Name: Ortotopowe przeszczepy guzów piersi jako modele przedkliniczne raka piersi (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-18T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Poznaj ortotopowe przeszczepy fragmentów guzów piersi do gruczołu tłuszczowego u myszy. Ta metoda umożliwia badanie biologii nowotworów i odpowiedzi na leki w modelach PDX.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ta praca była wspierana przez National Institutes of Health (R37CA228304 i R01HL146642 do Xi Chen, CA148761 do Jeffreya M. Rosena), Departament Obrony USA (W81XWH-19-1-0524 do Xi Chen, W81XWH-19-1-0035 do Xiangdong Lv), American Cancer Society (RSG-18-181-01-TBE do Xi Chen) oraz Cancer Prevention and Research Institute of Texas (RR150009 CPRIT Scholar in Cancer Research Award dla Xi Chena), Rdzeń Ksenoprzeszczepu Pochodzącego od Pacjenta i Zaawansowanych Modeli In Vivo w Baylor College of Medicine (finansowanie z RP170691 CPRIT Core Facility Award i NCI-CA125123 P30 Cancer Center Support Grant).

Wszystkie protokoły z wykorzystaniem zwierząt zostały sprawdzone i zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC). Fragmenty guza, o wielkości około 1−2mm3, pochodzą z żywotnie zamrożonego materiału uzyskanego z ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta i zaawansowanych modeli in vivo w Baylor College of Medicine.
1. Przygotowanie kriokonserwowanych fragmentów guza sutka do przeszczepu
<ol>
	<li>Przenieś kriowial z fragmentami guza z ciekłego azotu do łaźni wodnej o temperaturze 37 °C.</li>
	<li>Mieszaj kriowial, od czasu do czasu delikatnym ruchem podczas rozmrażania.</li>
	<li>Po rozmrożeniu tkanki wyjmij kriowial z łaźni wodnej i wymieszaj przez delikatne odwrócenie.</li>
	<li>Osusz zewnętrzną część kriowialu i spryskaj 70% etanolem. Przenieś go do okapu bezpieczeństwa biologicznego.</li>
	<li>Przenieś rozmrożone tkanki nowotworowe do stożkowej probówki o pojemności 15 ml wypełnionej 10 ml zimnej modyfikowanej pożywki Eagle (DMEM) firmy Dulbecco. Dobrze wymieszaj, odwracając rurkę. Pozwól, aby fragmenty tkanki osiadły na dnie probówki.</li>
	<li>Odessać supernatant i ponownie zawiesić w 10 ml zimnego DMEM. Dobrze wymieszaj, odwracając rurkę. Pozwól, aby fragmenty tkanki osiadły na dnie probówki.</li>
	<li>Odessać supernatant i ponownie zawiesić w 10 ml zimnego DMEM. Umieść probówkę na lodzie. 
	UWAGA: Tkanka jest gotowa do przeszczepu.</li>
</ol>
2. Pobranie i przygotowanie świeżego guza sutka do przeszczepienia
<ol>
	<li>Poddaj eutanazji mysz z guzem piersi. 
	UWAGA: Gospodarzem PDX mogą być samice myszy SCID/Beige, NSG lub NRG, podczas gdy w obecnym badaniu wykorzystuje się samice myszy Balb/c w wieku 3-5 tygodni.</li>
	<li>Spryskaj obszar guza myszy poddanej eutanazji 70% etanolem. 
	UWAGA: Staraj się unikać włosów z próbką guza, które mogą spowodować zanieczyszczenie fragmentów guza do krioprzechowywania lub przeszczepu.</li>
