Name: Model przewlekłego bólu po niedokrwieniu złożonego zespołu bólu regionalnego typu I u szczurów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-21T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: Poznaj model przewlekłego bólu po niedokrwieniu u szczurów do badania zespołu bólu regionalnego typu I. Ta metoda umożliwia ocenę nadwrażliwości mechanicznej i termicznej oraz obserwację zachowań nokiceptywnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ten projekt był sponsorowany przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (81873365 i 81603676), Zhejiang Provincial Natural Science Funds for Distinguished Young Scholars (LR17H270001) oraz fundusze badawcze z Chińskiego Uniwersytetu Medycznego Zhejiang (Q2019J01, 2018ZY37, 2018ZY19).

Protokoły dotyczące zwierząt zostały zatwierdzone przez Komitet Etyki Zwierząt Chińskiego Uniwersytetu Medycznego w Zhejiang.
1. Zwierzęta
<ol>
	<li>Pozyskaj samce szczurów Sprague-Dawley (SD) (280–320 g, w wieku 8-10 tygodni) z Centrum Zwierząt Laboratoryjnych w Szanghaju. Trzymaj zwierzęta w Centrum Zwierząt Laboratoryjnych Chińskiego Uniwersytetu Medycznego Zhejiang. Należy pamiętać, że warunki hodowli powinny obejmować 12 godzin/2 godziny cykli światła/ciemności i utrzymywać stałą temperaturę na poziomie 24 °C. Dostarczać wodę i pokarm ad libitum. Należy zauważyć, że w sumie w tym badaniu wykorzystano 48 szczurów. Jedna uwaga, w tym modelu musimy obserwować reakcję bólową podczas całego procesu. Jeśli stosuje się leki przeciwbólowe, nie możemy z powodzeniem ustalić modelu bólu. Po eksperymentach szczury są składane w ofierze.</li>
</ol>
2. Ustanowienie modelu CPIP
<ol>
	<li>Znieczulenie wszystkich szczurów (w tym grupy pozorowane i grupy modelowe CPIP) fenobarbitalem sodu (50 mg/kg, wstrzyknięcie dootrzewnowe [i.p.]). W razie potrzeby utrzymać znieczulenie do 20 mg/kg/h fenobarbitalu [i.p.]. Sprawdź odruchy każdego zwierzęcia, ściskając jego tylną łapę lub końcówkę ogona za pomocą kleszczy. Upewnij się, że szczury nie reagują przed ustanowieniem modelu. Umieść maść weterynaryjną na oczach, aby uniknąć wysuszenia podczas zabiegu. Umieścić znieczulone szczury na podgrzewanej podkładce utrzymywanej w temperaturze 37 °C w celu wykonania następującej procedury.</li>
	<li>Niedokrwienie i reperfuzja tylnej łapy
	<ol>
		<li>Nasmaruj prawą tylną łapę i kostkę glicerolem po znieczuleniu szczura.</li>
		<li>Wsuń O-ring z twardości nitrylu 70 o średnicy wewnętrznej 7/32" (5.5 mm) w większą stronę probówki Eppendorfa o pojemności 1.5 ml (z odciętą zatrzaskową nasadką przed użyciem). Ostrożnie włóż tylną łapę do pustej rurki Eppendorfa, aż dotrze do dna.</li>
		<li>Stopniowo przesuwaj O-ring z rurki na prawą tylną kończynę w pobliżu stawu skokowego i umieść na 3 godziny. Zastosuj ten sam zabieg do pozorowanej grupy szczurów, z wyjątkiem tego, że wokół kostki należy umieścić złamany O-ring, który jest odcięty i nie powinien wywoływać niedokrwienia.</li>
		<li>Odetnij O-ring 3 godziny po etapie niedokrwienia. Uważnie obserwuj szczura, aż odzyska wystarczającą przytomność, aby utrzymać leżący mostek. Należy pamiętać, że szczur, który otrzymał znieczulenie, nie powinien być umieszczany z powrotem w towarzystwie innych szczurów, dopóki w pełni nie wyzdrowieje.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Nocyfencyjne testy behawioralne
<ol>
	<li>Umieść szczura w przezroczystej komorze z pleksiglasu, która znajduje się na siatkowej podłodze. Przyzwyczaj szczura przez 0,5 godziny przed jakimikolwiek testami behawioralnymi.</li>
	<li>Mechaniczna allodynia
	<ol>
		<li>Do testu należy użyć filamentów von Freya (0,4, 0,6, 1,0, 2,0, 4,0, 6,0, 8,0, 15,0 i 26,0 g). Rozpocznij badanie od środkowego włókna (4,0 g). Przyłóż pionowo włókna do środkowej powierzchni podeszwowej tylnej łapy. Lekko przyłóż odpowiednią siłę, aby zgiąć filament przez maksymalnie 5 s. Nagłe cofnięcie tylnej łapy w odpowiedzi na bodźce jest uważane za zachowanie nocyfensywne. Przeprowadzaj mechaniczny test allodynii w dniach -3, -2, -1 i co drugi dzień do 13 dnia.</li>
		<li>Zastosuj metodę testowania góra-dół, aby przetestować próg. Zastosuj metodę Dixona do obliczania 50% progu wycofania łapy (PWT)13,14,15.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Hiperalgezja termiczna
	<ol>
		<li>Użyj metody Hargreavesa do zbadania hiperalgezji termicznej. Skieruj wiązkę światła emitowaną z żarówki (50 W) bezpośrednio na tylną łapę, aby zmierzyć opóźnienie wycofania łapy (PWL). Ustaw 20 s jako próg odcięcia, aby uniknąć nadmiernych obrażeń spowodowanych ogrzewaniem.</li>
		<li>Powtórz każdy test 3 razy w odstępach 5-minutowych dla każdej tylnej łapy. Weź średnią z tych trzech testów jako PWL każdego rat16. Test hiperalgezji termicznej przeprowadzaj w dniach -3, -2, -1 i co drugi dzień do 13 dnia.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Ostre zachowanie nocyfencyjne wywołane kapsaicyną
	<ol>
		<li>Przygotować roztwór podstawowy kapsaicyny (200 mM) przy użyciu dimetylosulfotlenku (DMSO) i dalej rozcieńczyć do 1:1000 w sterylnym roztworze soli fizjologicznej buforowanym fosforanami (PBS) do wstrzyknięcia tylnej łapy. Końcowe stężenie DMSO w PBS wynosi 0,1% (nośnik zawiera 0,1% DMSO tylko w PBS). Wstrzyknąć kapsaicynę lub nośnik do tylnej łapy (wstrzyknięcie dopodeszwowe) w objętości 50 μl za pomocą igły 30 G dołączonej do strzykawki o pojemności 1 ml.</li>
		<li>Rejestruj zachowanie nocyfensywne (tj. lizanie, gryzienie lub wzdryganie się łapy, w którą wstrzyknięto) za pomocą kamery wideo przez 10 minut zaraz po wstrzyknięciu, a następnie określ ilościowo, jak opisano wcześniej17,18,19.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Ocena obrzęku tylnej łapy: Oceń obrzęk tylnej łapy, mierząc wzrost średnicy łapy. Zmierz suwmiarką cyfrową i oblicz różnicę między wartością podstawową a wartością testową obserwowaną w różnych punktach czasowych. Oceń zmiany grubości łapy po 15 minutach, 24 godzinach, 48 godzinach i 72 godzinach od założenia modelu.</li>
</ol>

