Name: Zmodyfikowany mysi model regulacji reniny w zwężeniu tętnicy nerkowej z jedną nerką i jednym klipsem (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Poznaj model 2K1C u myszy do indukcji zwężenia tętnicy nerkowej i badania ekspresji reniny w nadciśnieniu naczyniowo-nefrytycznym. Ta niezawodna metoda pozwala zrozumieć mechanizmy molekularne i identyfikować nowe cele terapeutyczne.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Badania były wspierane przez NHLBI Research Scientist Development Grant (1K01HL135461-01) dla JAG. Dziękuję Davidowi Carmona-Berrio i Isabel Adarve-Rengifo za ich pomoc techniczną.

Myszy były trzymane i opiekowane w Vanderbilt University Medical Center (VUMC) Division of Animal Care zgodnie z wytycznymi National Institutes of Health (NIH) oraz Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, Departament Zdrowia i Opieki Społecznej USA. Wszystkie procedury na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Wykorzystania Zwierząt VUMC przed rozpoczęciem eksperymentów.
1. Przygotowanie i sekcja zwierząt
<ol>
	<li>Włącz kiełkownik i pompę wodną poduszki grzewczej na około 30 minut przed rozpoczęciem zabiegu.</li>
	<li>Przetnij rurkę poliuretanową o długości 0,5 mm ostrym skalpelem. Usuń 0,2 mm obwodu, wykonując nacięcie wzdłuż, aby utworzyć mankiet. 
	UWAGA: Jest to krytyczna część procedury zwężenia tętnicy nerkowej, która wymaga niezwykłej precyzji, dbałości o szczegóły i cierpliwości. Spróbuj przeciąć kilka kawałków rurki poliuretanowej na raz. Wykonaj całą tę procedurę pod mikroskopem.</li>
	<li>Zanim przejdziesz dalej, załóż sterylne rękawiczki chirurgiczne i maskę chirurgiczną.</li>
	<li>Użyj myszy C57BL/6 typu dzikiego (WT) w wieku 6-8 tygodni. Użyj równej liczby myszy męskich i żeńskich, aby uniknąć uprzedzeń związanych z płcią.</li>
	<li>Zapisz wagę myszy przed wykonaniem operacji. Idealna waga do wykonania zwężenia tętnicy nerkowej z rurką poliuretanową wynosi 18-22 g. Z myszami należy obchodzić się delikatnie i nie poruszać się podczas wstrzykiwania znieczulenia. Podawać przedoperacyjną analgezję (Ketofgen, 5 mg/kg masy ciała). 
	UWAGA: Podczas przenoszenia myszy z ich pomieszczenia do sali operacyjnej noś je z dużą delikatnością i ostrożnością, aby uniknąć pobudzenia. Zdecydowanie zaleca się noszenie klatek na myszy w rękach zamiast w wózku.</li>
	<li>Znieczulenie myszy mieszaniną ketaminy (100 mg / kg masy ciała) i ksylazyny (10 mg / kg masy ciała) za pomocą zastrzyków dootrzewnowych (IP).</li>
	<li>Umieść mysz z powrotem w klatce, aż zostanie całkowicie znieczulona. Potrzeba około 4-5 minut, zanim mysz jest całkowicie nieprzytomna. Uszczypnij ogon lub palec u nogi kleszczami, aby sprawdzić, czy mysz jest całkowicie nieprzytomna i gotowa do operacji.</li>
	<li>Połóż mysz na plecach na ręczniku papierowym. Usuń włosy z bocznej części brzucha za pomocą elektrycznej maszynki do strzyżenia włosów, podążając w kierunku przeciwnym do kierunku wzrostu włosów. Po ogoleniu pola operacyjnego należy je oczyścić peelingiem chirurgicznym zawierającym jod (lub chlorheksydynę), a następnie spłukać 70% etanolem (lub sterylną solą fizjologiczną). Powtórz 3 razy. 
	UWAGA: Procedura depilacji musi być wykonana w pewnej odległości lub najlepiej na innym stole niż stół zabiegowy, aby uniknąć ingerencji w włosy i zanieczyszczenia włosów podczas zabiegu chirurgicznego.</li>
	<li>Przykryj poduszkę grzewczą sterylnym prześcieradłem. Przynieś mysz na stół chirurgiczny i połóż ją na sterylnym arkuszu, skierowaną prawą boczną stroną myszy w kierunku mikroskopu. Utrzymywać stałą temperaturę podkładki wynoszącą 37 °C przy przepływie wody.</li>
	<li>Otwórz wysterylizowaną torbę zawierającą cały sprzęt chirurgiczny. Za pomocą mikroskopu preparacyjnego i sterylnych nożyczek do ostrych narzędzi wykonaj małe nacięcie boczne (w pobliżu 13 żebrapiersiowego, ostatniego żebra u myszy) i w odległości około 0,5 cm od kręgów. Idź wzdłuż kręgów lędźwiowych i wykonaj nacięcie o średnicy 1 cala.</li>
	<li>Odciągnij skórę i mięśnie, aby odsłonić nerki.</li>
	<li>Oczyść i usuń otaczający tłuszcz za pomocą sterylnych wacików, aby wyizolować tętnicę nerkową. Odizoluj nerw nerkowy od tętnicy nerkowej za pomocą zakrzywionych kleszczy.</li>
