Name: Synteza nanoklastrów złota emitujących promieniowanie bliskiej podczerwieni do zastosowań biologicznych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Poznaj metodę syntezy funkcjonalizowanych nanoklastrów złota emitujących promieniowanie bliskiej podczerwieni do zastosowań biologicznych. Technika umożliwia wykrywanie w komórkach HeLa przy użyciu cytometrii przepływowej i mikroskopii konfokalnej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Autorzy są wdzięczni Alzbecie Magdolenovej za pomoc w cytometrii przepływowej. Autorzy dziękują za wsparcie finansowe ze strony projektu GACR nr 18-12533S. Mikroskopię wykonano w Laboratorium Mikroskopii Konfokalnej i Fluorescencyjnej współfinansowanym ze środków Europejskiego Funduszu Rozwoju Regionalnego i budżetu państwa Republiki Czeskiej, nr projektu CZ.1.05/4.1.00/16.0347 i CZ.2.16/3.1.00/21515 oraz wspierane przez projekt Czech-BioImaging dla dużych RI LM2015062.

1. Przygotowanie AuNC emitujących bliskie podczerwieni (1)
<ol>
	<li>Dodać 7,8 mg (37,8 μmol) kwasu tioktowego (TA) i 60 μl 2 M NaOH do 23,4 ml ultraczystej wody (rezystywność 18,2 MΩ.cm w temperaturze 25 °C) i mieszać (co najmniej 1,000 obr./min) aż do całkowitego rozpuszczenia (~15-20 min). W celu szybszego rozpuszczenia TA, należy poddać mieszaninę sonikacji. Do syntezy zaleca się świeżo przygotowany roztwór TA.</li>
	<li>Do roztworu dodać 10,2 μl HAuCl4·3H2O (470 mg/mL) roztworu wodnego.</li>
	<li>Po 15 minutach dodać 480 μl NaBH4 (1,9 mg/ml) przy energicznym mieszaniu (co najmniej 1000 obr./min) i mieszać mieszaninę reakcyjną w tych samych warunkach przez noc. 
	UWAGA: Świeżo przygotować roztwór NaBH4 w lodowatej ultraczystej wodzie i dodać do mieszaniny reakcyjnej natychmiast po przygotowaniu. 
	UWAGA: Synteza AuNC jest łatwo skalowalna. W jednej partii zsyntetyzowano do 2 litrów AuNC, bez żadnych zmian we właściwościach optycznych cząstek.</li>
	<li>(Krytyczne) Następnego dnia należy oczyścić roztwór, stosując trzy cykle wirowania/filtracji przy użyciu urządzenia do filtracji membranowej z odcięciem masy cząsteczkowej wynoszącym 3 kDa. Bez tej procedury oczyszczania następny krok nie działa prawidłowo.</li>
	<li>Dodać glikol polietylenowy zakończony tiolami (MW 2 000; 15,6 mg; 7,8 μmol) do roztworu, dostosować pH do 7-7,5 i mieszać mieszaninę przez noc, aby uzyskać 1. Oczyścić dyspersję, stosując trzy cykle wirowania/filtracji przy użyciu urządzenia do filtracji membranowej o masie cząsteczkowej odcięcia 3 kDa. 
	UWAGA: Dostosowanie pH do 7-7,5 jest niezwykle ważne. Wyższe pH może powodować przesunięcie maksimów emisji o niebieski.</li>
</ol>
2. Koniugacja bromku 3-(aminopropylo)trifenylofosfoniowego (TPP) na powierzchni 1
<ol>
	<li>Zmieszać 1 roztwór (24 ml) przygotowany w poprzednim etapie z bromkiem 3-(aminopropylo)trifenylofosfoniowym (12 mg, ~30 μmol). Doprowadzić pH do 4,5 za pomocą 1 M HCl. 
	UWAGA: Sól bromku 3-(Aminopropylo)trifenylofosfonium (TPP) została przygotowana zgodnie z opisem w literaturze20.</li>
	<li>Reakcję należy rozpocząć od dodania nadmiaru chlorowodorku N-(3-dimetylo-aminopropylo)-N′-etylokarbodimidu (EDC·HCl) (60 mg, 312 μmol). pH roztworu wzrośnie i nie należy dopuścić, aby przekroczyło 6. Monitorować pH mieszaniny reakcyjnej przez pierwszą godzinę. Jeśli pH wzrośnie powyżej 6, zmniejsz je do 4,5–6, dodając 1 M HCl.</li>
	<li>Mieszaninę reakcyjną mieszać przez noc w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Oczyścić dyspersję, stosując trzy cykle wirowania/filtracji przy użyciu urządzenia do filtracji membranowej z odcięciem masy cząsteczkowej 3 kDa w celu uzyskania 2. Otrzymany tutaj 2 rozcieńczyć ultraczystą wodą do początkowej objętości 24 ml. Stężenie Au w roztworze wynosi 200 μg/ml.</li>
</ol>
3. Hodowla komórkowa
<ol>
	<li>Hodowla komórek HeLa (kolekcja kultur HPA) w zmodyfikowanym pożywce Eagle's Medium firmy Dulbecco, uzupełniona 10% płodową surowicą bydlęcą w 5% CO2 w temperaturze 37 °C.</li>
	<li>Podziel i przejdź komórki, gdy osiągną ~80% konfluencji. Aby zminimalizować nabywanie nowych mutantów, liczba propagacji komórek nie powinna przekraczać 30.</li>
</ol>
4. Internalizacja AuNC w komórkach HeLa
<ol>
	<li>Zasiej komórki na 12-dołkowej płytce o gęstości 20 000 komórek/ml (1 ml/dołek). Celem jest osiągnięcie ~50% zbiegu po 48 godzinach.</li>
	<li>Po 48 godzinach od wysiewu odessać pożywkę hodowlaną i dodać 400 μl kompletnej pożywki hodowlanej (w przypadku kontroli niepoddanych działaniu środka) lub 500 μg nanocząstek w 400 μl kompletnej pożywki hodowlanej (w przypadku próbek poddanych działaniu środka) do każdej studzienki. Umieścić kultury z powrotem w inkubatorze o temperaturze 37 °C. 
	UWAGA: Dodanie dużych ilości roztworu AuNC niekorzystnie wpływa na żywotność komórek. Roztwory AuNC muszą być skoncentrowane. Tak więc 2 otrzymane w kroku 2.4 jest skoncentrowane 100 razy. 40 ml AuNC zatężono do 400 μl. Wielokrotność 25 μl tego stężonego roztworu dodano do 400 μl pożywki do hodowli komórkowych w celu uzyskania pożądanego stężenia AuNC.</li>
	<li>Po 2 godzinach internalizacji odłącz komórki za pomocą standardowej trypsynizacji zgodnie z protokołem producenta.</li>
	<li>Zebrać próbki do polipropylenowych probówek wirówkowych i wirować przez 5 minut przy 350 x g w temperaturze 4 °C.</li>
