Name: Generowanie heterogenicznych gradientów leków w różnych populacjach nowotworów w akceleratorze ewolucji mikroprzepływowej do obserwacji w czasie rzeczywistym (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 24 s
Description: Poznaj mikroprzepływowy model cancer-on-chip do badania dynamiki nowotworów na poziomie pojedynczych komórek. Ta technologia umożliwia monitorowanie morfologii, motoryki i migracji komórek w czasie rzeczywistym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ta praca była wspierana przez NSF PHY-1659940.

1. Produkcja urządzenia mikroprzepływowego
<ol>
	<li>Wygeneruj żądany wzór mikroprzepływowy za pomocą oprogramowania do projektowania układu (patrz Materiały dodatkowe).</li>
	<li>Stwórz fotomaskę. Zobacz tabelę materiałów, aby uzyskać więcej informacji.
	<ol>
		<li>Za pomocą pisarki laserowej napisz wzór na płytce ze szkła sodowo-wapniowego pokrytej 100 nm Cr i 500 nm fotorezystu AZ1518.</li>
		<li>Wywołaj fotorezystor za pomocą AZ300MIF wywoływacza przez 60 s.</li>
		<li>Wytrawić chrom bez ochrony przed fotorezystem za pomocą wytrawiacza chromowego Cr-7.</li>
		<li>Usunąć resztki fotorezystu za pomocą środka do usuwania fotorezystu w temperaturze 70 °C przez 45 minut.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wzór fotorezystu. Zobacz tabelę materiałów, aby uzyskać więcej informacji.
	<ol>
		<li>Wiruj HMDS na płytce krzemowej z prędkością 4000 obr./min przez 40 s.</li>
		<li>Fotorezystor wirowy AZ4330 na płytce krzemowej z prędkością 4000 obr./min przez 40 s.</li>
		<li>Wafel silikonowy pieczemy na miękko w temperaturze 95 °C przez 60 sekund.</li>
		<li>Użyj nakładki maski, aby wystawić promieniowanie UV na płytkę silikonową.</li>
		<li>Wywołaj fotorezystor za pomocą AZ300MIF wywoływacza przez 4 minuty.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wykonaj wytrawianie DRIE. Zobacz tabelę materiałów, aby uzyskać więcej informacji.
	<ol>
		<li>Wytrawić na sucho płytkę z wzorem fotorezystu za pomocą systemu Silicon Deep Reactive Ion Etching (DRIE) na głębokość 100 μm.</li>
		<li>Zdejmij fotorezyst acetonem i wytrawiaj plazmowo za pomocą wytrawiacza plazmowego.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Utlenianie i silanizacja wafli. Zobacz tabelę materiałów, aby uzyskać więcej informacji.
	<ol>
		<li>Przeprowadzić utlenianie termiczne na wytrawionej płytce krzemowej w piecu w temperaturze 1100 °C przez 1 godzinę.</li>
		<li>Poczekaj, aż płytka krzemowa ostygnie, a następnie umieść wafel w eksykatorze z kilkoma kroplami trichloro-1H,1H,2H,2H-perfluorooktylosilanu (PFOTS) wlanymi do małego pojemnika w pobliżu płytki.</li>
		<li>Pompować ciśnienie eksykatora do 0,5 atm w temperaturze pokojowej przez 60 minut. Forma wafla krzemowego powinna stać się hydrofobowa po odpowiedniej silanizacji, co można przetestować, dodając kilka kropel wody do płytki.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Miękka litografia. Zobacz tabelę materiałów, aby uzyskać więcej informacji.
	<ol>
		<li>Wymieszać prepolimer i środek sieciujący (z zestawu do polifetylosiloksanu metylosiloksanu) w stosunku wagowym 10:1.</li>
		<li>Wlej zmieszany PDMS, aby utworzyć film o wysokości 10 mm na silanizowaną formę waflową z krzemu.</li>
		<li>Odgazowanie powstałego układu PDMS-krzemowa płytka krzemowa w eksykatorze przez 30 minut do 1 godziny.</li>
		<li>Inkubować wafel krzemowy PDMS w inkubatorze o temperaturze 70 °C przez noc w celu utwardzenia PDMS.</li>
		<li>Po utwardzeniu PDMS ostrożnie zdejmij folię PDMS z płytki krzemowej.</li>
		<li>Za pomocą igieł do biopsji wybij otwory przelotowe w portach wlotowych w oparciu o położenie wzoru na PDMS i użyj okrągłego stempla do cięcia wiórów o średnicy 27 mm.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Klejenie warstw PDMS.
	<ol>
		<li>Utwardzaj na gorąco dwa stosy butli PDMS o średnicy 27 mm (bez wzoru), które staną się warstwą zbiornika i warstwą zamykającą urządzenie.</li>
		<li>Wytnij dwa 7-milimetrowe okręgi wokół wlotów na warstwie zbiornika i użyj igły do biopsji, aby przebić otwory w otworach wlotowych w warstwie zakrywającej.</li>
		<li>Połącz trzy stosy PDMS (wzorzysty stos, warstwa zbiornika, warstwa zakrywająca) za pomocą plazmy tlenowej.</li>
		<li>Za pomocą igły do biopsji przebij otwory przelotowe w wylotach i środkowym porcie urządzenia.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Przygotowanie pożywek i linii komórkowych
<ol>
	<li>Przygotuj pożywkę do hodowli linii komórkowych PC3, w tym PC3-EMT i PC3-EPI: zmieszaj pożywkę RPMI 1640 z 10% płodową surowicą bydlęcą (FBS) i 1x antybiotyko-antybiotykiem. Wygeneruj linie komórkowe zgodnie z wcześniejszym opisem14. 
	UWAGA: Linie komórkowe PC3 są utrzymywane w powyższych pożywkach w nawilżanych inkubatorach w temperaturze 37 °C z 5% CO2 . Dziel komórki i subkulturę co 3 dni, zanim osiągną 100% zbieżności.</li>
	<li>Transfekcyjne linie komórkowe z cytoplazmatycznymi markerami fluorescencyjnymi dla lepszej wizualizacji, jak opisano wcześniej12, tak, że PC3-EMT wyraża cytoplazmatyczne GFP, a PC3-EPI wyraża cytoplazmatyczne mCherry. Należy pamiętać, że technologia jest również kompatybilna z dowolnymi komórkami znakowanymi fluorescencyjnie, a także z obrazowaniem w jasnym polu nieznakowanych komórek.</li>
</ol>
3. Konfiguracja eksperymentalna
<ol>
	<li>Produkcja uchwytu na metalową płytę
	<ol>