	<li>Podczas wykonywania pozorowanej operacji należy założyć szwy zamykające skórę i nałożyć antybiotyk na zamkniętą ranę, a następnie przejść do opieki pooperacyjnej. Jeśli nie, przejdź do następnej sekcji, aby zwęzić tętnicę. 
	UWAGA: W każdym eksperymencie powinny brać udział zwierzęta pozorowane jako grupa kontrolna procedury chirurgicznej. Zwierzęta pozorowane składają się z myszy, które przeszły zabieg chirurgiczny polegający na odsłonięciu tętnicy nerkowej bez zakładania na nią mankietu.</li>
</ol>
2. Zwężenie prawej tętnicy nerkowej
<ol>
	<li>Umieść dwa nylonowe szwy pod prawą tętnicą nerkową, zrób luźne węzły, a następnie umieść mankiet wokół głównej tętnicy nerkowej w mniej więcej równej odległości między rozwidleniem nerki a aorty</li>
	<li>Zamknij mankiet za pomocą nylonowych szwów. Wykonaj cztery węzły na każdy szew, aby uniknąć prawdopodobieństwa zgubienia szwów po operacji.</li>
	<li>Zamknij nacięcie w mięśniu, nakładając prosty szew ciągły.</li>
	<li>Wykonaj proste szwy przerywane, aby zamknąć skórę.</li>
	<li>Podawać leki przeciwbólowe zatwierdzone przez IACUC. 
	UWAGA: Autoklaw narzędzi chirurgicznych przed każdym użyciem. Jeśli wykonywana jest jednocześnie więcej niż jedna operacja, przetrzyj wszystkie używane narzędzia sterylnym miernikiem nasączonym alkoholem i umieść je w gorącym kiełkowniku na 15-30 s po każdym zabiegu. Zmieniaj sterylne rękawiczki również dla każdej myszy.</li>
</ol>
3. Opieka pooperacyjna
<ol>
	<li>Włóż myszy z powrotem do klatki i pozostaw klatkę w połowie włączoną, w połowie wyłączoną, na poduszce grzewczej z krążącą wodą na 2-3 godziny. Dodaj żelowy pokarm regeneracyjny do wnętrza klatki.</li>
	<li>Lek przeciwbólowy (ketoprofen) należy podać dootrzewnowo (dawka: 5 mg/kg m.c.) następnego dnia.</li>
	<li>Waż myszy przez następne dwa dni; jeśli niektóre myszy stracą więcej niż 20% swojej wagi, skonsultuj się z weterynarzem i zdecyduj, czy zwierzę musi zostać poddane eutanazji zgodnie z odpowiednią procedurą zatwierdzoną przez IACUC.</li>
	<li>Monitoruj myszy codziennie, aby ocenić zaczerwienienie, obrzęk, ból lub infekcję.</li>
	<li>Zasięgnij porady lekarza weterynarii w przypadku powikłań pooperacyjnych zgodnie z polityką instytucjonalną IACUC.</li>
</ol>
4. Pobieranie tkanek
<ol>
	<li>Pobrać tkankę 3 tygodnie po zabiegu chirurgicznym. Zapisz wagę każdej myszy.</li>
	<li>Poddaj mysz eutanazji za pomocą procedury zatwierdzonej przez IACUC.</li>
	<li>Umieść mysz na sterylnej platformie w pozycji leżącej, aby przeprowadzić sekcję.</li>
	<li>Zabezpiecz i wyprostuj kończyny, aby ograniczyć ruch.</li>
	<li>Dokładnie spryskaj myszy 70% etanolem.</li>
	<li>Wykonaj nacięcie w linii środkowej, aby otworzyć brzuch i klatkę piersiową za pomocą ostrych nożyczek.</li>
	<li>Odciągnij skórę i ścianę otrzewnej.</li>
	<li>Ostrożnie odsłoń serce i nakłuj prawą komorę i wykrwawij mysz.</li>
	<li>Usuń obie nerki za pomocą kleszczy. Nerki znajdują się z tyłu myszy. 
	UWAGA: Nie mieszaj obu nerek. Należy pamiętać o nerkach zwężonych, pozorowanych i przeciwległych.</li>
	<li>Wyjąć kapsułkę nerkową, oczyścić ją z tłuszczu i zanotować masę każdej nerki osobno.</li>
	<li>Wyciąć podłużny odcinek obu nerek i utrwalić w 4% PFA przez noc w temperaturze 4 °C, aby następnie przetworzyć go w celu zatopienia parafiny, przeprowadzenia hybrydyzacji in situ (ISH) i immunohistochemii (IHC). Postępuj zgodnie z protokołami ISH i IHC, jak podano23,24.</li>
	<li>Wyizoluj korę pozostałej nerki i błyskawicznie zamroź w ciekłym azocie, aby wykonać western blot. Próbki należy przechowywać w temperaturze -80 °C do czasu analizy.</li>
	<li>Określ ilościowo wyrażenia reniny i N-GAL za pomocą Western blot zgodnie z opisem w literaturze23,24.</li>
</ol>
5. Statystyki
<ol>
	<li>Do eksperymentów z trzema lub więcej warunkami należy stosować jedno- lub dwuczynnikową ANOVA, a następnie testy post-hoc Bonferroniego do porównań między poszczególnymi grupami. Rozważ, że wartość p jest równa lub mniejsza niż 0,05 istotna. Użyj oprogramowania (np. GraphPad Prism 8.2) do wykonania wszystkich analiz statystycznych.</li>
</ol>

