Name: Komórki progenitorowe naczyń wieńcowych i rozpuszczalne biomarkery w rokowaniu sercowo-naczyniowym po angioplastyce wieńcowej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: Poznaj metodę oceny ryzyka zdarzeń sercowo-naczyniowych po angioplastyce wieńcowej przy użyciu komórek progenitorowych i biomarkerów rozpuszczalnych. Technika ta wspiera stratyfikację ryzyka u pacjentów z chorobą wieńcową.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy dziękują za wsparcie Programu Instytucjonalnego E015; oraz Fondo Sectorial FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Ten protokół spełnia wytyczne instytucjonalne Komisji Etyki ds. Badań na Ludziach.
1. Koronarografia, ultradźwięki i pobieranie próbek krwi
<ol>
	<li>Poproś o podstawowe informacje kliniczne i demograficzne przed interwencją wieńcową. Zbierz dane osoby: wiek, płeć, aktualne palenie tytoniu, wskaźnik masy ciała (BMI), wysokie ciśnienie krwi, dyslipidemię, cukrzycę, przyjmowane leki oraz wskazania do aktualnej koronarografii.</li>
	<li>Wykonaj koronarografię poprzez cewnikowanie serca przy użyciu dostępu promieniowego. Zabieg ten powinien być wykonywany pod przewodnikiem fluoroskopii w gabinecie hemodynamicznym przez biegłych kardiologów. 
	UWAGA: Zidentyfikuj naczynia nadające się do oceny. W niniejszym badaniu naczynia podlegające ocenie zdefiniowano jako tętnice o odcinkach większych niż 1,5 mm i zwężeniu światła powyżej 50%.</li>
	<li>Przesuń wewnątrznaczyniowy cewnik ultrasonograficzny do obszaru zainteresowania i zarejestruj obrazy. Użyj odpowiedniego oprogramowania, aby zlokalizować i zmierzyć najmniejszy obszar świetlny.</li>
	<li>Użyj cewnika wieńcowego, aby pobrać 10 ml krwi z miejsca znajdującego się najbliżej blaszki miażdżycowej.</li>
	<li>Po wypisaniu pacjenta ze szpitala należy zaplanować okresowe oceny medyczne w celu sprawdzenia punktów końcowych badania. Jeśli kontakt telefoniczny nie jest możliwy lub wizyta lekarska opóźnia się o więcej niż 2 miesiące, należy zwrócić się do upoważnionej osoby (wcześniej wyznaczonej) w celu weryfikacji punktów końcowych badania. 
	UWAGA: Rozważ którykolwiek z następujących MACE: 1) zgon z przyczyn sercowo-naczyniowych, 2) nowy zawał mięśnia sercowego, 3) niestabilna dławica piersiowa powodująca nieplanowaną wizytę lekarską w ciągu 24 godzin, 4) restenoza stentu wykazana przez koronarografię, 5) epizody niewyrównanej niewydolności serca wymagające pomocy klinicznej.</li>
</ol>
2. Wyznaczanie krążących MPC (<silna klasa="xfig">Rysunek 2)
<ol>
	<li>Przetwarzaj krew w ciągu 1 godziny od pobrania. Przenieść 6 ml pobranej krwi do stożkowej probówki o pojemności 15 ml i rozcieńczyć w stosunku 1:1 (v/v) 1x solą fizjologiczną buforowaną fosforanem (PBS), pH = 7,4.</li>
	<li>Dodaj 2 ml pożywki o gradiencie gęstości do trzech probówek. Ostrożnie przenieść trzy równe objętości podwielokrotności rozcieńczonej krwi do każdej probówki zawierającej pożywkę o gradiencie gęstości. 
	UWAGA: Całkowita objętość pożywki o gradiencie gęstości i rozcieńczonej krwi nie powinna przekraczać trzech czwartych maksymalnej pojemności probówki.</li>
	<li>Wirować w temperaturze 1 800 x g, 4 °C przez 30 min. Przenieść pasmo na granicy warstw do nowej probówki. Dodać 2 ml PBS i odwirować w temperaturze 1 800 x g, 4 °C przez 6 min. Granulka będzie zawierała MPC.</li>
	<li>Umyj pellet kilka razy. Odessać poprzedni roztwór i delikatnie zawiesić osad komórkowy w świeżym PBS. Przy kolejnych płukaniach odwirować w temperaturze 1 800 x g, 4 °C przez 2 min. Powtórz proces 6 razy.</li>
	<li>Zawiesić osad komórkowy w 1 ml PBS. Zmieszać 20 μl zawiesiny komórek z 0,4% błękitem trypanowym, rozcieńczonym w stosunku 1:1 (v/v). Nałóż kroplę na hemocytometr i policz niebarwione komórki pod mikroskopem świetlnym.</li>
	<li>Przejdź do określenia MPC. Oznaczyć 5 ml probówek do cytometrii przepływowej i podzielić na porcje 1 x 106 komórek na probówkę. Przygotować odpowiednie przeciwciała kontrolne dopasowane do izotypu. Odwirować w temperaturze 1 800 x g, 4 °C przez 6 minut i odrzucić supernatant.</li>
