Bezwzględna kwantyfikacja metabolizmu syntezy białek bezkomórkowych za pomocą chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami i spektrometrią mas

Bezkomórkowa synteza białek to nowa technologia w systemach i biologii syntetycznej do produkcji białek in vitro. Bezkomórkowe systemy syntezy białek nie mają ściany komórkowej, dzięki czemu mamy bezpośredni dostęp do metabolitów. W tym protokole określamy ilościowo bezwzględne pomiary 40 metabolitów biorących udział w centralnym metabolizmie węgla i energii, co pozwala nam scharakteryzować metabolizm bezkomórkowy.

Protokół opiera się na przerzutowaniu związków za pomocą aniliny, co pozwala na lepszą separację i wyższą rozdzielczość spektrometrii mas. Ponadto stosujemy wzorce wewnętrzne z izotopem, który oznaczamy aniliną, do bezwzględnej kwantyfikacji metabolitów. Oznaczone metabolity wymywają się, co eliminuje skutki supresji żelaza.