	<li>Przygotować następujący bufor FCM: wstępnie schłodzony roztwór soli fizjologicznej buforowany fosforanami (PBS; 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 4,3 mM Na2HPO4, 1,47 mM NaH2PO4, pH 7,4) uzupełniony 2% albuminą surowicy bydlęcej w temperaturze 4 °C.</li>
	<li>Przemyć granulki 1 ml buforu FCM i odwirować przez 5 minut w temperaturze 350 x g w temperaturze 4 °C.</li>
	<li>Zawiesić osad w 500 μl buforu FCM i przechowywać próbki w temperaturze 4 °C przed analizą.</li>
</ol>
5. Analiza cytometrii przepływowej
<ol>
	<li>Przefiltrować wszystkie próbki za pomocą polistyrenowej probówki okrągłodennej o pojemności 5 ml z nasadką z sitkiem do komórek.</li>
	<li>Przed uzyskaniem danych za pomocą oprogramowania przyrządu należy określić konfigurację cytometru.</li>
	<li>Sformatuj wszystkie wykresy kropkowe i histogramy dla opcji "Przejęcia".</li>
	<li>Wykreśl dwuparametrowy wykres punktowy obszaru rozproszenia do przodu (FSC-A) i obszaru rozproszenia bocznego (SSC-A), aby pokazać rozkład komórek. Aby wykluczyć dublety, utwórz dwuparametrowy wykres punktowy wysokości FSC (FSC-H) i FSC-A. Aby monitorować względną intensywność fluorescencji w próbce, należy wykreślić histogram z jednym parametrem dla obszaru kanału fluorescencyjnego (FL-A). Użyj skali liniowej do zobrazowania danych FSC i SSC oraz skali logarytmicznej dla wszystkich parametrów fluorescencyjnych.</li>
	<li>Pobrać próbkę niepoddaną działaniu substancji (bez nanocząstek) przy niskim natężeniu przepływu, aby zminimalizować przypadkowe zdarzenia (jeśli zezwala na to urządzenie). Podczas akwizycji dostosuj napięcia lampy fotopowielacza (PMT), aby uzyskać populację nieleczoną w skali na wykresie FSC vs SSC. W razie potrzeby dostosuj napięcia PMT dla kanału FL, aby umieścić niezabarwioną populację w lewym rogu histogramu.</li>
	<li>Wybierz konkretną "zakładkę bramy" w oprogramowaniu i narysuj odpowiednią bramkę wokół żądanej populacji. Komórki wewnątrz bramy zostaną przeniesione do następnego punktu kontrolnego.</li>
	<li>Rejestrowanie 10 000 zdarzeń na próbkę.</li>
	<li>Rejestruj wszystkie próbki przy tych samych ustawieniach urządzenia.</li>
	<li>Użyj odpowiedniego programu do analizy danych cytometrii przepływowej. 
	UWAGA: Niektóre aplikacje mogą wymagać niestandardowej konfiguracji filtrów. W celu wymiany filtra należy zawsze postępować zgodnie z zaleceniami producenta zawartymi w instrukcji obsługi. 
	UWAGA: Eksperyment można zapisać i ponownie wczytać, aby zachować ustawienia instrumentu i strategię bramkowania. 
	UWAGA: Wykres wysokości rozproszenia bocznego (SSC-H) w stosunku do obszaru rozproszenia bocznego (SSC-A) może być również używany do wykluczania dubletów. Ten rodzaj bramkowania może być bardziej czuły, ponieważ detektor FSC zwykle nie jest PMT.</li>
</ol>
6. Internalizacja 2 komórek HeLa do konfokalnej laserowej mikroskopii skaningowej (CLSM)
<ol>
	<li>Wysiewaj komórki na 4-komorowym naczyniu ze szklanym dnem o średnicy 35 mm o gęstości 250 000 komórek/ml (0,5 ml/komorę). Przechowywać komorę w inkubatorze o temperaturze 37 °C z 5% atmosferąCO2. Celem jest osiągnięcie ~50% konfluencji po 24 godzinach.</li>
	<li>Po 24 godzinach od wysiewu dodać 100 μg 2 (lub 10 μl z roztworu podstawowego 10 mg/ml) do każdej komory naczynia zawierającej 0,5 ml pożywki z komórkami (dla próbek poddanych działaniu środka).</li>
	<li>Włóż naczynie z powrotem do inkubatora. Pozwól komórkom zinternalizować AuNC przez 24 godziny przed użyciem ich do CLSM.</li>
	<li>Po okresie internalizacji wyrzuć pożywkę i myj komórki wstępnie podgrzaną świeżą pożywką przez 5 minut. Powtórz etap mycia jeszcze raz. Następnie napełnij każdą komorę 800 μl świeżej pożywki.</li>
</ol>
7. CLSM Obrazowanie żywych komórek Hela oznaczonych symbolem 2
<ol>
	<li>Do obrazowania mikroskopowego należy użyć 63-krotnej olejowej (n = 1,518) soczewki obiektywowej (NA = 1,4) w mikroskopie konfokalnym z plan-apochromatem.</li>
	<li>Zamontuj czaszę na odwróconym stoliku mikroskopowym z komorą ogrzaną do 37 °C i zasilaną nawilżoną atmosferą 5%CO2</li>.
	<li>Do wykrywania zinternalizowanego AuNC należy użyć zestawu laserowego o długości fali 405 nm o mocy 2% z odpowiednim rozdzielaczem wiązki. Ustawia zakres długości fal detekcji w zakresie od 650 do 760 nm.</li>
	<li>Ustaw rozdzielczość obrazu na 2048 x 2048 pikseli. W ustawieniu szybkości akwizycji dąż do czasu przebywania pikseli około 4 μs. Uzyskaj obraz z 2-krotnym uśrednianiem (tryb liniowy, średnia metody uśredniania). Ustaw otwór na 1 jednostkę Airy (dla światła 405 nm). Aby uzyskać wyższą czułość, użyj trybu zliczania fotonów.</li>
	<li>Aby uzyskać prawidłowe oświetlenie w świetle przechodzącym z różnicowym kontrastem interferencyjnym (DIC), należy użyć ustawienia kondensatora i ogranicznika pola Köhlera. Do akwizycji światła przechodzącego należy użyć lasera o długości fali 488 nm o mocy 0,7% bez przypisanego detektora fluorescencji. Ustaw odpowiedni rozdzielacz wiązki dla długości fali lasera.</li>
	<li>Uzyskaj dwa obrazy dla każdej ścieżki (czerwona fluorescencja i DIC). Śledź AuNC na podstawie ich czerwonej fluorescencji; granice komórek można łatwo określić w świetle przechodzącym za pomocą obrazów DIC.</li>
</ol>