<ol><li>Kashyap, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+CCR2+reduces+macrophage+influx+and+development+of+chronic+renal+damage+in+murine+renovascular+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Blockade of CCR2 reduces macrophage influx and development of chronic renal damage in murine renovascular hypertension.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 310 (5), 372-384 (2016).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+inflammatory+biomarkers+after+renal+revascularization+in+atherosclerotic+renal+artery+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Changes in inflammatory biomarkers after renal revascularization in atherosclerotic renal artery stenosis.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 31 (9), 1437-1443 (2016).</li>
<li>Yerram, P., Karuparthi, P. R., Chaudhary, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+management+of+renovascular+hypertension+and+ischemic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Minerva+Urologica+e+Nefrologica%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and management of renovascular hypertension and ischemic nephropathy.</a> Minerva Urologica e Nefrologica. 64 (1), 63-72 (2012).</li>
<li>Covic, A., Gusbeth-Tatomir, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+renin-angiotensin-aldosterone+system+in+renal+artery+stenosis%2C+renovascular+hypertension%2C+and+ischemic+nephropathy%3A+diagnostic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Cardiovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">The role of the renin-angiotensin-aldosterone system in renal artery stenosis, renovascular hypertension, and ischemic nephropathy: diagnostic implications.</a> Progress in Cardiovascular Diseases. 52 (3), 204-208 (2009).</li>
<li>Barreras, A., Gurk-Turner, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+receptor+blockers%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II receptor blockers.</a> Proceedings. 16 (1), Baylor University. Medical Center. 123-126 (2003).</li>
<li>Sica, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin-converting+enzyme+inhibitors+side+effects--physiologic+and+non-physiologic+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Angiotensin-converting enzyme inhibitors side effects--physiologic and non-physiologic considerations.</a> Journal of Clinical Hypertension. 6 (7), 410-416 (2004).</li>
<li>Hill, R. D., Vaidya, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+Receptor+Blockers+%28ARB%2C+ARb%29%5BTitle%5D)+AND+%22StatPearls%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II Receptor Blockers (ARB, ARb).</a> StatPearls. , (2019).</li>
<li>Durante, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+renin-angiotensin-aldosterone+system+in+the+pathogenesis+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pharmaceutical+Design%22%5BJournal%5D)">Role of the renin-angiotensin-aldosterone system in the pathogenesis of atherosclerosis.</a> Current Pharmaceutical Design. 18 (7), 981-1004 (2012).</li>
<li>Chen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+reactive+carbonyl+species%3A+Potential+risk+factor+for+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Research%22%5BJournal%5D)">Plasma reactive carbonyl species: Potential risk factor for hypertension.</a> Free Radical Research. 45 (5), 568-574 (2011).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+receptor+blockade+has+protective+effects+on+the+poststenotic+porcine+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Angiotensin receptor blockade has protective effects on the poststenotic porcine kidney.</a> Kidney International. 84 (4), 767-775 (2013).</li>
<li>Zou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+scattered+tubular-like+cells+confer+protective+effects+in+the+stenotic+murine+kidney+mediated+by+release+of+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Renal scattered tubular-like cells confer protective effects in the stenotic murine kidney mediated by release of extracellular vesicles.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1263(2018).</li>
<li>Kinra, M., Mudgal, J., Arora, D., Nampoothiri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+insight+into+the+role+of+cyclooxygenase+and+lipooxygenase+pathway+in+renal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22European+Review+for+Medical+and+Pharmacological+Sciences%22%5BJournal%5D)">An insight into the role of cyclooxygenase and lipooxygenase pathway in renal ischemia.</a> European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 21 (21), 5017-5020 (2017).</li>
<li>Cavalcanti, C. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+PDE5+Restores+Depressed+Baroreflex+Sensitivity+in+Renovascular+Hypertensive+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of PDE5 Restores Depressed Baroreflex Sensitivity in Renovascular Hypertensive Rats.</a> Frontiers in Physiology. 7, 15(2016).</li>
<li>Dias, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sildenafil+ameliorates+oxidative+stress+and+DNA+damage+in+the+stenotic+kidneys+in+mice+with+renovascular+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Sildenafil ameliorates oxidative stress and DNA damage in the stenotic kidneys in mice with renovascular hypertension.</a> Journal of Translational Medicine. 12, 35(2014).</li>
<li>Lerman, L. O., Chade, A. R., Sica, V., Napoli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+hypertension%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Laboratory+and+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Animal models of hypertension: an overview.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 146 (3), 160-173 (2005).</li>
<li>Reckelhoff, J. F., Romero, D. G., Yanes Cardozo, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex%2C+Oxidative+Stress%2C+and+Hypertension%3A+Insights+From+Animal+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Sex, Oxidative Stress, and Hypertension: Insights From Animal Models.</a> Physiology (Bethesda). 34 (3), 178-188 (2019).</li>
<li>Goldblatt, H., Lynch, J., Hanzal, R. F., Summerville, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+Experimental+Hypertension+%3A+I.+The+Production+of+Persistent+Elevation+of+Systolic+Blood+Pressure+by+Means+of+Renal+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Studies on Experimental Hypertension : I. The Production of Persistent Elevation of Systolic Blood Pressure by Means of Renal Ischemia.</a> Journal of Experimental Medicine. 59 (3), 347-379 (1934).</li>
<li>Gollan, F., Richardson, E., Goldblatt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension+in+the+systemic+blood+of+animals+with+experimental+renal+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Hypertension in the systemic blood of animals with experimental renal hypertension.</a> Journal of Experimental Medicine. 88 (4), 389-400 (1948).</li>
<li>Lewis, H. A., Goldblatt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+Experimental+Hypertension%3A+XVIII.+Experimental+Observations+on+the+Humoral+Mechanism+of+Hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+the+New+York+Academy+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Studies on Experimental Hypertension: XVIII. Experimental Observations on the Humoral Mechanism of Hypertension.</a> Bulletin of the New York Academy of Medicine. 18 (7), 459-487 (1942).</li>
