Name: Test ruchliwości wypławków w celu oceny właściwości biomodulacyjnych produktów naturalnych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Poznaj test ruchliwości wypławków do oceny właściwości biomodulacyjnych produktów naturalnych. Ta metoda dostarcza wiarygodnych danych behawioralnych w badaniach nad układem nerwowym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Autorzy pragną podziękować Biuru Awansu Instytucjonalnego oraz Fundacji Morrisville College za grant na publikację w celu wsparcia tej pracy, a także SUNY Morrisville Collegiate Science and Technology Entry Program (CSTEP) za ich nieustającą pomoc i wsparcie dla badań licencjackich na SUNY Morrisville. Pragniemy również podziękować Sophii Hutchens za pomocne komentarze na temat opisanej techniki.

1. Hodowla wypławków
<ol>
	<li>W razie potrzeby użyj wypławków zakupionych od firmy zajmującej się zaopatrzeniem biologicznym lub złowionych na wolności. Wypławki użyte w tym protokole to Dugesia tigrina, wymieniona na liście dostaw. Gatunek ten jest również określany jako Girardia tigrina31. Inne wodne gatunki wypławków są również dopuszczalne2,3. 
	UWAGA: Opisany protokół jest przeznaczony dla zwierząt zakupionych od firmy zajmującej się zaopatrzeniem biologicznym. Ten system testowy nie został przetestowany na dziko żyjących wypławkach. Jeśli jednak wykorzystywane są wypławki schwytane na wolności, zaleca się, aby przyzwyczaiły się one do wody używanej w eksperymentach, a także do środowiska laboratoryjnego przez co najmniej 1 tydzień przed użyciem.</li>
	<li>Po przybyciu przenieś wypławki do plastikowych pojemników do przechowywania żywności zawierających czystą wodę źródlaną i trzymaj uchylone pokrywki.</li>
	<li>Utrzymuj wypławki w zaciemnionym środowisku.</li>
	<li>Nakarm nowo urodzone wypławki po 24–36 godzinach w ich nowym środowisku.</li>
	<li>Pozwól wypławkom zaaklimatyzować się w laboratorium co najmniej 1 tydzień przed eksperymentem.</li>
	<li>Karm wypławki regularnie, dwa razy w tygodniu.
	<ol>
		<li>Pozwól wypławkom karmić się ad libitum posiekanymi ekologicznymi jajkami na twardo lub zmiksowaną ekologiczną wątrobą wołową przez 1–2 godziny.</li>
		<li>Po karmieniu umieść karmione wypławki w czystym pojemniku.
		<ol>
			<li>Usuń zabrudzoną wodę z wypławków.</li>
			<li>Użyj małego płaskiego pędzla akwarelowego (numer 3–6), aby przenieść resztki jedzenia i szlam przylegający do pojemnika z okolic wypławków na ręcznik papierowy.</li>
			<li>Ze świeżą wodą źródlaną i delikatnym wirowaniem lub mieszaniem usuń wypławki i wlej je do czystego pojemnika.</li>
			<li>Wszelkie wypławki pozostające przyklejone do pojemnika można przenieść za pomocą okrągłego pędzla akwarelowego (nr 3–6) lub pipety transferowej z szerokim otworem.</li>
			<li>Zdekantować wodę transferową.</li>
			<li>Zalej wypławki czystą wodą źródlaną.</li>
			<li>Po 24 godzinach usuń wypławki z wszelkich wydalonych odpadów spożywczych, przenosząc je do czystego pojemnika, jak opisano powyżej (kroki 1.6.2.1–1.6.2.6).</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Do czyszczenia pojemników i przyborów używanych do hodowli wypławków nie używaj mydła ani detergentów. Wyczyść te przedmioty, dobrze spłukując je czystą wodą (dopuszczalna jest woda z kranu) i osuszając czystą szmatką lub ręcznikiem papierowym.</li>
</ol>
2. Przygotowanie wypławków do eksperymentów
<ol>
	<li>Pozwól nowo urodzonym wypławkom zaaklimatyzować się w środowisku co najmniej 1 tydzień przed eksperymentami.</li>
	<li>Głodzić wypławki przez 5-10 dni przed eksperymentami.</li>
	<li>Zmień wodę hodowlaną co najmniej 1x w okresie głodu.</li>
</ol>
3. Test prędkości lokomotorycznej wypławki (pLmV): Zachowania stymulujące
<ol>
	<li>Przed eksperymentami upewnij się, że wygłodzone wypławki są w pełni uformowane, z kompletną i pigmentowaną głową i ogonem.</li>
	<li>Przed rozpoczęciem eksperymentu przygotuj szklaną lub plastikową szalkę Petriego o średnicy 10 cm i pojemnik do habituacji do testu pLmV.
	<ol>
		<li>Umieść czystą szalkę Petriego o średnicy 10 cm, która ma być użyta do testu pLmV, na wstępnie laminowanym papierze w kratkę (z kwadratami o boku 0,5 cm).</li>
		<li>Dodać 20 ml niezanieczyszczonej wody źródlanej do celów kontrolnych lub wody źródlanej zawierającej odpowiednie stężenie badanego produktu naturalnego do szalki Petriego o średnicy 10 cm, która ma być użyta do badania pLmV.</li>
		<li>Umieść kamerę (np. telefon komórkowy lub kamerę o wysokiej rozdzielczości) nad przygotowaną szalką Petriego o średnicy 10 cm, aby rejestrować ruchliwość wypławków na papierze siatkowym podczas eksperymentu. Stojak pierścieniowy to wygodny sposób na ustawienie kamery w odległości, która może rejestrować cały widok 10-centymetrowej szalki Petriego i linii siatki.</li>
		<li>Przygotuj pojemnik habituacyjny z 5–10 ml niezanieczyszczonej wody źródlanej (kontrole) lub wody źródlanej zawierającej odpowiednie stężenie badanego produktu naturalnego. Odpowiedni jest pojemnik podobny do fiolki scyntylacyjnej lub małej 5-centymetrowej szalki Petriego.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Użyj małego, czystego, płaskiego lub okrągłego pędzla akwarelowego, aby delikatnie przenieść wypławkę z pojemnika podstawowego z wodą źródlaną do pojemnika habituacyjnego zawierającego 5–10 ml niezafałszowanej wody źródlanej lub wody źródlanej zawierającej testowany produkt naturalny. 
	UWAGA: Podczas manipulowania wypławkami do testu pLmV użyj małego, czystego, płaskiego lub okrągłego pędzla akwarelowego (numery 3–6). Podczas przesuwania wypławków szczotkę należy umieścić pod zwierzęciem, aby delikatnie je podnieść. Aby wypławki nie uległy uszkodzeniu podczas używania szczotki, włosie szczotki nie powinno być rozchylone pod zwierzęciem. Rozprzestrzenianie się włosia może zaszkodzić wypławkowi, jeśli zostanie złapany między włóknami szczotki. 
	UWAGA: Pipeta transferowa o szerokim otworze może być również używana do przenoszenia wypławka do czystego i suchego pojemnika habituacyjnego.
	<ol>
		<li>W przypadku korzystania z pipety usuń nadmiar wody przemieszczanej wraz z wypławkiem z pojemnika habituacyjnego za pomocą pipety transferowej.</li>
		<li>Ostrożnie dodać roztwór habituacyjny (tj. wodę źródlaną do kontroli lub wodę źródlaną zawierającą stężenie badanego produktu naturalnego) do pojemnika habituacyjnego zawierającego wypławkę.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Okresy przyzwyczajenia będą zależeć od dynamiki stymulacji ocenianej dla testowanego produktu naturalnego. Czas przyzwyczajenia wynoszący 2 minuty okazał się akceptowalny do wykrywania stymulacji w tym work1.</li>
	<li>Po 2-minutowym okresie habituacji użyj pędzla akwarelowego, aby delikatnie przenieść wypławka na środek przygotowanej 10 cm szalki Petriego w celu eksperymentu stymulacji pLmV.</li>
	<li>Uruchom kamerę, aby nagrać ruch wypławka. Nagraj 10–11 minut wideo.</li>
	<li>Przygotuj pojemnik habituacyjny i 10 cm szalkę Petriego do eksperymentu pLmV ze świeżymi roztworami dla każdej wypławki.</li>
	<li>Używaj dedykowanych pipet, naczyń, pojemników i pędzli do każdego eksperymentalnego stężenia testowanego produktu naturalnego, aby uniknąć nieumyślnego wystawienia wypławków na działanie niewłaściwego roztworu podczas eksperymentów.</li>
	<li>Ponieważ wypławki wykazują wyuczone zachowania, każdy wypławka (kontrolna lub testowa) powinien być użyty tylko raz21,22.</li>
</ol>
4. Test prędkości lokomotorycznej wypławkowej (pLmV): Zachowania związane z odstawieniem
<ol>
	<li>Przed eksperymentami upewnij się, że wygłodzone wypławki są w pełni uformowane, z kompletną i pigmentowaną głową i ogonem.</li>
	<li>Przed rozpoczęciem eksperymentu przygotuj 10-centymetrową szalkę Petriego (szklaną lub plastikową) do eksperymentu pLmV, 5-centymetrową szalkę Petriego (szklaną lub plastikową) do płukania wypławka po habituacji oraz pojemnik do habituacji.