<ol><li>Goh, E. L., Chidambaram, S., Ma, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome%3A+a+recent+update%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%2C+Trauma%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome: a recent update.</a> Burns, Trauma. 5 (1), 2(2017).</li>
<li>Birklein, F., Ajit, S. K., Goebel, A., Rsgm, P., Sommer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome+-+phenotypic+characteristics+and+potential+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neurology%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome - phenotypic characteristics and potential biomarkers.</a> Nature Reviews Neurology. 14 (5), (2018).</li>
<li>Shim, H., Rose, J., Halle, S., Shekane, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome%3A+a+narrative+review+for+the+practising+clinician%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome: a narrative review for the practising clinician.</a> British Journal of Anaesthesia. , (2019).</li>
<li>Urits, I., Shen, A. H., Jones, M. R., Viswanath, O., Kaye, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+Regional+Pain+Syndrome%2C+Current+Concepts+and+Treatment+Options%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pain%2C+Headache+Reports%22%5BJournal%5D)">Complex Regional Pain Syndrome, Current Concepts and Treatment Options.</a> Current Pain, Headache Reports. 22 (2), 10(2018).</li>
<li>Helyes, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+complex+regional+pain+syndrome+to+mice+via+human+autoantibodies+is+mediated+by+interleukin-1-induced+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+National+Academy+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Transfer of complex regional pain syndrome to mice via human autoantibodies is mediated by interleukin-1-induced mechanisms.</a> Proceedings of National Academy Sciences of the United States of America. 116 (26), 13067-13076 (2019).</li>
<li>Coderre, T. J., Xanthos, D. N., Francis, L., Bennett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+post-ischemia+pain+%28CPIP%29%3A+a+novel+animal+model+of+complex+regional+pain+syndrome-Type+I+%28CRPS-I%3B+reflex+sympathetic+dystrophy%29+produced+by+prolonged+hindpaw+ischemia+and+reperfusion+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Chronic post-ischemia pain (CPIP): a novel animal model of complex regional pain syndrome-Type I (CRPS-I; reflex sympathetic dystrophy) produced by prolonged hindpaw ischemia and reperfusion in the rat.</a> Pain. 112 (1), 94-105 (2004).</li>
<li>Coderre, T. J., Bennett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hypothesis+for+the+cause+of+complex+regional+pain+syndrome-type+I+%28reflex+sympathetic+dystrophy%29%3A+pain+due+to+deep-tissue+microvascular+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Pain+Medicine%22%5BJournal%5D)">A hypothesis for the cause of complex regional pain syndrome-type I (reflex sympathetic dystrophy): pain due to deep-tissue microvascular pathology.</a> Pain Medicine. 11 (8), 1224-1238 (2010).</li>
<li>Klafke, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+nociceptive+phases+observed+in+a+rat+hind+paw+ischemia%2Freperfusion+model+depend+on+different+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archiv+European+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic nociceptive phases observed in a rat hind paw ischemia/reperfusion model depend on different mechanisms.</a> Pflugers Archiv European Journal of Physiology. 468 (2), 229-241 (2015).</li>
<li>Tang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+between+astrocytic+colony+stimulating+factor+and+its+receptor+on+microglia+mediates+central+sensitization+and+behavioral+hypersensitivity+in+chronic+post+ischemic+pain+model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behavioral+Immunology%22%5BJournal%5D)">Interaction between astrocytic colony stimulating factor and its receptor on microglia mediates central sensitization and behavioral hypersensitivity in chronic post ischemic pain model.</a> Brain Behavioral Immunology. 68, 248-260 (2018).</li>
<li>Kim, J. H., Kim, Y. C., Nahm, F. S., Lee, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Therapeutic+Effect+of+Vitamin+C+in+an+Animal+Model+of+Complex+Regional+Pain+Syndrome+Produced+by+Prolonged+Hindpaw+Ischemia-Reperfusion+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">The Therapeutic Effect of Vitamin C in an Animal Model of Complex Regional Pain Syndrome Produced by Prolonged Hindpaw Ischemia-Reperfusion in Rats.</a> International Journal of Medical Sciences. 14 (1), 97-101 (2017).</li>
<li>Yin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+profiling+of+dorsal+root+ganglia+in+a+rat+model+of+complex+regional+pain+syndrome+type-I+reveals+potential+mechanisms+involved+in+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pain+Research%22%5BJournal%5D)">Transcriptome profiling of dorsal root ganglia in a rat model of complex regional pain syndrome type-I reveals potential mechanisms involved in pain.</a> Journal of Pain Research. 12, 1201-1216 (2019).</li>
<li>Hu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+Channel+Contributes+to+the+Behavioral+Hypersensitivity+in+a+Rat+Model+of+Complex+Regional+Pain+Syndrome+Type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">TRPV1 Channel Contributes to the Behavioral Hypersensitivity in a Rat Model of Complex Regional Pain Syndrome Type 1.</a> Frontiers in Pharmacology. 10, 453(2019).</li>
<li>Dixon, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+analysis+of+experimental+observations%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pharmacology+and+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Efficient analysis of experimental observations.</a> Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 20, 441-462 (1980).</li>