	<li>Za pomocą ząbkowanych kleszczy, aby uszczypnąć i podnieść skórę otaczającą guz, użyj nożyczek, aby wykonać krótkie nacięcie.</li>
	<li>Oddziel guz od skóry nożyczkami, aby wyciąć cały guz od myszy gospodarza. Odetnij pozostałą tkankę poduszeczki tłuszczowej myszy z zewnętrznej powierzchni guza. Umieść guz w stożkowej probówce o pojemności 15 ml wypełnionej 5 ml zimnego DMEM. 
	UWAGA: Używaj guzów o maksymalnej średnicy 1 cm, ponieważ większe guzy mogą zawierać martwicze rdzenie.</li>
	<li>W kapturze bezpieczeństwa biologicznego przenieś wypreparowany guz na sterylną 10-centymetrową szalkę Petriego zawierającą wystarczającą ilość DMEM, aby zapobiec wysuszeniu.</li>
	<li>Pokrój guz na 1 mm3 fragmenty za pomocą skalpela lub ostrza w warunkach aseptycznych. 
	UWAGA: Skalpel lub ostrze należy wystawić na działanie promieniowania UV w kapturze bezpieczeństwa biologicznego przez co najmniej 20 minut przed użyciem.</li>
	<li>Przenieś fragmenty guza do stożkowej probówki o pojemności 15 ml wypełnionej zimnym DMEM. Umieść probówkę na lodzie. 
	UWAGA: Tkanka jest gotowa do przeszczepu. Wypreparowane fragmenty guza z kroku 2.4 mogą być: 1) zamrożone w ciekłym azocie w celu ekstrakcji białek i RNA/DNA, 2) utrwalone za pomocą 4% paraformaldehydu (PFA) lub 10% obojętnej buforowanej formaliny (NBF) do analizy hematoksyliny i eozyny (H&E) oraz analizy immunohistochemicznej (IHC) lub 3) kriokonserwowane w 1,25 ml pożywki zamrażającej (10% dimetylosulfotlenku [DMSO], 40% DMEM i 50% płodowej surowicy bydlęcej [FBS]) przez powolne zamrażanie w zamrażarce w temperaturze -80 °C przez noc, a następnie przeniesienie do ciekłego azotu w celu długotrwałego przechowywania.</li>
</ol>
3. Przygotuj zwierzę do operacji
<ol>
	<li>W celu leczenia bólu zwierząt należy wstrzyknąć podskórnie buprenorfinę o przedłużonym uwalnianiu 60 minut przed zabiegiem w dawce 1 mg/kg lub postępować zgodnie z zaleceniami instytucji przez 72 godziny pokrycia przeciwbólowego.</li>
	<li>Skonfiguruj salę operacyjną zgodnie z wytycznymi instytucji dotyczącymi operacji aseptycznych.</li>
	<li>Znieczulij 4-tygodniową dziewczynkę w komorze indukcyjnej aparatu do znieczulania izofluranem z szybkością ~11,25 ml/h. Przenieś mysz do obszaru zabiegowego, na sterylną (gumę silikonową) tablicę chirurgiczną, gdzie zostanie znieczulona przez małą maskę na twarz. Połóż mysz na plecach i przyklej nogi taśmą do ich naturalnych pozycji. 
	UWAGA: SCID/Beige, NSG lub NRG są używane do PDX, a Balb/c jest używany do modeli przeszczepów GEMM.</li>
	<li>Nałóż maść okulistyczną na oczy, aby zapobiec wysuszeniu.</li>
	<li>Potwierdź odpowiedni poziom sedacji za pomocą uszczypnięcia palca. 
	UWAGA: Brak reakcji/ruchu zwierzęcia wskazuje, że zwierzę jest wystarczająco znieczulone i gotowe do operacji.</li>
