Ustalenie ostrego zawału mostu u szczurów za pomocą stymulacji elektrycznej

Prezentowany tutaj jest protokół do ustalenia ostrego zawału mostu w modelu szczurzym za pomocą stymulacji elektrycznej za pomocą pojedynczego impulsu.

Zapewniamy protokół do ustalenia zawału u szczura. Ten model szczura z zawałem mostu był łatwy do wykonania, łatwy do odtworzenia i bardzo udany. Stymulacja elektryczna może być wykorzystana do wywołania zawału w dowolnym innym obszarze mózgu, takim jak wzgórze.

Osoby, które chcą wykonać ten model, powinny przed eksperymentem zapoznać się z autonomią mostu. Przed zabiegiem należy zważyć szczury i ocenić ich sprawność neurologiczną zgodnie z testami behawioralnymi opisanymi w załączonym tekście. Rozgrzej poduszkę grzewczą do 37 stopni Celsjusza bezpośrednio przed znieczuleniem i przymocuj wiertło do czaszki do uchwytu na ramie stereotaktycznej.

Potwierdź brak reakcji na odruch pedałowania u pierwszego znieczulonego szczura i zamontuj szczura na ramie stereotaktycznej w pozycji leżącej na poduszce grzewczej. Umieścić pręty douszne nad kanałem słuchowym, aby zabezpieczyć głowę, uważając, aby czaszka była utrzymywana w pozycji poziomej, aby uniknąć przekrzywienia wstrzyknięcia. Nałóż maść na oczy zwierzęcia i użyj mikrogolarki, aby usunąć włosy z czaszki.

Za pomocą markera narysuj trzycentymetrową linię wzdłuż linii środkowej czaszki od linii obustronnego bocznego canthus do 0,5 centymetra za tylnym ciemiączkiem i za pomocą skalpela wykonaj nacięcie linii środkowej wzdłuż zaznaczonej linii. Użyj bawełnianego wacika, aby usunąć krew i umieść kawałek taśmy chirurgicznej po obu stronach płata skóry, aby odsłonić czaszkę. Użyj nowego wacika nasączonego 0,9% chlorkiem sodu, aby delikatnie usunąć tkankę łączną z czaszki i zlokalizować bregmę.

Użyj markera z cienką końcówką, aby wskazać centralny punkt bregmy jako punkt początkowy, umieść wiertło na sześciu milimetrach z przodu z tyłu, dwa milimetry przyśrodkowo z boku. Użyj wiertła, aby ostrożnie wykonać kraniotomię o średnicy jednego milimetra. Następnie zastąp wiertło sondą o rozmiarze 22 z izolowaną osłoną z końcówką umieszczoną dwa milimetry nad bliższym końcem osłony.

Włóż arkusze siedem milimetrów do mózgu i przesuwaj sondę wzdłuż osłony, aż górna część sondy znajdzie się dziewięć milimetrów pod powierzchnią mózgu. Podłącz elektrody do stymulatora elektrycznego i podłącz anodę do sondy. Następnie podłącz do katody do ucha szczura.

Następnie włącz stymulator elektryczny i ustaw szerokość pojedynczego impulsu na 4 050 milisekund, napięcie na 50 woltów, a prąd na cztery miliampery. Pozostaw sondę w tej pozycji przez pięć minut po stymulacji przed wyjęciem urządzenia z mózgu. Przykryj kraniotomię cementem kostnym i pozwól cementowi wyschnąć przed użyciem włókien do szwów poliamidowych 4.0 w celu zamknięcia rany.

Po trzech lub czterech szwach zawiąż standardowe węzły chirurgiczne 2-1-1. Następnie wstrzyknij dootrzewnowo szczurowi 250 mikrolitrów penicyliny i monitoruj szczura co 15 minut, aż do pełnego wybudzenia przed powrotem zwierzęcia do klatki. W tej analizie sześć zwierząt poddano operacji, jak wykazano, a sześć zwierząt traktowano jako kontrolę.

Wycinki mózgu na tych obrazach pochodziły od jednego szczura z każdej grupy. Rezonans magnetyczny wykazał, że zawał znajdował się w podstawie mostu, naśladując zawały przednio-boczne u ludzi. Ponieważ zastosowano izolowaną osłonkę, zawału nie zaobserwowano w korze mózgowi, ani w śródmózgowiu.

Obrazy ważone dyfuzją ujawniły również ostry zawał mostu. Barwienie TTC zastosowano w celu potwierdzenia zawału 24 godziny po operacji. Zgodnie z oczekiwaniami, objętość zawału była istotnie wyższa w grupie chirurgicznej w porównaniu z grupą kontrolną.

Wyniki behawioralne mierzono przed i po operacji. W porównaniu z grupą kontrolną, szczury z zawałem mostu krążyły w lewo. Zaobserwowano istotne różnice w wynikach testów somatosensorycznych Longa, Berdersona, ułożenia kończyn, równowagi belki i usuwania kleju między szczurami z zawałem mostu a szczurami z grupy kontrolnej.

Każdy konkretny obszar mózgu zostanie zniszczony przez stymulację elektryczną.