	<li>Dodać pierwszorzędowe przeciwciało rozcieńczone w 100 μl roztworu do inkubacji przeciwciał składającego się z 1x PBS (pH = 7,4), 2 mM kwasu etylenodiaminotetraoctowego (EDTA) i 0,05% albuminy surowicy bydlęcej (BSA). Zawiesić na 10 s i inkubować przez 20 minut w temperaturze 4 °C, w stanie ochrony przed światłem. Na tym etapie protokół można wstrzymać, wiążąc limfocyty w 4% paraformaldehydzie w PBS i przechowując próbki do 24 godzin w temperaturze 4 °C. 
	UWAGA: Końcowe stężenia pierwszorzędowych przeciwciał stosowanych w niniejszym protokole to CD45 1:50, CD34 1:20, KDR 1:50, CD184 1:20, CD133 1:50.</li>
	<li>Odwirować w temperaturze 1 800 x g, 4 °C przez 2 minuty i odrzucić supernatant. Zawiesić w 500 μL 1x PBS (pH = 7,4), 2 mM EDTA.</li>
	<li>Wykonaj analizę cytometrii przepływowej. Użyj przeciwciał kontrolnych dopasowanych do izotypu, aby ustawić barwienie tła. Następnie wybierz limfocyty rozprzestrzeniające się na powierzchni FSC/SSC, starając się wykluczyć resztkowe granulocyty, szczątki komórkowe i inne cząstki, które zwykle znajdują się w dolnym, lewym rozmieszczeniu na wykresie. Taki rozkład jest uważany za 100%.</li>
	<li>Użyj bramki zawierającej dużą liczbę komórek o wspólnym immunofenotypie CD45+ i CD34+. W przypadku podwójnie dodatnich immunofenotypów należy użyć bramki wcześniej identyfikującej CD45 +, CD34 + z dodatkiem KDR (VEGFR-2) +, CD133 + lub CD184 +. Zidentyfikuj subpopulacje MPC na podstawie ich specyficznych markerów powierzchni komórek. Raportuj jako procent zdarzeń z bramką.</li>
	<li>Zidentyfikuj główne subpopulacje MPC. W niniejszym badaniu głównymi immunofenotypami były: CD45+CD34+CD133+, CD45+CD34+CD184+, CD45+CD34+CD133+CD184+, CD45+CD34+KDR+, CD45+CD34+KDR+CD133+ oraz CD45+CD34+KDR+CD184. 
UWAGA: Stosowane markery powierzchniowe komórek to CD45 (limfocyty), CD34 (komórki śródbłonka i/lub naczyń), KDR (VEGFR-2, marker błonowy komórek śródbłonka), CD133 (śródbłonkowe komórki progenitorowe) i CD184 (hematopoetyczne komórki macierzyste i komórki śródbłonka).</li>
</ol>
3. Oznaczanie biomarkerów rozpuszczalnych w osoczu
<ol>
	<li>Użyj testu immunoenzymatycznego (ELISA), aby określić stężenie SICAM-1 i MMP-9 (<klasa silna = "xfig">Rysunek 3, górny wiersz).
	<ol>
		<li>Odwirować próbki krwi w temperaturze pokojowej 3 000 x g przez 5 minut i zebrać osocze.</li>
		<li>Oznacz wzorce, probówki na próbki i probówki kontrolne. Zrównoważyć wstępnie powlekane studzienki na płytce testowej, przemłukując 2x buforem płuczącym dostarczonym w zestawie ELISA.</li>
		<li>Przenieś wzorce, próbki i kontrole do studni. Uszczelnić i inkubować w temperaturze 37 °C przez 90 min. 
		UWAGA: Nie pozwól, aby studzienki całkowicie wyschły.</li>
		<li>Odrzucić zawartość i dodać przeciwciało wykrywające biotynę. Uszczelnić i inkubować w temperaturze 37 °C przez 60 minut.</li>
		<li>Wyrzucić zawartość i przemyć 3 razy. Uszczelnić płytkę nazębną i inkubować sekwencyjnie z roztworem roboczym streptawidyny, a następnie substratem tetrametylobenzydyny w temperaturze 37 °C przez 30 minut, chronionym przed światłem. Umyć 3x między inkubacjami. Gdy kolor się rozwinie, dodaj roztwór zatrzymujący i odczytaj absorbancję gęstości optycznej w czytniku ELISA na mikropłytce.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Użyj immunomagnetycznego testu multipleksowania, aby określić stężenie czynnika martwicy nowotworu alfa (TNFα) i interleukiny 1 beta (IL-1β) (<silna klasa = "xfig">Rysunek 3, dolny wiersz).
	<ol>
		<li>Oznacz wzorce, probówki na próbki i probówki kontrolne.</li>
		<li>Wirować fiolki z kulkami magnetycznymi przez 30 sekund. Przenieść zawiesinę kulek do probówek o odpowiedniej wielkości, a następnie do studzienek na płytce do multipleksowania. Okresowe wirowanie pozwala uniknąć wytrącania się kulek.</li>
		<li>Bezpiecznie włóż ręczną magnetyczną podkładkę do płyt. Odczekaj 2 minuty, aż koraliki zgromadzą się na dnie każdej studzienki i szybko odwróć zarówno ręczną magnetyczną podkładkę do płyt, jak i zespół płyt, nad zlewem lub pojemnikiem na odpady. Pamiętaj, aby użyć ręcznej magnetycznej podkładki do płyt, aby utrzymać koraliki wewnątrz studzienek.</li>