	<ol>
		<li>Umieść czystą szalkę Petriego o średnicy 10 cm, która zostanie użyta do eksperymentu pLmV, na wstępnie laminowanym papierze w kratkę z kwadratami o średnicy 0,5 cm).</li>
		<li>Dodać 20 ml nieskażonej wody źródlanej do szalki Petriego o średnicy 10 cm, która ma być użyta w eksperymencie pLmV.</li>
		<li>Umieścić kamerę nad przygotowaną szalką Petriego o średnicy 10 cm, jak w kroku 3.2.3, aby zarejestrować ruchliwość wypławków na papierze siatkowym podczas eksperymentu.</li>
		<li>Przygotuj pojemnik do płukania wypławków, dodając 5 ml samej wody źródlanej do 5-centymetrowej szalki Petriego.</li>
		<li>Przygotuj pojemnik habituacyjny z 5–10 ml niezatrutej wody źródlanej (kontrole) lub wody źródlanej zawierającej badany produkt naturalny. Odpowiedni jest pojemnik podobny do fiolki scyntylacyjnej lub mała 5-centymetrowa szalka Petriego (szklana lub plastikowa).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Użyj małego, czystego, płaskiego lub okrągłego pędzla akwarelowego, aby przenieść wypławkę z wody źródlanej do przygotowanego pojemnika habituacyjnego zawierającego 5–10 ml niezafałszowanej wody źródlanej (kontrole) lub wody źródlanej zawierającej badany produkt naturalny. Delikatnie przenieś zwierzę z pojemnika magazynowego do pojemnika habituacyjnego. Upewnij się, że wypławka nie została uszkodzona przez szczotkę. 
	UWAGA: Podczas manipulowania wypławkami do testu pLmV użyj małego, czystego, płaskiego lub okrągłego pędzla akwarelowego (numery 3–6). Podczas przesuwania wypławków szczotkę należy umieścić pod zwierzęciem, aby delikatnie je podnieść. Aby wypławki nie uległy uszkodzeniu podczas używania szczotki, włosie szczotki nie powinno być rozchylone pod zwierzęciem. Rozprzestrzenianie się włosia może zaszkodzić wypławkowi, jeśli zostanie złapany między włóknami szczotki. 
	UWAGA: Pipeta transferowa o szerokim otworze może być również używana do przenoszenia wypławka do czystego i suchego pojemnika habituacyjnego.
	<ol>
		<li>W przypadku korzystania z pipety, nadmiar wody przemieszczanej wraz z wypławkiem należy usunąć z pojemnika habituacyjnego za pomocą pipety transferowej.</li>
		<li>Ostrożnie dodaj roztwór habituacyjny (tj. niezanieczyszczoną wodę źródlaną do kontroli lub wodę źródlaną zawierającą badany produkt naturalny) do pojemnika habituacyjnego zawierającego wypławkę.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Okresy przyzwyczajenia do odstawienia będą zależeć od dynamiki stymulacji ocenianej dla testowanego produktu naturalnego; 2-5 minut okazało się wystarczające.</li>
	<li>Po okresie habituacji użyj pędzla akwarelowego, aby delikatnie przenieść wypławkę na przygotowaną 5 cm szalkę Petriego zawierającą wodę źródlaną, aby spłukać wszelkie naturalne produkty z pojemnika habituacyjnego. Upewnij się, że wypławka nie została uszkodzona przez szczotkę.</li>
	<li>Natychmiast przenieś wypławkę do środka przygotowanej 10 cm szalki Petriego zawierającej wodę źródlaną do eksperymentu z odstawieniem pLmV. Upewnij się, że wypławka nie została uszkodzona przez szczotkę.</li>
	<li>Uruchom kamerę, aby nagrać ruch wypławka. Nagraj 10–11 minut wideo.</li>
	<li>Przygotuj pojemnik habituacyjny, pojemnik do płukania i 10-centymetrową szalkę Petriego do eksperymentu pLmV ze świeżymi roztworami dla każdej wypławki.</li>
	<li>Używaj dedykowanych pipet, naczyń, pojemników i pędzli do każdego eksperymentalnego stężenia testowanego produktu naturalnego, aby uniknąć nieumyślnego wystawienia wypławków na działanie niewłaściwego roztworu podczas eksperymentów.</li>
	<li>Ponieważ wypławki wykazują wyuczone zachowania, użyj każdego wypławka (kontrolnego lub testowego) tylko raz26,27.</li>
</ol>
5. Analiza danych
<ol>
	<li>Przygotuj tabelę zbierania danych, aby udokumentować zachowanie i ruchliwość wypławków jako liczbę linii siatki przeciętych w każdej minucie podczas biegu pLmV. Tabela powinna również umożliwiać udokumentowanie skumulowanej liczby linii na minutę przekroczonych przez wypławka. Dołącz wiersze na notatki i tabelę definicji, aby zsumować obserwację zachowań w okresie eksperymentalnym, takich jak "wędrowanie" i "zatrzymywanie się" (patrz Dyskusja).</li>
	<li>Korzystając z wideo, policz liczbę pełnych linii siatki przeciętych przez wypławka na minutę przez 10 minut i zapisz tę liczbę w tabeli danych. Typowe zachowanie wypławków składa się z ciągłej prędkości, ruchu skierowanego do przodu, poziomego, z okresowymi skrętami i bez zatrzymań.
	<ol>
		<li>Rozpocznij czas eksperymentu w momencie, w którym wypławka odsunęła się od pędzla użytego do przeniesienia go na 10-centymetrową szalkę Petriego. Zapisz ten czas rozpoczęcia.</li>
		<li>Aby określić, kiedy zwierzę przekroczy pełne pole siatki, skup się na głowie i zdobądź jedną linię, gdy głowa całkowicie przekroczy kwadrat.</li>
		<li>Aby uzyskać pełną siatkę, gdy robak porusza się wokół krawędzi naczynia, zwizualizuj odległość 0,5 cm, odwołując się do linii, które wystają z brzegów naczynia. Jeśli wypławka przekroczy róg pola, zapoznaj się z drugą przeciętą linią, aby zdobyć jedną linię siatki. Ponownie skup się na głowie, aby dokonać tych ustaleń.</li>
		<li>Zatrzymuj wideo po każdej minucie, aby nagrać dane.</li>
		<li>Podczas ponownego uruchamiania wideo, aby odliczyć następną minutę, jeśli głowa robaka znajdowała się między liniami siatki, gdy wideo zostało zatrzymane, nagraj pierwszą przekroczoną linię jako pełne pole.</li>
		<li>Oceń liczbę linii startowych przekroczonych w ciągu 10 minut.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Jeśli zwierzę przestanie się poruszać podczas testu pLmV i nie przekroczy już linii siatki w ciągu 10 minut nagrywania, udokumentuj zachowanie wypławka na wykresie behawioralnym (np. "wędrowanie" lub "zatrzymanie się"). Zwierzęta, które zatrzymują swój tor jazdy do przodu podczas oznaczania pLmV, powinny być zamiast tego odnotowane, a dane przedstawione jako częstotliwość całkowitej liczby zwierząt narażonych na to stężenie odczynnika. Zachowanie zwijające się lub konwulsyjne (znane jako zachowanie C) zapobiegające jakiemukolwiek ruchowi do przodu w okresie przyzwyczajenia wskazuje, że stężenie naturalnego produktu nie jest odpowiednie do stosowania w teście pLmV, ponieważ test pLmV jest oparty na ruchliwości. Zachowania typu C mogą być analizowane przy użyciu innego typu analizy (patrz Dyskusja).</li>
	<li>Jeśli to możliwe, przetestuj wiele eksperymentalnych stężeń naturalnego produktu przy użyciu co najmniej 9-12 robaków w różnych dniach i różnych porach dnia, jeśli określasz ogólny wpływ odczynnika na fizjologię wypławków. Jeśli jednak naukowcy będą dążyć do zmniejszenia zmienności wywołanej rytmem okołodobowym, eksperymenty można przeprowadzać przy stałym oświetleniu o określonej porze dnia przy użyciu robaków, które są hodowane z czasowymi cyklami światła/ciemności i ustalonymi porami karmienia. Zaangażować w projekt co najmniej dwóch eksperymentatorów, aby umożliwić jednemu indywidualnemu rejestrowaniu danych, podczas gdy drugi osobnik liczy linie siatki "ślepo" na warunki użyte do zbierania danych. Zaangażowanie różnych osób w gromadzenie danych, a także obliczenia i analizy statystyczne, również zmniejsza ewentualne uprzedzenia.</li>
	<li>Oblicz liczbę linii siatki dla każdego stężenia produktu naturalnego w każdym dniu w stosunku do liczby kontrolnej dla każdej minuty, aby można było połączyć dane z różnych dni, godzin i eksperymentatorów. Dane te można uśrednić, a następnie przeanalizować za pomocą testów T Studenta. Wartości P dla każdego testu mogą być oceniane na minutę w porównaniu z kontrolą i między stężeniami odczynników. Oceny ANOVA z wykorzystaniem zestawów danych pochodzących z różnych stężeń eksperymentalnych stanowią dalszą metodę analizy.</li>
</ol>

