Test ruchliwości wypławków w celu oceny właściwości biomodulacyjnych produktów naturalnych

Test prędkości lokomotorycznej wypławki jest sposobem na szybką ocenę stymulantów i możliwych skutków odstawienia różnych biologicznych środków modyfikujących, które mogą wpływać na ruchliwość. Ten esej jest łatwy do kontrolowania i zapewnia prostą i dostępną metodę generowania wiarygodnych danych behawioralnych nawet w najbardziej podstawowych warunkach badawczych. Ponieważ wypławkowy układ nerwowy ma scentralizowany, szczątkowy mózg, dwustronną symetrię i analogiczne systemy neuroprzekaźników, badania behawioralne z wykorzystaniem tych organizmów oferują przedkliniczny wgląd w możliwe reakcje kręgowców.

Na eksperymenty mogą dodatkowo wpływać modyfikatory szlaków fizjologicznych, leki, a nawet genetycznie zmodyfikowane wypławki, aby zapewnić wgląd w związane z nimi mechanizmy biologiczne. Ważne jest, aby wypławka była płaska, aby transfery między pojemnikami nie obciążały ich oraz aby ustandaryzować krzywe linii siatki między elementami laboratorium. Najlepszym sposobem na uzyskanie spójnych wyników z tego eksperymentu z esejem behawioralnym jest sprawdzenie, jak wykonali je doświadczeni użytkownicy.

Po założeniu wypławka karm robaki ad libitum regularnie dwa razy w tygodniu posiekanymi ekologicznymi jajkami na twardo lub zmiksowaną ekologiczną wątrobą wołową przez jedną do dwóch godzin. Po karmieniu usuń zabrudzoną wodę z pojemnika i za pomocą płaskiego pędzla akwarelowego przenieś wszelkie resztki jedzenia i szlam przylegający do pojemnika na ręcznik papierowy. Użyj świeżej wody źródlanej i delikatnego wirowania lub mieszania, aby usunąć wypławki i umieścić robaki w czystym pojemniku.

Wsuń końcówkę pipety o szerokim otworze pod wszelkie wypławki przylegające do starego pojemnika, aby ułatwić ich przeniesienie do nowego naczynia i ostrożnie zdekantować wodę transferową. Następnie przykryj wypławki w nowym pojemniku świeżą wodą źródlaną. Aby wykonać test prędkości lokomotorycznej wypławków, najpierw upewnij się, że wygłodzone przez pięć do 10 dni wypławki są w pełni uformowane z kompletnymi i pigmentowanymi głowami i ogonami.

Jeśli wypławki są gotowe, umieść jedną czystą szalkę Petriego o średnicy 10 centymetrów na jednym kawałku wstępnie laminowanego papieru w kratkę z 0,5 centymetra kwadratowego na grupę eksperymentalną i dodaj 20 mililitrów niezafałszowanej wody źródlanej dla grupy kontrolnej lub 20 mililitrów wody źródlanej zawierającej odpowiednie stężenie badanego produktu naturalnego do każdej płytki. Umieść kamerę nad przygotowanym naczyniem do stymulacji prędkości ruchowej i dodaj od pięciu do 10 mililitrów nieskażonej wody źródlanej lub wody źródlanej zawierającej odpowiednie stężenie doświadczalnego związku do pojemnika habituacyjnego o odpowiedniej wielkości. Następnie użyj małego, czystego pędzla do malowania akwarelą, aby delikatnie przenieść jednego wypławka z pojemnika na kulturę do przygotowanego pojemnika habituacyjnego i pozwól wypławkowi przyzwyczaić się do roztworu w pojemniku przez dwie minuty.

Badania pozwolą wypławkom przejść na zarośla i ostrożnie podnieść zwierzęta bez zmuszania ich. Pod koniec okresu habituacji za pomocą pędzla ostrożnie przenieś wypławka do środka przygotowanego naczynia do stymulacji prędkości lokomotorycznej zawierającego ten sam roztwór co pojemnik habituacyjny i uruchom kamerę, aby zarejestrować od 10 do 11 minut ruchu wypławka. Aby przetestować skutki odstawienia pod koniec okresu przyzwyczajenia, opłucz wypławka w pięciocentymetrowym naczyniu zawierającym tylko wodę źródlaną.

Przed przeniesieniem robaka na środek przygotowanej miski prędkości lokomotywy zawierającej świeżą wodę źródlaną i uruchom kamerę, aby zarejestrować od 10 do 11 minut ruchu. Konfiguracja kamery umożliwia wyraźny widok wypławka i papieru w kratkę oraz pozwala na dokładną ocenę postępów zwierzęcia w czasie trwania eksperymentu. Gromadzenie danych powinno obejmować całkowitą liczbę przekroczonych linii siatki, jak również łączną łączną liczbę linii przekroczonych w ciągu minuty eksperymentu.

Aby ustandaryzować wyniki każdej próby, wypławkowe przebiegi lokomotywy można obliczyć i wykreślić jako liczbę przeciętych pól w stosunku do postępu pasującego robaka kontrolnego. Jako punkt odniesienia, wypławki w wodzie źródlanej zazwyczaj pokrywają około 25 skrzynek w ciągu trzech minut. Można zbadać zakres stężeń odczynników testowych w celu określenia ruchliwości wypławków w odpowiedzi na badane związki

Dane dotyczące wycofania można ocenić, określając ilościowo liczbę linii siatki przeciętych w wodzie źródlanej w stosunku do kontroli wody źródlanej po tym, jak zwierzęta przyzwyczaiły się do badanego produktu biomodulującego. Na czas trwania eksperymentu wypławki kontrolujące wodę źródlaną przemieszczają się po liniach siatki. Zdarza się jednak, że testowe wypławki przestają przekraczać linie siatki podczas eseju z zachowaniami, które są charakterystyczne dla testowanego produktu.

Sugeruje to, że może być wymagana inna metoda analizy. Takie przypadki można śledzić, a dane można zilustrować jako procent całkowitej liczby zwierząt narażonych na określone stężenie odczynnika. Konieczne jest obchodzenie się z wypławkami, aby nie uległy uszkodzeniu podczas przenoszenia między naczyniami.

Po określeniu wpływu różnych stężeń produktu naturalnego można dodać modyfikatory szlaku biologicznego, aby zaobserwować wszelkie dynamiczne zmiany w początkowych wynikach. Test Prędkości Lokomotorycznej Wypławki został wykorzystany do zbadania stymulacji i odstawienia przy użyciu znanych środków farmakologicznych. Dostosowaliśmy system do badania tych samych koncepcji w przypadku produktów naturalnych.