Name: Łączne wykorzystanie testów przerzutów do żył ogonowych i obrazowania in vivo w czasie rzeczywistym w celu ilościowego określenia kolonizacji przerzutowej raka piersi i obciążenia płuc (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-19T16:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
Description: Poznaj metodę monitorowania przerzutów raka piersi w czasie rzeczywistym przy użyciu testów dożylnych i obrazowania in vivo. Technika umożliwia ilościowe określenie liczby i wielkości przerzutów w płucach bez konieczności inwazyjnych procedur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dziękujemy Emily Norton za pomoc w walce z infekcjami wirusowymi i krytyczne przeczytanie manuskryptu. Dziękujemy również Ryanowi Kanai za pomoc w uzyskaniu obrazów płuc oraz Kate E. Tubbesing za pomoc w analizie obrazu zielonych przerzutów do płuc. Dziękujemy personelowi ośrodka badawczego na zwierzętach za wsparcie i pomoc w przygotowaniu tego filmu. Praca ta została wsparta grantem Susan G. Komen Career Catalyst Grant, który został przyznany J.M.L. (#CCR17477184).

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Krytyczne etapy metody Bardzo ważne jest zoptymalizowanie liczby wstrzykiwanych komórek (krok 3) dla danej linii komórkowej i szczepu myszy, ponieważ może to znacznie wpłynąć na liczbę powstających przerzutów i długość eksperymentu. Jeśli wstrzyknie się zbyt wiele komórek lub przerzuty rosną zbyt długo, przerzuty mogą być trudne do policzenia, co utrudnia ocenę skutków manipulacji genetycznej. Jeśli jednak wstrzyknie się zbyt mało komórek, może powstać niewiele przerzutów lub nie ma ich wcale. Dlate...