		<li>Dodaj 150 μl buforu do płukania do każdej studzienki i odczekaj 30 sekund, aby kulki zgromadziły się na dnie. Odrzucić zawartość jak w kroku 3.2.3. Następnie dodaj 25 μl uniwersalnego buforu testowego (dostarczonego w zestawie), a następnie 25 μl przygotowanych wzorców, próbek i kontroli.</li>
		<li>Uszczelnić płytkę i inkubować przez co najmniej 60 minut w temperaturze pokojowej, chronionej przed światłem, z ciągłym wytrząsaniem przy prędkości 500 obr./min. Alternatywnie, inkubować przez noc w temperaturze 4 °C, w osłonie przed światłem, z ciągłym wytrząsaniem przy 500 obr./min, jeśli to możliwe.</li>
		<li>Przemyć 2x dodając 150 μL buforu do płukania i odczekać 30 sekund. Wyrzuć zawartość, wkładając ręczną magnetyczną podkładkę do płyt. Odczekaj 2 minuty i odwróć nad zlewem lub pojemnikiem na odpady.</li>
		<li>Inkubować sekwencyjnie z 25 μl mieszaniny przeciwciał wykrywających, a następnie z 25 μl roztworu streptawidyny-PE w temperaturze pokojowej przez 30 minut, szczelnie zamknięty i chroniony przed światłem, ze stałym wytrząsaniem przy 500 obr./min. Przemyć 2x między inkubacjami, jak opisano w kroku 3.2.6.</li>
		<li>Uzyskaj odczyty. Dodać 120 μl buforu odczytującego. Uszczelnić płytkę i inkubować przez 5 minut w temperaturze pokojowej, chronionej przed światłem, ze stałym wstrząsaniem przy 500 obr./min. Uruchom odczyt na czytniku testów multipleksowych. Dostosuj parametry odczytu do każdego analitu.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Cassar, A., Holmes, D. R. Jr, Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+coronary+artery+disease%3A+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clinic+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li>
<li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study%3A+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li>
<li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+progenitor+cells%3A+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Science+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li>
<li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li>
<li>Tomulić, V., Gobić, D., Lulić, D., Židan, D., Zaputović, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon%2C+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Hypotheses%22%5BJournal%5D)">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li>
<li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+sinus+blood+sampling%3A+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment%3F%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li>
<li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li>
<li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass%5BTitle%5D)+AND+%22American+Society+for+Artificial+Internal+Organs+Journal%22%5BJournal%5D)">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li>
<li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy%3A+the+BIOCRT+study%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Rhythm%22%5BJournal%5D)">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li>
<li>Suárez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li>
<li>Suárez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline%2C+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Angiology+Open+Access%22%5BJournal%5D)">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01(2019).</li>
<li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790(2010).</li>
<li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li>
<li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiovascular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li>
<li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Pobranie krwi z chorej tętnicy wieńcowej może być trudne. Czasami tętnica wieńcowa jest ledwo dostępna. W takim przypadku alternatywą może być pobranie próbki z zatoki żylnej. Przeprowadziliśmy testy walidacyjne porównujące biomarkery krążące w tętnicy wieńcowej i zatoce żylnej, bez istotnych różnic. Jednak wydajność krążących biomarkerów została zwalidowana tylko w przypadku pobierania próbek naczyń wieńcowych. W związku z tym wydajność biomarkerów uzyskanych z zatoki żylnej pozostaje do zbadania.
<p class="jove_con...