	<li>Ogol mysz w dolnej części brzucha, zwłaszcza w okolicy czwartego sutka, w którym odbędzie się operacja.</li>
	<li>Wykonując okrężne ruchy i zaczynając od środka pola operacyjnego, pracuj w kierunku zewnętrznych krawędzi za pomocą peelingu chirurgicznego z jodonem powidonu, a następnie usuń jodu powidonu za pomocą podkładki z 70% izopropylu etanolu. Powtórz jeszcze dwa razy.</li>
</ol>
4. Przeszczepienie fragmentów guza do czwartej (pachwinowej) poduszeczki tłuszczowej sutka
<ol>
	<li>Użyj sterylnej serwety chirurgicznej, aby przykryć ciało zwierzęcia z wyjątkiem miejsca nacięcia. 
	UWAGA: Potwierdź odpowiedni poziom sedacji poprzez uszczypnięcie palca u nogi przed wykonaniem nacięcia.</li>
	<li>Za pomocą ząbkowanych kleszczy uszczypnij i unieś skórę przy sutku #4.</li>
	<li>stroną do dołu użyj nożyczek, aby wykonać krótkie (około 1 cm) nacięcie przystrzałkowe, od sutka #4 w kierunku głowy.</li>
	<li>Za pomocą aplikatora z bawełnianą końcówką oddziel skórę od otrzewnej po przyśrodkowej stronie nacięcia.</li>
	<li>Trzymając boczną stronę nacięcia, delikatnie oderwij poduszeczkę tłuszczową #4 od skóry za pomocą tego samego wacika.</li>
	<li>Po oddzieleniu poduszeczki tłuszczowej przygwoździć skórę igłą o wadze 27 G blisko ciała zwierzęcia.</li>
	<li>Jeśli doświadczalnie konieczne jest oczyszczenie poduszeczki tłuszczowej z endogennego nabłonka sutka myszy, wykonaj następujące czynności.
	<ol>
		<li>Za pomocą ząbkowanych kleszczy delikatnie odsuń poduszeczkę tłuszczową od ciała i zlokalizuj pachwinowy węzeł chłonny, który znajduje się poniżej punktów przecięcia głównych naczyń w gruczole (blisko miejsca, w którym kleszcze będą trzymać gruczoł).</li>
		<li>Ostrożnie kauteryzuj naczynia przyśrodkowe do węzła chłonnego i tłuszczu łączącego się z czwartą i piątą poduszką tłuszczową, która tworzy trójkątny obszar. 
		UWAGA: Na tym etapie tymczasowo wyłącz źródło tlenu.</li>
		<li>Za pomocą mikronożyczek preparacyjnych przecinaj każde kauteryzowane naczynie pojedynczo (aby upewnić się, że po każdym cięciu nie ma krwawienia), aż część poduszeczki tłuszczowej zawierająca węzeł chłonny zostanie usunięta.</li>
		<li>Wyrzuć "oczyszczoną" tkankę poduszeczki tłuszczowej.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przytrzymaj czwartą poduszeczkę tłuszczową sutka za pomocą kleszczy separacyjnych. Drugą ręką włóż zamkniętą końcówkę kątowych drobnych kleszczyków w środek poduszeczki tłuszczowej nad pozostałym naczyniem i blisko ściany otrzewnej. Powoli otwórz kleszcze, aby zrobić małą kieszeń. Usuń ukośne cienkie kleszcze z poduszeczki tłuszczowej.</li>
	<li>Za pomocą ustawionych pod kątem cienkich kleszczy weź kawałek fragmentu guza i włóż go do kieszeni.</li>
	<li>Powoli otwórz końcówki kleszczy, aby uwolnić fragment guza do kieszeni poduszeczki tłuszczowej.</li>
	<li>Ostrożnie wyjmij cienkie kleszcze pod kątem. 