<li>Warner, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+deficiency+of+Smad3+protects+the+kidneys+from+atrophy+and+interstitial+fibrosis+in+2K1C+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Genetic deficiency of Smad3 protects the kidneys from atrophy and interstitial fibrosis in 2K1C hypertension.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 302 (11), 1455-1464 (2012).</li>
<li>Lorenz, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renovascular+hypertension+using+a+modified+two-kidney%2C+one-clip+approach+in+mice+is+not+dependent+on+the+alpha1+or+alpha2+Na-K-ATPase+ouabain-binding+site%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Renovascular hypertension using a modified two-kidney, one-clip approach in mice is not dependent on the alpha1 or alpha2 Na-K-ATPase ouabain-binding site.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 301 (3), 615-621 (2011).</li>
<li>Ebina, K., Iwabuchi, T., Suzuki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+change+in+permanently+clipped+or+ligated+cerebral+arterial+wall.+Part+II%3A+Autopsy+cases+of+aneurysmal+neck+clipping%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurochirurgica%22%5BJournal%5D)">Histological change in permanently clipped or ligated cerebral arterial wall. Part II: Autopsy cases of aneurysmal neck clipping.</a> Acta Neurochirurgica. 66 (1-2), 23-42 (1982).</li>
<li>Saleem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sox6%3A+A+new+modulator+of+renin+expression+during+physiological+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Sox6: A new modulator of renin expression during physiological conditions.</a> bioRxiv. , (2019).</li>
<li>Saleem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sox6+as+a+new+modulator+of+renin+expression+in+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Sox6 as a new modulator of renin expression in the kidney.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. , (2019).</li>
<li>Chade, A. R., Williams, M. L., Engel, J., Guise, E., Harvey, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+translational+model+of+chronic+kidney+disease+in+swine%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">A translational model of chronic kidney disease in swine.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 315 (2), 364-373 (2018).</li>
<li>Xue, Y., Xu, Z., Chen, H., Gan, W., Chong, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-energy+shock+wave+preconditioning+reduces+renal+ischemic+reperfusion+injury+caused+by+renal+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cir%C3%BArgica+Brasileira%22%5BJournal%5D)">Low-energy shock wave preconditioning reduces renal ischemic reperfusion injury caused by renal artery occlusion.</a> Acta Cirúrgica Brasileira. 32 (7), 550-558 (2017).</li>
<li>Lalanne, A., Beaudeux, J. L., Bernard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NGAL%3A+a+biomarker+of+acute+and+chronic+renal+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Annales+de+Biologie+Clinique%22%5BJournal%5D)">NGAL: a biomarker of acute and chronic renal dysfunction.</a> Annales de Biologie Clinique. 69 (6), 629-636 (2011).</li>
<li>Bolignano, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+gelatinase-associated+lipocalin+%28NGAL%29+as+a+marker+of+kidney+damage%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Kidney+Diseases%22%5BJournal%5D)">Neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) as a marker of kidney damage.</a> American Journal of Kidney Diseases. 52 (3), 595-605 (2008).</li>
<li>Kashyap, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+renal+atrophy+in+murine+2+kidney+1+clip+hypertension+is+strain+independent%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Development of renal atrophy in murine 2 kidney 1 clip hypertension is strain independent.</a> Research in Veterinary Science. 107, 171-177 (2016).</li>
<li>Anderson, W. P., Woods, R. L., Kline, R. L., Korner, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+haemodynamic+responses+to+unilateral+renal+artery+stenosis+in+conscious+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Pharmacology+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Acute haemodynamic responses to unilateral renal artery stenosis in conscious dogs.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 12 (3), 305-309 (1985).</li>
<li>Imanishi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+degree+of+renal+arterial+stenosis+that+causes+hypertension+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Angiology%22%5BJournal%5D)">Critical degree of renal arterial stenosis that causes hypertension in dogs.</a> Angiology. 43 (10), 833-842 (1992).</li>
<li>Ziecina, R., Abramczyk, P., Lisiecka, A., Papierski, K., Przybylski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenal-renal+portal+circulation+contributes+to+decrease+in+renal+blood+flow+after+renal+artery+stenosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Adrenal-renal portal circulation contributes to decrease in renal blood flow after renal artery stenosis in rats.</a> Journal of Physiology and Pharmacology. 49 (4), 553-560 (1998).</li>
<li>Johnson, J. A., Ichikawa, S., Kurz, K. D., Fowler, W. L., Payne, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pressor+responses+to+vasopressin+in+rabbits+with+3-day+renal+artery+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Pressor responses to vasopressin in rabbits with 3-day renal artery stenosis.</a> American Journal of Physiology. 240 (6), 862-867 (1981).</li>
<li>Eirin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+glomerular+filtration+rate+after+renal+revascularization+correlate+with+microvascular+hemodynamics+and+inflammation+in+Swine+renal+artery+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%3A+Cardiovascular+Interventions%22%5BJournal%5D)">Changes in glomerular filtration rate after renal revascularization correlate with microvascular hemodynamics and inflammation in Swine renal artery stenosis.</a> Circulation: Cardiovascular Interventions. 5 (5), 720-728 (2012).</li>
<li>Ma, Z., Jin, X., He, L., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXCL16+regulates+renal+injury+and+fibrosis+in+experimental+renal+artery+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory%22%5BJournal%5D)">CXCL16 regulates renal injury and fibrosis in experimental renal artery stenosis.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory. 311 (3), 815-821 (2016).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+analysis+of+signaling+pathways+activated+in+a+murine+model+of+two-kidney%2C+one-clip+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Temporal analysis of signaling pathways activated in a murine model of two-kidney, one-clip hypertension.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (4), 1055-1068 (2009).</li>
<li>Wiesel, P., Mazzolai, L., Nussberger, J., Pedrazzini, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-kidney%2C+one+clip+and+one-kidney%2C+one+clip+hypertension+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Two-kidney, one clip and one-kidney, one clip hypertension in mice.</a> Hypertension. 29 (4), 1025-1030 (1997).</li>
<li>Johns, C., Gavras, I., Handy, D. E., Salomao, A., Gavras, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+experimental+hypertension+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Models of experimental hypertension in mice.</a> Hypertension. 28 (6), 1064-1069 (1996).</li>
</ol>