Rak pozostaje drugą najczęstszą przyczyną zgonów na świecie1, a przerzuty są odpowiedzialne za większość tych zgonów2,3. Jednak ograniczone zrozumienie mechanizmów molekularnych, które rządzą kolonizacją przerzutów i późniejszym wzrostem, utrudniło opracowanie skutecznych metod leczenia choroby przerzutowej. Identyfikacja nowych celów terapeutycznych wymaga przeprowadzenia testu w celu sprawdzenia, w jaki sposób zaburzona ekspresja lub funkcja genu kandydującego wpływa na powstawanie i wzrost przerzutów. Chociaż autochtoniczne modele myszy mają swoje zalety, są czasochłonne i kosztowne w generowaniu, co czyni je bardziej odpowiednimi do walidacji celu niż do odkrywania celu. Systemy modelowe do przeszczepów, w których gen kandydujący jest zaburzony w komórkach nowotworowych in vitro, a następnie wpływ na potencjał przerzutowy jest oceniany in vivo, są tańsze i mają wyższą przepustowość niż modele autochtoniczne. Ponadto wektory wirusowe do stabilnego dostarczania RNAi, CRISPR/CAS9 i transgenów są powszechnie dostępne, co sprawia, że stosunkowo łatwo jest zakłócić praktycznie każdy gen lub geny będące przedmiotem zainteresowania w liniach komórkowych raka. Podejście to można również wykorzystać do zbadania roli genów kandydujących w kolonizacji i wzroście przerzutów w ludzkich liniach komórkowych raka poprzez przeszczepienie komórek myszom z obniżoną odpornością lub humanizowanym.
Dwa rodzaje testów używanych do badania tworzenia przerzutów przez przeszczepione komórki rakowe in vivo to spontaniczne testy przerzutów i eksperymentalne testy przerzutów. W testach spontanicznych przerzutów4,5, komórkom rakowym wstrzykuje się myszy, pozwala im utworzyć guz pierwotny, a następnie bada się spontaniczne tworzenie przerzutów i późniejszy wzrost. Siłą tego modelu jest to, że komórki muszą przejść wszystkie etapy procesu przerzutowego, aby utworzyć guzy przerzutowe. Jednak wiele linii komórek rakowych nie daje przerzutów skutecznie w modelach spontanicznych przerzutów, a każda manipulacja komórkami, która wpływa na wzrost guza pierwotnego, może zakłócić wyniki testu przerzutów. Aby uniknąć tych pułapek, stosuje się eksperymentalne testy przerzutowe, w których komórki rakowe są wstrzykiwane bezpośrednio do krążenia. Typowe eksperymentalne testy przerzutów obejmują wstrzyknięcie do żyły ogonowej6,7,8 (i pokazane tutaj), iniekcja dosercowa9 i wstrzyknięcie do żyły wrotnej10.
Celem przedstawionego tutaj protokołu jest dostarczenie eksperymentalnego testu przerzutów in vivo, który pozwala badaczowi monitorować powstawanie i wzrost przerzutów w czasie rzeczywistym, a także określić ilościowo liczbę i wielkość przerzutów w płucach tej samej myszy. Aby to osiągnąć, tradycyjne eksperymentalne testy przerzutów do żył ogonowych 6,7,8 są łączone z obrazowaniem żywych zwierząt przy użyciu urządzenia do obrazowania in vivo9,11,12,13,14. Komórki nowotworowe stabilnie eksprymujące zarówno lucyferazy, jak i białko fluorescencyjne są wstrzykiwane myszom przez boczną żyłę ogonową, a następnie urządzenie do obrazowania in vivo służy do pomiaru zmian obciążenia przerzutami w płucach w czasie (<silna klasa = "xfig">Figura 1). Jednak urządzenie do obrazowania żywych zwierząt in vivo nie jest w stanie rozróżnić ani zmierzyć wielkości poszczególnych przerzutów. Tak więc, pod koniec eksperymentu, fluorescencyjny mikroskop stereoskopowy jest używany do policzenia liczby i zmierzenia wielkości fluorescencyjnych przerzutów w płucach bez potrzeby sekcji i histologii lub immunohistochemii (<silna klasa = "xfig">Ryc. 1). Protokół ten można wykorzystać do zbadania, w jaki sposób zmiana ekspresji lub funkcji genu kandydującego wpływa na powstawanie i wzrost przerzutów. Można również testować potencjalne związki terapeutyczne, takie jak małe cząsteczki lub przeciwciała blokujące działanie.
Aby zademonstrować to podejście, najpierw przeprowadziliśmy eksperyment potwierdzający słuszność koncepcji, w którym główny czynnik replikacji, białko replikacyjne A3 (RPA3) jest niszczone w przerzutowych komórkach raka piersi u myszy. Pokazujemy, że myszy, którym wstrzyknięto komórki knockdown RPA3, mają znacznie mniejsze obciążenie przerzutowe w każdym punkcie czasowym w porównaniu z myszami, którym wstrzyknięto komórki kontrolne. Analiza płuc zawierających przerzuty pokazuje, że to zmniejszone obciążenie przerzutami jest wynikiem znacznie zmniejszonej kolonizacji przerzutów i upośledzonego wzrostu tworzących się przerzutów. Aby jeszcze bardziej zademonstrować tę technikę, sprawdziliśmy, czy jednoczesne znokautowanie białka związanego z Yes (YAP) i koaktywatora transkrypcji z motywem wiążącym PDZ (TAZ) upośledza kolonizację przerzutową lub późniejszy wzrost. YAP i TAZ to dwa powiązane koaktywatory transkrypcji, które są krytycznymi efektorami szlaku hipopotama. We15,16 i inni powiązali YAP i TAZ z przerzutami (przejrzane w17,18,19), sugerując, że te białka są dobrymi celami terapeutycznymi. Konsekwentnie stwierdziliśmy, że myszy, którym wstrzyknięto komórki knockdown YAP / TAZ, znacznie zmniejszyły obciążenie przerzutami. Analiza płuc wykazała, że komórki knockdown YAP/TAZ tworzyły znacznie mniej przerzutów, a przerzuty, które się utworzyły, były mniejsze. Eksperymenty te pokazują, w jaki sposób eksperymentalne testy przerzutów pozwalają badaczowi szybko i niedrogo przetestować rolę genu kandydującego w tworzeniu i wzroście przerzutów. Pokazują ponadto, w jaki sposób połączone wykorzystanie obrazowania żywych zwierząt i fluorescencyjnej kwantyfikacji przerzutów w całych płucach pozwala badaczowi lepiej zrozumieć etapy kolonizacji przerzutów.