	UWAGA: Spójrz na kieszeń, aby upewnić się, że fragment guza pozostaje w kieszeni poduszeczki tłuszczowej sutka podczas wyjmowania kleszczy. Guzy mogą być wszczepiane do obu przeciwległych poduszek tłuszczowych, gdy nadmiar tkanki nowotworowej jest potrzebny do eksperymentów lub bankowania. Zwierzęta z obustronnymi przeszczepami nie są zalecane do badań klinicznych ze względu na znane interakcje między przeciwległymi nowotworami. Alternatywnie do procesu implantacji można użyć trokaru.</li>
	<li>Zaczynając od podstawy nacięcia, zbierz skórę z każdej strony za pomocą pazura i ząbkowanych kleszczy. Zbliż obie strony do siebie i lekko unieś, aby przygotować skórę do nałożenia klipsa na rany. Rozwiń krawędzie nacięcia za pomocą kleszczy do pazurów i ściśnij krawędzie razem, aby utworzyć ciągłą powierzchnię u góry.</li>
	<li>Trzymając obie strony razem ząbkowanymi kleszczami, użyj aplikatora do klipsów do ran, aby umieścić klips do ran pośrodku nacięcia. W razie potrzeby nałóż klej tkankowy na końce nacięcia, aby były zamknięte i zabezpieczone.</li>
	<li>Umieść zwierzę w czystej klatce, która znajduje się na rozgrzewającej powierzchni. Monitoruj krwawienie, oznaki rozejścia się i ból w okresie pooperacyjnym. Zwierzę powinno być na nogach i poruszać się w ciągu kilku minut po operacji.</li>
	<li>Zwróć szczególną uwagę na miejsce nacięcia i ogólny stan zdrowia zwierząt przez co najmniej 3 dni po zabiegu. Postępuj zgodnie z wytycznymi instytucjonalnymi dotyczącymi leczenia bólu.</li>
	<li>Wyczyść narzędzia chirurgiczne przez 10 sekund w sterylizatorze z kulkami szklanymi przed kontynuowaniem następnego przeszczepu. Przed użyciem poczekaj, aż narzędzia ostygną.</li>
	<li>Powtarzaj kroki 4.1−4.15, aż wszystkie myszy zostaną przeszczepione. 
	UWAGA: Suplementacja estrogenem jest wymagana w przypadku guzów ER+, które mogą być dostarczane przez wodę lub granulki o powolnym uwalnianiu59.</li>
</ol>
5. Monitorowanie wzrostu guza w odpowiedzi na leczenie farmakologiczne
UWAGA: Wyczuwalne guzy z potwierdzonymi PDX do przeszczepu i guzy p53-null rozwijają się od 2 tygodni do 8 tygodni po operacji, w zależności od wewnętrznego tempa wzrostu guza.
<ol>
	<li>Mierz guzy w dwóch wymiarach za pomocą suwmiarki dwa razy w tygodniu. Oblicz objętość za pomocą wzoru: 
	Objętość guza (mm3) = W2 x L / 2 
	gdzie W to szerokość, a L to długość guza.</li>
	<li>Leczenie farmakologiczne należy rozpocząć, gdy objętość guza osiągnie 150−300 mm3, 
	UWAGA: W zależności od właściwości leków, do dostarczania leków można zastosować zgłębnik doustny lub wstrzyknięcie dootrzewnowe.</li>
	<li>Zbierz próbki guza i wykonaj barwienie IHC60, izolację białek i RNA/DNA oraz fenotypowanie immunologiczne61 do różnych celów. Zbierz krew i wykonaj fenotypowanie immunologiczne lub wykorzystaj ją do badań farmakokinetycznych/farmakodynamicznych.</li>
</ol>