Angioplastyka wieńcowa i stentowanie stanowią procedurę ratunkową dla pacjentów z chorobą wieńcową (CAD). Jednak poważne niepożądane zdarzenia sercowo-naczyniowe (MACE), w tym zgon z przyczyn sercowo-naczyniowych, zawał mięśnia sercowego, restenoza wieńcowa oraz epizody dławicy piersiowej lub dekompensacji niewydolności serca, mogą wystąpić kilka miesięcy po interwencji wieńcowej, powodując nieplanowane wizyty w szpitalu. MACE są powszechne na całym świecie, a ich śmiertelność morbi jest wysoka1.
Uszkodzenie niedokrwienne naczyń wieńcowych wywołuje wczesną reakcję naczyniową i mechanizmy naprawcze obejmujące mobilizację MPC ze względu na ich zdolność do różnicowania i/lub potencjał angio-reparacyjny, a także produkcję rozpuszczalnych cząsteczek, takich jak międzykomórkowe cząsteczki adhezyjne (ICAM), metaloproteinazy macierzy (MMP) i reaktywne formy tlenu, odzwierciedlające adhezję komórek, przebudowę tkanek i stres oksydacyjny. Chociaż wewnętrzne cechy naczyniowe, takie jak charakterystyka blaszki miażdżycowej i złożoność tętnic wieńcowych, zostały wykorzystane do przewidywania MACE, niektóre badania sugerują, że biomarkery związane z mechanizmami uszkodzenia i naprawy zachodzącymi w śródbłonku wieńcowym mogą być bardzo przydatne do wczesnej identyfikacji i prognozowania zdarzeń sercowo-naczyniowych u pacjentów z CAD poddanych angioplastyce wieńcowej2, 3,4,5.
Ciągłe zainteresowanie zrozumieniem mechanizmów leżących u podstaw uszkodzeń i naprawy CAD zmotywowało badaczy do zbadania wewnątrzwieńcowych biomarkerów krążących, ponieważ pobieranie próbek wieńcowych lepiej odzwierciedla uszkodzenia i naprawę naczyń krwionośnych6. Jednak charakterystyka biomarkerów wieńcowych w badaniach na ludziach była rzadka7,8,9. Dlatego celem niniejszego badania było opisanie metody określania ilości krążących w naczyniach wieńcowych MPC i rozpuszczalnych cząsteczek, odzwierciedlających zarówno uszkodzenie naczyń krwionośnych, jak i naprawę, oraz wykazanie, czy te biomarkery są związane z MACE i rokowaniem klinicznym pacjentów z CAD, którzy przeszli angioplastykę wieńcową. Metoda ta opiera się na wykorzystaniu krążących w naczyniach krwionośnych MPC i rozpuszczalnych cząsteczek otrzymanych przez pobieranie próbek z miejsc znajdujących się najbliżej uszkodzenia naczynia. Może być również przydatny w badaniach klinicznych dotyczących niedokrwienia kończyn dolnych, udaru, zapalenia naczyń, zakrzepicy żylnej i innych urazów związanych z uszkodzeniem i naprawą naczyń krwionośnych.