		<li>Wyprodukuj uchwyt na płytkę, który jest wystarczający do jednoczesnego przechowywania przepuszczających gaz naczyń hodowlanych do równoległych eksperymentów poprzez obróbkę skrawaniem lub drukowanie 3D. Plik CAD 3D ("płytka 3-dołkowa. FCStd") można znaleźć w serwisie GitHub jako odniesienie (https://github.com/kechihl/3-well-plate).</li>
		<li>Odkręć elementy uchwytu (<klasa silna="xfig">Rysunek 2) za pomocą śrubokręta. Zdezynfekować elementy poprzez naświetlanie promieniami UV przez co najmniej 1 godzinę i pozostawić w sterylnym środowisku. 
		UWAGA: Uchwyt został zaprojektowany tak, aby zapewnić odpowiednie warunki do równowagi termicznej i idealnego składu gazu, z wlotami kanałów gazowych, które umożliwiają przepływ powietrza. Więcej szczegółów można znaleźć w naszej poprzedniej pracy 12.</li>
		<li>Przygotuj do trzech przepuszczalnych dla gazów naczyń hodowlanych, z których błona hodowli komórkowej jest stosunkowo elastyczna.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wysiewanie linii komórkowych
	<ol>
		<li>Na 24 godziny przed rozpoczęciem doświadczenia należy pobrać komórki PC3-EPI i PC3-EMT przez trypsynizację przez 5 minut. Dodać podgrzaną pożywkę hodowlaną, następnie odwirować przy 150 x g przez 3 minuty i odrzucić supernatant.</li>
		<li>Policz komórki każdego PC3-EPI i PC3-EMT za pomocą hemocytometru i wyizoluj łącznie 2,5 x 104 każdego typu komórek dla każdej przepuszczalnej dla gazów płytki hodowlanej.</li>
		<li>Wymieszać i ponownie zawiesić oba typy komórek w 2 ml pożywki hodowlanej i umieścić komórki w każdym z naczyń hodowlanych przepuszczających gaz.</li>
		<li>Pozostaw cały uchwyt płytki w inkubatorze na noc, aby komórki mogły się przyczepić.</li>
		<li>Zdezynfekuj urządzenia PDMS poprzez ekspozycję na promieniowanie UV przez co najmniej 1 godzinę i pozostaw w sterylnym środowisku.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Konfiguracja termicznej jednostki sterującej i systemu zasilania gazem
	<ol>
		<li>Jak pokazano na Rysunek 3, skonfiguruj system zasilania gazem, który składa się zarówno z jednostek sterującychCO2, jak i O2, pompy gazowej, komory mieszania gazów, nawilżacza lub bełkotki oraz trzech oddzielnych zestawów zaworów gazowych i manometrów. Więcej szczegółów można znaleźć w naszej poprzedniej pracy 12.</li>
		<li>Ustawić jednostki sterujące CO2 i O2 w taki sposób, aby regulowały szybkość mieszania gazu ze zbiorników CO2 i N2 oraz źródłaO2 . Alternatywnie działałby każdy system zaopatrzenia w gaz, który dostarcza gaz w warunkach normoksji.</li>
		<li>Upewnij się, że gaz, który jest połączony w komorze mieszania i nawilżony przez bełkotkę, jest tak wysoki, że wilgotność względna wzrasta do 85% (zgodnie z odczytem z monitora wilgotności względnej) i że gaz prowadzi do trzech niezależnych zaworów gazowych z manometrami w celu kontrolowania i monitorowania natężenia przepływu gazu w uchwycie płyty.</li>
		<li>Umieścić cały uchwyt płytki w umieszczonej na etapie inkubacji jednostce termicznej kontroli z oddzielnymi podzespołami grzewczymi dla pokrywy i dolnej płyty, przy wszystkich jednostkach ustawionych na 37 °C. Zobacz tabelę materiałów, aby uzyskać więcej informacji.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Instalacja urządzenia mikroprzepływowego. Zobacz tabelę materiałów, aby uzyskać więcej informacji.
	<ol>
		<li>Sprawdź, czy szczegółowe elementy uchwytu płytki 3-dołkowej są w porządku, jak na rysunku Rysunek 2. Każda z trzech studni jest identyczna i niezależna, z parą kanałów gazowych dla każdej studni. Każda studzienka posiada przepuszczający gaz uchwyt na miskę hodowlaną, uchwyt na chip PDMS, szklany uchwyt na okienko i parę szklanych okien o średnicy 35 mm. Elementy te można montować za pomocą zamontowanych. 
		UWAGA: Szklane okna zapewniają izolowaną termicznie przestrzeń między przepuszczalną dla gazu membraną hodowlaną a studnią, tak aby nie dochodziło do kondensacji wody z powodu różnic temperatur na granicy faz. Należy pamiętać, że 3 studnie są niezależne, a 3 eksperymenty można wykonać osobno.</li>
		<li>Wstępnie ogrzać pożywkę hodowlaną w temperaturze 37 °C i odgazować w komorze próżniowej przez 20 minut.</li>
		<li>Traktuj chipy PDMS za pomocą systemu plazmy tlenowej przez 30 s w celu utrzymania hydrofilowości.</li>
		<li>Skonfigurować system strzykawkowy. Powoli załadować dwie strzykawki pożywką wzrostową, a pozostałe dwie strzykawki z pożądanym odczynnikiem (pożywka, pożywka z lekiem itp.). Podłącz każdą pojedynczą strzykawkę do rurki o długości 50 cm (0,020" x 0,060"OD) za pomocą igły dozującej 23 G do jednego wydrążonego stalowego kołka. Włóż wydrążony stalowy kołek do drugiego końca rurki.</li>
		<li>Zagruntować rurkę i włożyć stalowy kołek do każdego chipa PDMS przez warstwę zakrywającą. Napełnij warstwę zbiornika i zwilż wzór warstwy wzoru PDMS nośnikiem. Warstwa zbiornika działa jak pułapka bąbelkowa na chipie, aby zapobiec przedostawaniu się pęcherzyków powietrza do wzorca mikroprzepływowego.</li>
		<li>Załadować strzykawkę o pojemności 1 ml pożywką hodowlaną. Podłączyć strzykawkę do rurki o średnicy 5 cm (0,020" x 0,060"OD) za pomocą igły dozującej 23 G do jednego wydrążonego stalowego kołka. Włóż wydrążony stalowy kołek do drugiego końca rurki i zalej rurkę.</li>
		<li>Włóż wydrążony stalowy kołek do środkowego otworu wióra, skąd nadmiar mediów może zostać usunięty z wióra później podczas procesu uszczelniania wiórów.</li>
		<li>Ponieważ każde urządzenie PDMS wymaga czterech strzykawek o pojemności 10 ml załadowanych do pompy strzykawkowej, należy załadować dwie strzykawki o pojemności 10 ml na chip do pokładu dziobowego. Umieścić dwie pozostałe strzykawki w zestawie wyjmującym systemu strzykawkowego.</li>