MTL jest założycielem komandytariusza w StemMed, Ltd. oraz założycielem i menedżerem w StemMed Holdings, jej komplementariuszu. MTL jest założycielem i udziałowcem Tvardi Therapeutics, Inc. LED jest opłacanym pracownikiem StemMed, Ltd.

Aby zmniejszyć różnice we wzroście guza u zwierząt, konieczne jest pocięcie tkanki nowotworowej na fragmenty o wielkości 1 mm3 do przeszczepu. Modele, które rosną z tkanką miękką, są trudniejsze w obróbce, a fragmenty guza muszą być nieco większe (1−2 mm3). Umieszczając tkankę w kieszeni poduszeczki tłuszczowej sutka, należy uważać, aby nie podzielić tkanki na wiele części, ponieważ spowoduje to powstanie wielu małych guzów lub guzów o dziwnym kształcie.
Ponadto, Do Przes...

Większość zgonów z powodu raka piersi można przypisać nawracającej chorobie, która jest oporna na konwencjonalne terapie1,2. Niejednorodność między i wewnątrz guza raka piersi przyczynia się do oporności na leczenie. Co więcej, niejednorodność guza może mieć wpływ na dokładne rokowanie i stanowić wyzwanie w leczeniu choroby3,4. Identyfikacja predykcyjnych biomarkerów odpowiedzi znacznie poprawi wyniki kliniczne pacjentek z rakiem piersi. Mimo że większość typów raka piersi to immunologicznie "zimne" nowotwory, które prawdopodobnie nie reagują na immunoterapię, inhibitory immunologicznych punktów kontrolnych okazały się obiecujące w badaniach klinicznych2,5. Na przykład badanie III fazy wykazało poprawę przeżycia wolnego od choroby (DFS) i wstępne dowody na to, że atezolizumab (przeciwciało monoklonalne przeciwko PD-L1) w połączeniu z nab-paklitakselem może zapewnić korzyści w zakresie całkowitego przeżycia w porównaniu z samym nab-paklitakselem w nowotworach z ≥1% barwieniem PD-L16. Opracowanie terapii uwrażliwiających guzy piersi na immunoterapię zrewolucjonizuje schematy leczenia.
Modele przedkliniczne, które wiernie odwzorowują niejednorodność ludzkiego raka piersi i reakcję na leki, są niezbędne do badania biologii nowotworu i identyfikacji potencjalnych biomarkerów dla terapii celowanej. Unieśmiertelnione linie komórkowe są szeroko stosowane w badaniach nad rakiem piersi, ponieważ te linie komórkowe są łatwe w hodowli i modyfikacji genetycznej w celu badania mechanizmów molekularnych. Jednak ze względu na presję selekcyjną wynikającą z długotrwałej hodowli komórkowej in vitro, z czasem może dojść do dryfu genetycznego, a linie komórkowe raka piersi mogą przenosić zmiany genomowe specyficzne dla linii komórkowej, które różnią się od aberracji w pierwotnych nowotworach piersi7,8,9.
Fragmenty guza ksenoprzeszczepu (PDX) pochodzące od pacjenta są w stanie podsumować niejednorodność ludzkiej choroby i są histologicznie i immunohistochemicznie podobne do nowotworu pochodzenia10,11,12,13,14,15,16, 17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29. Co ważne, modele PDX są fenotypowo stabilne w wielu przeszczepach, o czym świadczy analiza histologiczna, transkryptomowa, proteomowa i genomiczna10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29. Modele PDX pokazują reakcje na leczenie porównywalne do tych obserwowanych klinicznie10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29. Stworzono modele PDX dla modeli PDX z dodatnim receptorem estrogenowym (ER+), dodatnim z dodatnim receptorem progesteronu (PR+), naskórkowym czynnikiem wzrostu 2 dodatnim (ERBB2+, HER2+) i potrójnie ujemnym rakiem piersi (TNBC), które stanowią doskonałą platformę do testowania terapii endokrynologicznych, chemo- i celowanych. Jednak jednym z głównych zastrzeżeń obecnych modeli PDX jest brak funkcjonalnego układu odpornościowego u myszy.
Genetycznie modyfikowane modele myszy (GEMM), takie jak modele Trp53 homozygotycznego zera, cMyc, Wnt1, PyMT lub Her2 z nadekspresją, pozwalają na badanie spontanicznej inicjacji, progresji i przerzutów nowotworu w kontekście nienaruszonego układu odpornościowego. Jednak opóźnienie guza jest długie, co utrudnia prowadzenie badań przedklinicznych z wieloma ramionami30,31. Jednak GEMM może być przeszczepiony do syngenicznych gospodarzy, aby wygenerować wystarczającą liczbę guzów, które dokładnie przypominają ludzkie nowotwory32,33,34,35,36,37,38,39,40, 41,42,43,44,45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,55. Na przykład nabłonek sutka myszy o zerowym BALB/c p53 został przeszczepiony do oczyszczonych poduszek tłuszczowych syngenicznych myszy biorców typu dzikiego w celu utworzenia guzów pierwotnych, które mogą być dalej przeszczepiane do syngenicznych gospodarzy56,57. Guzy zerowe p53 rekapitulowały różne podtypy ludzkich nowotworów.
Połączenie modeli PDX i przeszczepialnego GEMM dostarcza cennych narzędzi przedklinicznych do badania biologii guza piersi, odpowiedzi na leki i odporności przeciwnowotworowej. W obecnym protokole opisano metodę ortotopowego przeszczepiania fragmentów guza PDX i GEMM do poduszeczki tłuszczowej sutka myszy. Modele te są podatne na przejścia seryjne i zwykle zachowują stabilny fenotyp. Aby zmniejszyć ryzyko dryfu genetycznego lub utraty heterogeniczności między pasażami w czasie, wiele fragmentów tkanek jest kriokonserwowanych przy każdym pasażu w celu późniejszego przeszczepu w przypadku, gdy zmiany biologiczne lub morfologiczne są obserwowane w czasie29,58.