<table><tbody><tr><td>10% SDS-PAGE Żel</td><td></td><td></td><td>Do western blot</td></tr><tr><td>2,5% Trypsyna</td><td>Gibco</td><td>15090-046</td><td>Trypsyna do hodowli tkankowej</td></tr><tr><td>96-dołkowa biała płytka testowa z płaskim dnem</td><td>Corning</td><td>3922</td><td>Do pomiaru lucyferazy i sygnału renilli w hodowanych komórkach</td></tr><tr><td>Chusteczki nasączone alkoholem</td><td></td><td></td><td>Do sterylizacji miejsca wstrzyknięcia przed wszczepieniem żyły ogonowej</td></tr><tr><td>Myszy BALB/C ( samica, 6 tygodni)</td><td>Taconic</td><td>BALB-F</td><td>Do kolonizacji przerzutów do żył ogonowych i testów obciążenia</td></tr><tr><td>BSA regular</td><td>VWR Ameresco</td><td>97061-416</td><td>Do western blot</td></tr><tr><td>Bufor do lizy komórek</td><td>Sygnalizacja</td><td></td> komórkowa <td>Do zbierania próbek protien</td></tr><tr><td>Filtry strzykawkowe Celltreat, PES 30mm, 0,45 i mu; m</td><td>Celltreat</td><td>40-229749-CS</td><td>Do filtrowania wirusowego supernatantu</td></tr><tr><td>CO2 i komory</td><td></td><td></td><td>eutanazyjnej Do eutanazji myszy Zestaw do eutanazji</td></tr><tr><td>reporterowej z podwójną lucyferazy</td><td>Promega</td><td>E1960</td><td>Do pomiaru sygnału lucyferazy i renilli w hodowanych komórkach</td></tr><tr><td>Dulbecco& 39; s sól fizjologiczna buforowana fosforanami</td><td>Himedia</td><td>TS1006</td><td>Dla PBS</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>VWR</td><td>97061-406</td><td>Służy do rozcieńczania trypsyny do hodowli tkankowej</td></tr><tr><td>FBS 100% pochodzenia amerykańskiego</td><td>VWR</td><td>97068-085</td><td>Składnik kompletnych pożywek wzrostowych</td></tr><tr><td>Obrazownik żelowy Fujifilm LAS-3000</td><td>Fujifilm</td><td></td><td>Do western blot</td></tr><tr><td>GAPDH (14C10) Rabibit mAb</td><td>Sygnalizacja komórkowa</td><td>2118</td><td>Dla western blot</td></tr><tr><td>Kozia anty-królicza IgG (H+L) Przeciwciało drugorzędowe, koniugat HRP</td><td>Thermo Scientific</td><td>31460</td><td>Dla western blot</td></tr><tr><td>Ludzkie embrionalne komórki nerkowe, HEK-293FT</td><td>Invitrogen</td><td>R70007</td><td>Linia komórkowa używana do pakowania wirusa</td></tr><tr><td>HyClone DMEM / High Clucose</td><td>GE Healthcare nauki przyrodnicze</td><td>SH30243.01</td><td>Składnik kompletnej pożywki wzrostowej</td></tr><tr><td>Higromycyna B, Ultra Pure Grade</td><td>VWR Ameresco</td><td>97064-810</td><td>Do selekcji antybiotyków zakażonych komórek</td></tr><tr><td>I3-P/i3 Multi-Mode Microplate/EA</td><td>Urządzenia molekularne</td><td></td><td>Do pomiaru lucyferazy i sygnału renilla w hodowanych komórkach</td></tr><tr><td>Imagej</td><td></td><td></td><td>Służy do analizy obrazu przerzutów do płuc: próg ustawiony na 25 i 100</td></tr><tr><td>Immuno-Blot Membrana PVDF</td><td>Biorad</td><td>1620177</td><td>Dla western blot</td></tr><tr><td>Izofluran</td><td></td><td></td><td>Do znieczulenia myszy</td></tr><tr><td>IVIS Lumina XRMS System obrazowania in vivo (urządzenie do obrazowania żywych zwierząt in vivo)</td> <td>PerkinElmer</td><td>CLS136340</td><td>Do obrazowania in vivo obciążenia przerzutowego</td></tr><tr><td>Leica M205 FA & Lecia DCF3000 G (GFP i filtry jasnego pola)Mikroskop</td> <td>i kamera Leica Microsystems do wizualizacji, liczenia i pobierania próbek przerzutów do płuc; 10-krotne powiększenie, 3,5 sekundy ekspozycji, zysk 1,4</td><td></td> L-glutaminy Gibco 25030-081 Składnik kompletnych pożywek wzrostowych Lipofectamina 3000 Life technologies L3000008 Do transfekcji reporterskiej YAP/TAZ-TEAD <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Living Image 3.2 (oprogramowanie do obrazowania)</td><td>Oprogramowanie PerkinElmer</td><td></td><td>dla komórek raka piersi myszy IVIS</td></tr><tr><td>, 4T1</td><td>Karmanos Cancer Institute</td><td>Aslakson, CJ i wsp., 1992</td><td>Linia komórek kancelaryjnych piersi z przerzutami myszy</td></tr><tr><td>Multi-Gauge wersja 3.0</td><td>Oprogramowanie Fujifilm</td><td></td><td>do ilościowego określania intensywności pasma Western blot</td></tr><tr><td>Opti-MEM (bufor transfekcyjny)</td> <td>Gibco</td><td>31985-062</td><td>Do pakowania wirusów i transfekcji</td></tr><tr><td>Penicylina Streptomycyna</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Składnik kompletnych pożywek wzrostowych</td></tr><tr><td>Zestaw do oznaczania białek Pierce BCA</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td>Do ilościowego określania stężenia białka</td></tr><tr><td>Inhibitor fosfatazy Pierce Mini tabletki</td><td>Thermo Scientific</td><td>A32957</td><td>Dodany do buforu do lizy komórek</td></tr><tr><td>Inhibitor proteazy Pierce Mini tabletki</td><td>Thermo Scientific</td><td>A32953</td><td>Dodano do buforu do lizy komórek</td></tr><tr><td>Polybrene (bromek heksadimetryny)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>45-H9268</td><td>Do infekcji</td></tr><tr><td>Puromycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>45-P7255</td><td>Do antybiotykowej selekcji zakażonych komórek</td></tr><tr><td>Środek odstraszający</td><td></td><td></td> gryzonie <td>Do krępowania myszy podczas injeciton</td></tr><tr><td>żyły ogonowej Bufor biegowy</td><td></td><td></td> SDS-PAGE<td>Na western blot</td></tr><tr><td>TAZ (V3886)</td><td>Sygnalizacja komórkowa</td> przeciwciała <td>4883</td><td>Do buforu</td></tr><tr><td></td><td></td> Western<td>blot TBST</td> Do <td></td></tr><tr><td>automatycznego licznika komórek Western blot TC20</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td>Do liczenia komórek</td></tr><tr><td>Wektory</td><td>Pełna lista wektorów</td><td></td><td></td> znajduje się w Tabeli 1 Mikroskop</tr><tr><td>odwróconej fluorescencji VWR</td><td>VWR</td><td>89404-464</td><td>Do wizualizacji fluorescencji w Komórki znakowane ZSGreen</td></tr><tr><td>Zachodni bufor</td><td></td><td></td> transferowy <td>Dla Western blot</td></tr><tr><td>XenoLight D-Luciferin K+ Sól</td><td>PerkinElmer</td><td>122799</td><td>Substrate wstrzykiwany myszom w celu uzyskania bioluminescencyjnych obrazów IVIS in vivo</td></tr><tr><td>Odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE 9 (roztwór lipidowy do transfekcji)</td> <td>Roche</td><td>6365787001</td><td>Do pakowania wirusa</td></tr><tr><td>YAP (D8H1X) XP Sygnalizacja komórkowa mAb królika</td><td></td><td>14074</td><td>Do western blot</td></tr></tbody></table>