<li>Chai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroacupuncture+Alleviates+Pain+Responses+and+Inflammation+in+a+Rat+Model+of+Acute+Gout+Arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Electroacupuncture Alleviates Pain Responses and Inflammation in a Rat Model of Acute Gout Arthritis.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2018, 2598975(2018).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li>
<li>Fang, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameter-specific+analgesic+effects+of+electroacupuncture+mediated+by+degree+of+regulation+TRPV1+and+P2X3+in+inflammatory+pain+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Parameter-specific analgesic effects of electroacupuncture mediated by degree of regulation TRPV1 and P2X3 in inflammatory pain in rats.</a> Life Sciences. 200, 69-80 (2018).</li>
<li>Tai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+Transient+Receptor+Potential+Cation+Channel+Member+A1+activation+in+the+irritation+and+pain+response+elicited+by+skin-lightening+reagent+hydroquinone%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Involvement of Transient Receptor Potential Cation Channel Member A1 activation in the irritation and pain response elicited by skin-lightening reagent hydroquinone.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7532(2017).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPM8+is+the+principal+mediator+of+menthol-induced+analgesia+of+acute+and+inflammatory+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">TRPM8 is the principal mediator of menthol-induced analgesia of acute and inflammatory pain.</a> Pain. 154 (10), 2169-2177 (2013).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidized+Phospholipid+OxPAPC+Activates+TRPA1+and+Contributes+to+Chronic+Inflammatory+Pain+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Oxidized Phospholipid OxPAPC Activates TRPA1 and Contributes to Chronic Inflammatory Pain in Mice.</a> PLoS One. 11 (11), 0165200(2016).</li>
<li>Terkelsen, A. J., Gierthmuhlen, J., Finnerup, N. B., Hojlund, A. P., Jensen, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+hypersensitivity+to+capsaicin%2C+thermal%2C+and+mechanical+stimuli+in+unilateral+complex+regional+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Bilateral hypersensitivity to capsaicin, thermal, and mechanical stimuli in unilateral complex regional pain syndrome.</a> Anesthesiology. 120 (5), 1225-1236 (2014).</li>
<li>Drummond, P. D., Morellini, N., Finch, P. M., Birklein, F., Knudsen, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome%3A+intradermal+injection+of+phenylephrine+evokes+pain+and+hyperalgesia+in+a+subgroup+of+patients+with+upregulated+alpha1-adrenoceptors+on+dermal+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome: intradermal injection of phenylephrine evokes pain and hyperalgesia in a subgroup of patients with upregulated alpha1-adrenoceptors on dermal nerves.</a> Pain. 159 (11), 2296-2305 (2018).</li>
<li>Minert, A., Gabay, E., Dominguez, C., Wiesenfeld-Hallin, Z., Devor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+pain+following+spinal+nerve+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Spontaneous pain following spinal nerve injury in mice.</a> Experimental Neurology. 206 (2), 220-230 (2007).</li>
<li>Kingery, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsaicin+sensitive+afferents+mediate+the+development+of+heat+hyperalgesia+and+hindpaw+edema+after+sciatic+section+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Capsaicin sensitive afferents mediate the development of heat hyperalgesia and hindpaw edema after sciatic section in rats.</a> Neuroscience Letters. 318 (1), 39-43 (2002).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+cannabinoid+receptor+2+attenuates+mechanical+allodynia+and+neuroinflammatory+responses+in+a+chronic+post-ischemic+pain+model+of+complex+regional+pain+syndrome+type+I+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Activation of cannabinoid receptor 2 attenuates mechanical allodynia and neuroinflammatory responses in a chronic post-ischemic pain model of complex regional pain syndrome type I in rats.</a> European Journal of Neuroscience. 44 (12), 3046-3055 (2016).</li>
<li>Coderre, T. J., Xanthos, D. N., Francis, L., Bennett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+post-ischemia+pain+%28CPIP%29%3A+a+novel+animal+model+of+complex+regional+pain+syndrome-type+I+%28CRPS-I%3B+reflex+sympathetic+dystrophy%29+produced+by+prolonged+hindpaw+ischemia+and+reperfusion+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Chronic post-ischemia pain (CPIP): a novel animal model of complex regional pain syndrome-type I (CRPS-I; reflex sympathetic dystrophy) produced by prolonged hindpaw ischemia and reperfusion in the rat.</a> Pain. 112 (1-2), 94-105 (2004).</li>
<li>Weissmann, R., Uziel, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+complex+regional+pain+syndrome%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Rheumatology+Online+Journal%22%5BJournal%5D)">Pediatric complex regional pain syndrome: a review.</a> Pediatric Rheumatology Online Journal. 14 (1), 29(2016).</li>
<li>Kim, H., Lee, C. H., Kim, S. H., Kim, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+complex+regional+pain+syndrome+in+Korea%3A+An+electronic+population+health+data+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of complex regional pain syndrome in Korea: An electronic population health data study.</a> PLoS One. 13 (6), 0198147(2018).</li>
<li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+complex+regional+pain+syndrome+type+I+%28CRPS-I%29+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pain+Research%22%5BJournal%5D)">Sex differences in complex regional pain syndrome type I (CRPS-I) in mice.</a> Journal of Pain Research. 10, 1811-1819 (2017).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów w związku z niniejszą pracą.