<table><tbody><tr><td>1 mg/ml Buprenorfina-SR</td><td>ZooPharm (przez weterynarzy BCM)</td><td></td><td>Sterylna</td></tr><tr><td>strzykawka 26G</td><td>BD</td><td>148232E</td><td>Sterylny</td></tr><tr><td>peeling betadynowy</td><td>Fisher</td><td>19-027132</td><td></td></tr><tr><td>Waciki bawełniane</td><td>VWR International Laboratory</td><td>89031-272</td><td>Sterylny</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Fisher</td><td>MT 10-013-CM</td><td>Sterylny</td></tr><tr><td>elektryczny Golarka</td><td>Oster</td><td>78005-050</td><td></td></tr><tr><td>Sterylizator koralików szklanych (Germinator)</td><td>Sklep chirurgiczny Roboz</td><td>DS-401</td><td></td></tr><tr><td>Smar maść okulistyczna</td><td>Akorn Animal Health</td><td>17478-062-35</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze do mikropreparacji; Ząbkowane, kątowe (zwykłe kleszcze)</td><td>Sklep chirurgiczny Roboz</td><td>RS-5139</td><td>Sterylne</td></tr><tr><td>nożyczki sprężynowe do mikropreparowania (obcinacz do poduszek tłuszczowych)</td><td>Sklep chirurgiczny Roboz</td><td>RS-5658BT</td><td>Sterylne</td></tr><tr><td>mikrokleszcze (kleszcze do umieszczania tkanek)</td><td>Sklep chirurgiczny</td><td>Roboz RS-5069</td><td>Sterylna</td></tr><tr><td>szalka Petriego</td><td>Fisher</td><td>08-757- 100D</td><td>Sterylna</td></tr><tr><td>sterylna serweta</td><td>Sai Technologia infuzyjna</td><td>PSS-SD1</td><td>Sterylne</td></tr><tr><td>nożyczki chirurgiczne</td><td>Sklep chirurgiczny</td><td>Roboz RS-5960</td><td>Sterylne</td></tr><tr><td>kleszczyki do tkanek (kleszczyki do pazurów)</td><td>Sklep chirurgiczny Roboz</td><td>RS-5158</td><td>Sterylny</td></tr><tr><td>aplikator do klipsów do ran</td><td>BD Autoclip Wound System</td><td>01-804</td><td>Sterylny</td></tr> środek <tr><td>do usuwania klipsów do ran</td><td>BD Autoclip Wound System</td><td>01-804-15</td><td>Sterylny</td></tr><tr><td>Klipsy do ran</td><td>BD Autoclip Wound System</td><td>01-804-5</td><td>Sterylne</td></tr></tbody></table>

ortotopowe przeszczepy guzów piersi jako modele przedkliniczne raka piersi

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Modele przedkliniczne, które wiernie odwzorowują heterogeniczność guza i odpowiedź terapeutyczną, są kluczowe dla translacyjnych badań nad rakiem piersi. Unieśmiertelnione linie komórkowe są łatwe w hodowli i modyfikacji genetycznej w celu zbadania mechanizmów molekularnych, jednak selektywna presja ze strony hodowli komórkowej często prowadzi z czasem do zmian genetycznych i epigenetycznych. Modele ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów (PDX) wiernie odwzorowują heterogeniczność i reakcję na leki w ludzkich nowotworach piersi. Modele PDX wykazują stosunkowo krótkie opóźnienie po przeszczepie ortotopowym, co ułatwia badanie biologii guza piersi i odpowiedzi na leki. Genetycznie modyfikowane modele myszy do przeszczepu pozwalają na badanie odporności guza piersi. Obecny protokół opisuje metodę ortotopowego przeszczepiania fragmentów guza piersi do poduszeczki tłuszczowej sutka, a następnie leczenia farmakologicznego. Te modele przedkliniczne dostarczają cennych podejść do badania biologii guza piersi, odpowiedzi na leki, odkrywania biomarkerów i mechanizmów oporności na leki.