<ol><li>Wang, Y., Chen, J., Irudayaraj, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+Targeting+Dynamics+of+Gold+Nanoclusters+for+Enhanced+Therapy+of+HER2%2B+Breast+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Nuclear Targeting Dynamics of Gold Nanoclusters for Enhanced Therapy of HER2+ Breast Cancer.</a> ACS Nano. 5 (12), 9718-9725 (2011).</li>
<li>Chen, L. Y., Wang, C. W., Yuan, Z., Chang, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+Gold+Nanoclusters%3A+Recent+Advances+in+Sensing+and+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Fluorescent Gold Nanoclusters: Recent Advances in Sensing and Imaging.</a> Analytical Chemistry. 87 (1), 216-229 (2015).</li>
<li>Dongyun, C., Zhentao, L., Li, N., Lee, J. Y., Xie, J., Lu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jianmei+Amphiphilic+Polymeric+Nanocarriers+with+Luminescent+Gold+Nanoclusters+for+Concurrent+Bioimaging+and+Controlled+Drug+Release%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Functional+Materials%22%5BJournal%5D)">Jianmei Amphiphilic Polymeric Nanocarriers with Luminescent Gold Nanoclusters for Concurrent Bioimaging and Controlled Drug Release.</a> Advanced Functional Materials. 23 (35), 4324-4331 (2013).</li>
<li>Tan, X., Jin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasmall+metal+nanoclusters+for+bio-related+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdisciplinary+Reviews%3A+Nanomedicine+and+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Ultrasmall metal nanoclusters for bio-related applications.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews: Nanomedicine and Nanobiotechnology. 5 (6), 569-581 (2013).</li>
<li>Yuan, X., Luo, Z., Yu, Y., Yao, Q., Xie, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luminescent+Noble+Metal+Nanoclusters+as+an+Emerging+Optical+Probe+for+Sensor+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+-+An+Asian+Journal%22%5BJournal%5D)">Luminescent Noble Metal Nanoclusters as an Emerging Optical Probe for Sensor Development.</a> Chemistry - An Asian Journal. 8 (5), 858-871 (2013).</li>
<li>Zheng, K., Setyawati, M. I., Leong, D. T., Xie, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+Gold+Nanoclusters%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial Gold Nanoclusters.</a> ACS Nano. 11 (7), 6904-6910 (2017).</li>
<li>Li, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+mechanistic+study+of+a+novel+gold+nanocluster-based+drug+delivery+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Design and mechanistic study of a novel gold nanocluster-based drug delivery system.</a> Nanoscale. 10 (21), 10166-10172 (2018).</li>
<li>Zhang, X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasmall+Au10-12%28SG%2910-12+Nanomolecules+for+High+Tumor+Specificity+and+Cancer+Radiotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Ultrasmall Au10-12(SG)10-12 Nanomolecules for High Tumor Specificity and Cancer Radiotherapy.</a> Advanced Materials. 26 (26), 4565-4568 (2014).</li>
<li>Zhang, X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasmall+Glutathione-Protected+Gold+Nanoclusters+as+Next+Generation+Radiotherapy+Sensitizers+with+High+Tumor+Uptake+and+High+Renal+Clearance%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Ultrasmall Glutathione-Protected Gold Nanoclusters as Next Generation Radiotherapy Sensitizers with High Tumor Uptake and High Renal Clearance.</a> Scientific Reports. 5, 8669(2015).</li>
<li>Zhang, X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+Tumor+Accumulation+of+Sub-2+nm+Gold+Nanoclusters+for+Cancer+Radiation+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Enhanced Tumor Accumulation of Sub-2 nm Gold Nanoclusters for Cancer Radiation Therapy.</a> Advanced Healthcare Materials. 3 (1), 133-141 (2014).</li>
<li>Zheng, J., Zhang, C., Dickson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Fluorescent%2C+Water-Soluble%2C+Size-Tunable+Gold+Quantum+Dots%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Review+Letters%22%5BJournal%5D)">Highly Fluorescent, Water-Soluble, Size-Tunable Gold Quantum Dots.</a> Physical Review Letters. 93 (7), 077402(2004).</li>
<li>Wu, Z., Jin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+Ligand%27s+Role+in+the+Fluorescence+of+Gold+Nanoclusters%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">On the Ligand's Role in the Fluorescence of Gold Nanoclusters.</a> Nano Letters. 10 (7), 2568-2573 (2010).</li>
<li>Lin, C. A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis%2C+Characterization%2C+and+Bioconjugation+of+Fluorescent+Gold+Nanoclusters+toward+Biological+Labeling+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Synthesis, Characterization, and Bioconjugation of Fluorescent Gold Nanoclusters toward Biological Labeling Applications.</a> ACS Nano. 3 (2), 395-401 (2009).</li>
<li>Yang, L., Shang, L., Nienhaus, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanistic+aspects+of+fluorescent+gold+nanocluster+internalization+by+live+HeLa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Mechanistic aspects of fluorescent gold nanocluster internalization by live HeLa cells.</a> Nanoscale. 5 (4), 1537-1543 (2013).</li>
<li>Mishra, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aqueous+Growth+of+Gold+Clusters+with+Tunable+Fluorescence+Using+Photochemically+Modified+Lipoic+Acid-Based+Ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Aqueous Growth of Gold Clusters with Tunable Fluorescence Using Photochemically Modified Lipoic Acid-Based Ligands.</a> Langmuir. 32 (25), 6445-6458 (2016).</li>