Protokół ten opisuje szczegółowe metody ustalania modelu CPIP szczura poprzez zastosowanie niedokrwienia/reperfuzji do tylnych kończyn szczurów. Polega na ocenie wyglądu kończyn tylnych, obrzęku, nadwrażliwości mechanicznej/termicznej i ostrych zachowań nocyfencyjnych w odpowiedzi na wstrzyknięcie kapsaicyny.
Niedokrwienie/reperfuzja kończyn jest częstym czynnikiem przyczyniającym się do CRPS-I u pacjentów12. W tym protokole opisano, jak ustanowić szczurzy model CPIP, k...

Complex regional pain syndrome (CRPS) odpowiada złożonym i przewlekłym objawom bólowym wynikającym ze złamań, urazów, operacji, niedokrwienia lub uszkodzenia nerwów1,2,3. CRPS jest podzielony na 2 podkategorie: CRPS typu I i typu II (CRPS-I i CRPS-II)4. Badania epidemiologiczne wykazały, że częstość występowania CRPS wynosiła około 1:20005. CRPS-I, który nie wykazuje oczywistego uszkodzenia nerwów, może powodować przewlekły ból i dramatycznie wpływa na jakość życia pacjentów. Obecnie dostępne metody leczenia wykazują niewystarczające efekty terapeutyczne. W związku z tym CRPS-I nadal pozostaje ważnym i wymagającym problemem klinicznym, którym należy się zająć.
Stworzenie przedklinicznego modelu zwierzęcego naśladującego CRPS-I jest kluczowe dla zbadania mechanizmów leżących u podstaw CRPS-I. Aby rozwiązać ten problem, Coderre i in. zaprojektowali model szczura, stosując przedłużone niedokrwienie i reperfuzję do kończyny tylnej, aby podsumować CRPS-I6. Wiadomo, że uszkodzenie niedokrwienne/reperfuzyjne jest jedną z głównych przyczyn CRPS-I7. Model CPIP u szczurów wykazuje wiele objawów podobnych do CRPS-I, które obejmują obrzęk kończyn tylnych i przekrwienie we wczesnym stadium po ustanowieniu modelu, a następnie utrzymującą się nadwrażliwość termiczną i mechaniczną6. Za pomocą tego modelu proponuje się, że centralne uwrażliwienie na ból, aktywacja obwodowego kanału TRPA1 i generowanie reaktywnych form tlenu itp. przyczyniają się do CRPS-I8,9,10. Niedawno udało nam się ustalić model szczura CPIP i przeprowadziliśmy sekwencjonowanie RNA zwojów korzenia grzbietowego (DRG), które unerwiają dotkniętą chorobą tylną łapę11. Odkryliśmy kilka potencjalnych mechanizmów, które mogą być zaangażowane w pośredniczenie w nadwrażliwości na ból CRPS-I11. Ponadto zidentyfikowaliśmy przejściowy kanał waniloidowy 1 (TRPV1) o potencjale receptora przejściowego w neuronach DRG jako ważny czynnik przyczyniający się do mechanicznej i termicznej nadwrażliwości CRPS-I12.
W tym badaniu opisaliśmy szczegółowe procedury związane z ustanowieniem szczurzego modelu CPIP. Następnie oceniliśmy model CPIP u szczurów, mierząc nadwrażliwość mechaniczną i termiczną, a także jego reakcję na ostrą prowokację kapsaicyną. Sugerujemy, że szczurzy model CPIP może być wiarygodnym modelem zwierzęcym do dalszych badań nad mechanizmami zaangażowanymi w CRPS-I.

