Name: Model obrzęku limfatycznego mysiego ogona (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 38 s
Description: Poznaj model obrzęku limfatycznego mysiego ogona z wykorzystaniem technologii nanotransfekcji tkankowej TNT do dostarczania materiału genetycznego. Ta metoda umożliwia badanie mechanizmów obrzęku i rozwój nowych strategii terapeutycznych w medycynie regeneracyjnej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez granty przyznane przez Amerykańskie Stowarzyszenie Chirurgów Plastycznych Stypendium Akademickie i Departament Obrony W81XWH2110135 do AHH. Grant Fundacji Edukacji i Badań nad Chirurgią Estetyczną dla MS. NIH U01DK119099, R01NS042617 i R01DK125835 dla CKS.

Protokół jest zgodny z wytycznymi komisji etycznej ds. badań na zwierzętach. Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Indiana University School of Medicine Institutional Animal Care and Use Committee. Zwierzęta trzymano w 12-godzinnym cyklu światło-ciemność z jedzeniem i wodą ad libitum.
1. Chirurgiczne uszkodzenie układu limfatycznego mysiego ogona
<ol>
	<li>Użyj ośmiu tygodniowych myszy C57BL/6 o równym rozkładzie płci.</li>
	<li>Umieść mysz w znieczuleniu ogólnym w komorze indukcyjnej z 3-4% izofluranem w 100% tlenie, a następnie sedacją podtrzymującą w 1-3% podczas zabiegu.</li>
	<li>Podawać podskórnie 0,5 mg/kg buprenorfiny o przedłużonym uwalnianiu (SR) w celu kontroli bólu. 
	UWAGA: Dodatkowe leki przeciwbólowe podawane po operacji: karprofen raz na 24 h przez co najmniej 48 h i bupiwakaina raz po wykonaniu nacięcia lub przed zamknięciem nacięcia, aplikowane przez kapanie na brzegi skóry (utrzymuje się do 4 – 6 h).</li>
	<li>Ustaw mysz grzbietowo i przygotuj ogon 70% alkoholem izopropylowym.</li>
	<li>Przed zabiegiem zmierzyć średnicę ogona w odstępach co 5 mm, zaczynając 20 mm od podstawy ogona za pomocą suwmiarki. Pomiary te zostaną użyte do obliczenia objętości przy użyciu równania ściętego stożka37.</li>
	<li>Zaznaczyć wycięcie o obwodzie 3 mm na ogonie w odległości 20 mm od podstawy.</li>
	<li>Wykonaj skrupulatne wycięcie skóry o pełnej grubości 3 mm za pomocą sterylnego ostrza chirurgicznego (rozmiar 15), pozostawiając całe znajdujące się pod nią naczynia krwionośne nienaruszone pod mikroskopijnym powiększeniem chirurgicznym. Naciąć górny znak obwodowy (20 mm od podstawy ogona) najpierw przez skórę właściwą, a następnie nacięcie na całej grubości obwodowej 3 mm w kierunku dystalalnym do pierwszego nacięcia.
	<ol>
		<li>Wykonaj prostopadłe pionowe nacięcie o pełnej grubości, aby połączyć dwa nacięcia. Użyj drobnoziarnistego podbieracza, aby uchwycić krawędź natarcia i użyj mikronożyczek, aby ostrożnie wypreparować głęboko w płaszczyźnie jałowej do skóry właściwej i powierzchownie do żyły przydankowej.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wstrzyknąć 0,1 ml błękitu izosulfanowego (1%) podskórnie proksymalnie do końca ogona.</li>
	<li>Zidentyfikuj dwa kanały limfatyczne przylegające do bocznych żył ogonowych pod mikroskopem operacyjnym. Naczynia limfatyczne będą niebieskie z powodu wstrzyknięcia izosulfanu. Przeciąć naczynia limfatyczne za pomocą prostych nożyczek mikrochirurgicznych. Użyj nożyczek, aby ostrożnie wypreparować płaszczyznę między żyłą boczną a limfatyczną. Następnie przełóż końcówkę jednego ostrza nożyczek między naczyniem limfatycznym a żyłą boczną i zamknij ostrza, aby przeciąć naczynie limfatyczne</li>.