Autorzy nie deklarują żadnych konfliktów interesów, finansowych lub innych.

Zwężenie tętnicy nerkowej jest ważną przyczyną wtórnego lub opornego nadciśnienia tętniczego i uszkodzenia nerek 1,29. Model Goldblatta z dwoma nerkami i jednym klipsem (2K1C) został wykorzystany do badania nadciśnienia naczyniowego wywołanego RAStenosis 1,17,18,19. Wiele wcześniejszych badań z wykorzystaniem różnych modeli zwierzęcych ...

Zwężenie tętnicy nerkowej (RAStenosis) jest nierozwiązywalnym problemem dotykającym około 6% osób powyżej 65 roku życia i do 40% osób z chorobą wieńcową lub obwodową chorobą naczyniową1,2. Obecne metody leczenia tej choroby są ograniczone; w związku z tym istnieje pilna potrzeba opracowania nowych terapii w leczeniu nadciśnienia naczyniowego lub opornego nadciśnienia tętniczego wywołanego przez RAStenosis. System reninowo-angiotensynowo-aldosteronowy (RAAS) jest kluczowym szlakiem zaangażowanym w patogenezę nadciśnienia indukowanego RAStenosis lub nadciśnienia naczyniowego3,4. Znane terapie ukierunkowane na RAAS, takie jak inhibitory ACE lub blokery receptora angiotensyny, łagodzą nadciśnienie, ale wymagają dokładnego zbadania pod kątem niewydolności nerek i hiperkaliemii5,6,7. Renina katalizuje etap ograniczający szybkość w RAAS; przekształca angiotensynogen w angiotensynę I. W miażdżycy tworzenie się blaszki miażdżycowej powoduje zwężenie tętnicy nerkowej, która napędza wydzielanie reniny, co skutkuje nadciśnieniem naczyniowo-naczyniowym i uszkodzeniem nerek8. Wiele badań wykazało zwiększony poziom stresu oksydacyjnego podczas nadciśnienia naczyniowo-naczyniowego u ludzi, co zostało potwierdzone w modelu myszy z dwoma nerkami z jednym klipsem (2K1C), a także w innych modelach zwierzęcych z nadciśnieniem2,9,10,11,12,13,14,15,16. Molekularny mechanizm kontroli ekspresji reniny podczas nadciśnienia naczyniowego wywołanego RAStenosis nie jest dobrze poznany i wymaga dalszych badań.
Eksperymentalne modele zwierzęce, które wiarygodnie i powtarzalnie podsumowują RAStenosis są ważne w wyjaśnianiu komórkowych i molekularnych mechanizmów kontroli ekspresji reniny dla rozwoju nowych terapii. Mysi model 2K1C jest dobrze znanym modelem eksperymentalnym do badania patogenezy nadciśnienia naczyniowego17,18,19,20. Model ten jest generowany przez zwężenie tętnicy nerkowej za pomocą clip17,20,21, powodując w ten sposób niedrożność tętnicy nerkowej, która powoduje wzrost ekspresji reniny i nadciśnienie17,19,20,21. Nie ma jednak dostępnych raportów technicznych, które opisywałyby krok po kroku procedurę generowania zwężenia tętnicy nerkowej na modelach zwierzęcych.
Konwencjonalne srebrne klipsy w kształcie litery U, rurki poliuretanowe i inne klipsy były używane do zwężania tętnicy nerkowej w celu wywołania zwężenia tętnicy nerkowej. Niektóre badania wykazały, że konstrukcja i materiał, z którego wykonany jest klips, mają kluczowe znaczenie dla uzyskania wiarygodnych i powtarzalnych danych z modelem zwierzęcym 2K1C. Według Lorenza i wsp., stosowanie konwencjonalnych srebrnych klipsów zaprojektowanych w kształcie litery U wywołuje niski wskaźnik powodzenia nadciśnienia (40-60%)21. Ze względu na konstrukcję klipsa tętnica nerkowa jest uciskana bocznie, co powoduje kilka zwężeń i większe prawdopodobieństwo wyparcia z tętnicy nerkowej. Plastyczność i ciągliwość srebra mogą umożliwiać zmiany szerokości klipsów; w związku z tym, powodując różne poziomy nadciśnienia wśród myszy. Dwutlenki srebra na klipsie mogą powodować zapalenie okołonaczyniowe, proliferację błony wewnętrznej i ziarninowanie tkanek, zmieniając średnicę tętnicy nerkowej22. Ze względu na zmienność poziomów nadciśnienia uzyskanych za pomocą konwencjonalnego srebrnego klipsa w kształcie litery U, Warner i wsp. oraz Lorenz i wsp. z powodzeniem zastosowali rurkę poliuretanową o bardziej okrągłej konstrukcji do zainicjowania zwężenia tętnicy nerkowej u myszy, generując bardziej wiarygodną i spójną indukcję modelu zwierzęcego z jedną nerką20,21.
W tym raporcie opisujemy protokół chirurgiczny do generowania eksperymentalnej RAStenozy u myszy, wykorzystujący rurkę poliuretanową do zwężenia tętnicy nerkowej. Okrągły mankiet z poliuretanu jest bardziej powtarzalnym, niezawodnym i tańszym klipsem do generowania zwężenia u myszy. Celem tego modelu eksperymentalnego jest zbadanie i zdefiniowanie molekularnego i komórkowego mechanizmu kontroli ekspresji reniny podczas zwężenia tętnicy nerkowej. Potwierdziliśmy sukces modelu myszy RAStenosis, mierząc ekspresję reniny i marker uszkodzenia nerek lipokalinę związaną z żelatynazą neutrofilową (N-GAL).