<table><tbody><tr><td>BSA</td><td>Roche</td><td>10735086001</td><td>albuminę surowicy bydlęcej (BSA) jako środek buforujący, stabilizator, wzorzec i do mieszania.</td></tr><tr><td>Kulki kalibracyjne</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-093-607</td><td>Kulki kalibracyjne MACQuant są dostarczane w roztworze wodnym zawierającym 0,05% azydku sodu. 3,5 ml na maksymalnie 100 testów</td></tr><tr><td>CD133/1 (AC133)-PE</td><td>Milteny Biotec / MACS#</td><td>130-080-801</td><td>Przeciwciało sprzężone z R-fikoerytryną w buforze PBS/EDTA</td>CD184</tr><tr><td>(CXCR4)-PE-VIO770</td><td>Miltenyi Biotec / MACS#</td><td>130-103-798</td><td>Monoklonalne, rekombinowane izotypowo ludzkie IgG1, sprzężone</td></tr><tr><td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td><td>Miltenyi Biotec / MACS#</td><td>130-093-601</td><td>Przeciwciało sprzężone z R-fikoerytryną w buforze PBS/</td></tr><tr><td>EDTA CD34-FITC</td><td>Miltenyi Biotec / MACS#</td><td>130-081-001</td><td>Klon przeciwciała monoklonalnego AC136 wykrywa epitop klasy III CD34</td></tr><tr><td>CD45- VioBlue</td><td>Miltenyi Biotec / MACS#</td><td>130-092-880</td><td>Przeciwciało monoklonalne CD45, ludzkie sprzężone</td></tr><tr><td>Probówki stożkowe</td><td>Thermo SCIENTIFIC</td><td>#339651</td><td>15ml stożkowe probówki wirówkowe</td></tr><tr><td>Probówki cytometryczne</td><td>FALCON Corning Marka</td><td>#352052</td><td>5 ml probówka z okrągłym dnem z polistyrenu. Styl 12x75. Sterylny.</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>BIO-RAD</td><td>#161-0729</td><td>Metale ciężkie, (jako Pb) < 10ppm, Fe < 0,01%, As < 1ppm, Nierozpuszczalne < 0,005%</td></tr><tr><td>Ulepszony Neubauer</td><td>Bez marki</td><td>Bez numeru katalogowego</td><td>Hemocytometr do zliczania komórek. (zakres 0,1000 mm, 0,0025 mm2)</td></tr><tr><td>Probówki do pobierania krwi K2 EDTA</td><td>BD Vacutainer</td><td>#367863</td><td>Liliowa plastikowa rurka próżniowa (K2E) 10,8 mg, 6 mL.</td></tr><tr><td>Lymphoprep</td><td>Stemcell Technologies</td><td>01-63-12-002-A</td><td>Sterylne i sprawdzone na obecność endotoksyn. Gęstość: 1,077 plusmn; 0,001 g / ml</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td></td>#SZBF0920V <td>Utrwalanie próbek biologicznych, (proszek, 95%)</td></tr><tr><td>Transfer pipetą 1,3mL</td><td>CRM Globe</td><td>PF1016, PF1015</td><td>Pipeta transferowa to narzędzie, które ułatwia przenoszenie cieczy z większą dokładnością.</td></tr><tr><td>Probówki</td><td>KIMBLE CHASE</td><td>45060 13100</td><td>Probówki żaroodporne. ROZMIAR/NAKRĘTKA 13 x 100 mm</td></tr></tbody></table>