Rysunek 1 przedstawia sprzęt (Rysunek 1A) oraz kluczowe procedury (Rysunek 1B) transplantacji ortotopowej. Rysunek 2 przedstawia charakterystykę przeszczepionego guza PDX (MC1). Fragmenty guza (1 mm3) modelu MC1 przeszczepiono do 4. poduszki tłuszczowej myszy SCID/Beige. Po miesiącu średnia wielkość guza osiągnęła około 350 mm...

Modele ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów (PDX) oraz genetycznie modyfikowane modele myszy do przeszczepu wiernie odwzorowują ludzką chorobę i są preferowanymi modelami do podstawowych i translacyjnych badań nad rakiem piersi. W tym miejscu opisano metodę ortotopowego przeszczepiania fragmentów guza piersi do poduszeczki tłuszczowej sutka w celu zbadania biologii guza i oceny odpowiedzi na lek.

Ortotopowe przeszczepy guzów piersi jako modele przedkliniczne raka piersi

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Protokół ten opisuje ortotopowy przeszczep fragmentów guza piersi do poduszeczki tłuszczowej sutka i zapewnia cenne podejścia do badania biologii guza, odpowiedzi na leki i mechanizmu oporności na leki. Technika ta jest minimalnie inwazyjna i zapewnia prawidłowe umieszczenie tkanek nowotworowych w poduszce tłuszczowej sutka, dostęp do liczenia na pomiar oraz utrzymanie mobilności zwierząt. Technika ta pozwala na przeszczepienie dziesiątek zwierząt z jednego pacjenta w celu jednoczesnej oceny wielu potencjalnych terapii przeciwnowotworowych w formacie badania przedklinicznego.Metoda ta jest lepsza od implantacji tkanek podskórnych w celu ustalenia modeli międzygrafowych pacjenta, a także może być stosowana, gdy implanty ortotopowe nie są możliwe. Najtrudniejszym zadaniem jest wywarcie odpowiedniego nacisku, aby oderwać poduszeczkę tłuszczową od ściany ciała i zrobić kieszeń tkankową. Wizualizacja złuszczania się poduszeczki tłuszczowej oraz popękanego anatomicznego ułożenia fragmentu tkanki, pomoże Ci zapewnić pomyślne wykonanie zabiegu.Aby rozmrozić kriokonserwowane fragmenty tkanki guza sutka do przeszczepu. Najpierw rozmrozić fiolkę kriogeniczną z magazynu ciekłego azotu zawieraj

orthotopic-transplantation-breast-tumors-as-preclinical-models-for

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Film demonstruje technikę ortotopowej inokulacji raka piersi na modelu mysim. Technika ta zapewnia wysoki wskaźnik nowotworzenia przy mniejszej zmienności wielkości i kształtu guza w porównaniu z wstrzyknięciem podskórnym lub niechirurgicznym.

Wstrzyknięcie ortotopowe: wszczepianie komórek rakowych specyficznych tkankowo dorosłej myszy

Rak jest złożoną chorobą, na którą wpływ ma tkanka otaczająca guz, a także lokalne mediatory pro- i przeciwzapalne. Dlatego ortotropowe modele iniekcyjne, a nie modele podskórne, mogą być przydatne do badania progresji raka w sposób, który lepiej naśladuje ludzką patologię.

Ortotopowe wstrzyknięcie komórek raka piersi do poduszeczki tłuszczowej sutka myszy w celu zbadania wzrostu guza.

Opisany jest ortotopowy model pierwotnego guza raka piersi i chirurgiczne usunięcie pierwotnego guza w celu przedłużenia życia myszy w celu wytworzenia spontanicznych przerzutów. Wzrost i progresja guza są monitorowane i oznaczane ilościowo za pomocą obrazowania fluorescencyjnego lucyferazy.