	<li>Opatrunek rany ogona należy opatrzyć sterylnym, przylegającym, przezroczystym opatrunkiem. Codziennie sprawdzaj nacięcia pooperacyjne, aby upewnić się, że nie są zakażone lub krwawiące, i zapewnij pielęgnację rany przez 2 tygodnie. </li>
	<li>Trzymaj zwierzęta pojedynczo, aby zapobiec dalszym urazom ogona i zapobiec gryzieniu się zwierząt, co mogłoby prowadzić do powikłań chirurgicznych. </li>
</ol>
2. Ocena naczyń ogonowych za pomocą laserowego obrazowania z kontrastem plamkowym
<ol>
	<li>Znieczulij mysz jak w kroku 1.2.</li>
	<li>Aby użyć obrazowania z kontrastem laserowym do wizualizacji unaczynienia ogona, ustaw szerokość na 0,8 cm, wysokość na 1,8 cm, gęstość punktów na wysoką, liczbę klatek na sekundę na 44 obrazy/sekundę, czas na 30 sekund, a kolorowe zdjęcie na 1 na 10 sekund.</li>
	<li>Oceń perfuzję żylną i tętniczą pod kątem drożności. Jakościowo należy zobrazować ciągłość przepływu.</li>
</ol>
3. Funkcjonalna ocena limfy za pomocą angiografii laserowej w bliskiej podczerwieni
<ol>
	<li>Znieczulić zwierzę jak w kroku 1.2</li>
	<li>Odpuścić zieleń indocyjaninową (ICG) (25 mg/10 ml) i podać 0,1 ml podskórnie w dystalny ogon myszy w pobliżu końcówki.</li>
	<li>Przyciemnij światła w pokoju. Umieść angiografię laserową w bliskiej podczerwieni w ustawieniu buforowania, a następnie przechwytywanie na żywo.</li>
</ol>
4. Ogniskowe dostarczanie ładunku kwasu nukleinowego do ogona myszy za pomocą TNT
<ol>
	<li>Znieczulić zwierzę jak w kroku 1.2.</li>
	<li>Złuszczaj mysi ogon za pomocą miejscowego kremu złuszczającego skórę.</li>
	<li>Zanurzyć ogon myszy w roztworze kolagenazy (10 mg/ml) w temperaturze 37 °C na 5 minut.</li>
	<li>Załaduj DNA do zbiornika chipa TNT2.035.</li>
	<li>Umieść silikonowe urządzenie z chipem TNT2.0 w żądanym ognisku dostawy na ogonie za pomocą nanoigieł stykających się z ogonem.</li>
	<li>Umieść dodatnią sondę elektryczną w zbiorniku. Przymocować sondę ujemną do igły 30 G i wprowadzić igłę podskórnie w końcówkę do miejsca podania.</li>
	<li>Zastosuj stymulację elektryczną impulsem fali prostokątnej (impulsy 10 x 10 ms, 250 V, 10 mA).</li>
</ol>

<ol><li>Kataru, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+and+secondary+lymphedema%3A+chicken+or+egg%5BTitle%5D)+AND+%22Translation+Research%22%5BJournal%5D)">Fibrosis and secondary lymphedema: chicken or egg.</a> Translation Research. 209, 68-76 (2019).</li>
<li>Brayton, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+prevalence+and+treatment+benefits+in+cancer%3A+impact+of+a+therapeutic+intervention+on+health+outcomes+and+costs%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lymphedema prevalence and treatment benefits in cancer: impact of a therapeutic intervention on health outcomes and costs.</a> PLoS One. 9 (12), 114597(2014).</li>
<li>Mendoza, N., Li, A., Gill, A., Tyring, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filariasis%3A+diagnosis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatology+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Filariasis: diagnosis and treatment.</a> Dermatology and Therapy. 22 (6), 475-490 (2009).</li>
<li>Rockson, S. G., Rivera, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+the+population+burden+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Estimating the population burden of lymphedema.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1131, 147-154 (2008).</li>
<li>Soran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer-related+lymphedema--what+are+the+significant+predictors+and+how+they+affect+the+severity+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Journal%22%5BJournal%5D)">Breast cancer-related lymphedema--what are the significant predictors and how they affect the severity of lymphedema.</a> Breast Journal. 12 (6), 536-543 (2006).</li>
<li>Hayes, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upper-body+morbidity+after+breast+cancer%3A+incidence+and+evidence+for+evaluation%2C+prevention%2C+and+management+within+a+prospective+surveillance+model+of+care%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Upper-body morbidity after breast cancer: incidence and evidence for evaluation, prevention, and management within a prospective surveillance model of care.</a> Cancer. 118, 8 Suppl 2237-2249 (2012).</li>
<li>Carl, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+Review+of+the+Surgical+Treatment+of+Extremity+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Reconstructive+Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Systematic Review of the Surgical Treatment of Extremity Lymphedema.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 33 (6), 412-425 (2017).</li>
<li>Garza, R., Skoracki, R., Hock, K., Povoski, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+overview+on+the+surgical+management+of+secondary+lymphedema+of+the+upper+and+lower+extremities+related+to+prior+oncologic+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">A comprehensive overview on the surgical management of secondary lymphedema of the upper and lower extremities related to prior oncologic therapies.</a> BMC Cancer. 17 (1), 468(2017).</li>
