażu jako opóźnienie montażu po wytrysku.</li>
		<li>Rekordowa liczba serii kopulacyjnych w 30 min. Seria kopulacyjna to każda sekwencja od montażu do wytrysku.</li>
		<li>Zapisz czas wszystkich serii kopulacyjnych w ciągu 30 minut jako czas trwania serii kopulacyjnej.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>The staff of the Jackson laboratory. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biology+of+the+Laboratory+Mouse%22">Biology of the Laboratory Mouse</a>. , Second Edition, Dover publications, inc. New York. Chapter 11 (2007).</li>
<li>Burns-Cusato, M., Scordalakes, E. M., Rissman, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice+and+missing+data%3A+what+we+know+%28and+need+to+learn%29+about+male+sexual+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Of mice and missing data: what we know (and need to learn) about male sexual behavior.</a> Physiology & Behavior. 83 (2), 217-232 (2004).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrawley%2C+JN+%22What%27s+Wrong+With+My+Mouse%3F%22">What's Wrong With My Mouse?</a>. , Second Edition, John Wiley & Sons, Inc. (2006).</li>
<li>Whishaw, I. Q., Haun, F., Kolb, B. Analysis of Behavior in Laboratory Rodents. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWhishaw%2C+IQ+%22Modern+Techniques+in+Neuroscience+Research%22">Modern Techniques in Neuroscience Research</a>. Windhorst, U., Johansson, H. , Springer. Berlin, Heidelberg. (1999).</li>
<li>Sachs, B., Barfield, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSachs%2C+B+%22Functional+Analysis+of+Masculine+Copulatory+Behavior+in+the+Rat%22">Functional Analysis of Masculine Copulatory Behavior in the Rat</a>. 7, (1976).</li>
<li>Hull, E. M., Dominguez, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+behavior+in+male+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Hormones+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Sexual behavior in male rodents.</a> Hormones and Behavior. 52 (1), 45-55 (2007).</li>
<li>Mosig, D. W., Dewsbury, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+the+copulatory+behavior+of+house+mice+%28Mus+musculus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Biology%22%5BJournal%5D)">Studies of the copulatory behavior of house mice (Mus musculus).</a> Behavioral Biology. 16 (4), 463-473 (1976).</li>
<li>Park, J. H. Assessment of Male Sexual Behavior in Mice. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPark%2C+JH+%22Mood+and+Anxiety+Related+Phenotypes+in+Mice%22">Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice</a>. Gould, T. 63, Humana Press. (2011).</li>
<li>Bonthuis, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice+and+rats%3A+key+species+variations+in+the+sexual+differentiation+of+brain+and+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Of mice and rats: key species variations in the sexual differentiation of brain and behavior.</a> Frontiers in Neuroendocrinology. 31 (3), 341-358 (2010).</li>
<li>Levine, L., Barsel, G. E., Diakow, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mating+behaviour+of+two+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behavior%22%5BJournal%5D)">Mating behaviour of two inbred strains of mice.</a> Animal Behavior. 14 (1), 1-6 (1966).</li>
<li>McGill, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+Behavior+in+Three+Inbred+Strains+of+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behaviour%22%5BJournal%5D)">Sexual Behavior in Three Inbred Strains of Mice.</a> Behaviour. 19 (4), 341(1962).</li>
<li>James, P. J., Nyby, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testosterone+rapidly+affects+the+expression+of+copulatory+behavior+in+house+mice+%28Mus+musculus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Testosterone rapidly affects the expression of copulatory behavior in house mice (Mus musculus).</a> Physiology & Behavior. 75 (3), 287-294 (2002).</li>