		<li>Umieść chip bezpośrednio na przepuszczalnych dla gazów membranach hodowlanych (z komórkami już przyklejonymi do membran). Aby uniknąć uwięzienia mikropęcherzyków we wzorze mikroprzepływowym, przed montażem należy wlać 1 ml wstępnie podgrzanego i odgazowanego podłoża do przepuszczalnej dla gazu płytki hodowlanej o średnicy 35 mm, a następnie upewnić się, że chip zbliża się do powierzchni cieczy pod kątem 15 stopni.</li>
		<li>Clamp przepuszczalną dla gazu naczynię hodowlaną i studzienkę w uchwycie naczyń do hodowli gazów dla każdego chipa, przy czym uchwyt chipa PDMS popycha urządzenie PDMS w dół.</li>
		<li>Przyklej arkusz zgrzewarki do urządzenia PDMS i zaciśnij go za uchwyt na wióry PDMS, aby zapobiec wysychaniu wióra.</li>
		<li>Ustaw natężenie przepływu mediów wokół matrycy na 20 μl/h.</li>
		<li>Umieść całą płytkę w inkubatorze na stoliku na zmotoryzowanym stoliku odwróconego mikroskopu. Podłącz system zasilania gazem do kanałów gazowych i dotrzymuj pod ciśnieniem membranę hodowlaną przepuszczającą gaz do zainstalowanego chipa PDMS, aby zapewnić uszczelnienie urządzenia. Utrzymuj ciśnienie manometryczne na poziomie 0.2 psi (1.4 x 104 Pa).</li>
		<li>Powoli usuń nadmiar pożywki z chipa za pomocą strzykawki o pojemności 1 ml ze środkowego otworu. Obserwuj wiór pod mikroskopem podczas ekstrakcji mediów, a następnie przerwij ekstrakcję, gdy wiór jest zgrzewany. Uszczelnianie wiórów powinno być oczywiste, ponieważ część komórek zostałaby zmiażdżona przez mikrostruktury.</li>
		<li>Podłączyć czujnik temperatury inkubatora na poziomie do płytki 3-dołkowej i ustawić na 37 °C.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Obrazowanie poklatkowe pojedynczej komórki
<ol>
	<li>Skonfiguruj oprogramowanie do obrazowania wykorzystujące odwrócony mikroskop do akwizycji obrazu poklatkowego. Należy pamiętać, że do eksperymentu EA wymagany jest odwrócony mikroskop fluorescencyjny z w pełni zmotoryzowanym stolikiem x-y, pokrętłem ostrości, migawką i kostkami filtrującymi.</li>
	<li>Skonfiguruj oprogramowanie do pozyskiwania obrazów w dwóch kanałach przy 10-krotnym powiększeniu dla każdego układu z automatycznym łączeniem obrazu po jednej rundzie autofokusa. Należy pamiętać, że systemy automatycznej korekcji, takie jak Perfect Focus, nie gwarantują zadowalającej jakości obrazu. Bardziej zalecane jest wygenerowanie niestandardowej powierzchni ostrości do długotrwałej akwizycji obrazu w oparciu o autofokus lub ręczne ustawianie ostrości na chipie.</li>
	<li>Rób zdjęcia co godzinę i pozostaw eksperyment uruchomiony w skali tygodni. Codziennie monitoruj jakość obrazu i w razie potrzeby aktualizuj powierzchnię ostrości.</li>
	<li>Przygotuj chip PDMS i przepuszczalne dla gazu naczynie hodowlane do późniejszej analizy immunofluorescencyjnej, jak opisano wcześniej13.</li>
</ol>
5. Przetwarzanie i analiza obrazu
<ol>
	<li>Przetwarzanie poeksperymentalne
	<ol>
		<li>Konwertuj obrazy do formatu TIFF w celu przetwarzania obrazu i pomiarów z wykorzystaniem Fiji/ImageJ.</li>
		<li>Kompresuj pliki TIFF w celu ułatwienia dalszego przetwarzania obrazu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Analiza Fidżi/ImageJ
	<ol>
		<li>Aby zidentyfikować komórki, wykonaj odejmowanie tła i analizę cząstek, aby zidentyfikować fluorescencyjne jasne punkty w celu wykrywania lokalizacji komórek i automatycznego zliczania komórek.</li>
		<li>Wykorzystaj wtyczki (Manual Tracking, Chemotaxis, Migration Tool, Trackmate) do analizy ruchliwości i migracji komórek.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Meacham, C. E., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+heterogeneity+and+cancer+cell+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tumour heterogeneity and cancer cell plasticity.</a> Nature. 501 (7467), 328-337 (2013).</li>
<li>Whiteside, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumor+microenvironment+and+its+role+in+promoting+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">The tumor microenvironment and its role in promoting tumor growth.</a> Oncogene. 27 (45), 5904-5912 (2008).</li>
<li>Lambert, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+analogy+between+the+evolution+of+drug+resistance+in+bacterial+communities+and+malignant+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">An analogy between the evolution of drug resistance in bacterial communities and malignant tissues.</a> Nature Reviews Cancer. 11 (5), 375-382 (2011).</li>
<li>Tannock, I. F., Lee, C. M., Tunggal, J. K., Cowan, D. S., Egorin, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+penetration+of+anticancer+drugs+through+tumor+tissue%3A+a+potential+cause+of+resistance+of+solid+tumors+to+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Limited penetration of anticancer drugs through tumor tissue: a potential cause of resistance of solid tumors to chemotherapy.</a> Clinical Cancer Research. 8 (3), 878-884 (2002).</li>
<li>Grantab, R. H., Tannock, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penetration+of+anticancer+drugs+through+tumour+tissue+as+a+function+of+cellular+packing+density+and+interstitial+fluid+pressure+and+its+modification+by+bortezomib%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Penetration of anticancer drugs through tumour tissue as a function of cellular packing density and interstitial fluid pressure and its modification by bortezomib.</a> BMC Cancer. 12, 214(2012).</li>