<li>Hassanein, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+Inferior+Epigastric+Artery+Vascularized+Lymph+Node+Transfer%3A+A+Simple+and+Safe+Option+for+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plastic%2C+Reconstructive%2C+Aesthetic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Deep Inferior Epigastric Artery Vascularized Lymph Node Transfer: A Simple and Safe Option for Lymphedema.</a> Journal of Plastic, Reconstructive, Aesthetic Surgery. 73 (10), 1897-1916 (2020).</li>
<li>Hassanein, A. H., Sacks, J. M., Cooney, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+perioperative+lymphatic-venous+anastomosis+localization+using+transcutaneous+vein+illumination%2C+isosulfan+blue%2C+and+indocyanine+green+lymphangiography%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Optimizing perioperative lymphatic-venous anastomosis localization using transcutaneous vein illumination, isosulfan blue, and indocyanine green lymphangiography.</a> Microsurgery. 37 (8), 956-957 (2017).</li>
<li>Chang, D. W., Masia, J., Garza, R., Skoracki, R., Neligan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema%3A+Surgical+and+Medical+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema: Surgical and Medical Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138, 3 Suppl 209-218 (2016).</li>
<li>Gould, D. J., Mehrara, B. J., Neligan, P., Cheng, M. H., Patel, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+transplantation+for+the+treatment+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Lymph node transplantation for the treatment of lymphedema.</a> Journal of Surgical Oncology. 118 (5), 736-742 (2018).</li>
<li>Cook, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immediate+Lymphatic+Reconstruction+after+Axillary+Lymphadenectomy%3A+A+Single-Institution+Early+Experience%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Immediate Lymphatic Reconstruction after Axillary Lymphadenectomy: A Single-Institution Early Experience.</a> Annals of Surgical Oncology. , (2020).</li>
<li>Cook, J. A., Hassanein, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ASO+Author+Reflections%3A+Immediate+Lymphatic+Reconstruction%3A+A+Proactive+Approach+to+Breast+Cancer-Related+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">ASO Author Reflections: Immediate Lymphatic Reconstruction: A Proactive Approach to Breast Cancer-Related Lymphedema.</a> Annals of Surgical Oncology. , (2020).</li>
<li>Johansson, K., Branje, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arm+lymphoedema+in+a+cohort+of+breast+cancer+survivors+10+years+after+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Oncologica%22%5BJournal%5D)">Arm lymphoedema in a cohort of breast cancer survivors 10 years after diagnosis.</a> Acta Oncologica. 49 (2), 166-173 (2010).</li>
<li>Johnson, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+Incidence+After+Axillary+Lymph+Node+Dissection%3A+Quantifying+the+Impact+of+Radiation+and+the+Lymphatic+Microsurgical+Preventive+Healing+Approach%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema Incidence After Axillary Lymph Node Dissection: Quantifying the Impact of Radiation and the Lymphatic Microsurgical Preventive Healing Approach.</a> Annals of Plastic Surgery. 82, 4S Suppl 3 234-241 (2019).</li>
<li>Gartner, R., Mejdahl, M. K., Andersen, K. G., Ewertz, M., Kroman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+in+self-reported+arm-lymphedema+in+Danish+women+treated+for+early-stage+breast+cancer+in+2005+and+2006--a+nationwide+follow-up+study%5BTitle%5D)+AND+%22Breast%22%5BJournal%5D)">Development in self-reported arm-lymphedema in Danish women treated for early-stage breast cancer in 2005 and 2006--a nationwide follow-up study.</a> Breast. 23 (4), 445-452 (2014).</li>
<li>Shin, W. S., Rockson, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+the+molecular+and+mechanistic+study+of+lymphatic+biology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Animal models for the molecular and mechanistic study of lymphatic biology and disease.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1131, 50-74 (2008).</li>
<li>Tobbia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+development+and+lymphatic+function+following+lymph+node+excision+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep.</a> Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).</li>
<li>Olszewski, W., Machowski, Z., Sokolowski, J., Nielubowicz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+lymphedema+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Experimental lymphedema in dogs.</a> Journal of Cardiovascular Surgery. 9 (2), 178-183 (1968).</li>
<li>Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+lymphedema+in+the+mouse+tail%3A+Lymphatic+hyperplasia%2C+VEGF-C+upregulation%2C+and+the+protective+role+of+MMP-9%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9.</a> Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).</li>
<li>Tabibiazar, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+manifestations+of+experimental+lymphatic+insufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Inflammatory manifestations of experimental lymphatic insufficiency.</a> PLoS Medicine. 3 (7), 254(2006).</li>