<li>Arteaga-Silva, M., Rodriguez-Dorantes, M., Baig, S., Morales-Montor, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+castration+and+hormone+replacement+on+male+sexual+behavior+and+pattern+of+expression+in+the+brain+of+sex-steroid+receptors+in+BALB%2Fc+AnN+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Biochemistry+and+Physiology+-+Part+A%3A+Molecular+%26+Integrative+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of castration and hormone replacement on male sexual behavior and pattern of expression in the brain of sex-steroid receptors in BALB/c AnN mice.</a> Comparative Biochemistry and Physiology - Part A: Molecular & Integrative Physiology. 147 (3), 607-615 (2007).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+Type+3+Adenylyl+Cyclase+Perturbs+the+Postnatal+Maturation+of+Olfactory+Sensory+Neurons+and+Olfactory+Cilium+Ultrastructure+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Deletion of Type 3 Adenylyl Cyclase Perturbs the Postnatal Maturation of Olfactory Sensory Neurons and Olfactory Cilium Ultrastructure in Mice.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 1(2017).</li>
<li>Mandiyan, V. S., Coats, J. K., Shah, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficits+in+sexual+and+aggressive+behaviors+in+Cnga2+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neurosciemce%22%5BJournal%5D)">Deficits in sexual and aggressive behaviors in Cnga2 mutant mice.</a> Nature Neurosciemce. 8 (12), 1660-1662 (2005).</li>
<li>Choi, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+deletion+of+floxed+genes+mediated+by+CaMKIIalpha-Cre+in+the+brain+and+in+male+germ+cells%3A+application+to+conditional+and+conventional+disruption+of+Goalpha%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+%26+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Simultaneous deletion of floxed genes mediated by CaMKIIalpha-Cre in the brain and in male germ cells: application to conditional and conventional disruption of Goalpha.</a> Experimental & Molecular Medicine. 46, 93(2014).</li>
<li>Pelch, K. E., Sharpe-Timms, K. L., Nagel, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+surgically-induced+endometriosis+by+auto-transplantation+of+uterine+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Mouse model of surgically-induced endometriosis by auto-transplantation of uterine tissue.</a> Journal of Visualized Experiments. (59), e3396(2012).</li>
<li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+vaginal+lavage%2C+crystal+violet+staining%2C+and+vaginal+cytological+evaluation+for+mouse+estrous+cycle+staging+identification%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), e4389(2012).</li>
<li>Liu, Z. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postweaning+Isolation+Rearing+Alters+the+Adult+Social%2C+Sexual+Preference+and+Mating+Behaviors+of+Male+CD-1+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Postweaning Isolation Rearing Alters the Adult Social, Sexual Preference and Mating Behaviors of Male CD-1 Mice.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 13, 21(2019).</li>
<li>TIan, E. P., Long, T., Qin, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+applications+of+mating+model+in+male+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Andrology%22%5BJournal%5D)">Establishment and applications of mating model in male rat.</a> Chinese Journal of Andrology. 22 (1), 7-10 (2008).</li>
<li>University of Minnesota Academic Health Center Research Service. Anesthesia Guidelines: Mice. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.researchservices.umn.edu/services-name/research-animal-resources/research-support/guidelines/anesthesia-mice">https://www.researchservices.umn.edu/services-name/research-animal-resources/research-support/guidelines/anesthesia-mice</a> (2019).</li>
<li>Leypold, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+sexual+and+social+behaviors+in+trp2+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Altered sexual and social behaviors in trp2 mutant mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (9), 6376-6381 (2002).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