<li>Fu, F., Nowak, M. A., Bonhoeffer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+Heterogeneity+in+Drug+Concentrations+Can+Facilitate+the+Emergence+of+Resistance+to+Cancer+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Computational+Biology%22%5BJournal%5D)">Spatial Heterogeneity in Drug Concentrations Can Facilitate the Emergence of Resistance to Cancer Therapy.</a> PLoS Computational Biology. 11 (3), e1004142(2015).</li>
<li>Bogorad, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+microvessel+models%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">In vitro microvessel models.</a> Lab on a Chip. 15 (22), 4242-4255 (2015).</li>
<li>Caballero, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ-on-chip+models+of+cancer+metastasis+for+future+personalized+medicine%3A+From+chip+to+the+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Organ-on-chip models of cancer metastasis for future personalized medicine: From chip to the patient.</a> Biomaterials. 149, 98-115 (2017).</li>
<li>Caballero, D., Blackburn, S. M., De Pablo, M., Samitier, J., Albertazzi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-vessel-on-a-chip+models+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Tumour-vessel-on-a-chip models for drug delivery.</a> Lab on a Chip. 17 (22), 3760-3771 (2017).</li>
<li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+emergence+of+bacterial+antibiotic+resistance+in+connected+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Acceleration of emergence of bacterial antibiotic resistance in connected microenvironments.</a> Science. 333 (6050), 1764-1767 (2011).</li>
<li>Wu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ancient+hot+and+cold+genes+and+chemotherapy+resistance+emergence%5BTitle%5D)+AND+%22Proceeding+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Ancient hot and cold genes and chemotherapy resistance emergence.</a> Proceeding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (33), 10467-10472 (2015).</li>
<li>Lin, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+and+mesenchymal+prostate+cancer+cell+population+dynamics+on+a+complex+drug+landscape%5BTitle%5D)+AND+%22Convergent+Science+Physical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Epithelial and mesenchymal prostate cancer cell population dynamics on a complex drug landscape.</a> Convergent Science Physical Oncology. 3 (4), 045001(2017).</li>
<li>Lin, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+heterogeneous+environment+and+docetaxel+gradient+in+the+emergence+of+polyploid%2C+mesenchymal+and+resistant+prostate+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">The role of heterogeneous environment and docetaxel gradient in the emergence of polyploid, mesenchymal and resistant prostate cancer cells.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 36 (2), 97-108 (2019).</li>
<li>Roca, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcription+factors+OVOL1+and+OVOL2+induce+the+mesenchymal+to+epithelial+transition+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Transcription factors OVOL1 and OVOL2 induce the mesenchymal to epithelial transition in human cancer.</a> PloS One. 8 (10), e76773(2013).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Tinevez, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trackmate%3A+An+open+and+extensible+platform+for+single-particle+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Trackmate: An open and extensible platform for single-particle tracking.</a> Methods. 115, 80-90 (2017).</li>
<li>Caballero, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ-on-chip+models+of+cancer+metastasis+for+future+personalized+medicine%3A+From+chip+to+the+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Organ-on-chip models of cancer metastasis for future personalized medicine: From chip to the patient.</a> Biomaterials. 149, 98-115 (2017).</li>
<li>Akhtar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+flaws+and+human+harms+of+animal+experimentation%5BTitle%5D)+AND+%22Cambridge+Quarterly+of+Healthcare+Ethics%22%5BJournal%5D)">The flaws and human harms of animal experimentation.</a> Cambridge Quarterly of Healthcare Ethics. 24 (4), 407-419 (2015).</li>
<li>Sontheimer-Phelps, A., Hassell, B. A., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+cancer+in+microfluidic+human+organs-on-chips%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Modelling cancer in microfluidic human organs-on-chips.</a> Nature Reviews Cancer. 19 (2), 65-81 (2019).</li>
<li>Bogorad, M. I., DeStefano, J., Karlsson, J., Wong, A. D., Gerecht, S., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+in+vitro+microvessel+models%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Review: in vitro microvessel models.</a> Lab on a Chip. 15, 4242-4255 (2015).</li>
<li>Zañudo, J. G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+control+of+cellular+decision-making+networks+in+the+epithelial-to-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Biology%22%5BJournal%5D)">Towards control of cellular decision-making networks in the epithelial-to-mesenchymal transition.</a> Physical Biology. 16 (3), 031002(2019).</li>
<li>Morris, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+population+solitary+waves+can+defeat+rings+of+funnels%5BTitle%5D)+AND+%22New+Journal+of+Physics%22%5BJournal%5D)">Bacterial population solitary waves can defeat rings of funnels.</a> New Journal of Physics. 19 (3), 035002(2017).</li>
</ol>

Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Konwencjonalna hodowla komórkowa została opracowana prawie sto lat temu i pozostaje najczęściej stosowanym modelem przedklinicznym w badaniach biomedycznych, pomimo udowodnionej ograniczonej zdolności do przewidywania wyników klinicznych w przypadku raka17. Modele zwierzęce oferują najwyższe znaczenie fizjologiczne i rozsądne podobieństwo genetyczne do ludzi, ale od dawna uznaje się, że mają znaczące ograniczenia w przewidywaniu wyników u ludzi18. Spośród wszystkich istniej...

Rak jest coraz częściej rozpoznawany jako złożony ekosystem, który zależy nie tylko od ciągłej dysregulacji zmutowanych populacji komórek, ale także od istotnych interakcji między komórkami rakowymi a mikrośrodowiskiem gospodarza. W tym sensie rak ewoluuje w krajobrazie adaptacyjnym objawiającym się kombinacją czynników, w tym heterogenicznym mikrośrodowiskiem guza i wzajemnym oddziaływaniem z różnymi komórkami gospodarza, z których wszystkie przyczyniają się do selektywnego nacisku na dalsze zmiany genetyczne lub epigenetyczne1,2,3. W kontekście guzów litych nierównomierne rozmieszczenie chemioterapeutyków i innych gradientów zasobów przyczynia się do ich niejednorodności molekularnej i może odgrywać rolę w rozwoju oporności na leki, zwiększonej angiogenezie do określonych subpopulacji nowotworów, a nawet przerzutów4,5,6. Konwencjonalne badania 2D hodowli komórkowych in vitro, choć dysponują dużą skalą, wygodną zdolnością doświadczalną, zapewniają warunki pola średniego, jednolite i stałe, często pozbawione precyzyjnej kontroli przestrzennej i czasowej środowiska niezbędnej do prawdziwego naśladowania dynamiki guza in vivo. W związku z tym istnieje potrzeba opracowania bardziej reprezentatywnych modeli ex vivo w celu odtworzenia mikrośrodowiska guza przed modelami zwierzęcymi w procesie opracowywania leków, aby lepiej przewidywać progresję raka, a także reakcje na leki w dynamicznych krajobrazach stresu. Zaproponowano mikrofluidykę, aby wypełnić lukę między badaniami 2D nad hodowlami komórkowymi a bardziej złożonymi badaniami na zwierzętach in vivo, które mogą nie być w stanie wesprzeć kontrolowanych badań ilościowych7,8,9.
Idealny system in vitro do charakteryzowania dynamiki komórek nowotworowych powinien posiadać zdolność do generowania heterogenicznego mikrośrodowiska do naśladowania adaptacyjnych odpowiedzi komórkowych, które mogą mieć miejsce w guzie, a także umożliwiać obserwację tej dynamiki w rozdzielczości pojedynczej komórki. W tym artykule opisujemy mikroprzepływową platformę hodowli komórkowych, urządzenie oparte na PDMS o nazwie "Akcelerator Ewolucji" (EA), które pozwala na równoległe badania in vitro dynamiki komórek nowotworowych w rozdzielczości komórkowej z akwizycją danych w czasie rzeczywistym w ciągu kilku tygodni, przy jednoczesnym stabilnym utrzymaniu gradientów stresu w całym krajobrazie hodowli. Projekt tej platformy opiera się na naszych wcześniejszych pracach, w których dynamika ewolucyjna organizmów w metapopulacji może być przyspieszona10,11. W szczególności w grupie przestrzennie oddzielonych populacji, które oddziałują na siebie na pewnym poziomie, po wystawieniu na niejednorodny krajobraz stresu, najbardziej przystosowane gatunki mogą dominować w lokalnej populacji szybciej w porównaniu z dużą jednolitą populacją. Korzystne gatunki migrują następnie do sąsiednich mikrosiedlisk w poszukiwaniu zasobów i przestrzeni, aby ostatecznie zdominować całą populację. Jak pokazano na Rysunek 1, wzór mikroprzepływowego chipa EA składa się z (i) pary kanałów serpentynowych, które zapewniają cyrkulację świeżego podłoża i konstruują stałe warunki brzegowe dla dyfuzji chemicznej, oraz (ii) sześciokątnego obszaru hodowli komórek, który składa się ze 109 połączonych ze sobą sześciokątnych i 24 półsześciokątnych komór w środku, przypominających strukturę plastra miodu. Chip ma głębokość 100 μm. Kanały pożywkowe i obszar hodowli komórkowej są połączone małymi szczelinami (o szerokości około 15 μm), które zapobiegają bezpośredniemu przepływowi pożywki i wynikającemu z tego naprężeniu ścinającemu w obszarze hodowli komórkowej, a jednocześnie umożliwiają dyfuzję chemikaliów przez małe szczeliny i wymianę składników odżywczych, odpadów metabolicznych itp. Generowanie gradientów chemicznych jest pokazane w <silna klasa="xfig">Rysunek 1B, gdzie jeden kanał medialny zawiera 0,1 mM fluoresceiny, podczas gdy drugi kanał jest wolny od fluoresceiny. Komórki są hodowane na membranie przepuszczającej gaz, otoczonej mikrostrukturami poprzez dodatnie ciśnienie zwrotne na membranie w stosunku do chipa. Elementy uchwytu urządzenia są zilustrowane na Rysunek 2, a konfiguracja eksperymentalna jest zilustrowana na Rysunek 3, gdzie hodowla jest utrzymywana na odwróconym mikroskopie w temperaturze 37 °C, przy wilgotności względnej powyżej 85% i kondycjonowana w składzie gazu normoxia.
Ten system zapewnia szczegółową obserwację zlokalizowanych interakcji komórkowych za pośrednictwem kanałów jasnego pola i fluorescencji oraz pozwala na przestrzennie rozdzielcze testy niższego szczebla, takie jak immunofluorescencja, Western blot lub spektrometria mas. Wcześniej wykazaliśmy jako dowód słuszności tego mikroprzepływowego modelu raka na chipie długoterminową kokulturę nabłonkowych i mezenchymalnych komórek raka prostaty PC3 w 12, a także pojawienie się opornych na leki poliploidalnych gigantycznych komórek rakowych przy użyciu nabłonkowej linii komórkowej PC313. Podczas gdy przedstawiamy zastosowanie tej platformy do zrozumienia czasoprzestrzennej dynamiki nabłonkowego PC3 i mezenchymalnych komórek raka prostaty pod gradientem stresu docetakselu, system mikroprzepływowy można łatwo zastosować do dowolnej kombinacji linii komórkowych i gradientów zasobów (tj. leków, składników odżywczych, tlenu).