<ol><li>Moustakas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guarana+provides+additional+stimulation+over+caffeine+alone+in+the+planarian+model%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Guarana provides additional stimulation over caffeine alone in the planarian model.</a> PloS One. 10 (4), 0123310(2015).</li>
<li>Raffa, R. B., Valdez, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cocaine+withdrawal+in+Planaria%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Cocaine withdrawal in Planaria.</a> European Journal of Pharmacology. 430 (1), 143-145 (2001).</li>
<li>Raffa, R. B., Holland, L. J., Schulingkamp, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+dopamine+D2+antagonist+activity+using+invertebrate+%28Planaria%29+locomotion+as+a+functional+endpoint%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Toxicological+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of dopamine D2 antagonist activity using invertebrate (Planaria) locomotion as a functional endpoint.</a> Journal of Pharmacology and Toxicological Methods. 45 (3), 223-226 (2001).</li>
<li>Thumé, I. S., Frizzo, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sertraline+induces+toxicity+and+behavioral+alternations+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Research+International%22%5BJournal%5D)">Sertraline induces toxicity and behavioral alternations in planarians.</a> Biomedical Research International. 2017, 5792621(2017).</li>
<li>Aggarwal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+allosteric+modulator+of+the+human+dopamine+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chemical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel allosteric modulator of the human dopamine transporter.</a> ACS Chemical Neuroscience. 10 (8), 3718-3730 (2019).</li>
<li>Zhang, C., Tallarida, C. S., Raffa, R. B., Rawls, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sucrose+produces+withdrawal+and+dompamine-sensitive+reinforcing+effects+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Sucrose produces withdrawal and dompamine-sensitive reinforcing effects in planarians.</a> Physiology & Behavior. 0, 8-13 (2013).</li>
<li>Zewde, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PLDT+%28planarian+light%2Fdark+test%29%3A+an+invertebrate+assay+to+quantify+defensive+responding+and+study+anxiety-like+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">PLDT (planarian light/dark test): an invertebrate assay to quantify defensive responding and study anxiety-like effects.</a> Journal of Neuroscience Methods. 293, 284-288 (2018).</li>
<li>Risse, B., Otto, N., Berh, D., Jiang, X., Klämbt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FIM+Imaging+and+FIMtrack%3A+two+new+tools+allowing+high-throughput+and+cost+effective+locomotion+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">FIM Imaging and FIMtrack: two new tools allowing high-throughput and cost effective locomotion analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52207(2014).</li>
<li>Inoue, T., Hoshino, H., Yamashita, T., Shimoyama, S., Agata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Planarian+shows+decision-making+behavior+in+response+to+multiple+stimuli+by+integrative+brain+function%5BTitle%5D)+AND+%22Zoological+Letters%22%5BJournal%5D)">Planarian shows decision-making behavior in response to multiple stimuli by integrative brain function.</a> Zoological Letters. 1, 7(2015).</li>
<li>Hastrom, D., Cochet-Escartin, O., Zhang, S., Khuu, C., Collins, E. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Freshwater+planarians+as+an+alternative+animal+model+for+neurotoxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Freshwater planarians as an alternative animal model for neurotoxicology.</a> Toxicological Sciences. 147 (1), 270-285 (2015).</li>
<li>Risse, B., Berh, D., Otto, N., Klämbt, C., Jiang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FIMtrack%3A+an+open+source+tracking+and+locomotion+analysis+software+for+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One+Computational+Biology%22%5BJournal%5D)">FIMtrack: an open source tracking and locomotion analysis software for small animals.</a> PLoS One Computational Biology. 13 (5), 100553(2017).</li>
<li>Pagán, O. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Planaria%3A+an+animal+model+that+integrates+development%2C+regeneration+and+pharmacology%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Planaria: an animal model that integrates development, regeneration and pharmacology.</a> International Journal of Developmental Biology. 61, 519-529 (2017).</li>
<li>Palladini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pharmacological+study+of+cocaine+activity+in+planaria%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Biochemistry+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">A pharmacological study of cocaine activity in planaria.</a> Comparative Biochemistry and Physiology. 115 (1), 41-45 (1996).</li>
<li>Buttarelli, F. R., Pellicano, C., Pontieri, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropharmacology+and+behavior+in+planarians%3A+translation+to+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Biochemistry+and+Physiology+Part+C.+Toxicology+%26+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Neuropharmacology and behavior in planarians: translation to mammals.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part C. Toxicology & Pharmacology. 147 (4), 399-408 (2008).</li>
<li>Nishimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+glutamic+acid+decarboxylase+gene+and+distribution+of+GABAergeric+nervous+system+in+the+planarian+Dugesia+japonica%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Identification of glutamic acid decarboxylase gene and distribution of GABAergeric nervous system in the planarian Dugesia japonica.</a> Neuroscience. 153 (4), 1103-1114 (2008).</li>
<li>Raffa, R. B., Rawls, S. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRaffa%2C+RB+%22A+model+for+drug+action+and+abuse%22">A model for drug action and abuse</a>. , Landes Bioscience. Austin, TX. (2008).</li>
<li>Hall, F., Morita, M., Best, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((neoplastic+transformation+in+the+planarian%3A+I+cocarcinogenesis+and+histopathology%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Zoology%22%5BJournal%5D)">neoplastic transformation in the planarian: I cocarcinogenesis and histopathology.</a> The Journal of Experimental Zoology. 240 (2), 211-227 (1986).</li>
<li>Voura, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Planarians+as+models+of+cadmium-induced+neoplasia+provide+measurable+benchmarks+for+mechanistic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Ecotoxicology+and+Environmental+Safety%22%5BJournal%5D)">Planarians as models of cadmium-induced neoplasia provide measurable benchmarks for mechanistic studies.</a> Ecotoxicology and Environmental Safety. 142, 544-554 (2017).</li>
<li>Van Roten, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+carcinogenic+trigger+to+study+the+function+of+tumor+suppressor+genes+in+Schmedtea+mediterranea%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+and+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">A carcinogenic trigger to study the function of tumor suppressor genes in Schmedtea mediterranea.</a> Disease Models and Mechanisms. 11 (9), 032573(2018).</li>
<li>Mason, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemo-klino-kinesis+in+planarian+food+location%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Chemo-klino-kinesis in planarian food location.</a> Animal Behaviour. 23 (2), 460-469 (1975).</li>
<li>Van Huizen, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weak+magnetic+fields+alter+stem+cell-mediated+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Weak magnetic fields alter stem cell-mediated growth.</a> Science Advances. 5 (1), 7201(2019).</li>
<li>Brown, H. M., Ogden, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+electrical+response+of+the+planarian+ocellus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+Physiology%22%5BJournal%5D)">The electrical response of the planarian ocellus.</a> Journal of General Physiology. 51 (2), 255-260 (1968).</li>