<li>Wu, Z., Gayathri, C., Gil, R. R., Jin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+the+Structure+and+Charge+State+of+Glutathione-Capped+Au25%28SG%2918+Clusters+by+NMR+and+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Probing the Structure and Charge State of Glutathione-Capped Au25(SG)18 Clusters by NMR and Mass Spectrometry.</a> Journal of the American Chemical Society. 131 (18), 6535-6542 (2009).</li>
<li>Stamplecoskie, K. G., Kamat, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-Dependent+Excited+State+Behavior+of+Glutathione-Capped+Gold+Clusters+and+Their+Light-Harvesting+Capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Size-Dependent Excited State Behavior of Glutathione-Capped Gold Clusters and Their Light-Harvesting Capacity.</a> Journal of the American Chemical Society. 136 (31), 11093-11099 (2014).</li>
<li>Pramanik, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoclusters+with+bright+near-infrared+photoluminescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Gold nanoclusters with bright near-infrared photoluminescence.</a> Nanoscale. 10 (8), 3792-3798 (2018).</li>
<li>Salvati, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+measurement+of+nanoparticle+uptake+by+flow+cytometry+illustrated+by+an+interlaboratory+comparison+of+the+uptake+of+labelled+polystyrene+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22NanoImpact%22%5BJournal%5D)">Quantitative measurement of nanoparticle uptake by flow cytometry illustrated by an interlaboratory comparison of the uptake of labelled polystyrene nanoparticles.</a> NanoImpact. 9, 42-50 (2018).</li>
<li>Zhang, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism-Guided+Design+and+Synthesis+of+a+Mitochondria-Targeting+Artemisinin+Analogue+with+Enhanced+Anticancer+Activity%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie%22%5BJournal%5D)">Mechanism-Guided Design and Synthesis of a Mitochondria-Targeting Artemisinin Analogue with Enhanced Anticancer Activity.</a> Angewandte Chemie. 128 (44), 13974-13978 (2016).</li>
<li>Shang, L., Dong, S., Nienhaus, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-small+fluorescent+metal+nanoclusters%3A+Synthesis+and+biological+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Today%22%5BJournal%5D)">Ultra-small fluorescent metal nanoclusters: Synthesis and biological applications.</a> Nano Today. 6 (4), 401-418 (2011).</li>
<li>Higaki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+the+Atomic+Structure+of+Au30+Nanoclusters+by+a+Ligand-Based+Strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Controlling the Atomic Structure of Au30 Nanoclusters by a Ligand-Based Strategy.</a> Angewandte Chemie International Edition. 55 (23), 6694-6697 (2016).</li>
<li>Li, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailoring+the+Electronic+and+Catalytic+Properties+of+Au25+Nanoclusters+via+Ligand+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Tailoring the Electronic and Catalytic Properties of Au25 Nanoclusters via Ligand Engineering.</a> ACS Nano. 10 (8), 7998-8005 (2016).</li>
<li>Kim, A., Zeng, C., Zhou, M., Jin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+Engineering+of+Au36%28SR%2924+Nanoclusters+for+Photoluminescence+Enhancement%5BTitle%5D)+AND+%22Particle+%26+Particle+Systems+Characterization%22%5BJournal%5D)">Surface Engineering of Au36(SR)24 Nanoclusters for Photoluminescence Enhancement.</a> Particle & Particle Systems Characterization. 34 (8), 1600388(2017).</li>
<li>Chevrier, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular-Scale+Ligand+Effects+in+Small+Gold%E2%80%93Thiolate+Nanoclusters%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Molecular-Scale Ligand Effects in Small Gold–Thiolate Nanoclusters.</a> Journal of the American Chemical Society. 140 (45), 15430-15436 (2018).</li>
<li>Yuan, X., Goswami, N., Chen, W., Yao, Q., Xie, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+the+effect+of+surface+ligands+on+the+optical+properties+of+thiolated+Au25+nanoclusters%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Communications%22%5BJournal%5D)">Insights into the effect of surface ligands on the optical properties of thiolated Au25 nanoclusters.</a> Chemical Communications. 52 (30), 5234-5237 (2016).</li>
<li>Yuan, X., Goswami, N., Mathews, I., Yu, Y., Xie, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+stability+through+ligand-shell+engineering%3A+A+case+study+with+Au25%28SR%2918+nanoclusters%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Research%22%5BJournal%5D)">Enhancing stability through ligand-shell engineering: A case study with Au25(SR)18 nanoclusters.</a> Nano Research. 8 (11), 3488-3495 (2015).</li>
<li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidation+at+the+Core-Ligand+Interface+of+Au+Lipoic+Acid+Nanoclusters+That+Enhances+the+Near-IR+Luminescence%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+C%22%5BJournal%5D)">Oxidation at the Core-Ligand Interface of Au Lipoic Acid Nanoclusters That Enhances the Near-IR Luminescence.</a> The Journal of Physical Chemistry C. 118 (35), 20680-20687 (2014).</li>
<li>Padelford, J. W., Wang, T., Wang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enabling+Better+Electrochemical+Activity+Studies+of+H2O-Soluble+Au+Clusters+by+Phase+Transfer+and+a+Case+Study+of+Lipoic-Acid-Stabilized+Au22%5BTitle%5D)+AND+%22ChemElectroChem%22%5BJournal%5D)">Enabling Better Electrochemical Activity Studies of H2O-Soluble Au Clusters by Phase Transfer and a Case Study of Lipoic-Acid-Stabilized Au22.</a> ChemElectroChem. 3 (8), 1201-1205 (2016).</li>