<table><tbody><tr><td>1,5 ml probówka Eppendorf</td><td>Eppendorf</td><td>22431021</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1435</td><td></td></tr><tr><td>Kapsaicyna</td><td>APEXBIO</td><td>A3278</td><td></td></tr><tr><td>Suwmiarka cyfrowa</td><td>Meinaite</td><td>O-ring NA</td><td></td></tr><tr><td>O-ringi Zachodni</td><td>Nitryl 70 Twardość</td><td>7/32 in. średnica wewnętrzna</td><td></td></tr><tr><td>Aparatura do testowania podeszwy</td><td>UGO Basile, Włochy</td><td>37370</td><td></td></tr><tr><td>von Frey filaments</td><td>UGO Basile, Włochy</td><td>NC12775</td><td></td></tr></tbody></table>

model przewlekłego bólu po niedokrwieniu złożonego zespołu bólu regionalnego typu i u szczurów

Chronic Post-Ischemia Pain Model for Complex Regional Pain Syndrome Type-I in Rats

Złożony zespół bólu regionalnego typu I (CRPS-I) jest chorobą neurologiczną, która powoduje silny ból u pacjentów i pozostaje nierozwiązanym stanem chorobowym. Jednak mechanizmy leżące u podstaw CRPS-I nie zostały jeszcze ujawnione. Wiadomo, że niedokrwienie/reperfuzja jest jednym z głównych czynników powodujących CRPS-I. Za pomocą przedłużonego niedokrwienia i reperfuzji kończyny tylnej stworzono model przewlekłego bólu poniedokrwiennego u szczurów (CPIP), który naśladuje CRPS-I. Model CPIP stał się dobrze rozpoznawalnym modelem zwierzęcym do badania mechanizmów CRPS-I. Protokół ten opisuje szczegółowe procedury związane z ustanowieniem szczurzego modelu CPIP, w tym znieczulenie, a następnie niedokrwienie/reperfuzję kończyny tylnej. Charakterystyka szczurzego modelu CPIP jest dalej oceniana, mierząc nadwrażliwość mechaniczną i termiczną kończyny tylnej, a także reakcje nocyfenywne na ostre wstrzyknięcie kapsaicyny. Model CPIP szczura wykazuje kilka objawów podobnych do CRPS-I, w tym obrzęk kończyn tylnych i przekrwienie we wczesnym stadium po ustaleniu, uporczywą nadwrażliwość termiczną i mechaniczną oraz zwiększoną reakcję nocyfensywną na ostre wstrzyknięcie kapsaicyny. Te cechy sprawiają, że jest to odpowiedni model zwierzęcy do dalszych badań nad mechanizmami zaangażowanymi w CRPS-I.