komórki progenitorowe naczyń wieńcowych i rozpuszczalne biomarkery w rokowaniu sercowo-naczyniowym po angioplastyce wieńcowej

Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

Poważne niepożądane zdarzenia sercowo-naczyniowe (MACE) negatywnie wpływają na rokowania sercowo-naczyniowe pacjentów poddawanych angioplastyce wieńcowej z powodu uszkodzenia niedokrwiennego naczyń wieńcowych. Stopień uszkodzenia naczyń wieńcowych i mechanizmy naprawy naczyń krwionośnych są czynnikami wpływającymi na przyszły rozwój MACE. Wewnętrzne cechy naczyniowe, takie jak charakterystyka blaszki miażdżycowej i złożoność tętnic wieńcowych, dostarczyły informacji prognostycznych dla MACE. Jednak stosowanie biomarkerów krążących wewnątrzwieńcowych jest postulowane jako wygodna metoda wczesnej identyfikacji i prognozowania MACE, ponieważ lepiej odzwierciedlają one dynamiczne mechanizmy związane z uszkodzeniem i naprawą naczyń wieńcowych. Określenie biomarkerów krążących naczyń wieńcowych podczas angioplastyki, takich jak liczba subpopulacji jednojądrzastych komórek progenitorowych (MPC), a także stężenie rozpuszczalnych cząsteczek odzwierciedlających stan zapalny, adhezję i naprawę komórek, pozwala na ocenę przyszłego rozwoju i rokowania MACE 6 miesięcy po angioplastyce wieńcowej. Metoda ta charakteryzuje się charakterem translacyjnym i lepszą wydajnością niż biomarkery krążące we krwi obwodowej w zakresie przewidywania MACE i jej wpływu na rokowanie sercowo-naczyniowe, co może być stosowane do stratyfikacji ryzyka pacjentów z chorobą wieńcową poddawanych angioplastyce.

Krew tętnicza wieńcowa, z zatoki wieńcowej oraz krew obwodowa zostały pobrane od 52 pacjentów poddanych angiografii wieńcowej (Rysunek 1), u których stwierdzono wysoką częstość występowania nadciśnienia tętniczego i dyslipidemii. Podczas kontroli klinicznej, 6 miesięcy po angiografii wieńcowej, wystąpiło 1 (21,1%) MACE: zgon (n = 1), dławica piersiowa wymagająca hospitalizacji (n = 6), zawał mięśnia sercowego (n = 2) i/lub objawy niewydolności serca (n = 4).<...

Na rozwój poważnych niekorzystnych zdarzeń sercowo-naczyniowych, które wpływają na rokowanie sercowo-naczyniowe po angioplastyce wieńcowej, wpływa zakres uszkodzenia naczyń wieńcowych i naprawy naczyń krwionośnych. Zastosowanie nowych biomarkerów wieńcowych i rozpuszczalnych, reagujących na uszkodzenia i naprawę naczyń krwionośnych, jest przydatne do przewidywania rozwoju MACE i rokowania.