W przedstawionym protokole znajduje się kilka krytycznych kroków. Jeśli chodzi o jajnikomię kobiet, nacięcie chirurgiczne otwierane od tyłu jest mniej szkodliwe niż to z brzucha. Biorąc pod uwagę, że pozycja jajnika jest głęboka, wyciąganie innych narządów podczas rozcinania nacięcia z jamy brzusznej często prowadzi do krwawienia i skutkuje niejasnym widzeniem chirurgicznym20. Wykonaliśmy nacięcie na plecach, aby łatwo dotrzeć do jajnika i skrócić czas operacji, a także zapewnić bezpieczeństwo ope...

Zachowania seksualne u dojrzałych samców myszy wynikają z interakcji szeregu powiązanych i współzależnych systemów hormonalnych i nerwowych w różnych obwodach mózgu1. Wymaga również doświadczeń rozwojowych, uczenia się, kontekstu i odpowiedniego partnera. Analiza behawioralna jest ważną refleksją nad funkcjami neuronalnymi lub neurokrynnymi. W związku z tym badania zachowań seksualnych na modelach zwierzęcych są szeroko stosowane w neuronauce behawioralnej i innych powiązanych badaniach2. Etogram zachowań seksualnych u gryzoni został wyjaśniony w wielu artykułach i książkach1,3,4. Na przykład opis zachowań seksualnych Scahsa i Barfielda w klasie rat<sup="xref">5 pomógł zrozumieć podobny wzorzec zachowania u myszy5. Mysz jest jednym z najczęściej wykorzystywanych przedmiotów do badań behawioralnych. Hull et al.6 szczegółowo opisali zachowania seksualne samców myszy: Kiedy samiec myszy napotyka samicę, zaczyna badać okolicę odbytu i narządów płciowych samicy. Następnie samiec przyciska przednie łapy do boków samicy, aby dosiąść samicy od tyłu. Samica wykazuje charakterystyczną postawę podatną na transpozycję seksualną, zginając kręgosłup w łuk i przesuwając ogon na jedną stronę ciała, odsłaniając introitus otwierający się na penetrację seksualną samca (tj. lordozę). Po dosiadaniu samiec wykonuje szybkie, płytkie pchnięcia miednicą, po których następują powolne i głębokie pchnięcia pochwy. Po licznych intromisjach, długotrwały ciąg powoduje wytrysk nasienia, podczas którego samiec myszy może zastygnąć na około 25 sekund, zanim zejdzie z konia lub spadnie z samicy6. Podczas wytrysku gruczoły dodatkowe samca myszy mogą wytwarzać mieszaninę zawierającą nasienie, które twardnieje, tworząc czop kopulacyjny. Wreszcie, po wytrysku, samiec rozpoczyna pielęgnację narządów płciowych i wykazuje brak zainteresowania samicą. Krótko mówiąc, podstawowa sekwencja męskich zachowań seksualnych składa się z wąchania, podążania, dosiadania, intromisji, wytrysku i pielęgnacji po wytrysku. Zachowania seksualne myszy wykazują różnice w odmianach. Na przykład opóźnienia wytrysku wahają się od 594 do 6943 s, a liczba intromisji waha się od 5 do ponad 100. Opóźnienia po wytrysku wahają się od 17 do 60 minut. Jednak wprowadzenie nowej samicy może skrócić ten przedział czasowy. W niektórych przypadkach samiec wytryskuje podczas pierwszego wprowadzenia z nową samicą7.
Głównymi wydarzeniami dla oceny zachowań seksualnych są montowanie, intromisja i wytrysk. Naukowcy behawioralni zalecili pomiar nie tylko częstotliwości każdej akcji, ale także jej opóźnienia i interwału czasowego5,8. Niektóre główne wskaźniki pomiarowe w poprzednich badaniach obejmują: liczbę montaży, liczbę intromisji, opóźnienie montowania, opóźnienie intromisji, opóźnienie wytrysku, opóźnienie montażu po wytrysku (lub odstępy po wytrysku), opóźnienie intromisji po wytrysku, liczbę serii kopulacyjnych i czas trwania serii kopulacyjnych. Park et al.8 oraz Sachs et al.5 opisali, jak zidentyfikować każdą czynność dosiadania, intromisji i wytrysku gryzoni. Dosiadanie definiuje się jako samca dosiadającego samicy od tyłu, dotykającego jej boków przednimi łapami i pchającego penisa szybko i wielokrotnie bez wprowadzania prącia. Intromission, znana również jako wprowadzenie prącia, jest identyfikowana przez jeden lub więcej z następujących aktów: długie, głębokie pchnięcie po szybkich, płytkich pchnięciach, szybkie kopnięcie jedną tylną nogą i wyraźne boczne wycofanie się samca od samicy. Wytrysk identyfikuje się przez końcowe pchnięcie miednicy, które jest wolniejsze i głębsze niż w przypadku intromisji i zmniejszenia wysokości