<li>Wang, T., Wang, D., Padelford, J. W., Jiang, J., Wang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-Infrared+Electrogenerated+Chemiluminescence+from+Aqueous+Soluble+Lipoic+Acid+Au+Nanoclusters%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Near-Infrared Electrogenerated Chemiluminescence from Aqueous Soluble Lipoic Acid Au Nanoclusters.</a> Journal of the American Chemical Society. 138 (20), 6380-6383 (2016).</li>
<li>Aldeek, F., Muhammed, M. A. H., Palui, G., Zhan, N., Mattoussi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+Highly+Fluorescent+Polyethylene+Glycol-+and+Zwitterion-Functionalized+Gold+Nanoclusters%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Growth of Highly Fluorescent Polyethylene Glycol- and Zwitterion-Functionalized Gold Nanoclusters.</a> ACS Nano. 7 (3), 2509-2521 (2013).</li>
<li>Oh, E., Susumu, K., Goswami, R., Mattoussi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-Phase+Synthesis+of+Water-Soluble+Gold+Nanoparticles+with+Control+over+Size+and+Surface+Functionalities%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">One-Phase Synthesis of Water-Soluble Gold Nanoparticles with Control over Size and Surface Functionalities.</a> Langmuir. 26 (10), 7604-7613 (2010).</li>
<li>Nair, L. V., Nazeer, S. S., Jayasree, R. S., Ajayaghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+Imaging+Assisted+Photodynamic+Therapy+Using+Photosensitizer-Linked+Gold+Quantum+Clusters%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Fluorescence Imaging Assisted Photodynamic Therapy Using Photosensitizer-Linked Gold Quantum Clusters.</a> ACS Nano. 9 (6), 5825-5832 (2015).</li>
<li>Porret, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrophobicity+of+Gold+Nanoclusters+Influences+Their+Interactions+with+Biological+Barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+of+Materials%22%5BJournal%5D)">Hydrophobicity of Gold Nanoclusters Influences Their Interactions with Biological Barriers.</a> Chemistry of Materials. 29 (17), 7497-7506 (2017).</li>
<li>Shang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-Pot+Synthesis+of+Near-Infrared+Fluorescent+Gold+Clusters+for+Cellular+Fluorescence+Lifetime+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">One-Pot Synthesis of Near-Infrared Fluorescent Gold Clusters for Cellular Fluorescence Lifetime Imaging.</a> Small. 7 (18), 2614-2620 (2011).</li>
<li>Wu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solution+NMR+Analysis+of+Ligand+Environment+in+Quaternary+Ammonium-Terminated+Self-Assembled+Monolayers+on+Gold+Nanoparticles%3A+The+Effect+of+Surface+Curvature+and+Ligand+Structure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Solution NMR Analysis of Ligand Environment in Quaternary Ammonium-Terminated Self-Assembled Monolayers on Gold Nanoparticles: The Effect of Surface Curvature and Ligand Structure.</a> Journal of the American Chemical Society. 141 (10), 4316-4327 (2019).</li>
<li>Gao, X., Cui, Y., Levenson, R. M., Chung, L. W. K., Nie, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cancer+targeting+and+imaging+with+semiconductor+quantum+dots%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">In vivo cancer targeting and imaging with semiconductor quantum dots.</a> Nature Biotechnology. 22 (8), 969-976 (2004).</li>
<li>Bartczak, D., Kanaras, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+Peptide-Functionalized+Gold+Nanoparticles+Using+One+Pot+EDC%2FSulfo-NHS+Coupling%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Preparation of Peptide-Functionalized Gold Nanoparticles Using One Pot EDC/Sulfo-NHS Coupling.</a> Langmuir. 27 (16), 10119-10123 (2011).</li>
<li>Dutta, D., Sailapu, S. K., Chattopadhyay, A., Ghosh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenylboronic+Acid+Templated+Gold+Nanoclusters+for+Mucin+Detection+Using+a+Smartphone-Based+Device+and+Targeted+Cancer+Cell+Theranostics%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Applied+Materials+%26+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Phenylboronic Acid Templated Gold Nanoclusters for Mucin Detection Using a Smartphone-Based Device and Targeted Cancer Cell Theranostics.</a> ACS Applied Materials & Interfaces. 10 (4), 3210-3218 (2018).</li>
<li>Retnakumari, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD33+monoclonal+antibody+conjugated+Au+cluster+nano-bioprobe+for+targeted+flow-cytometric+detection+of+acute+myeloid+leukaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">CD33 monoclonal antibody conjugated Au cluster nano-bioprobe for targeted flow-cytometric detection of acute myeloid leukaemia.</a> Nanotechnology. 22 (28), 285102(2011).</li>
<li>Pyo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Luminescent+Folate-Functionalized+Au22+Nanoclusters+for+Bioimaging%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Highly Luminescent Folate-Functionalized Au22 Nanoclusters for Bioimaging.</a> Advanced Healthcare Materials. 6 (16), 1700203(2017).</li>
<li>Fernández, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+accumulation+and+immunological+properties+of+fluorescent+gold+nanoclusters+in+human+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Intracellular accumulation and immunological properties of fluorescent gold nanoclusters in human dendritic cells.</a> Biomaterials. 43, 1-12 (2015).</li>
</ol>