<table><tbody><tr><td>Żel dietetyczny</td><td>Clear H2O</td><td>Diet-Gel 76A</td><td>Dieta regeneracyjna</td></tr><tr><td>EMC Podgrzewana twarda podkładka</td><td>Hallowell</td><td>000A2788B</td><td>Poduszki grzewcze były używane do utrzymywania ciepła</td></tr><tr><td>myszy Ethilon Nylon Suture</td><td>Ethicon</td><td>662G</td><td>4-0 (1,5 metrycznego), Ten szew służył do zamykania otrzewnej i skóry</td></tr><tr><td>Ethilon Nylon Suture</td><td>Ethicon</td><td>2815 G</td><td>8-0 (0,4 metra), Ten szew był używany do zamykania mankietu w celu zawiązania i zwężenia tętnicy</td></tr><tr><td>Germinator 500</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>GER 5287</td><td>Sterylizuj narzędzia chirurgiczne między operacjami</td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Zoetis</td><td>Ketofen</td><td>Painkiller</td></tr><tr><td>Poliuretan</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>MRE-025</td><td>Ta rurka była używana do inicjowania zwężenia</td></tr><tr><td>Powidonowo-jodowe antyseptyczne waciki</td><td>Medline</td><td>MDS093901</td><td>Zastosowano go po depilacji i zabiegu chirurgicznym na skórze</td></tr><tr><td>Reflex 7 Clip Applier</td><td>Roboz Surgical Instrument Co</td><td>204-1000</td><td>Ten aplikator do klipsów służył do zakładania klipsa w przypadku odpadnięcia jednego lub więcej szwów</td></tr><tr><td>Sterylne serwety ręcznikowe</td><td>Dynarex</td><td>4410</td><td>Był używany jako prześcieradło dla myszy podczas operacji</td></tr><tr><td>Maść z potrójnym antybiotykiem</td><td>Medi-First</td><td>22312</td><td></td></tr><tr><td>Pompa wodna</td><td>Stryker</td><td>T/pump Profesjonaliści Służy</td><td>do podgrzewania i cyrkulacji wody w twardej podkładce grzewczej, aby utrzymać myszy w cieple podczas i po operacji</td></tr></tbody></table>

zmodyfikowany mysi model regulacji reniny w zwężeniu tętnicy nerkowej z jedną nerką i jednym klipsem

A Modified Two Kidney One Clip Mouse Model of Renin Regulation in Renal Artery Stenosis

Zwężenie tętnicy nerkowej jest częstym schorzeniem u pacjentów z chorobą wieńcową lub obwodową, gdzie układ reninowo-angiotensynowo-aldosteronowy (RAAS) jest nadmiernie aktywowany. W tym kontekście dochodzi do zwężenia tętnic nerkowych, które stymulują wzrost ekspresji i uwalniania reniny, proteazy ograniczającej szybkość w RAAS. Wynikający z tego wzrost ekspresji reniny jest znanym czynnikiem powodującym nadciśnienie naczyniowe, często związane z uszkodzeniem nerek i uszkodzeniem narządów końcowych. W związku z tym istnieje duże zainteresowanie opracowywaniem nowych metod leczenia tego schorzenia. Molekularny i komórkowy mechanizm kontroli reniny w zwężeniu tętnicy nerkowej nie jest w pełni poznany i wymaga dalszych badań. Aby wywołać zwężenie tętnicy nerkowej u myszy, opracowano zmodyfikowany model myszy Goldblatt z klipsem 2 nerka 1 (2K1C). Prawa nerka została zwężona u myszy typu dzikiego, a myszy operowane pozorowane były używane jako kontrola. Po zwężeniu tętnicy nerkowej oznaczyliśmy ekspresję reniny i uszkodzenie nerek. Pobrano nerki, a świeże kory mózgowe wykorzystano do określenia ekspresji białka i mRNA reniny. Ten model zwierzęcy jest powtarzalny i może być używany do badania reakcji patofizjologicznych, szlaków molekularnych i komórkowych zaangażowanych w nadciśnienie naczyniowe i uszkodzenie nerek.

Zwężenie tętnicy nerkowej zwiększa ekspresję reniny w nerce z niedrożnością, jednocześnie hamując jej ekspresję w nerce przeciwległej. Model stenozy z podwiązaniem jednej nerki (2K1C) lub model Goldbatta indukuje zwiększoną ekspresję reniny oraz uszkodzenie nerek. Jest on uznawany za najlepszy reprezentatywny model jednostronnego zwężenia tętnicy nerkowej u ludzi.
Ekspresję reniny i proreniny (prekursora reniny) zmierzono za pomocą immunoblottingu. Dane wykazują, że ekspresja reniny i prorenin...

Zmodyfikowany model myszy Goldblatt z 2 nerkami i klipsem (2K1C) został opracowany przy użyciu rurki poliuretanowej do zainicjowania zwężenia tętnicy nerkowej, wywołując wzrost ekspresji reniny i uszkodzenie nerek. W tym miejscu opisujemy szczegółową procedurę przygotowania i umieszczenia mankietu na tętnicy nerkowej w celu wygenerowania powtarzalnego i spójnego modelu myszy 2K1C.

Zmodyfikowany mysi model regulacji reniny w zwężeniu tętnicy nerkowej z jedną nerką i jednym klipsem

Renal artery stenosis is a common condition in patients with coronary or peripheral vascular disease where the renin angiotensin aldosterone system (RAAS) ...