<li>Inoue, T., Yamashita, T., Agata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermosensory+signaling+by+TRPM+is+processed+by+brain+serotonergic+neurons+to+produce+planarian+thermotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Thermosensory signaling by TRPM is processed by brain serotonergic neurons to produce planarian thermotaxis.</a> The Journal of Neuroscience. 34 (47), 15701-15714 (2014).</li>
<li>Byrne, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ethanol+on+negative+phototaxis+and+motility+in+brown+planarians+%28Dugesia+tigrina%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Effects of ethanol on negative phototaxis and motility in brown planarians (Dugesia tigrina).</a> Neuroscience Letters. 685, 102-108 (2018).</li>
<li>de Sousa, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+analysis+of+planarians+under+simulated+microgravity+or+8g+demonstrates+that+alteration+of+gravity+induces+genomic+and+cellular+alterations+that+could+facilitate+tumoral+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic analysis of planarians under simulated microgravity or 8g demonstrates that alteration of gravity induces genomic and cellular alterations that could facilitate tumoral transformation.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (3), 720(2019).</li>
<li>Best, J. B., Rubinstein, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maze+learning+and+associated+behavior+in+planaria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+and+Physiological+Psychology%22%5BJournal%5D)">Maze learning and associated behavior in planaria.</a> Journal of Comparative and Physiological Psychology. 55, 560-566 (1962).</li>
<li>Shomrat, T., Levin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+automated+training+paradigm+reveals+long-term+memory+in+planarians+and+its+persistence+through+head+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">An automated training paradigm reveals long-term memory in planarians and its persistence through head regeneration.</a> The Journal Experimental Biology. 216, Pt 20 3799-3810 (2013).</li>
<li>Robarts-Galbraith, R. H., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+organ+trail%3A+insights+into+organ+regeneration+in+the+planarian%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Genetics+%26+Development%22%5BJournal%5D)">On the organ trail: insights into organ regeneration in the planarian.</a> Current Opinion in Genetics & Development. 32, 37-46 (2015).</li>
<li>Ivancovic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Model+systems+for+regeneration%3A+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Model systems for regeneration: planarians.</a> Development. 146 (17), 167684(2019).</li>
<li>Herath, S., Lobo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-inhibition+of+Turing+patterns+explains+the+self-organized+regulatory+mechanism+of+planarian+fission%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Theoretical+Biology%22%5BJournal%5D)">Cross-inhibition of Turing patterns explains the self-organized regulatory mechanism of planarian fission.</a> Journal of Theoretical Biology. 485, 110042(2019).</li>
<li>Animal Diversity. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Dugesia_tigrina/">http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Dugesia_tigrina/</a> (2019).</li>
<li>Itoh, M. T., Shinozawa, T., Sumi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+rhythms+of+melatonin-synthesizing+enzyme+activities+and+melatonin+levels+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Circadian rhythms of melatonin-synthesizing enzyme activities and melatonin levels in planarians.</a> Brain Research. 830 (1), 165-173 (1999).</li>
<li>Itoh, M. T., Igarashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+rhythm+of+serotonin+levels+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreports%22%5BJournal%5D)">Circadian rhythm of serotonin levels in planarians.</a> Neuroreports. 11 (3), 473-476 (2000).</li>
<li>Hinrichsen, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photosensitivity+and+motility+in+planarian+Schmedtea+mediterranea+vary+diurnally%5BTitle%5D)+AND+%22Chronobiology+International%22%5BJournal%5D)">Photosensitivity and motility in planarian Schmedtea mediterranea vary diurnally.</a> Chronobiology International. 36 (12), 1789-1793 (2019).</li>
<li>Raffa, R. B., Desai, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Description+and+quantification+of+cocaine+withdrawal+signs+in+planaria%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Description and quantification of cocaine withdrawal signs in planaria.</a> Brain Research. 1032 (1-2), 200-202 (2005).</li>
<li>Pagán, O. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cembranoid+from+tobacco+prevents+the+expression+of+induced+withdrawal+behavior+in+planarian+worms%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">A cembranoid from tobacco prevents the expression of induced withdrawal behavior in planarian worms.</a> European Journal of Pharmacology. 615 (1-3), 118-124 (2009).</li>
<li>Rawls, S. M., Patil, T., Yuvasheva, E., Raffa, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+evidence+that+drugs+of+abuse+produce+behavioral+sensitization+and+cross-sensitization+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">First evidence that drugs of abuse produce behavioral sensitization and cross-sensitization in planarians.</a> Behavioural Pharmacology. 21 (4), 301-313 (2010).</li>
<li>Venturini, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pharmacological+study+of+dopaminergic+receptors+in+planaria%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">A pharmacological study of dopaminergic receptors in planaria.</a> Neuropharmacology. 28 (12), 1377-1382 (1989).</li>
<li>Ouyang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+effects+of+Spenda%2C+Equal+and+sucrose%3A+Clues+from+planarians+on+sweeteners%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Behavioral effects of Spenda, Equal and sucrose: Clues from planarians on sweeteners.</a> Neuroscience Letters. 636, 213-217 (2017).</li>
<li>Pagán, O. R., Montgomery, E., Deats, S., Bach, D., Baker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+nicotine-induced%2C+curare-sensitive%2C+behavior+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemical+Research%22%5BJournal%5D)">Evidence of nicotine-induced, curare-sensitive, behavior in planarians.</a> Neurochemical Research. 40 (10), 2087-2090 (2015).</li>
<li>Shibata, N., Agata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+in+planarians%3A+feeding+and+injection+of+synthetic+dsRNA%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">RNA interference in planarians: feeding and injection of synthetic dsRNA.</a> Methods in Molecular Biology. 1774, 455-466 (2018).</li>
<li>Pagán, O. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+cocaine-induced+planarian+behavior+by+parthenolide+and+related+sesquiterpene+lactones%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Reversal of cocaine-induced planarian behavior by parthenolide and related sesquiterpene lactones.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 89 (2), 160-170 (2008).</li>
<li>Vouga, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereochemistry+and+neuropharmacology+of+a+%27bath+salt%27+cathinone%3A+S-enantiomer+of+mephedrone+reduces+cocaine-induced+reward+and+withdrawal+in+invertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Stereochemistry and neuropharmacology of a 'bath salt' cathinone: S-enantiomer of mephedrone reduces cocaine-induced reward and withdrawal in invertebrates.</a> Neuropharmacology. 91, 109-116 (2015).</li>
<li>Chan, J. D., Marchant, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+and+functional+genetic+assays+to+manipulate+regeneration+of+the+planarian+Dugesia+japonica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Pharmacological and functional genetic assays to manipulate regeneration of the planarian Dugesia japonica.</a> Journal of Visualized Experiments. (54), e3058(2011).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Opisano prosty i dostępny test ruchliwości wypławków w celu określenia stymulantów i efektów odstawienia produktów naturalnych. Jako model behawioralny, konieczne jest posiadanie rygorystycznych protokołów oceny ruchu, ruchu i jasnych definicji wszelkich zachowań, aby ustandaryzować obserwacje między różnymi eksperymentatorami. Przedstawione pomysły pokazują, w jaki sposób można to osiągnąć. Każde laboratorium stosujące ten protokół powinno dostosować prezentowane informacje do efektów działania konkretnego badanego prod...