Niektóre fragmenty metod i wyników zostały wcześniej przedstawione w artykule Pramanika i wsp.18 Tutaj metody te zostały przekształcone w praktyczne protokoły punkt po punkcie. Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów finansowych.

AuNC emitujące NIR zsyntetyzowano przy użyciu podejścia oddolnego, w którym roztwór prekursora złota (HAuCl4) poddano działaniu odpowiednich ligandów tiolowych, a następnie redukcję Au3+. Redukcja jonów metali w roztworze wodnym ma tendencję do agregacji i prowadzi do powstawania dużych nanocząstek, a nie ultramałych NC21. W celu przygotowania ultramałych (≤2 nm) AuNC PL dostosowano warunki syntezy, aby zapobiec powstawaniu dużych cząstek i sprzyjać powstawaniu ultramałych kl...

W ciągu ostatniej dekady ultramałe (≤ 2 nm) fotoluminescencyjne nanoklastry złota (PL AuNCs) okazały się obiecującymi sondami zarówno do badań podstawowych, jak i zastosowań praktycznych1,2,3,4,5,6,7,8,9,10. Ich wiele pożądanych cech to wysoka fotostabilność, przestrajalne maksima emisji, długi czas trwania emisji, duże przesunięcia Stokesa, niska toksyczność, dobra biokompatybilność, klirens nerkowy i łatwa biokoniugacja. PL AuNC mogą zapewniać fotoluminescencję od niebieskiego do obszaru widmowego bliskiej podczerwieni (NIR), w zależności od liczby atomów w klastrze11 i charakteru powierzchni ligand12. Emitujące NIR (650-900 nm) AuNC są szczególnie obiecujące dla długoterminowego obrazowania in vitro i in vivo komórek i tkanek, ponieważ oferują wysoki stosunek sygnału do szumu ze względu na minimalne nakładanie się na autofluorescencję wewnętrzną, słabsze rozpraszanie i absorpcję oraz wysoką penetrację tkanek światła NIR13,14.
W ostatnich latach opracowano różne podejścia wykorzystujące oddziaływania kowalencyjne Au-S do przygotowania NIR-PL AuNC pokrytych różnymi ligandami zawierającymi tiole13,15,16,17. W przypadku zastosowań biomedycznych AuNC muszą być funkcjonalizowane komponentem biologicznym, aby ułatwić interakcje wiążące. W związku z tym wysoce pożądane są AuNC o wysokiej stabilności koloidalnej, które łatwo funkcjonują w wodnym rozpuszczalniku. Ogólnym celem obecnego protokołu jest szczegółowe opisanie wcześniej zgłoszonego 18 przygotowania AuNC z funkcjonalizowalną grupą kwasu karboksylowego na powierzchni poprzez zastosowanie kwasu tioktynowego i glikolu polietylenowego (PEG) w środowisku wodnym oraz ich sprzężenie z cząsteczkami zawierającymi pierwszorzędową aminę zgodnie z metodą sprzęgania kwas-amina. Ze względu na łatwość syntezy i wysoką odtwarzalność, protokół ten może być używany i dostosowywany przez badaczy ze środowisk niezwiązanych z chemią.
Jednym z kluczowych warunków do zastosowania AuNC w badaniach biomedycznych jest możliwość obserwacji i pomiaru AuNC wewnątrz komórek. Wśród dostępnych metod monitorowania wychwytu nanocząstek przez komórki, cytometria przepływowa (FCM) i konfokalna laserowa mikroskopia skaningowa (CLSM) oferują solidne, wysokowydajne metody, które umożliwiają szybkie pomiary internalizacji nanomateriałów fluorescencyjnych w dużej liczbie komórek19. W tym miejscu również zaprezentowano metodę FCM i CLSM do bezpośredniego pomiaru i analizy AuNC PL wewnątrz komórek, bez konieczności stosowania dodatkowych barwników.