Po założeniu pierścienia uszczelniającego (O-ring) na kostkę, skóra ipsilateralnej tylnej łapy wykazywała sinicę, co wskazywało na hipoksję tkankową (Rycyna 1A). Po przecięciu pierścienia, ipsilateralna tylna łapa zaczęła napełniać się krwią i wykazywała silny obrzęk, co stanowiło wyraźny objaw hiperemii (Rycyna 1A). Obrzęk łapy stopniowo ustępował i wrócił do normy 48 h po procedurze niedokrwienia/reperfuzji (dwuczynnikowa anal...

Dostarczony jest tutaj protokół, który szczegółowo opisuje kroki prowadzące do stworzenia zwierzęcego modelu przewlekłego bólu po niedokrwieniu (CPIP). Jest to dobrze rozpoznawalny model naśladujący ludzki złożony zespół bólu regionalnego typu I. Dalej oceniane są nadwrażliwości mechaniczne i termiczne, a także zachowania nocyfensywne wywołane kapsaicyną obserwowane w modelu szczurzym CPIP.

Model przewlekłego bólu po niedokrwieniu złożonego zespołu bólu regionalnego typu I u szczurów

Complex regional pain syndrome type-I (CRPS-I) is a neurological disease that causes severe pain among patients and remains an unresolved medical ...