Ortotopowy mysi model spontanicznych przerzutów raka piersi

Rak prostaty jest drugą najczęstszą przyczyną zgonów związanych z rakiem w Stanach Zjednoczonych. Ortotopowy model raka stanowi użyteczne podejście do zrozumienia biologii raka prostaty i oceny skuteczności schematów terapeutycznych. Protokół ten opisuje szczegółowe kroki niezbędne do ustalenia ortotopowego modelu myszy raka prostaty.

Przedkliniczny ortotopowy mysi model ludzkiego raka prostaty

Wprowadzamy mysi ortotopowy model raka piersi i model radykalnej mastektomii z technologią bioluminescencji, aby określić ilościowo obciążenie guza, aby naśladować postęp ludzkiego raka piersi.

Generowanie mysiego ortotopowego modelu raka piersi z przerzutami i wykonywanie radykalnej mastektomii u myszy

Tutaj prezentujemy protokół wszczepiania komórek raka piersi do poduszeczki tłuszczowej w prosty, mniej inwazyjny i łatwy w obsłudze sposób, a ten mysi ortotopowy model raka piersi z odpowiednim środowiskiem poduszeczki tłuszczowej może być wykorzystany do badania różnych aspektów raka.

Ortotopowe wstrzyknięcie komórek raka piersi do poduszeczki tłuszczowej sutka myszy

Ta praca wstępnie ustawia zaawansowany protokół do dokładnej oceny obciążenia guza poprzez detekcję zielonego białka fluorescencyjnego i sygnałów bioluminescencji, a także integrację ilościowej techniki wykrywania molekularnego.

Badanie potrójnie ujemnego raka piersi przy użyciu ortotopowego modelu raka piersi

Modele przerzutów do kości nie rozwijają przerzutów równomiernie ani ze 100% częstością. Bezpośrednie wstrzyknięcie do komórek nowotworowych kości może spowodować embolizację płuc. Przedstawiamy naszą technikę modelowania pierwotnych guzów kości i przerzutów do kości z wykorzystaniem implantacji przeszczepu guza litego do kości, prowadzącej do powtarzalnego wszczepienia i wzrostu.

Modelowanie pierwotnych guzów kości i przerzutów do kości z implantacją przeszczepu guza litego do kości

Obecny protokół opisuje wstrzykiwanie komórek do kostniakomięsaka kości piszczelowej w celu wygenerowania modeli myszy z ortotopowym kostniakomięsakiem i przerzutami do płuc.

Wstrzyknięcie komórek kostniakomięsaka piszczelowego w celu wygenerowania ortotopowego kostniakomięsaka i mysich modeli przerzutów do płuc

Manuskrypt opisuje metodologię ustalania oraz monitorowania wzrostu podłużnego spontanicznych przerzutów do płuc z ortotopowo wstrzykiwanych guzów piersi, które mogą być interwencyjne na wszystkich etapach kaskady przerzutowej.

In vivo (in vivo) Obrazowanie w celu pomiaru spontanicznych przerzutów do płuc komórek guza piersi wstrzykniętych ortotopowo

Ten protokół opisuje skuteczną, niechirurgiczną metodę ortotopowego wszczepiania ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów z rakiem piersi u myszy. Technika ta polega na enzymatycznej dysocjacji guza, a następnie bezpośrednim wstrzyknięciu do poduszek tłuszczowych sutka, co umożliwia implantację o wysokiej przepustowości. Kompleksowa walidacja zapewnia wierność modelu, ułatwiając rygorystyczne badania nad różnymi podtypami raka piersi.

Wysokoprzepustowa dysocjacja i ortotopowa implantacja ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów z rakiem piersi

Poznaj ortotopowe przeszczepy fragmentów guzów piersi do gruczołu tłuszczowego u myszy. Ta metoda umożliwia badanie biologii nowotworów i odpowiedzi na leki w modelach PDX.

Ortotopowe przeszczepy guzów piersi jako modele przedkliniczne raka piersi

Przeglądaj więcej filmów