Mysi model 2K1C jest niezawodną i powtarzalną metodą wywoływania zwężenia tętnicy nerkowej. Protokół ten jest cenny w wyjaśnianiu mechanizmów molekularnych zaangażowanych w kontrolę ekspresji reniny podczas nadciśnienia naczyniowego nerek. Ten model zwierzęcy naśladuje jednostronne zwężenie tętnicy nerkowej u ludzi.Niezawodność i powtarzalność sprawiają, że jest to dobry model do rozpoznawania nowych celów terapeutycznych w leczeniu nadciśnienia naczyniowego nerek. Ta technika wymaga podstawowej wiedzy na temat wykonywania operacji na myszach. Istnieją dwie krytyczne części: przygotowanie rurki i umieszczenie rurki w tętnicy nerkowej.Oba są szczegółowo opisane. Kluczowe jest zwężenie prawej tętnicy nerkowej za pomocą precyzyjnie wyciętego drenu. Ten film z procedury pokaże uczniom, jak przeciąć rurkę, a następnie uzyskać dostęp do tętnicy i ją zwęzić.Zacznij od przecięcia rurki do zabiegu zwężenia. Wytnij kawałek rurki poliuretanowej o długości 0,5 milimetra ostrym skalpelem. Następnie wykonaj mankiet, usuwając 0,2 milimetra obwodu za pomocą podłużnego cięcia.Zapisz wagę myszy, która powinna wynosić od 18 do 22 gramów, aby wykonać zwężenie tętnicy nerkowej za pomocą rurki poliuretanowej. Waga myszy ma kluczowe znaczenie dla wykonania operacji. Po znieczuleniu i podaniu myszce środka przeciwbólowego, umieść ją z powrotem w klatce, aż całkowicie straci przytomność.Uszczypnij palec u nogi kleszczami, aby sprawdzić, czy mysz jest w pełni znieczulona i gotowa do operacji. Połóż mysz na plecach na ręczniku papierowym z dala od obszaru operacji i usuń włosy z bocznej części brzucha za pomocą elektrycznej maszynki do strzyżenia włosów, podążając w kierunku przeciwnym do wzrostu włosów. Oczyść ogolony obszar sterylnym gazikiem nasączonym alkoholem i nałóż miejscowy roztwór jodu powidonu.Otwórz wysterylizowaną torbę zawierającą cały sprzęt chirurgiczny. Pracując pod mikroskopem preparacyjnym, użyj sterylnych ostrych nożyczek, aby wykonać małe nacięcie boku w odległości około 0,5 centymetra od kręgów. Idź wzdłuż kręgów lędźwiowych i wykonaj jednocalowe nacięcie.Odciągnij skórę i mięśnie, aby odsłonić nerki. Następnie oczyść i usuń otaczający tłuszcz za pomocą bawełnianych wacików, aby wyizolować tętnicę nerkową. Odizoluj nerw nerkowy od tętnicy nerkowej za pomocą zakrzywionych kleszczy.Oczyść wyciek płynu w pobliżu tętnicy nerkowej bawełnianym wacikiem. Umieść dwa nylonowe szwy pod prawą tętnicą nerkową, zrób luźne węzły i umieść mankiet wokół głównej tętnicy nerkowej w mniej więcej równej odległości między rozwidleniem nerki a aortą. Zamknij mankiet za pomocą nylonowych szwów, wykonując trzy węzły na każdy szew, aby uniknąć prawdopodobieństwa utraty szwów po operacji.Zamknij nacięcie w mięśniu, zakładając prosty szew ciągły i wykonaj proste szwy przerywane, aby zamknąć skórę. Wróć myszy do klatki i pozostaw półklatkę na poduszce grzewczej z krążącą wodą na dwie do trzech godzin, aby zwierzęta mogły dojść do siebie po operacji. Zapewnij zwierzętom pokarm regeneracyjny na diecie żelowej.Następnego dnia podaj środek przeciwbólowy. Waż myszy przez następne dwa dni i skonsultuj się z weterynarzem, jeśli mysz straci więcej niż 20% swojej wagi. Codziennie sprawdzaj myszy, aby ocenić je pod kątem zaczerwienienia, obrzęku, bólu lub infekcji.Zapisz wagę każdej myszy. Po eutanazji zwierzęcia umieść je na sterylnej platformie w pozycji leżącej. Zabezpiecz i wyprostuj kończyny, aby ograniczyć ruch i dokładnie spryskaj mysz 70% etanolem.Użyj nożyczek, aby wykonać nacięcie w linii środkowej i otworzyć brzuch i klatkę piersiową. Odciągnij skórę i ścianę otrzewnej, a następnie ostrożnie odsłoń serce i nakłuj prawą komorę. Usuń obie nerki za pomocą kleszczy, śledząc, która nerka została zwężona.Wyjmij kapsułki nerkowe, oczyść je z tłuszczu i zapisz masę każdej nerki osobno. Wytnij podłużny odcinek obu nerek i utrwal je w 4% PFA przez noc w temperaturze czterech stopni Celsjusza w celu hybrydyzacji in situ i immunohistochemii. Odizoluj korę pozostałej nerki i błyskawicznie zamroź ją w ciekłym azocie, aby wykonać Western blot.Próbki należy przechowywać w temperaturze minus 80 stopni Celsjusza do czasu dalszej analizy. Zwężenie tętnicy nerkowej zwiększa ekspresję reniny w zwężonej nerce, jednocześnie hamując ekspresję w nerce przeciwległej. Dwunerkowy model zwężenia z jednym klipsem indukował ekspresję reniny i zwiększył uszkodzenie nerek.Ekspresję reniny i proreniny mierzono za pomocą immunoblottingu. Dane pokazują, że ekspresja reniny i proreniny zwiększyła się w nerce ze zwężoną nerką w porównaniu z nerkami przeciwległymi i pozorowanymi, co sugeruje, że mankiet zwężał tętnicę nerkową i powodował zmiany w perfuzji nerek. Przeprowadzono immunohistochemię w celu uwidocznienia lokalizacji ekspresji reniny.Obrazy potwierdziły zwiększoną ekspresję reniny w przyciętej nerce. Ponadto w zwężonej nerce zaobserwowano rekrutację komórek przykłębuszkowych wzdłuż tętnicy doprowadzającej. Aby zbadać wpływ na poziomy ekspresji mRNA reniny, przeprowadzono hybrydyzację in situ.Dane sugerują zwiększoną rekrutację mRNA reniny i komórek JG w zwężonej nerce. Inną cechą charakterystyczną zwężenia tętnicy nerkowej jest regulacja w górę markerów uszkodzenia nerek spowodowana zmianami w perfuzji nerek, wytwarzaniem ponadtlenków i nadciśnieniem. Dlatego N-GAL mierzono za pomocą immunoblottingu, co wykazało, że marker ostrego uszkodzenia nerek był silnie podwyższony w zwężonej nerce.Próbując tego protokołu, pamiętaj, aby założyć nylonowe szwy wokół tętnicy nerkowej przed założeniem mankietu. Pomaga to przyspieszyć procedurę.