Opisany protokół wykorzystuje ruchliwość wypławków, aby zapewnić sposób oceny efektów biomodulacyjnych naturalnych substancji. Został specjalnie przystosowany do określenia, czy substancje te działają jako stymulanty i czy są one związane z mierzalnym zachowaniem odstawiennym1. Ten test, znany jako test prędkości lokomotorycznej wypławki (pLmV), został po raz pierwszy użyty do testowania znanych środków farmakologicznych2,3. Od tego czasu zastosowanie tego testu opartego na ruchliwości wypławków zyskało na popularności i zostało przyjęte przez różne laboratoria zainteresowane substancjami innymi niż produkty naturalne4,5. W tym teście wypławka umieszcza się na szalce Petriego zawierającej wodę źródlaną lub wodę źródlaną zawierającą rozpuszczony biomodulator. Ponieważ samo naczynie jest umieszczone na papierze milimetrowym, liczba linii siatki przecinanych przez zwierzę w czasie, gdy porusza się po pojemniku, może być wykorzystana do określenia szybkości ruchu w każdym stanie. Test światła/ciemności, inaczej określany jako test preferencji miejsca uwarunkowanego (CPP), jest kolejną wariacją na temat monitorowania ruchliwości wypławków i ocenia, jak szybko zwierzęta reagują i migrują do zaciemnionego środowiska6,7. Śledzenie wideo ruchów wypławków może być również analizowane za pomocą programów komputerowych i śledzenia środka masy (COM)8,9,10,11.
Używanie wypławka jako modelu zwierzęcego do takich badań daje kilka zalet w porównaniu z innymi zwierzętami, ponieważ eksperymentator może łatwo kontrolować środowisko testowe. W szczególności głodzenie wypławków przed eksperymentami może zapobiec ich ekspozycji na inne czynniki odżywcze lub farmakologiczne, które w przeciwnym razie mogłyby zakłócić wyniki, a badany specyficzny biomodulator można wprowadzić do wypławków po prostu dodając go bezpośrednio do wody hodowlanej, standaryzując w ten sposób ekspozycję. Ponieważ wypławki mają układ nerwowy i neuroprzekaźniki, które przypominają zwierzęta "wyższego rzędu", fizjologia i eksperymentalne reakcje tych zwierząt na bodźce nerwowo-mięśniowe są uważane za biologicznie istotne dla innych organizmów12,13,14,15,16. Ponadto, ponieważ wypławki są stosunkowo niedrogie i łatwe w utrzymaniu w laboratorium, stanowią dostępny model biologiczny dla wielu badaczy.
Jako zwierzę doświadczalne, wypławki nadają się do szerokiego zakresu badań. Na przykład nasza grupa, jak również inni badacze, używają wypławków do badania nowotworzenia17,18,19. Wypławki wykazują również szereg zachowań reakcyjnych na bodźce chemiczne, termiczne, grawitacyjne, elektryczne, fotograficzne i magnetyczne, które stanowiły podstawę innych systemów testowych. Niektóre z tych efektów zostały wykorzystane do badania uczenia się i pamięci u tych zwierząt20,21,22,23,24,25,26,27. Podstawowe zastosowanie modelu wypławkowego w obecnej literaturze koncentruje się na aktywności pluripotencjalnych komórek macierzystych wypławkowych, zwanych neoblastami, i ich roli w regeneracji28,29,30. W związku z tym przyjęcie opisanego tutaj modelu pozwala na dalsze badania przy użyciu innych testów opartych na wypławkach, aby zapewnić szersze zrozumienie, w jaki sposób produkty naturalne i inne biomodulatory wpływają na organizm.