Komórki progenitorowe naczyń wieńcowych i rozpuszczalne biomarkery w rokowaniu sercowo-naczyniowym po angioplastyce wieńcowej

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

Chociaż angioplastyka pomaga pacjentom z chorobą wieńcową, po zabiegu nadal mogą wystąpić zdarzenia sercowo-naczyniowe. Ponieważ MPC i rozpuszczalne cząsteczki są otrzymywane z krążenia wieńcowego, mogą być skorelowane ze stopniem uszkodzenia i naprawy naczyń krwionośnych. Poziomy MPC w naczyniach wieńcowych i rozpuszczalnych mediatorów można zatem wykorzystać do oceny zdarzeń sercowo-naczyniowych i rokowania u pacjentów z chorobą wieńcową poddawanych angioplastyce wieńcowej.MPC i cząsteczki rozpuszczalne mogą być również wykorzystywane do oceny powikłań i rokowań, które występują w różnych warunkach niedokrwiennych, takich jak nawracający udar niedokrwienny kończyn. Procedurę zademonstrują Eduardo Vera-Gomez i Alejandro Hernandez-Patricio, technicy laboratoryjni, oraz Karen De La Vega-Moreno i Carlos Zamora-Aleman, studenci. Zademonstrują również Gabriela Alexandra Dominguez-Perez, studentka studiów magisterskich, Alberto Melchor-Lopez, doktorant i Mario Antonio Tellez-Gonzalez, współpracownik magistra nauk ścisłych.W ciągu godziny od pobrania przenieś sześć mililitrów pobranej próbki krwi do stożkowej probówki o pojemności 15 mililitrów i rozcieńcz krew w stosunku jeden do jedneg

coronary-progenitor-cells-soluble-biomarkers-cardiovascular-prognosis

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ludzka tkanka serca zawiera multipotencjalne okołonaczyniowe populacje komórek prekursorowych, które mogą być odpowiednie do regeneracji mięśnia sercowego. Opisana technika pozwala na jednoczesną izolację i oczyszczenie dwóch multipotencjalnych populacji komórek zrębu związanych z natywnymi naczyniami krwionośnymi, tj. perycytów CD146+CD34- i komórek przybyszowych CD34+CD146-, z ludzkiego mięśnia sercowego.

Izolacja okołonaczyniowych multipotencjalnych populacji komórek prekursorowych z ludzkiej tkanki serca

Prezentujemy trzy nowatorskie i bardziej efektywne protokoły różnicowania ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych na kardiomiocyty, komórki śródbłonka i komórki mięśni gładkich oraz metodę dostarczania, która poprawia wszczepianie przeszczepionych komórek poprzez połączenie iniekcji komórek z dostarczaniem cytokin za pośrednictwem łatki.

Pluripotencjalne komórki serca pochodzące z komórek macierzystych do naprawy mięśnia sercowego

Śródbłonkowe komórki progenitorowe (EPC) są kluczowe w neowaskularyzacji niedokrwionych tkanek. Metoda ta opisuje izolację ludzkich EPC z krwi obwodowej, a także identyfikację ich potencjału migracyjnego w próbkach surowicy pacjentów kardiochirurgicznych.

Izolacja śródbłonkowych komórek progenitorowych od zdrowych ochotników i ich potencjał migracyjny pod wpływem próbek surowicy po operacji kardiochirurgicznej

Ten protokół ilustruje bezpieczną i skuteczną procedurę modyfikacji krwiotwórczych komórek macierzystych CD133+. Zaprezentowane niewirusowe, oparte na polipleksie magnetycznym podejście może stanowić podstawę do optymalizacji efektów terapeutycznych komórek macierzystych, a także do monitorowania podawanego produktu komórkowego za pomocą rezonansu magnetycznego.