a-modified-two-kidney-one-clip-mouse-model-renin-regulation-renal

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten film przedstawia procedurę odnerwienia współczulnego tętnicy nerkowej w mysim modelu nadciśnieniowym indukowanym angiotensyną II, wykorzystującą fenol do zakłócenia funkcji nerwu współczulnego i obniżenia ciśnienia krwi.

Współczulne unerwienie tętnic nerkowych w mysim modelu nadciśnienia indukowanego angiotensyną II

Mysi model uszkodzenia reperfuzyjnego niedokrwiennego nerek opisany tutaj składa się z prawej nefrektomii, która zapewnia tkankę kontrolną i zaciskania lewej szypułki nerki w celu wywołania niedokrwienia, które powoduje ostre uszkodzenie nerek. Model ten wykorzystuje laparotomię w linii środkowej, w której wszystkie kroki są wykonywane przez jedno nacięcie.

Uszkodzenie reperfuzyjne niedokrwienia nerek: mysi model urazu i regeneracji

Mysia izolowana perfundowana nerka (MIPK) to technika utrzymywania nerki myszy w warunkach ex vivo w stanie perfundowanym i funkcjonalnym przez 1 godzinę. i technika chirurgiczna są szczegółowo opisane.

Technika perfuzji nerki izolowanej u myszy

Ten manuskrypt zawiera szczegółową dwuetapową procedurę chirurgiczną do wykonania mysiej 5/6częściowej nefrektomii (PNx) z podwiązaniem bieguna. Cztery tygodnie po operacji, w porównaniu z myszami operowanymi pozorowanymi, myszy PNx rozwinęły upośledzoną czynność nerek, niedokrwistość, przerost serca, zwłóknienie serca oraz zmniejszoną czynność skurczową i rozkurczową serca.

Mysi model nefrektomii 5/6, który indukuje eksperymentalną kardiomiopatię mocznicową

Uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne nerek wiąże się z wysoką zachorowalnością i śmiertelnością u hospitalizowanych pacjentów. W tym miejscu przedstawiamy prosty i skuteczny mysi model jednostronnego uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego nerek i zapewniamy sekwencyjny przegląd reprezentatywnych zmian patologicznych obserwowanych w nerkach.

Skuteczny mysi model jednostronnego uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego nerek

Tutaj prezentujemy protokół odnerwienia współczulnego nerek (RDN) u myszy z nadciśnieniem wywołanym infuzją angiotensyny II. Zabieg jest powtarzalny, wygodny i pozwala na zbadanie mechanizmów regulacyjnych RDN na nadciśnienie tętnicze i przerost mięśnia sercowego.

Poprawa unerwienia nerek łagodziła nadciśnienie indukowane przez infuzję angiotensyny II

Ten protokół szczegółowo opisuje etapy chirurgiczne tworzenia mysiej wspólnej przetoki tętniczo-żylnej. Opracowaliśmy ten model do badania patofizjologii kończyn związanej z dostępem do hemodializy.

Mysi model dysfunkcji ręki związanej z dostępem do hemodializy

Niniejszy artykuł zawiera szczegółowe instrukcje, które umożliwią badaczom wykonanie odwracalnej jednostronnej niedrożności moczowodu u myszy przy użyciu ustandaryzowanego modelu, który umożliwia analizę długoterminowych wyników strukturalnych i funkcjonalnych po odwróceniu przedłużonej niedrożności moczowodu.

Mysi model do oceny długoterminowych wyników strukturalnych i funkcjonalnych po odwróceniu przedłużającej się jednostronnej niedrożności moczowodu

W tym artykule przedstawiono model niedokrwiennej CKD z wykorzystaniem jednostronnego IRI nerki z kontralateralną nefrektomią wykonaną dzień przed pobraniem próbki; protokół ten umożliwia ocenę funkcjonalną opartą na surowicy, wysoką przeżywalność oraz powtarzalną patologię PREWKinek w ciągu 28 i 42 dni, zapewniając wszechstronną platformę do badań mechanistycznych i interwencyjnych.

Model myszy przejścia z ostrej do przewlekłej choroby nerek wywołanego niedokrwieniem nerek lub uszkodzeniem reperfuzyjnym

Precyzyjny mysi model ostrego uszkodzenia nerek (AKI) wywołanego niedokrwieniem jest ważnym narzędziem do badania ostrego uszkodzenia nerek i potencjalnego poszukiwania środków terapeutycznych do leczenia uszkodzeń nerek. System obciążników wiszących zapewnia narzędzie do natychmiastowej i niezawodnej okluzji oraz reperfuzji tętnicy nerkowej bez powodowania zastoju nerkowego.

Zastosowanie systemu obciążeń wiszących do izolowanej okluzji tętnicy nerkowej

Poznaj model 2K1C u myszy do indukcji zwężenia tętnicy nerkowej i badania ekspresji reniny w nadciśnieniu naczyniowo-nefrytycznym. Ta niezawodna metoda pozwala zrozumieć mechanizmy molekularne i identyfikować nowe cele terapeutyczne.

Zmodyfikowany mysi model regulacji reniny w zwężeniu tętnicy nerkowej z jedną nerką i jednym klipsem

Przeglądaj więcej filmów