tylnej nogi. Seria kopulacyjna jest identyfikowana przez każdą sekwencję od montażu do wytrysku. Definicje parametrów behawioralnych użyte w niniejszym badaniu są wymienione w następujący sposób: 1) Opóźnienie montażu: czas od wprowadzenia samicy do pierwszego dosiadania samca; 2) Opóźnienie intromisji: czas od wprowadzenia samicy do pierwszej intromisji; 3) Opóźnienie wytrysku: czas od pierwszego wprowadzenia do pierwszego wytrysku (zwykle po ostatnim pchnięciu miednicy); 4) Opóźnienie montażu po wytrysku: czas od wytrysku do następnego montażu; 5) Opóźnienie intromisji po wytrysku: czas od wytrysku do następnej intromisji; 6) Liczba mocowań: liczba czasów montażu przed pierwszym wytryskiem; 7) Liczba intromisji: liczba intromisji przed pierwszym wytryskiem; 8) liczba serii kopulacyjnych: liczba serii kopulacyjnych w okresie obserwacji; 9) Czas trwania serii kopulacyjnej: czas trwania wszystkich serii kopulacyjnych w okresie obserwacji.
Zachowania seksualne i związane z nimi zachowania mogą być prowadzone zarówno w domowej klatce samca, jak i na zamkniętej arenie, wśród której wprowadzono urządzenie zwane lustrzanym pudełkiem Rissmana "Bez Sekretów" do obserwacji zachowań godowych3. Kamera wideo jest umieszczona przed pudełkiem, aby jednocześnie rejestrować działanie myszy z boku i przez pochylone lustro z widoku brzusznego. Jednak ta metoda wymaga jasnego światła, co nieuchronnie prowadzi do dłuższego przyzwyczajenia w celu wyeliminowania stresu środowiskowego u myszy. Jeśli chodzi o metodę pomiaru, zalecana jest analiza behawioralna oparta na wideo w celu rejestrowania i ilościowego określania zachowania4. Magnetowid z opcją przewijania wideo klatka po klatce z zalecanymi czasami otwarcia migawki większymi niż 1/1000 s może być używany do nagrywania szybkich ruchów myszy. Kamera na podczerwień o wysokiej rozdzielczości jest niezbędna podczas nagrywania w ciemnym otoczeniu. Do analizy filmu potrzebny jest komputer z frame grabberem, który pozwala na uchwycenie poszczególnych klatek zachowania w celu manipulacji komputerowej. Myszy są niezwykle wszechstronne i mogą wykazywać zachowania kompensacyjne po prawie każdym zabiegu. Niejednoznaczność może istnieć w odniesieniu do każdej poruszającej się części ciała4. Stąd też analiza niektórych zachowań może wymagać zastosowania jeszcze większej rozdzielczości i szybszych kamer.
Na zachowania seksualne mężczyzn u myszy wpływa wiele czynników, w tym różnice w odmianach, zmiany hormonalne i mutantiony genów1,3,9,10. McGill i Blight11 zilustrowali różnice w zachowaniach godowych myszy. Na przykład samce C57BL/6 zazwyczaj szybko się wprowadzają i wytryskują w ciągu około 20 minut11. Samce DBA/2 powoli osiągają intromisję, ale szybko wytryskują. Samce BALB/c osiągają wytrysk powoli (średnie opóźnienie wynosi 1 h) ze względu na długi okres zalotów11. Testosteron ułatwia i utrzymuje męskie zachowania seksualne2, a zmiany poziomu testosteronu mogą wpływać na wydajność zachowań seksualnych12. Zarówno chirurgiczna kastracja, jak i leczenie antyandrogenowe mogą obniżyć poziom testosteronu i spowodować szybki spadek zachowań seksualnych, a nawet motywacji seksualnej i podniecenia seksualnego13. Podawany testosteron może przywrócić zachowania przedkopulacyjne i kopulacyjne u wykastrowanych myszy. Wreszcie, myszy z nokautem i powaleniem wykazują różnice w aspektach zachowań seksualnych w porównaniu z myszami typu dzikiego. Na przykład samce myszy z celowanymi mutacjami Adcy3, Cnga2 i Gnao wykazują zmniejszoną zdolność do wykrywania feromonów, podczas gdy myszy z nokautem Trpc2 wykazują zmienioną preferencję partnera14,15,16. Inne skutki transgeniki i nokautów na zachowania seksualne myszy są wyjaśnione przez Crawley3.
Tutaj opisana jest jedna z najczęstszych procedur oceny zachowań seksualnych w parze samca myszy z samicą po owariektomii, która została hormonalnie przygotowana do bycia otwartym. Przedstawiono eksperymentalny protokół przeprowadzania eksperymentów z zachowaniami seksualnymi na myszach. Ponadto przedstawiono przykład zmieniających się wzorców zachowań seksualnych wynikających z izolacji społecznej u myszy z CD-1.