Łączne wykorzystanie testów przerzutów do żył ogonowych i obrazowania in vivo w czasie rzeczywistym w celu ilościowego określenia kolonizacji przerzutowej raka piersi i obciążenia płuc

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

Przerzuty są główną przyczyną zgonów związanych z rakiem i istnieją ograniczone możliwości terapeutyczne dla pacjentów z chorobą przerzutową. Identyfikacja i testowanie nowych celów terapeutycznych, które ułatwią opracowanie lepszych metod leczenia choroby przerzutowej, wymaga przedklinicznych modeli in vivo. Zademonstrowano tutaj syngeniczny model myszy do oznaczania kolonizacji raka piersi z przerzutami i późniejszego wzrostu. Przerzutowe komórki rakowe są stabilnie transdukowane wektorami wirusowymi kodującymi lucyferazy świetlika i białka ZsGreen. Geny kandydujące są następnie stabilnie manipulowane w komórkach rakowych wykazujących ekspresję lucyferazy / ZsGreen, a następnie komórki są wstrzykiwane myszom przez boczną żyłę ogonową w celu zbadania kolonizacji i wzrostu przerzutów. Urządzenie do obrazowania in vivo jest następnie wykorzystywane do pomiaru bioluminescencji lub fluorescencji komórek nowotworowych u żywych zwierząt w celu ilościowego określenia zmian obciążenia przerzutami w czasie. Ekspresja białka fluorescencyjnego pozwala na ilościowe określenie liczby i wielkości przerzutów w płucach pod koniec eksperymentu bez konieczności cięcia lub barwienia histologicznego. Podejście to oferuje stosunkowo szybki i łatwy sposób testowania roli genów kandydujących w kolonizacji i wzroście przerzutów oraz dostarcza znacznie więcej informacji niż tradycyjne testy przerzutów do żył ogonowych. Stosując to podejście, pokazujemy, że jednoczesny knockdown białka związanego z Yes (YAP) i koaktywatora transkrypcji z motywem wiążącym PDZ (TAZ) w komórkach raka piersi prowadzi do zmniejszenia obciążenia przerzutami w płucach i że to zmniejszone obciążenie jest wynikiem znacznie upośledzonej kolonizacji przerzutów i zmniejszonego wzrostu przerzutów.