<table><tbody><tr><td>10 ml strzykawki BD Luer-Lok z końcówką</td><td>BD</td><td>14-823-16E</td><td></td></tr><tr><td>Antybiotykowo-przeciwgrzybiczo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5955</td><td>1x anty-anty</td></tr><tr><td>AZ 300 MIF</td><td>Merck KGaA</td><td>18441123163</td><td>Wywoływacz fotorezystu</td></tr><tr><td>AZ1518</td><td>Merck KGaA</td><td>AZ1518</td><td>Fotorezystor</td></tr><tr><td>AZ4330</td><td>Merck KGaA</td><td>AZ4330</td><td>Fotorezystor</td></tr><tr><td>Cr Wytrawiacz chromowy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>651826</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca (FBS)</td><td>Life Technologies Corporation</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>Heidelberg DWL 66+ laserwriter</td><td>Heidelberg Instruments</td><td>DWL66+</td> <td>Pisanie fotomaski</td></tr><tr><td>Hexamethyldisilazan (HMDS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>379212</td><td>Do zwiększenia przyczepności fotorezystu</td></tr><tr><td>Puste stalowe kołki</td><td>Nowość Anglia Mała rura</td><td>NE-1300-01</td><td>&nbsp;. 025 OD .017 ID x .500 długi / typ 304 WD fullhard</td></tr><tr><td>ibidi System grzewczy, płytki wielodołkowe, K-Frame</td><td>ibidi</td><td>10929</td><td>Inkubator nasadowy&nbsp;</td></tr><tr><td>Igła dozująca Luer-Lok 23 G</td><td>McMaster-Carr</td><td>75165A684</td><td>Do łączenia strzykawek i rurek</td></tr><tr><td>Naczynie Lumox 35</td><td>Sarstedt</td><td>94.6077.331</td><td>Przepuszczalne dla gazów naczynie do hodowli komórkowych</td></tr><tr><td>Microposit Remover 1165</td><td>Dow Electronic Materials</td><td>Microposit Remover 1165</td><td>Ściągacz do usuwania fotorezystu</td></tr><tr><td>Microseal B Klej uszczelniający</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td>MSB1001</td><td>Klej uszczelniacz</td></tr><tr><td>O-ring (do uszczelniania płyt Lumox)</td><td>McMaster-Carr</td><td>9452K114</td><td>Kreska nr 27; 1-5/16" ID x 1-7/16" OD; Duro 70</td></tr><tr><td>O-ring (do uszczelniania dolnej szyby)</td><td>McMaster-Carr</td><td>9452K74</td><td>Deska rozdzielcza nr 20; 7/8" ID x 1" OD; Duro 70</td></tr><tr><td>Plasma-Preen System do czyszczenia/trawienia plazmowego</td><td>Plasmatic Systems, Inc</td> System <td>plazmowy</td><td>Plasma-Preen</td> Oxygen</tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Life Technologies Corporation</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>Samco RIE800iPB DRIE</td><td>Samco</td><td>RIE800iPB</td><td>System głębokiego reaktywnego wytrawiania jonowego</td></tr><tr><td>Suss MA6 Nakładka do maski SUSS</td><td>MicroTec</td><td>MA6</td><td>Nakładka do maski&nbsp;</td></tr><tr><td>Sylgard 184 Elastomer silikonowy</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9285739</td><td>PDMS elastomer</td></tr><tr><td>TePla M4L wytrawiacz plazmowy</td><td>PVA TePla</td><td>M4L</td><td>Wytrawiacz plazmowy</td></tr><tr><td>Trichloro-1H,1H,2H,2H-perfluorooktylosilan (PFOTS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>448931</td><td>Do silanizacji wafli krzemowych</td></tr><tr><td>Rurka mikrootworowa Tygon (0,020" x 0,060"OD)</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-06419-01</td><td>Rurki do dostarczania nośników</td></tr></tbody></table>