<table><tbody><tr><td>Woda butelkowana - 1 galon.</td><td>Polska Źródło</td><td>N/A</td><td>Woda źródlana do hodowli wypławków i do przygotowania roztworów</td></tr><tr><td>Brązowa Planaria (Dugesia tigrina)</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td>132954</td><td>Brązowa płaśnik żyjąca (dopuszczalne są inne gatunki)</td></tr><tr><td>Płaski pędzel</td><td>Royal Crafter's Choice</td><td>9159</td><td>Płaskie pędzle akwarelowe do czyszczenia pojemników na kultury wypławkowe</td></tr><tr><td>Szklana szalka Petriego - 10 cm</td><td>Kimax</td><td>Nie dotyczy</td><td>Średnica 10 cm (szkło) Szalki Petriego do oznaczania pLmV</td></tr><tr><td>Szklana szalka Petriego - 5 cm</td><td>Kimax</td><td>N/A</td><td>5 cm i szalki Petriego do płukania wypławków podczas eksperymentów z odstawieniem i do habituacji stymulantów</td></tr><tr><td>Papier siatkowy</td><td>Dowolna</td><td>Standardowa</td><td>siatka 0,5 cm do oznaczania pLmV</td></tr><tr><td>iPEVO Visualizer (oprogramowanie)</td><td>iPEVO</td><td>https://www.ipevo.com/software/visualizer</td><td>Oprogramowanie kamery dokumentacyjnej do przechwytywania i nagrywania filmów</td></tr><tr><td>Zestaw wyrobów metalowych ze stojakiem podporowym i pierścieniem retortowym</td><td>Dowolna</td><td>nie dotyczy</td><td>Standardowy stojak laboratoryjny do przechowywania aparatu w telefonie komórkowym, jeśli jest używany</td></tr><tr><td>Jajko ekologiczne</td><td>Dowolna</td><td>nie dotyczy</td><td>Ekologiczna wątroba jajeczna lub wołowa do karmienia planarainów</td></tr><tr><td>Butelka z poliwęglanu z zakrętką - 10 ml</td><td>Beckman</td><td>N/A</td><td>Plastikowe fiolki na pojemność od 5 do 10 ml do przyzwyczajania do stymulantów</td></tr><tr><td>Okrągły pojemnik do przechowywania - 10 cm</td><td>Ziploc</td><td>N/A</td><td>10 cm Okrągłe pojemniki do przechowywania żywności dla około 90 wypławków lub mniej</td></tr><tr><td>Okrągły pędzel do malowania wodą</td><td>LOEW-Cornell</td><td>N/A</td><td>Małe okrągłe pędzle akwarelowe (numery od 3 do 6) - miękkie</td></tr><tr><td>Pipeta transferowa</td><td>Dowolna</td><td>N/A</td><td>Plastikowe pipety transferowe o szerokim otworze (5 mL) do poruszania wypławkami</td></tr><tr><td>Kamera dokumentacyjna USB</td><td>iPEVO</td><td>CDVU-06IP</td><td>Kamera dokumentacyjna (lub inna kamera lub kamera telefonu komórkowego)</td></tr></tbody></table>