<table><tbody><tr><td>Chlorowodorek 1-(3-dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodimidu</td><td>TCI Chemicals</td><td>D1601</td><td>https://www.tcichemicals.com/eshop/en/eu/commodity/D1601/;jsessionid=3AD046E5389206AAE33C8AAB5036CDD6?gclid=CjwKCAjwiZnnBRBQEiwAcWKfYrO69K6Np3tYeSsAouqGndUvzzsy1hStBPuHG-X3cpTIsAqq9z0cDBoC76MQAvD_BwE</td></tr><tr><td>Albumina surowicy bydlęcej</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4161</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/a4161?lang=en&region=CZ</td></tr><tr><td>Wodorofosforan disodowy dwuwodny</td><td>PENTA s.r.o.</td><td>15130-31000</td><td>https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_281.pdf</td></tr><tr><td>Kwas DL-tioktynowy, 98%</td><td>Alfa Aesar</td><td>L04711</td><td>https://www.alfa.com/en/catalog/L04711/</td></tr> <tr><td>Kwas solny 35%</td><td>PENTA s.r.o.</td><td>19350-11000</td><td>https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_512.pdf</td></tr><tr><td>Wodorotetrachloroauranian(III) trójwodny, ACS, 99,99% (w przeliczeniu na metale), Au 49,0% min</td><td>Alfa Aesar</td><td>36400</td><td>https://www.alfa.com/en/catalog/036400/</td></tr> <tr><td>O-(2-merkaptoetylo)-O&prime;-metylopolietylenoglikol 2000</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>743127</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/743127?lang=en&region=CZ</td></tr><tr><td>Chlorek potasu</td><td>PENTA s.r.o.</td><td>16200-31000</td><td>https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_346.pdf</td></tr><tr><td>Borowodorek sodu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>452882</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/452882?lang=en&region=CZ&gclid=CjwKCAjwiZnnBRBQEiwAcWKfYuoZKvdK_fH24F1gGugG4pamF2FFZLd36YyZmRTdGgkbm5SbyGP0jBoCoo0QAvD_BwE</td></tr><tr><td>Chlorek</td><td>sodu PENTA s.r.o.</td><td>16610-31000</td><td>https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_376.pdf</td></tr><tr><td>Diwodorofosforan sodu dwuwodny</td><td>PENTA s.r.o.</td><td>12330-31000</td><td>https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_124.pdf</td></tr><tr><td>Granulki wodorotlenku sodu</td><td>PENTA s.r.o.</td><td>15740-31000</td><td>https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_307.pdf</td></tr><tr><td>XTT (sól wewnętrzna 2,3-bis (2-metoksy-4-nitro-5-sulfofenylo)-5-[(fenyloamino)-karbonylo]-2H-tetrazolu)Thermo</td> <td>Fisher Scientific</td><td>X12223</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/X12223#/X12223</td></tr></tbody></table>

synteza nanoklastrów złota emitujących promieniowanie bliskiej podczerwieni do zastosowań biologicznych

Synthesis of Near-Infrared Emitting Gold Nanoclusters for Biological Applications

W ciągu ostatniej dekady, fluorescencyjne nanoklastry złota (AuNCs) były świadkami rosnącej popularności w zastosowaniach biologicznych i włożono ogromne wysiłki w ich rozwój. W niniejszym protokole szczegółowo opisano niedawno opracowaną, łatwą metodę przygotowania rozpuszczalnych w wodzie, biokompatybilnych i stabilnych koloidalnie AuNC emitujących promieniowanie w bliskiej podczerwieni. Ta oddolna synteza chemiczna w temperaturze pokojowej zapewnia łatwo funkcjonalizowane AuNC pokryte kwasem tioktycznym i glikolem polietylenowym modyfikowanym tiolem w roztworze wodnym. Podejście syntetyczne nie wymaga ani rozpuszczalników organicznych, ani dodatkowej wymiany ligandów, ani rozległej wiedzy z zakresu chemii syntetycznej do rozmnażania. Powstałe AuNC oferują wolne powierzchniowe kwasy karboksylowe, które mogą być funkcjonalizowane różnymi cząsteczkami biologicznymi zawierającymi wolną grupę aminową bez negatywnego wpływu na właściwości fotoluminescencyjne AuNC. Opisano również szybką, niezawodną procedurę kwantyfikacji cytometrii przepływowej i konfokalnego obrazowania mikroskopowego wychwytu AuNC przez komórki HeLa. Ze względu na duże przesunięcie Stokesa, odpowiednie ustawienie filtrów w cytometrii przepływowej i mikroskopii konfokalnej jest niezbędne do skutecznego wykrywania fotoluminescencji AuNC w bliskiej podczerwieni.

NIR PL AuNCs przygotowano z Au3+ w obecności TA, a następnie przyłączono końcówki tiolowe PEG (MW 2 000) do powierzchni AuNC, otrzymując 1, zgodnie z układem pokazanym na Rysunku 1. Koniugacja amidowa między 1 a bromkiem 3-(aminopropylu) trifenylofosfoniu (TPP) dała związek 2. Jak oczekiwano, widma absorpcji (Rysunek 2a) wskazały, że AuNCs 1 i 2 nie wykazują charakter...

Opisana jest niezawodna i łatwo odtwarzalna metoda przygotowania funkcjonalnych, emitujących światło podczerwone fotoluminescencyjnych nanoklastrów złota i ich bezpośredniego wykrywania wewnątrz komórek HeLa za pomocą cytometrii przepływowej i konfokalnej laserowej mikroskopii skaningowej.

Synteza nanoklastrów złota emitujących promieniowanie bliskiej podczerwieni do zastosowań biologicznych

Over the past decade, fluorescent gold nanoclusters (AuNCs) have witnessed growing popularity in biological applications and enormous efforts have been ...

Jest to prosty protokół syntezy funkcjonalizowalnych, emitujących promienie bliskiej podczerwieni fotoluminescencyjnych nanoklastrów złota i ich wykrywania przy użyciu komercyjnej konfiguracji. Jedną z głównych zalet tej techniki jest to, że przyłączenie liganda funkcjonalizowanego tiolem i sprzężenie liganda funkcjonalizowanego aminami na powierzchni nanoklastrów złota nie wpływa negatywnie na właściwości fotoluminescencyjne i stabilność cewki. Można przypuszczać, że połączenie intensywnych właściwości fotoluminescencyjnych i koniugacji z biomolekułami pozwoli na wykrywanie in vitro anilidów o niskim stężeniu, biodetekcję, rozpuszczalnie i bioobrazowanie.Zabieg zademonstruje Klaudia Kvakova, moja doktorantka. Cytometria przepływowa zostanie zademonstrowana przez asystentkę naukową Alzbeta Magdolenovą. Część mikroskopową zademonstruje Vaclav Bocan, doktorant z Laboratorium Lenki Libusowej.Zacznij od dodania 7,8 miligrama kwasu tioktycznego w 60 mikrolitrach dwumolowego wodorotlenku sodu do 23,4 mililitra ultraczystej wody i mieszania mieszaniny aż do całkowitego rozpuszczenia. Następnie dodać 10,2 mikrolitra wodoru tetrachlorauranu do roztworu i po 15 minutach dodać 480 mikrolitrów