generowanie heterogenicznych gradientów leków w różnych populacjach nowotworów w akceleratorze ewolucji mikroprzepływowej do obserwacji w czasie rzeczywistym

Generation of Heterogeneous Drug Gradients Across Cancer Populations on a Microfluidic Evolution Accelerator for Real-Time Observation

Konwencjonalna hodowla komórkowa pozostaje najczęściej używanym modelem przedklinicznym, pomimo udowodnionej ograniczonej zdolności do przewidywania wyników klinicznych w raku. Zaproponowano mikroprzepływowe modele raka na chipie, aby wypełnić lukę między nadmiernie uproszczonymi konwencjonalnymi hodowlami 2D a bardziej skomplikowanymi modelami zwierzęcymi, które mają ograniczoną zdolność do uzyskiwania wiarygodnych i powtarzalnych wyników ilościowych. W tym miejscu przedstawiamy mikroprzepływowy model raka na chipie, który w kompleksowy sposób odtwarza kluczowe składniki złożonego mikrośrodowiska guza, a jednocześnie jest wystarczająco prosty, aby zapewnić solidne ilościowe opisy dynamiki raka. Ten mikroprzepływowy model raka na chipie, "Akcelerator Ewolucji", rozkłada dużą populację komórek nowotworowych na połączony ze sobą układ mikrośrodowisk guza, generując jednocześnie niejednorodny krajobraz stresu chemoterapeutycznego. Postęp i dynamika ewolucyjna raka w odpowiedzi na gradient leku mogą być monitorowane przez tygodnie w czasie rzeczywistym, a liczne eksperymenty mogą być przeprowadzane jako uzupełnienie zdjęć poklatkowych wykonanych w trakcie eksperymentów.

Walidacja optymalnego wzrostu komórek na chipie 
Głównym celem platformy eksperymentalnej jest kompleksowe odtworzenie kluczowych komponentów i oddziaływań w złożonym mikrośrodowisku nowotworowym, przy jednoczesnym zachowaniu wystarczającej prostoty, aby zapewnić ilościowe, wiarygodne i powtarzalne dane. Cel ten można osiągnąć jedynie przy pełnej kontroli nad fizycznymi i biochemicznymi czynnikami środowiskowymi. Musimy albo wyeliminować niepożądane czynniki, albo znal...

Prezentujemy mikroprzepływowy model raka na chipie, technologię "Akcelerator Ewolucji", która zapewnia kontrolowaną platformę do długoterminowych badań ilościowych dynamiki raka w czasie rzeczywistym w dobrze zdefiniowanych warunkach środowiskowych na poziomie pojedynczej komórki. Oczekuje się, że technologia ta sprawdzi się jako model in vitro do badań podstawowych lub przedklinicznego opracowywania leków.

Generowanie heterogenicznych gradientów leków w różnych populacjach nowotworów w akceleratorze ewolucji mikroprzepływowej do obserwacji w czasie rzeczywistym

Conventional cell culture remains the most frequently used preclinical model, despite its proven limited ability to predict clinical results in cancer. ...

Ten mikroprzepływowy model on-chip raka, który nazywamy akceleratorem ewolucji, zapewnia kontrolowaną platformę do długoterminowych badań ilościowych dynamiki raka w czasie rzeczywistym w dobrze zdefiniowanych warunkach środowiskowych na poziomie pojedynczej komórki. Technologia ta pozwala nam badać dynamikę ewolucyjną nowotworów w warunkach stresu przypominającego nowotwór. Dostarczanie informacji, w tym morfologii, populacji, ruchliwości i migracji w czasie na poziomie komórkowym.Dzięki możliwości kontrolowania i monitorowania zachowania mieszanych populacji nowotworów w warunkach dobrze kontrolowanych gradientów stresu, nasza technologia może stanowić bardziej fizjologicznie istotny model dla przedklinicznego opracowywania leków. Przedstawiona metoda pakowania z uszczelnieniem ciśnieniowym może być również zaimplementowana w innych układach mikroprzepływowych, które wymagają wyrafinowanej regulacji składu gazów otoczenia, a także zdolności eksperymentu na dalszych etapach. Kluczem do pomyślnego przeprowadzenia długoterminowego eksperymentu jest zapewnienie stabilnego fizycznie i biochemicznie środowiska.Czynniki, takie jak temperatura, wilgotność i skład gazu, powinny być monito

generation-heterogeneous-drug-gradients-across-cancer-populations-on

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

Opisujemy protokół mikrofabrykacji mikroprzepływowego urządzenia do generowania gradientów, które umożliwia tworzenie przestrzennych i czasowych gradientów w ściśle określonym mikrośrodowisku. W tym podejściu mikroprzepływowe urządzenie do generowania gradientów może być wykorzystane do badania kierunkowej migracji komórek, embriogenezy, gojenia ran oraz przerzutów nowotworowych.

Mikroprzepływowe urządzenie do generowania gradientów w biologii komórki

Przedstawiamy procedurę wykonania i obsługi urządzenia mikrofluidycznego, które odtwarza heterogeniczne mikrośrodowiska nowotworowe in vitro. Zmienność apoptozy w obrębie tkanki nowotworowej została określona ilościowo przy użyciu barwników fluorescencyjnych, a następnie oceniono efektywny współczynnik dyfuzji leku chemioterapeutycznego, doksorubicyny, do tkanki nowotworowej.