test ruchliwości wypławków w celu oceny właściwości biomodulacyjnych produktów naturalnych

A Planarian Motility Assay to Gauge the Biomodulating Properties of Natural Products

Opisany jest prosty, kontrolowany sposób wykorzystania niepasożytniczego płazińca, Dugesia tigrina, wolno żyjącego wodnego płazińca, do badania właściwości pobudzających i odstawiających produktów naturalnych. Testy eksperymentalne wykorzystujące unikalne aspekty fizjologii wypławków zostały zastosowane w badaniach nad gojeniem się ran, regeneracją i nowotworzeniem ran. Ponadto, ponieważ wypławki wykazują wrażliwość na różnorodne bodźce środowiskowe i są zdolne do uczenia się i rozwijania uwarunkowanych reakcji, mogą być wykorzystywane w badaniach behawioralnych badających uczenie się i pamięć. Wypławki posiadają podstawową obustronną symetrię i ośrodkowy układ nerwowy, który wykorzystuje układy neuroprzekaźników podatne na badania badające działanie biomodulatorów nerwowo-mięśniowych. W związku z tym opracowano eksperymentalne systemy monitorujące ruch i motorykę wypławków w celu zbadania uzależnienia od substancji i odstawienia. Ponieważ ruchliwość wypławków oferuje potencjał dla czułego, łatwego do standaryzacji systemu oznaczania ruchliwości do monitorowania wpływu bodźców, test prędkości planariańskiej lokomotorycznej (pLmV) został dostosowany do monitorowania zarówno zachowań związanych ze stymulacją, jak i wycofaniem przez wypławki poprzez określenie liczby linii siatki przekraczanych przez zwierzęta w czasie. Tutaj zademonstrowano i wyjaśniono technikę i jej zastosowanie.

Przygotowanie laboratorium oraz stanowiska pracy do przeprowadzenia testu pLmV powinno zostać zakończone przed rozpoczęciem eksperymentu. Obejmuje to przygotowanie pojemnika do habituacji, pojemnika do płukania, jeśli jest on wymagany (w przypadku eksperymentów z wycofaniem), szalki Petriego umieszczonej na laminowanej papierze w kratkę oraz odpowiednio ustawionej kamery (Rycina 1). Po zarejestrowaniu wszystkich materiałów wideo zaleca się stosowanie wspólnego arkusza danych w celu ustandary...

Ruchliwość płaśnikowa służy do oceny właściwości pobudzających i odstawczych produktów naturalnych w porównaniu z ruchem zwierząt w samej wodzie źródlanej.

Test ruchliwości wypławków w celu oceny właściwości biomodulacyjnych produktów naturalnych

A straightforward, controllable means of using the non-parasitic planarian, Dugesia tigrina, a free-living aquatic flatworm, to study the stimulant and ...

Test prędkości lokomotorycznej wypławki jest sposobem na szybką ocenę stymulantów i możliwych skutków odstawienia różnych biologicznych środków modyfikujących, które mogą wpływać na ruchliwość. Ten esej jest łatwy do kontrolowania i zapewnia prostą i dostępną metodę generowania wiarygodnych danych behawioralnych nawet w najbardziej podstawowych warunkach badawczych. Ponieważ wypławkowy układ nerwowy ma scentralizowany, szczątkowy mózg, dwustronną symetrię i analogiczne systemy neuroprzekaźników, badania behawioralne z wykorzystaniem tych organizmów oferują przedkliniczny wgląd w możliwe reakcje kręgowców.Na eksperymenty mogą dodatkowo wpływać modyfikatory szlaków fizjologicznych, leki, a nawet genetycznie zmodyfikowane wypławki, aby zapewnić wgląd w związane z nimi mechanizmy biologiczne. Ważne jest, aby wypławka była płaska, aby transfery między pojemnikami nie obciążały ich oraz aby ustandaryzować krzywe linii siatki między elementami laboratorium. Najlepszym sposobem na uzyskanie spójnych wyników z tego eksperymentu z esejem behawioralnym jest sprawdzenie, jak wykonali je doświadczeni użytkownicy.Po założeniu wypławka karm robaki ad libitum regularnie dwa razy w tygodniu posieka

a-planarian-motility-assay-to-gauge-biomodulating-properties-natural

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemia

Atrakcyjnym modelem do badania różnicowania się komórek macierzystych w żywym organizmie jest płaskonic z rzędu Planarioidea. Regenerację bada się za pomocą prostych eksperymentów z amputacją, które można łatwo przeprowadzić w podstawowym laboratorium i które poddaje się manipulacjom farmakologicznym oraz genetycznym (in vivo RNAi), zgodnie ze szczegółowymi protokołami zawartymi w niniejszym artykule.

