Prosta metoda cięcia na sucho w celu uzyskania całego przekroju żywicy wielkości nasion i jej zastosowania

Morfologia, nauka i jakość komórek, granulek skrobi i ciał białkowych w jądrze decydują o masie i jakości nasion. W tym badaniu przedstawiamy jako prostą populację całego ziarna zatopionego w żywicy LR White i ustalamy prostą metodę odsysania całych ziaren na sucho. Wybieramy żywicę LR White jako medium do zabudowy z dwóch głównych powodów.

Po pierwsze, charakteryzuje się niską lepkością i silną przepuszczalnością, co prowadzi do dobrych zastosowań w przygotowywaniu tych potężnych sekcji nasion, szczególnie w przypadku dojrzałych ziaren zbóż o dużej objętości i wysokiej zawartości skrobi. Po drugie, próbkę osadzoną w żywicy LR White można łatwo zabarwić wieloma barwnikami chemicznymi, aby wyraźnie pokazać morfologię próbek pod światłem za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego. Przygotowane skrawki mogą być specjalnie barwione, aby wyraźnie uwidocznić komórki, granulki skrobi i ciała białkowe podczas wyłaniania się całego ziarna, a parametry morfologiczne mogą być również analizowane ilościowo.

Metoda zawiera badania. W tym przypadku używamy dojrzałych ziaren kukurydzy o większej objętości i wysokiej zawartości skrobi jako próbki, aby krok po kroku pokazać procesy. Na początek przycina ziarna do prostej butelki.

Dodaj około 10 milimetrów 2,5% buforowanego fosforanem aldehydu glutarowego. jeszcze jeden pH 7,2 i umieść go w temperaturze 4 stopni Celsjusza na 48 godzin, aby je naprawić. Następnie wyjmij te ziarna i pokrój je wzdłuż lub poprzecznie, o grubości od dwóch do trzech milimetrów.

Potrzebujesz ostrego dwustronnego ostrza. I napraw je przez kolejne 48 godzin. Następnie przemyj próbki trzykrotnie około 10 milimetrami, czyli 0,1 M buforem fosforanowym, pH 7,2 przez 30 minut za każdym razem.

Aby uwodnić próbki krok po kroku, najpierw namocz je w około 10 milimetrach 30% wodnego roztworu etanolu na 30 minut, a następnie namocz je w 10 milimetrach, czyli 50%70%90%raz i 100%trzy razy. Aby infiltrować próbkę krok po kroku, kolejno pobieraj ją za pomocą 10 milimetrów roztworu żywicy LR White rozcieńczonego etanolem w ilości 25%50%75% raz i 100%dwa razy w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez 12 godzin za każdym razem. Przed zasadzeniem musimy przygotować postumenty na próbki.

Dodaj 250 mikrolitrów czystej żywicy LR White do dwumilimetrowej probówki wirówkowej i polimeryzuj ją w temperaturze sześciu stopni Celsjusza przez 48 godzin. Następnie należy kolejno dodać 500 mikrolitrów czystej żywicy LR White i naciekazać próbkę do probówki wirówkowej z postumentem. Po wyprostowaniu próbek za pomocą anatomicznej igły umieść żywicę w temperaturze sześciu stopni Celsjusza w piekarniku na 48 godzin.

Wyjmij te osadzone ziarna z probówki wirówkowej i wytnij nadmiar żywicy wokół próbki za pomocą ostrego ostrza. Umieść blok żywicy w uchwycie na próbkę w mikrotonach i odetnij zbędną żywicę na powierzchni próbki i wokół próbki za pomocą ostrza. Na koniec wypoleruj powierzchnię próbki szklanym nożem, aż będzie można uformować cały przekrój.

Teraz nadszedł czas, aby przygotować ten niesamowity przekrój o grubości dwóch mikronów. Przed krojeniem umieść małą miedzianą szprychę około dwóch milimetrów nad krawędzią ostrza, aby zapobiec zwijaniu się sekcji. W miarę wydłużania się sekcji umieść szprychę pod sekcją, aby ją podeprzeć.

Następnie dodaj 100 mikrolitrów wody na niewystającą zjeżdżalnię i ostrożnie przenieś całą i nieprzerwaną sekcję do wody z zabiegaczami. Podgrzej i wysusz je w temperaturze 50 stopni Celsjusza, aby wygładzić pomarszczoną sekcję. Na koniec należy zwrócić uwagę na dwie ważne wskazówki.

Po pierwsze, jeśli sekcja kruszy się lub rozrywa, wydłuż czas każdej infiltracji żywicy próbki. Po drugie, jeśli sekcja ma kilka linii równoległych do noża, mocno zaciśnij blok próbki. Jeśli sekcja ma jakieś linie pionowe do noża, użyj nowego noża.