Aby zademonstrować powyższe podejście, przeprowadziliśmy eksperyment typu proof of concept, w którym dokonano wyciszenia krytycznego czynnika replikacji, RPA3, w linii komórkowej przerzutowego raka gruczołowego piersi myszy (4T12). Chociaż protokół opisuje znakowanie komórek zarówno lucyferazą, jak i białkami fluorescencyjnymi przed manipulacją genetyczną, zastosowaliśmy zmodyfikowane podejście, ponieważ wektory RNAi dostarczają również ZsGreen (Rycina 2A</str...

Opisane podejście łączy eksperymentalne testy przerzutów do żył ogonowych z obrazowaniem żywych zwierząt in vivo, aby umożliwić monitorowanie w czasie rzeczywistym powstawania i wzrostu przerzutów raka piersi, a także ilościowe określenie liczby i wielkości przerzutów w płucach.

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...

Nasz protokół może być wykorzystany do szybkiego i łatwego przetestowania roli dowolnego genu kandydującego w kolonizacji i wzroście przerzutów. Protokół umożliwia również monitorowanie w czasie rzeczywistym przerzutów, ich powstawania i wzrostu, a także ilościowe określanie liczby i wielkości przerzutów u tych samych zwierząt bez konieczności resekcji lub barwienia histologicznego. Płytkować cztery komórki T1 po 150 000 komórek na studzience na 12-dołkowej płytce w kompletnej pożywce wzrostowej.Inkubować w temperaturze 37 stopni Celsjusza 5% dwutlenku węgla przez noc. Następnego dnia odessaj pożywkę wzrostową z komórek. Dodaj 500 mikrolitrów supernatantu wirusa lucyferazy i 500 mikrolitrów supernatantu wirusa białka fluorescencyjnego, aby jednocześnie zainfekować komórki zarówno supernatantem wirusa lucyferazy, jak i białka fluorescencyjnego.Następnie dodaj jeden mikrolitr ośmiu miligramów na mililitr bromku heksadimetryny i inkubuj w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla przez 24 do 48 godzin. Trypsynizuj cztery komórki T1 za pomocą 500 mikrolitrów trypsyny. Po dwóch do pięciu minutach przenieś wszystkie komórki do sześciocentymetrowego naczynia w czterech mililit

combined-use-tail-vein-metastasis-assays-real-time-vivo-imaging-to

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Nowy protokół opisany w niniejszym badaniu umożliwia selekcyjne wykrywanie przerzutów do płuc z rozdzielczością pojedynczych komórek u myszy poprzez połączenie perfuzji i fiksacji płuc in-situ oraz barwienia X-Gal komórek nowotworowych znakowanych genem lacZ.

Ulepszona wizualizacja przerzutów do płuc w rozdzielczości pojedynczych komórek u myszy poprzez połączoną perfuzję in-situ tkanki płucnej i barwienie X-Gal komórek nowotworowych znakowanych lacZ

W patogenezie przerzutów do kości angiogeneza jest procesem kluczowym, w związku z czym stanowi cel obrazowania i terapii. W niniejszej pracy przedstawiamy szczurzy model miejscowych przerzutów raka piersi do kości oraz opisujemy strategie nieinwazyjnego obrazowania angiogenezy in vivo z wykorzystaniem obrazowania rezonansem magnetycznym, wolumetrycznej tomografii komputerowej i ultrasonografii.