Mechanizm leżący u podstaw CRPS I nadal pozostaje niejasny. Ustanowienie przedklinicznego modelu zwierzęcego naśladującego CRPS I będzie miało kluczowe znaczenie dla zbadania mechanizmów leżących u podstaw CRPS I. Model CPIP u szczurów wykazuje wiele podobieństw do CRPS, które lubię, w tym obrzęk kończyn tylnych i przekrwienie we wczesnym stadium. Po ustanowieniu modelu, a następnie utrzymująca się nadwrażliwość termiczna i mechaniczna.Zacznij od znieczulenia wszystkich szczurów fenobarbitalem sodu. Upewnij się, że szczury są odpowiednio znieczulone, szczypiąc ich tylną łapę lub ogon kleszczami. I nałóż maść weterynaryjną na oczy.Podczas zabiegu trzymaj szczura na podkładce podgrzewanej o temperaturze 37 stopni Celsjusza. Nasmaruj prawą tylną łapę i kostkę glicerolem. Następnie wsuń nitrylowy pierścień uszczelniający o twardości 70 w większą stronę jednopunktowej pięciomililitrowej rurki z odciętą nasadką zatrzaskową.Ostrożnie włóż tylną łapę do pustej rurki, aż dotrze do dna. Stopniowo przesuwaj O-ring z rurki do prawej kończyny tylnej w pobliżu stawu skokowego. I zostaw go tam na trzy godziny.Zastosuj to samo leczenie do pozorowanej grupy szczurów, z wyjątkiem pękniętego O-ringu, który nie powinien wywoływać niedokrwienia. Po trzech godzinach odetnij O-ring i monitoruj szczura, aż odzyska wystarczającą przytomność, aby utrzymać pozycję leżącą mostka. Nie umieszczaj szczura w towarzystwie innych szczurów, dopóki nie zostanie w pełni wyleczony ze znieczulenia.Umieść szczura w przezroczystej komorze z pleksiglasu na siatkowej podłodze i przyzwyczaj szczura do środowiska przez 30 minut przed jakimikolwiek testami behawioralnymi. Użyj włókien von freya, aby przetestować szczura pod kątem mechanicznej allodynii. Rozpocznij badanie od środkowego włókna, przykładając je pionowo do środkowej powierzchni podeszwowej tylnej łapy.Zastosuj odpowiednią siłę, aby zgiąć filament na maksymalnie pięć sekund. Nagłe cofnięcie łapy jest uważane za zachowanie nocyfensywne. Przeprowadź test mechanicznej allodynii w trzecim, drugim, pierwszym i co drugi dzień aż do 13 dnia.Zastosuj metodę testowania góra-dół, aby przetestować próg i metodę Dicksona do obliczania 50-procentowego progu wycofania łapy. Aby przetestować hiperalgezję termiczną, użyj metody hargreavesa, kierując bezpośrednio wiązkę światła emitowaną z 50-watowej żarówki na tylną łapę. Zmierz opóźnienie wycofania łapy, ustawiając 20 sekund jako próg odcięcia, aby uniknąć nadmiernych obrażeń.Powtórz każdy test trzy razy w odstępach pięciominutowych dla każdej tylnej łapy i przyjmij średnią jako opóźnienie wycofania łapy. Przeprowadzaj test hiperalgezji termicznej w trzecim, drugim, pierwszym i co drugi dzień do 13 dnia. Aby przetestować ostre zachowanie nocyfencywne wywołane kapsaicyną, należy przygotować 200-milimolowy roztwór podstawowy kapsaicyny z DMSO i dalej rozcieńczyć go od 1 do 1 000 w PBS do wstrzykiwań.Kapsaicyna jest odczynnikiem, który może powodować podrażnienie stawów skóry, oczu i oddychania. Ważne jest, aby nosić maskę i okulary ochronne podczas przygotowywania roztworu kapsaicyny. Następnie wstrzyknąć 50 mikrolitrów kapsaicyny lub nośnika do tylnej łapy za pomocą igły o rozmiarze 30 dołączonej do strzykawki o pojemności jednego mililitra.Nagrywaj zachowania nocyfensywne, takie jak lizanie, gryzienie lub wzdryganie się łapy, której wstrzyknięto nóż, za pomocą kamery wideo przez 10 minut po wstrzyknięciu. Oceń obrzęk tylnej łapy, mierząc wzrost średnicy łapy po 15 minutach, 24 godzinach, 48 godzinach i 72 godzinach od założenia modelu. Po umieszczeniu O-ringu na kostce, ipsilateralna skóra tylnej łapy wykazywała sinicę, co wskazuje na niedotlenienie tkanek.Po przecięciu O-ringu łapa zaczęła wypełniać się krwią i wykazywała silny obrzęk, co wskazuje na intensywne przekrwienie. Obrzęk stopniowo zmniejszał się i powrócił do normy po 48 godzinach od zabiegu. Dzień po ustanowieniu modelu, ipsilateralna tylna łapa grupy CPIP wykazywała wyraźną allodynię mechaniczną, która utrzymywała się przez 13 dni w ramach obserwacji.Przeciwległa tylna łapa grupy CPIP również wykazywała hiperalgezję mechaniczną przez 13 dni. Gdy mierzono hiperalgezję termiczną, obustronne tylne łapy szczurów CPIP wykazywały znacznie zmniejszone opóźnienie wycofania w odpowiedzi na szkodliwe bodźce termiczne, w porównaniu ze szczurami z grupy pozorowanej. Hiperalgezja termiczna ipsilateralnej tylnej łapy utrzymywała się do końca okresu obserwacji, podczas gdy hiperalgezja termiczna przeciwległej tylnej łapy utrzymywała się przez siedem dni.Grupy pozorowane i CPIP zostały przetestowane pod kątem zachowania nocyfenywnego po wstrzyknięciu kapsaicyny. Po wstrzyknięciu nośnika grupa pozorowana wykazywała lekką odpowiedź nocyfacyjną, a grupa CPIP wykazywała znacznie wyższą odpowiedź. Co ważniejsze, szczury CPIP wykazywały znacznie wyższą odpowiedź na wstrzyknięcie kapsaicyny niż grupa pozorowana, co sugeruje, że szczury CPIP wykazują zjawisko podobne do ludzkich pacjentów z CRPS I.By tej procedurze szczury są znieczulane przed i podczas tworzenia modelu.Model szczura CPIP opisany w tym protokole ustalony przez niedokrwienie i Human CRPS podoba mi się symulacja. Rodziny tych modeli, więcej mechanizmów dotyczących CRPS I można zbadać.

chronic-post-ischemia-pain-model-for-complex-regional-pain-syndrome

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Opisano tutaj model zwierzęcy Spared Nerve Injury jako mysi model obwodowego bólu neuropatycznego po częściowej denerwacji nerwu kulszowego poprzez uszkodzenie gałęzi nerwu piszczelowego i wspólnego strzałkowego, przy zachowaniu nienaruszonego nerwu podszywkowego. Modyfikację behawioralną wynikającą z allodynii mechanicznej ilościowo określono za pomocą włókien von Freya.

Model Spared Nerve Injury (SNI) indukowanej allodynii mechanicznej u myszy

Ze względu na prostotę zabiegu chirurgicznego oraz wyraźne efekty behawioralne, przewlekłe uciskowe uszkodzenie nerwu kulszowego jest jednym z najważniejszych modeli zwierzęcych bólu neuropatycznego. W ciągu 24 h po operacji rozwija się nadwrażliwość bólowa, którą można zmierzyć ilościowo za pomocą estezjometru von Freya (test mechaniczny) oraz urządzenia do pomiaru analgesii podeszwowej (test termiczny).