Urządzenie mikrofluidyczne do odtwarzania mikrośrodowiska nowotworu in vitro

Opisujemy wysokoprzepustowy test wrażliwości na leki dla pierwotnych komórek szpiczaka mnogiego. Polega ona na rekonstrukcji mikrośrodowiska szpiku kostnego (w tym macierzy zewnątrzkomórkowej i zrębu) na płytkach wielodołkowych oraz nieinwazyjnej metodzie podłużnego oznaczania żywotności komórek.

Organotypowy wysokoprzepustowy system do charakteryzowania wrażliwości pierwotnych komórek szpiczaka mnogiego na leki

Kontrola gradientów chemicznych i tlenu jest niezbędna dla hodowli komórkowych. W artykule opisano urządzenie mikroprzepływowe z polidimetylosiloksanu i poliwęglanu (PDMS-PC) zdolne do niezawodnego generowania kombinacji gradientów chemicznych i tlenowych do badań migracji komórek, które można praktycznie wykorzystać w laboratoriach biologicznych bez wyrafinowanego oprzyrządowania.

Urządzenia mikroprzepływowe z polidimetylosiloksanu i poliwęglanu do badań migracji komórek w prostopadłych gradientach chemicznych i tlenu

W szerokim zakresie wskazań chorobowych, bardziej fizjologicznie istotne modele są opracowywane i wdrażane do programów odkrywania leków. Opisany tutaj nowy system modelowy pokazuje, w jaki sposób trójwymiarowe sferoidy nowotworowe mogą być hodowane i badane przesiewowo w wysokowydajnym systemie opartym na płytkach 1536-dołkowych w celu poszukiwania nowych leków onkologicznych.

Generowanie wysokoprzepustowych trójwymiarowych sferoid nowotworowych do badań przesiewowych leków

Opisujemy metodę konstruowania urządzeń do hodowli 3D i eksperymentowania z komórkami i organoidami wielokomórkowymi. Urządzenie to umożliwia analizę odpowiedzi komórkowych na sygnały rozpuszczalne w mikrośrodowiskach 3D ze zdefiniowanymi gradientami chemoatraktantu. Organoidy są lepsze niż pojedyncze komórki w wykrywaniu słabych hałaśliwych sygnałów.

Analiza 3D wielokomórkowych odpowiedzi na gradienty chemoatraktantu

Ten protokół opisuje generowanie sferoid pochodzących od pacjentów oraz dalszą analizę, w tym kwantyfikację proliferacji, testy cytotoksyczności, cytometrię przepływową, barwienie immunofluorescencyjne i obrazowanie konfokalne, w celu oceny potencjału kandydatów na leki jako terapii przeciwnowotworowych. Protokół ten wspiera medycynę precyzyjną w identyfikacji specyficznych leków dla każdego pacjenta i stadium choroby.

Fizjologiczne sferoidy 3D pochodzące od pacjenta do badań przesiewowych leków przeciwnowotworowych w celu ukierunkowania na rakowe komórki macierzyste

Ten raport opisuje metodę opartą na chipie mikroprzepływowym, która pozwala na przeprowadzenie eksperymentu z pojedynczą hodowlą komórkową, w którym można uzyskać wysokowydajne parowanie i mikroskopową analizę wielu pojedynczych komórek.

Ustanawianie kokultur opartych na pojedynczych komórkach w sposób deterministyczny za pomocą chipa mikroprzepływowego

Prezentujemy system mikroprzepływowy do wysokoprzepustowych badań nad złożonymi maszynami życia, który składa się z 1500 jednostek hodowlanych, szeregu ulepszonych pomp perystaltycznych i modułu mieszania na miejscu. Chip mikroprzepływowy pozwala na analizę wysoce złożonych i dynamicznych warunków mikrośrodowiskowych in vivo.

Generowanie dynamicznych warunków środowiskowych za pomocą wysokowydajnego urządzenia mikroprzepływowego

W dobie immunoterapii i profilowania genomu pojedynczej komórki, biologia nowotworów wymaga nowatorskich narzędzi in vitro i obliczeniowych do badania interfejsu nowotworowo-immunologicznego we właściwym kontekście czasoprzestrzennym. Opisujemy protokoły wykorzystania kokultur mikroprzepływowych immunologicznych z nowotworami w warunkach 2D i 3D, kompatybilnych z dynamicznym, wieloparametrycznym monitorowaniem funkcji komórkowych.

Mikroprzepływowe modele kohodowli do analizy odpowiedzi immunologicznej w mikrośrodowiskach nowotworowych in vitro

Niedotlenienie jest cechą charakterystyczną mikrośrodowiska guza i odgrywa kluczową rolę w progresji raka. Ten artykuł opisuje proces wytwarzania niedotlenionego raka na chipie opartego na technologii drukowania komórek 3D w celu podsumowania patologii raka związanej z niedotlenieniem.

Drukowany w 3D hipoksyjny rak na chipie do rekapitulacji patologicznej progresji raka litego

Poznaj mikroprzepływowy model cancer-on-chip do badania dynamiki nowotworów na poziomie pojedynczych komórek. Ta technologia umożliwia monitorowanie morfologii, motoryki i migracji komórek w czasie rzeczywistym.

Generowanie heterogenicznych gradientów leków w różnych populacjach nowotworów w akceleratorze ewolucji mikroprzepływowej do obserwacji w czasie rzeczywistym (Wideo) | JoVE Journal

Generowanie heterogenicznych gradientów leków w różnych populacjach nowotworów w akceleratorze ewolucji mikroprzepływowej do obserwacji w czasie rzeczywistym

Przeglądaj więcej filmów