<table><tbody><tr><td>Hydrat chóralny</td><td>Sinopharm Chenmical Reagent Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>20160225 Powlekane szwy VICRYL Plus</td><td>Ethicon, Inc.</td><td>brak</td><td></td></tr><tr><td>benzoesanu estradiolu</td><td>J&amp; K Scientific, Sp. z o.o.</td><td></td><td></td>L930Q170</tr><tr><td>Absolutny etanol</td><td>Beijing Chemical Works Co., Ltd.</td><td></td><td></td>20160715</tr><tr><td>Ibuprofen (Motrin dla dzieci)</td><td>Shanghai Johnson &amp; Johnson Co., Sp. z o.o.</td><td></td><td></td>160629478</tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD Life Science Co., Ltd.</td><td></td><td></td>217180501</tr><tr><td>Lidokaina</td><td>HebeI Tiancheng Pharmacreutical Co., Ltd.</td><td></td><td></td>1170506107</tr><tr><td>Samce i samice myszy CD-1</td><td>Vital River Beijing</td><td>SCXK(<img src="/files/ftp_upload/60154/SCXK.jpg">)2013-0023</td><td></td></tr><tr><td>Oliwa</td><td></td><td></td><td></td>z oliwek</tr><tr><td>Penicylina sodowa</td><td>North China Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td></td>F5126420</tr><tr><td>Progesteron</td><td>J&amp; K Scientific, Sp. z o.o.</td><td></td><td></td>LR50Q07</tr><tr><td>Aparat cyfrowy Sony</td><td>Sony Corporation</td><td>HDR-CX290E</td><td></td></tr><tr><td>Pudełko testowe</td><td></td><td></td><td>DIY</td></tr><tr><td>Komputer ThinkStation</td><td>Lenovo</td><td>S/N PCOGLQKG</td><td></td></tr><tr><td>Vaporyzator do izofluranu</td><td>RWD Life Science Co., Ltd.</td><td>E05904-009M</td><td></td></tr></tbody></table>