Protokół transferu mikroRNA do dorosłych hematopoetycznych komórek macierzystych pochodzących ze szpiku kostnego w celu umożliwienia inżynierii komórkowej w połączeniu z celowaniem magnetycznym

Tutaj prezentujemy solidną metodę przeprogramowania pierwotnych fibroblastów embrionalnych w funkcjonalne kardiomiocyty poprzez nadekspresję GATA4, Hand2, Mef2c, Tbx5, miR-1 i miR-133 (GHMT2m) wraz z hamowaniem sygnalizacji TGF-β. Nasz protokół generuje bicie kardiomiocytów już po 7 dniach od transdukcji z wydajnością do 60%.

Tłumienie sygnalizacji pro-fibrotycznej nasila przeprogramowanie fibroblastów embrionalnych myszy w indukowane kardiomiocyty za pośrednictwem czynników

Ten protokół opisuje technikę różnicowania śródbłonka dla komórek progenitorowych serca. W szczególności koncentruje się na tym, jak stężenie surowicy i gęstość wysiewu komórek wpływają na potencjał różnicowania śródbłonka.

Indukcja różnicowania śródbłonka w komórkach progenitorowych serca w warunkach niskiej surowicy

Modele angiogenezy wieńcowej in vitro mogą być wykorzystane do odkrycia komórkowych i molekularnych mechanizmów angiogenezy wieńcowej. Hodowle eksplantatów in vitro tkanek zatok żylnych i wsierdzia wykazują silny wzrost w odpowiedzi na VEGF-A i wykazują podobny wzór ekspresji COUP-TFII jak in vivo.

Model angiogenezy wieńcowej in vitro

Amputacja kończyny dolnej może wystąpić nawet po angioplastyce niedrożnych naczyń w krytycznym niedokrwieniu kończyn (CLI). Jednojądrzaste komórki progenitorowe (MPC) odzwierciedlają naprawę naczyń krwionośnych. Niniejszy protokół opisuje kwantyfikację MPC z krążenia zbliżonego do angioplastyki oraz jej związek z dysfunkcją śródbłonka i przewidywaniem amputacji kończyny dolnej.

Przewidywanie amputacji przy użyciu miejscowo krążących jednojądrzastych komórek progenitorowych u pacjentów leczonych angioplastyką z krytycznym niedokrwieniem kończyn

To badanie przedstawia chirurgiczny model przewlekłego niedokrwienia mięśnia sercowego spowodowanego postępującym zwężeniem tętnicy wieńcowej, skutkującym upośledzeniem funkcji serca bez zawału. Po niedokrwieniu zwierzęta przechodzą pomostowanie tętnic wieńcowych poza pompą z nasierdziowym umieszczeniem plastra kolagenowego obciążonego egzosomami pochodzącymi z komórek macierzystych. Ta terapia wspomagająca poprawia funkcję mięśnia sercowego i powrót do zdrowia.

Chirurgiczny model przewlekłego niedokrwienia mięśnia sercowego u świń leczony egzosomem z plastrem kolagenowym i pomostowaniem aortalno-wieńcowym poza pompą

Próbki tkanek po endarterektomii wieńcowej zostały przetworzone w celu wyizolowania pojedynczych jąder przy użyciu zoptymalizowanego protokołu dysocjacji. Integralność izolowanych jąder została zweryfikowana za pomocą trzech uzupełniających się podejść: barwienia trypanowym wykluczającym do oceny integralności błony, mikroskopii konfokalnej opartej na DAPI do potwierdzenia morfologii jądrowej oraz cytometrii przepływowej do ilościowej oceny wydajności i czystości jądrowej.

Izolacja pojedynczego jądra od tkanki po endarterektomii wieńcowej pacjentów poddanych przeszczepowi tętnic wieńcowych

Poznaj metodę oceny ryzyka zdarzeń sercowo-naczyniowych po angioplastyce wieńcowej przy użyciu komórek progenitorowych i biomarkerów rozpuszczalnych. Technika ta wspiera stratyfikację ryzyka u pacjentów z chorobą wieńcową.

Komórki progenitorowe naczyń wieńcowych i rozpuszczalne biomarkery w rokowaniu sercowo-naczyniowym po angioplastyce wieńcowej

Przeglądaj więcej filmów