synthesis-near-infrared-emitting-gold-nanoclusters-for-biological

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

Zsyntetyzowaliśmy złote nanogwiazdy o kształcie gwiazdy, wykorzystując metodę wzrostu wspomaganego srebrnymi zarodkami. Średnica nanogwiazd wynosi od 200 do 300 nm, a liczba ramion waha się od 7 do 10. Nanocząstki wykazują szeroki mod powierzchniowego rezonansu plazmonowego z maksimum w bliskiej podczerwieni.

Synteza nanogwiazd złota metodą wzrostu sterowanego srebrnymi nasionami

Tutaj opisujemy protokół syntezy magneto-plazmonicznych nanocząstek o silnym momencie magnetycznym i silnej absorbancji bliskiej podczerwieni (NIR). Protokół obejmuje również koniugację przeciwciał z nanocząstkami za pomocą ugrupowania Fc do różnych zastosowań biomedycznych, które wymagają specyficznego celowania molekularnego.

Synteza immunoukierunkowanych magnetoplazmonicznych nanoklastrów

Ten protokół opisuje, jak wykorzystać przejściowe ogrzewanie związane z optyczną absorpcją nanoprętów złota do stymulowania różnicowania i wewnątrzkomórkowej aktywności wapnia w komórkach neuronalnych. Wyniki te potencjalnie otwierają nowe zastosowania w protezach neuronalnych i podstawowych badaniach w neurobiologii.

Stymulacja optyczna komórek neuronalnych wspomagana złotem nanoprętami

Przedstawiono protokół badań przesiewowych leków małocząsteczkowych oparty na syntezie in-situ ultramałych fluorescencyjnych nanoklastrów złota (Au NCs) przy użyciu białka obciążonego lekiem jako matrycy. Metoda ta jest prosta do określenia powinowactwa wiązania leków z białkiem docelowym za pomocą widzialnego sygnału fluorescencyjnego emitowanego z matrycami białkowymi Au NC.

Szybka i ilościowa metoda fluorymetryczna do badań przesiewowych leków małocząsteczkowych ukierunkowanych na białka

Opisujemy prostą metodę wytwarzania wysoce stabilnych oligomerycznych klastrów nanocząstek złota poprzez redukcję kwasu chloroaurowego (HAuCl4) tiocyjanianem sodu (NaSCN). Oligoklastry mają wąski rozkład wielkości i mogą być produkowane w szerokim zakresie rozmiarów i powłok powierzchniowych.

Prosta metoda kontrolowanej wielkości syntezy stabilnych oligomerycznych klastrów nanocząstek złota w warunkach otoczenia

Ten artykuł opisuje protokół syntezy nanoprętów złota, oparty na użyciu hydrochinonu jako środka redukującego, a także różne mechanizmy kontroli ich wielkości i proporcji.

Synteza nanoprętów złota oparta na hydrochinonach

W tej pracy przedstawiono protokół wzmacniania sygnału biodetekcji opartej na nanosondach. Protokół opiera się na redukcji kwasu chloroaurowego na powierzchnię istniejących nanosond, które składają się z nanocząstek złota, srebra, krzemionki lub tlenku żelaza.

Szybkie wzmocnienie sygnału nanosondy poprzez syntezę nanocząstek złota in situ

Przedstawiono protokoły do badania wiązania kationów złota (Au(III)) z różnymi konformacjami albuminy surowicy bydlęcej (BSA), jak również do charakteryzowania zależnej od konformacji unikalnej fluorescencji BSA-Au.

Tworzenie luminoforów w różnych konformacjach albuminy surowicy bydlęcej przez wiązanie złota(III)

Przedstawiono protokół syntezy nanocząstek złota o średnicy ~12 nm (nanocząstek Au) w rozpuszczalniku organicznym. Nanocząstki złota są pokryte ligandami oleiloaminy, aby zapobiec aglomeracji. Nanocząstki złota są rozpuszczalne w rozpuszczalnikach organicznych, takich jak toluen.

Synteza nanocząstek złota

Ten artykuł przedstawia integrację modułu spektralnego ogniskowania i lasera impulsowego o podwójnym wyjściu, umożliwiającego szybkie obrazowanie hiperspektralne nanocząsteczek złota i komórek rakowych. Praca ta ma na celu zademonstrowanie szczegółów multimodalnych nieliniowych technik optycznych na standardowym laserowym mikroskopie skaningowym.

Obrazowanie biomolekularne wychwytu komórkowego nanocząstek przy użyciu multimodalnej nieliniowej mikroskopii optycznej

Obecny protokół opisuje technologię znakowania za pomocą klonowalnego mikroskopu elektronowego do wykrywania białek znakowanych metalotioneiną w komórkach za pomocą nowatorskiej techniki syntezy nanocząstek złota opartej na mechanizmie tłumienia autonukleacji.

Bezpośrednia synteza widocznych dla EM-widocznych nanocząstek złota w komórkach do analizy lokalizacji białek z dobrze zachowaną ultrastrukturą

Poznaj metodę syntezy funkcjonalizowanych nanoklastrów złota emitujących promieniowanie bliskiej podczerwieni do zastosowań biologicznych. Technika umożliwia wykrywanie w komórkach HeLa przy użyciu cytometrii przepływowej i mikroskopii konfokalnej.

Synteza nanoklastrów złota emitujących promieniowanie bliskiej podczerwieni do zastosowań biologicznych

Przeglądaj więcej filmów