Wielomodalne obrazowanie angiogenezy w modelu przerzutów raka piersi do kości u szczurów nago z wykorzystaniem obrazowania rezonansem magnetycznym, wolumetrycznej tomografii komputerowej i ultradźwięków

Ten film opisuje technikę wstrzykiwania oznaczonych komórek rakowych za pomocą iniekcji żyły ogonowej do modelu mysiego. Ponadto monitorujemy powstawanie i wzrost przerzutów raka piersi za pomocą obrazowania żywych zwierząt w czasie rzeczywistym.

Wstrzyknięcie żyły ogonowej: metoda podawania komórek rakowych do badań przerzutowych w modelu mysim

Ten manuskrypt opisuje metodę ilościowego określania akumulacji komórek nowotworowych w płucach w zwierzęcym modelu przerzutów nowotworowych.

Test rekrutacji komórek nowotworowych płuc

Protokół ten opisuje, jak używać ilościowego PCR W CZASIE RZECZYWISTYM (QRT-PCR) do wykrywania mRNA specyficznego dla komórek nowotworowych reprezentującego przerzuty w tkance płucnej myszy.

Ocena przerzutów do płuc w modelach guza sutka myszy za pomocą ilościowego PCR w czasie rzeczywistym

Opisujemy stosunkowo prostą metodę obrazowania na żywo ex vivo interakcji komórka nowotworowa - zrąb w obrębie przerzutów do płuc, wykorzystując fluorescencyjne reportery u myszy. Wykorzystując mikroskopię konfokalną z wirującym dyskiem, technika ta umożliwia wizualizację żywych komórek przez co najmniej 4 godziny i może być dostosowana do badania innych stanów zapalnych płuc.

Ex vivo Obrazowanie na żywo przerzutów do płuc i ich mikrośrodowiska

Ta praca wstępnie ustawia zaawansowany protokół do dokładnej oceny obciążenia guza poprzez detekcję zielonego białka fluorescencyjnego i sygnałów bioluminescencji, a także integrację ilościowej techniki wykrywania molekularnego.

Badanie potrójnie ujemnego raka piersi przy użyciu ortotopowego modelu raka piersi

Dożylne wstrzykiwanie komórek rakowych jest często stosowane w badaniach nad przerzutami, ale obciążenie guzem przerzutowym może być trudne do analizy. W tym artykule demonstrujemy model przerzutów do iniekcji żyły ogonowej i uwzględniamy nowatorskie podejście do analizy wynikającego z przerzutowego obciążenia guzem płuc.

Analiza patologiczna przerzutów do płuc po bocznym wstrzyknięciu komórek nowotworowych do żyły ogonowej

Opisujemy bardziej spójną i szybką metodę ilościowego oznaczania przerzutów do płuc w modelu raka piersi 4T1 za pomocą Fiji-ImageJ.

Wykorzystanie komputerowej analizy obrazu w celu poprawy kwantyfikacji przerzutów do płuc w modelu raka piersi 4T1

Tutaj prezentujemy protokół chirurgicznego wszczepienia na stałe stałego okna optycznego dla mysiej klatki piersiowej, który umożliwia wysokorozdzielcze, przyżyciowe obrazowanie płuc. Trwałość okienka sprawia, że dobrze nadaje się ono do badania dynamicznych procesów komórkowych w płucach, zwłaszcza tych, które powoli ewoluują, takich jak progresja przerzutowa rozsianych komórek nowotworowych.

Stałe okno do badania przerzutów raka do płuc

Manuskrypt opisuje metodologię ustalania oraz monitorowania wzrostu podłużnego spontanicznych przerzutów do płuc z ortotopowo wstrzykiwanych guzów piersi, które mogą być interwencyjne na wszystkich etapach kaskady przerzutowej.

In vivo (in vivo) Obrazowanie w celu pomiaru spontanicznych przerzutów do płuc komórek guza piersi wstrzykniętych ortotopowo

Poznaj metodę monitorowania przerzutów raka piersi w czasie rzeczywistym przy użyciu testów dożylnych i obrazowania in vivo. Technika umożliwia ilościowe określenie liczby i wielkości przerzutów w płucach bez konieczności inwazyjnych procedur.

Łączne wykorzystanie testów przerzutów do żył ogonowych i obrazowania in vivo w czasie rzeczywistym w celu ilościowego określenia kolonizacji przerzutowej raka piersi i obciążenia płuc (Wideo) | JoVE Journal

Łączne wykorzystanie testów przerzutów do żył ogonowych i obrazowania in vivo w czasie rzeczywistym w celu ilościowego określenia kolonizacji przerzutowej raka piersi i obciążenia płuc

Przeglądaj więcej filmów