Badania farmakologiczne i funkcjonalne badania genetyczne w celu manipulacji regeneracją planarii Dugesia japonica

Ten film demonstruje zastosowanie testu lokomocji promieniowej do oceny dysfunkcji motorycznej u C. elegans wykazujących ekspresję ludzkiego białka TDP-43 typu dzikiego lub z mutacją ALS. Robaki o różnym poziomie ekspresji TDP-43 typu dzikiego lub zmutowanego mogą pełzać, a ich ruch jest mierzony odległością promieniową przebytą od centralnego punktu na płytce testowej. Test rozróżnia łagodne, umiarkowane i ciężkie upośledzenie motoryczne na podstawie odległości przebytej przez różne szczepy C.

Ocena upośledzenia motorycznego w modelach C. elegans za pomocą testu lokomocji radialnej

Opisano metodę ilościowej oceny reakcji chemotaktycznej Caenorhabditis elegans. Zastosowano wskaźnik chemotaksyczny (CI) jako sposób dokładnej oceny reakcji robaków na określone cele oraz jako platformę porównawczą między odmianami i związkami interesującymi.

C. elegans Test chemotaktyksy

Protokół jest opisany do wykrywania in vivo efektów inhibitorów mitochondrialnych w organizmie modelowym Caenorhabditis elegans oraz do identyfikacji potencjalnych związków wzmacniających. Protokół ten może być używany do badań przesiewowych bibliotek leków pod kątem związków modulujących funkcję mitochondriów.

Przesiewowy test in vivo dla modulatorów mitochondrialnych przy użyciu transgenicznych bioluminescencyjnych Caenorhabditis elegans

Ten protokół pokazuje, jak konsekwentnie wycinać wypławki oczu (panewki wzrokowe) bez naruszania otaczających tkanek. Za pomocą igły insulinowej i strzykawki można dokonać ablacji jednego lub obu oczu, aby ułatwić badania nad mechanizmami regulującymi regenerację oczu, ewolucją regeneracji wzroku i neuronalnymi podstawami zachowań wywołanych światłem.

Test ablacji chirurgicznej do badania regeneracji oka u wypławków

Wypławki słodkowodne wykazują trzy chody (ślizganie się, perystaltyka i zgniatanie), które można rozróżnić za pomocą ilościowej analizy behawioralnej. Opisujemy metodę wywoływania zgniecania za pomocą różnych szkodliwych bodźców, ich kwantyfikację oraz odróżnienie od perystaltyki i ślizgu. Korzystając z knockdownu genów, demonstrujemy specyfikę zgniatania jako ilościowego odczytu fenotypowego.

Zgniatanie wypławków jako ilościowy odczyt behawioralny dla wyczuwania szkodliwych bodźców

Przedstawiamy protokół charakteryzacji ruchliwości i zachowania populacji komórek o rozmiarach stu mikronów do milimetrów za pomocą mikroskopii jasnego pola i śledzenia komórek. Ten test ujawnia, że Stentor coeruleus przechodzi przez cztery behawioralnie odrębne fazy podczas regeneracji utraconego aparatu ustnego.

Analiza wzorców ruchliwości stentora w trakcie i po regeneracji aparatu jamy ustnej z wykorzystaniem śledzenia komórek

Ten protokół opisuje dwa czułe testy do rozróżniania między łagodnym, umiarkowanym i ciężkim upośledzeniem motorycznym w modelach stwardnienia zanikowego bocznego C. elegans, z ogólną użytecznością dla szczepów C. elegans, ze zmienioną ruchliwością.

Ocena upośledzenia motorycznego w modelach stwardnienia zanikowego bocznego C. elegans

Obecny protokół opisuje test określający odpowiedź na lewamizol, farmakologicznego agonistę jednej klasy receptorów acetylocholiny Caenorhabditis elegans. W tym płynnym teście pływania z lewamizolem naukowcy wizualnie obserwują i określają ilościowo zależny od czasu paraliż zwierząt hodowanych na 24-dołkowych płytkach.

Pomiar wrażliwości Caenorhabditis elegans na lewamizol, agonistę receptora acetylocholiny

Artykuł proponuje nowatorską metodę in vitro do szybkiej i czułej oceny toksyczności i ekotoksyczności zanieczyszczeń, w oparciu o ruchliwość hemocytów Mytilus galloprovincialis. Metoda ta ma na celu przyczynienie się do opracowania bardziej etycznych i czułych badań narażenia toksykologicznego i ekotoksykologicznego.

Test toksykologiczny i ekotoksykologiczny oparty na ruchliwości hemocytów omułka (Mytilus galloprovincialis)

Napady negatywnie wpływają na różne funkcje i jakość życia. Robaki Planaria były wystawione na działanie różnych stężeń chemoconvulsantów w celu oceny ich fenotypów napadowych i ruchliwości destrukcyjnej. W badaniu tym zaproponowano wykorzystanie robaków wypławkowych jako modelu ostrych napadów padaczkowych u ludzi i ma znaczenie w opracowywaniu leków na padaczkę.

Wypławka jako model zwierzęcy do eksperymentalnego ostrego napadu padaczkowego

Poznaj test ruchliwości wypławków do oceny właściwości biomodulacyjnych produktów naturalnych. Ta metoda dostarcza wiarygodnych danych behawioralnych w badaniach nad układem nerwowym.

Test ruchliwości wypławków w celu oceny właściwości biomodulacyjnych produktów naturalnych

Przeglądaj więcej filmów