Aby zaobserwować morfologię komórek, granulek skrobi i ciał białkowych, możemy zabarwić skrawki odpowiednio rozjaśniaczem fluorescencyjnym 28, roztworem jodu i błękitem brylantowym Coomassie R250. W przypadku innych konkretnych plam oprzyj się na badaniach propozycji. Tutaj jako przykład używamy roztworu jodu do barwienia granulek skrobi.

Dodaj 40 mikrolitrów roztworu jodu, aby zanurzyć sekcję. I trzymaj go w słoiku przez minutę. A następnie przykryj próbkę rękawem osłonowym.

I zetrzyj nadmiar roztworu środka wokół niego. Natychmiast obserwować i fotografować próbkę pod oświetlonym mikroskopem wyposażonym w kamerę CCTV. Możemy przetwarzać i analizować ilościowo sfotografowane obrazy pod kątem obszaru, długiego lub krótkiego dostępu oraz okrągłości komórek, granulek skrobi i ciał białkowych w różnych regionach ziarna za pomocą oprogramowania do analizy morfologicznej.

Ustalamy prostą metodę cięcia na sucho, aby zachować całe sekcje wielkości ziarna w żywicy LR White. Metoda pozwala na przygotowanie przekrojów poprzecznych i podłużnych całego ziarna o wielkości dwóch mikronów. lub Na przykład, dojrzałe całe nasiona rzepaku mogą być dzielone poprzecznie i wzdłużnie.

Z powodzeniem można również przygotować kawałki dojrzałego całego ziarna kukurydzy o większej objętości. Ponadto za pomocą tej metody można również zbadać rozwijające się jądro, ugotowane jądro i kiełkujące jądro. Przygotowane sekcje całych jąder mają poniższe zastosowania.

Po pierwsze, skrawki całego ziarna można wykorzystać do obserwacji struktury tkankowej nasion. Na przykład skrawki całego zarodka rzepaku zabarwione safraniną mogą wyraźnie wskazywać na to, że jest to radykalny, hiper przypadkowy, wewnętrzny i zewnętrzny skrawki całego jądra mogą być używane do obserwacji i analizy morfologii komórek. Na przykład przekroje poprzeczne całego zarodka rzepaku są barwione rozjaśniaczem fluorescencyjnym 28, a olejki komórkowe są barwione w sposób specyficzny.

Mikromorfologia komórek w dowolnych regionach całego zarodka może być wyświetlana w dużym powiększeniu. Parametry morfologiczne komórek miąższowych mogą być analizowane ilościowo za pomocą oprogramowania do analizy morfologicznej i wykazują pewne różnice w różnych regionach zarodka. Przekroje poprzeczne całego ziarna kukurydzy barwione rozjaśniaczem fluorescencyjnym 28 mogą również występować jako morfologia komórek, a parametry morfologiczne komórek są różne w różnych regionach bielma.

Skrawki całego ziarna można zabarwić roztworem jodu, aby pokazać jego morfologię granulek skrobi, na przykład przekroje poprzeczne i podłużne ziaren kukurydzy barwione jodem mogą wyraźnie wykazywać morfologię granulek skrobi. Granulki skrobi w różnych regionach wykazują znacznie różną morfologię, rozmiar i ilość w komórkach bielma. Tak więc analiza ilościowa parametrów morfologicznych granulek skrobi pokazuje, że są one znacząco różne w różnych regionach bielma.

Przekroje mogą być wykorzystywane do obserwacji i analizy morfologii ciał białkowych. Na przykład białko skrobi jest barwione na niebiesko przy użyciu błękitu brylantowego Coomassie R250. Rozkład przestrzenny białka skrobiowego w całym zarodku rzepaku można zaobserwować w jego małym powiększeniu, a mikrostruktura może być wyraźnie widoczna przy dużym powiększeniu.

Ponadto można również analizować ilościowo liczby, indeks błędów i parametry morfologiczne ciał białkowych w wybranych regionach. Technika ta zapewnia pierwsze i proste przygotowanie kawałków żywicy całych ziaren z rozwijających się i dojrzałych nasion. Zastosowania przekrojowe w strukturze tkankowej całego ziarna, a następnie badanie morfologii komórek, granulek skrobi i ciał białkowych w różnych regionach całego ziarna.

Uzyskane obrazy można analizować ilościowo w celu pokazania parametrów morfologicznych komórek, granulek skrobi i ciał białkowych, a następnie porównywać je w różnych regionach całego ziarna.