Przewlekłe uciskowe uszkodzenie nerwu kulszowego i badanie nadwrażliwości bólowej u szczurów

Ból neuropatyczny jest konsekwencją uszkodzenia lub choroby wpływającej na układ somatosensoryczny. "Model mankietowy" bólu neuropatycznego u myszy polega na wszczepieniu mankietu polietylenowego wokół głównej gałęzi nerwu kulszowego. Mechaniczna allodynia jest testowana przy użyciu filamentów von Freya.

Model kajdanki nerwu kulszowego bólu neuropatycznego u myszy

Ten manuskrypt opisuje model gryzonia do badania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego. Opisane metody obejmują zabiegi chirurgiczne w celu wykonania przewlekłego zwężenia nerwu podoczodołowego szczura oraz pooperacyjne testy behawioralne w celu zmierzenia zmian w spontanicznym i wywołanym zachowaniu, które wskazują na uporczywy ból i allodynię.

Przewlekłe zwężenie nerwu podoczodołowego szczura (IoN-CCI) w celu zbadania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego

Przedstawiamy protokół do pomiaru [14C]-jodoantypiryny (IAP) i oceny aktywacji substratów nerwowych, które są zaangażowane w centralny ból poudarowy (CPSP) w modelu gryzoni.

Pomiary autoradiograficzne [14C]-jodoantypiryny w mózgu szczura po centralnym bólu poudarowym

Zmodyfikowana operacja to uproszczona metoda dla modelu uszkodzenia nerwu oszczędzonego u myszy lub szczura, która wymaga tylko jednego podwiązania i jednego cięcia, aby uszkodzić zarówno wspólne nerwy strzałkowe, jak i łydkowe.

Zmodyfikowany model chirurgii oszczędzonego uszkodzenia nerwu bólu neuropatycznego u myszy

Mechaniczny test unikania konfliktów jest używany jako nierefleksyjny odczyt wrażliwości na ból u myszy, który może być wykorzystany do lepszego zrozumienia reakcji afektywno-motywacyjnych w różnych modelach bólu myszy.

Mechaniczny test unikania konfliktów do pomiaru zachowania bólowego u myszy

Metody prostej, szybkiej indukcji modelu bólu pleców u myszy są tutaj dostępne za pomocą iniekcji aktywatora plazminogenu w moczu do wnętrza więzadła.

Model bólu pleców myszy wywołany aktywatorem plazminogenu typu urokinazy

Częściowe podwiązanie nerwu kulszowego wywołuje długotrwały przewlekły ból neuropatyczny, charakteryzujący się przesadnymi reakcjami na bodźce termiczne i mechaniczne. Ten mysi model bólu neuropatycznego jest powszechnie stosowany do badania innowacyjnych terapii leczenia bólu. W tym artykule szczegółowo opisano procedurę chirurgiczną w celu poprawy standaryzacji i odtwarzalności.

Częściowe podwiązanie nerwu kulszowego: mysi model przewlekłego bólu neuropatycznego w celu zbadania antynocyceptywnego działania nowych terapii

Przewlekłe uszkodzenie zwężenia dystalnego nerwu podoczodołowego u myszy wywołuje zmiany w spontanicznym zachowaniu (zwiększona aktywność pielęgnacji twarzy) i zachowaniu nocyfensyjnym w odpowiedzi na stymulację dotykową (nadreaktywność na stymulację włosów von Freya), które są oznakami trwającego bólu i allodynii oraz służy jako model dla trójdzielnego bólu neuropatycznego.

Przewlekłe uszkodzenie zwężenia dystalnego nerwu podoczodołowego (DIoN-CCI) u myszy w celu zbadania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego

Protokół ten przedstawia powtarzalny model szczura wykorzystujący nerwy czuciowe do naśladowania bólu neuromimy u człowieka oraz oceny zabiegów chirurgicznych, oferując cenne narzędzie do badań nad neuromią translacyjną.

Nowy chirurgiczny model gryzonia do badania opcji leczenia bólu nerwiaka z wykorzystaniem ukierunkowanej renerwacji mięśni przez nerw odpiszczelowy

Poznaj model przewlekłego bólu po niedokrwieniu u szczurów do badania zespołu bólu regionalnego typu I. Ta metoda umożliwia ocenę nadwrażliwości mechanicznej i termicznej oraz obserwację zachowań nokiceptywnych.

Model przewlekłego bólu po niedokrwieniu złożonego zespołu bólu regionalnego typu I u szczurów

Przeglądaj więcej filmów