ocena zachowań seksualnych samców myszy

Assessment of Sexual Behavior of Male Mice

Zachowania seksualne są bardzo specyficzne dla danego gatunku. Chociaż gryzonie mają nieco inne zachowania seksualne, myszy i szczury mają podobny wzorzec zachowań seksualnych. Celem tego artykułu jest opisanie modelu samicy rui wywołanej hormonami oraz eksperymentalnej procedury oceny zachowań seksualnych samców myszy. Najważniejsze elementy zachowań seksualnych są pokazane w filmie i ilustracjach. Wyjaśniono również krytyczne kroki, zalety i ograniczenia testu zachowań seksualnych. Na koniec przedstawiono parametry zachowania oraz wyróżniono procesy dosiadania, intromisji i wytrysku podczas krycia. Parametry behawioralne są oceniane pod kątem występującego czasu trwania i zliczeń w okresie testowym.

Przedstawiono porównanie zachowań seksualnych myszy CD-1 hodowanych w izolacji oraz myszy CD-1 hodowanych grupowo. Samce myszy CD-1 zostały losowo przydzielone do grupy hodowanej w izolacji (IS, jedna mysz na klatkę, n = 30) oraz grupy hodowanej grupowo (GH, pięć myszy na klatkę, n = 15). Myszy poddawano hodowli w izolacji od 23. do 93. dnia po urodzeniu. Następnie oceniono zachowania seksualne obu grup myszy. Nasze badanie wykazało, że wskaźnik sukcesu kopulacji miał tendencję do bycia niższym w grupie IS niż w grupie G...

Ten artykuł opisuje, jak przeprowadzać testy zachowań seksualnych u samców myszy.

Ocena zachowań seksualnych samców myszy

Sexual behavior is highly species-specific. Although rodents have slightly different sexual behaviors, mice and rats have a similar sexual behavioral ...

Zachowania seksualne to dynamiczny i złożony proces, na który wpływają czynniki biologiczne, społeczne i środowiskowe. Badanie zachowań seksualnych myszy może dostarczyć więcej informacji na temat tych interakcji. Procedura ta ułatwia rejestrowanie liczby i czasu trwania zachowań seksualnych samców myszy, aby umożliwić identyfikację i charakterystykę interakcji zachowań seksualnych myszy i wzorców.Na 48 godzin przed testem zachowań seksualnych wstrzyknij 20 mikrogramów benzoesanu estradiolu w 100 mikrolitrach wysterylizowanej oliwy z oliwek dootrzewnowo sześcio- do ośmiotygodniowej samicy myszy, aby wywołać ruję. Tego samego dnia umieść samce myszy, które mają być testowane, w środku kwadratowego pudełka polowego o wymiarach 40 na 40 na 40 centymetrów z trzema czarnymi ściankami z pleksiglasu i jedną przezroczystą ścianą przednią. Pozwól zwierzętom swobodnie eksplorować środowisko przez 30 minut dziennie przez następne dwa dni.W dniu testu, cztery godziny przed eksperymentem, wstrzyknij dootrzewnowo samicom myszy 500 mikrogramów progesteronu w 100 mikrolitrach sterylnej oliwy z oliwek i ustaw oświetlenie w pomieszczeniu na 650 luksów. Następnie skonfiguruj kamerę cyfrową połączoną

assessment-of-sexual-behavior-of-male-mice

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

W niniejszym materiale opisujemy szczegółowy protokół badania socjalizacji u myszy z wykorzystaniem testu socjalizacji i preferencji nowości społecznej według Crawleya. Opisujemy zalety i możliwe zastosowania tej procedury, w tym istotne szczegóły ważne dla prawidłowej interpretacji wyników.

Ocena zachowań interakcji społecznych

Labirynt Barnesa na suchym lądzie jest powszechnie używany do mierzenia zdolności nawigacji przestrzennej w odpowiedzi na łagodnie awersyjne bodźce. W ciągu kolejnych dni poprawia się wydajność (np. opóźnienie w zlokalizowaniu klatki ewakuacyjnej) osób z grupy kontrolnej, co wskazuje na normalne uczenie się i pamięć. Różnice między szczurami a myszami wymagają zmian w aparaturze i metodologii, które zostały szczegółowo opisane tutaj.

Strategie testowania labiryntu Barnesa z małymi i dużymi modelami gryzoni

Mierzymy obwodowo-płciową wrażliwość mechaniczną i aktywację komórek tucznych u samców myszy C57BL/6, które przeszły paradygmat stresu we wczesnym okresie życia - separację noworodków od matek, w celu wywołania przedklinicznego modelu przewlekłego zapalenia gruczołu krokowego/przewlekłego bólu miednicy.

Ocena wrażliwości okołopłciowej i aktywacji komórek tucznych gruczołu krokowego w mysim modelu separacji noworodków od matek

Upłynnienie nasienia jest niezbędne do uwolnienia nasienia z żelu nasiennego. W badaniu przedstawiono procedury pobierania nasienia z żeńskiego układu rozrodczego po stosunku płciowym oraz pomiaru czasu upłynnienia nasienia.

Pobieranie nasienia po kryciu z żeńskiego układu rozrodczego i pomiar upłynnienia nasienia u myszy

Opracowaliśmy protokół oceny samopoczucia myszy podczas zabiegów z użyciem znieczulenia ogólnego. Przeanalizowano szereg parametrów behawioralnych wskazujących na poziom dobrostanu, a także metabolity glikokortykosteroidów. Protokół może służyć jako ogólna pomoc w oszacowaniu stopnia ciężkości w sposób naukowy, skoncentrowany na zwierzętach.

Systematyczna ocena dobrostanu myszy przed zabiegami ze względu na znieczulenie ogólne

Ten protokół mierzy przestrzenne uczenie się i pamięć za pomocą labiryntu Barnesa. Nowatorski paradygmat damy w niebezpieczeństwie służy do oceny aktywności lokomotorycznej i zachowań prospołecznych u myszy.

Analiza uczenia się przestrzennego i zachowań prospołecznych u myszy przy użyciu paradygmatów labiryntu Barnesa i damy w niebezpieczeństwie

Wiele zabiegów i mutacji genetycznych wpływa na czas dojrzałości płciowej i płodności. Protokół ten opisuje nieinwazyjną metodę oceny początku dojrzewania u myszy i szczurów przed rozpoczęciem badania płodności u zwierząt dojrzałych płciowo.

Określenie kompetencji rozrodczych poprzez potwierdzenie początku dojrzewania i przeprowadzenie testu płodności u myszy i szczurów

Opracowaliśmy model przyspieszonego stresu związanego z porażką społeczną dla dorastających myszy C57BL/6, który działa zarówno u samców, jak i samic i umożliwia ekspozycję podczas dyskretnych okresów dojrzewania. Ekspozycja na ten model indukuje unikanie społeczne, ale tylko w podgrupie pokonanych samców i samic myszy.

Model stresu porażki społecznej dla dorastających samców i samic myszy C57BL/6

Modele gryzoni są cennymi narzędziami do badania podstawowych zachowań związanych z zaburzeniami ze spektrum autyzmu (ASD). W tym artykule wyjaśniamy dwa testy behawioralne do modelowania podstawowych cech ASD u myszy: samopielęgnację, który ocenia powtarzające się zachowanie, oraz trzykomorowy test interakcji społecznych, który dokumentuje upośledzenia społeczne.

Strategie oceny zachowań podobnych do autystycznych u myszy

Poprzez integrację czterech codziennych stresorów społecznych, niniejsze badanie opisuje model wielokrotnego zintegrowanego stresu społecznego (MISS) dla zaburzeń psychicznych u samic myszy C57BL/6J. Po dziesięciu dniach powtarzającej się ekspozycji na MISS myszy rozwinęły fenotypy podobne do depresji i lęku, zapewniając w ten sposób naturalny, oparty na etiologii model zwierzęcy do badania zaburzeń psychicznych u kobiet.

Wieloraki zintegrowany model stresu społecznego dla zaburzeń psychicznych u samic myszy C57BL/6J

Protokół ten opisuje test behawioralny w celu oceny dominacji społecznej u gryzoni za pomocą testu probówkowego. Dominacja społeczna pozostaje stabilna w czasie, a kilka modeli zaburzeń rozwojowych i neurologicznych wykazuje silne nieprawidłowości dominacji społecznej. Dlatego test probówkowy służy jako wygodna miara wyniku w badaniach mechanistycznych lub przedklinicznych badaniach przesiewowych terapeutycznych.

Ocena dominacji społecznej w modelach mysich za pomocą testu probówkowego

Poznaj metodę oceny zachowań seksualnych samców myszy w modelu behawioralnym. Technika obejmuje indukcję rui u samic i rejestrację aktywności w otwartym polu, umożliwiając analizę wzorców behawioralnych w badaniach neurobiologicznych.

Ocena zachowań seksualnych samców myszy

Przeglądaj więcej filmów