<li>Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Return+of+lymphatic+function+after+flap+transfer+for+acute+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema.</a> Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).</li>
<li>Zampell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+deficiency+worsens+inflammation+and+lymphedema+after+lymphatic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor deficiency worsens inflammation and lymphedema after lymphatic injury.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 302 (4), 709-719 (2012).</li>
<li>Gardenier, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diphtheria+toxin-mediated+ablation+of+lymphatic+endothelial+cells+results+in+progressive+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Diphtheria toxin-mediated ablation of lymphatic endothelial cells results in progressive lymphedema.</a> JCI Insight. 1 (15), 84095(2016).</li>
<li>Weiler, M. J., Cribb, M. T., Nepiyushchikh, Z., Nelson, T. S., Dixon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+tail+lymphedema+model+for+observing+lymphatic+pump+failure+during+lymphedema+development%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A novel mouse tail lymphedema model for observing lymphatic pump failure during lymphedema development.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10405(2019).</li>
<li>Avraham, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th2+differentiation+is+necessary+for+soft+tissue+fibrosis+and+lymphatic+dysfunction+resulting+from+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Th2 differentiation is necessary for soft tissue fibrosis and lymphatic dysfunction resulting from lymphedema.</a> FASEB J. 27 (3), 1114-1126 (2013).</li>
<li>Zampell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%28%2B%29+cells+regulate+fibrosis+and+lymphangiogenesis+in+response+to+lymphatic+fluid+stasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">CD4(+) cells regulate fibrosis and lymphangiogenesis in response to lymphatic fluid stasis.</a> PLoS One. 7 (11), 49940(2012).</li>
<li>Arruda, G., Ariga, S., de Lima, T. M., Souza, H. P., Andrade, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+mouse-tail+lymphedema+model%5BTitle%5D)+AND+%22Lymphology%22%5BJournal%5D)">A modified mouse-tail lymphedema model.</a> Lymphology. 53 (1), 29-37 (2020).</li>
<li>Jun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+Mouse+Models+of+Chronic+Secondary+Lymphedema%3A+Tail+and+Hind+Limb+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Modified Mouse Models of Chronic Secondary Lymphedema: Tail and Hind Limb Models.</a> Annals of Vascular Surgery. 43, 288-295 (2017).</li>
<li>Karkkainen, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+gene+therapy+of+human+hereditary+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A model for gene therapy of human hereditary lymphedema.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98 (22), 12677-12682 (2001).</li>
<li>Yoon, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-C+gene+therapy+augments+postnatal+lymphangiogenesis+and+ameliorates+secondary+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">VEGF-C gene therapy augments postnatal lymphangiogenesis and ameliorates secondary lymphedema.</a> Journal of Clinical Investigation. 111 (5), 717-725 (2003).</li>
<li>Gallego-Perez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+tissue+nano-transfection+mediates+non-viral+stroma+reprogramming+and+rescue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Topical tissue nano-transfection mediates non-viral stroma reprogramming and rescue.</a> Nature Nanotechnology. 12 (10), 974-979 (2017).</li>
<li>Moore, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanochannel-Based+Poration+Drives+Benign+and+Effective+Nonviral+Gene+Delivery+to+Peripheral+Nerve+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Biosystems%22%5BJournal%5D)">Nanochannel-Based Poration Drives Benign and Effective Nonviral Gene Delivery to Peripheral Nerve Tissue.</a> Advanced Biosystems. , 2000157(2020).</li>
<li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-Mediated+Crosstalk+between+Keratinocytes+and+Macrophages+in+Cutaneous+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Exosome-Mediated Crosstalk between Keratinocytes and Macrophages in Cutaneous Wound Healing.</a> ACS Nano. 14 (10), 12732-12748 (2020).</li>
<li>Roy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenic+tissue+nanotransfection+in+the+management+of+cutaneous+diabetic+polyneuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Neurogenic tissue nanotransfection in the management of cutaneous diabetic polyneuropathy.</a> Nanomedicine. 28, 102220(2020).</li>
<li>Sitzia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volume+measurement+in+lymphoedema+treatment%3A+examination+of+formulae%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cancer+Care%22%5BJournal%5D)">Volume measurement in lymphoedema treatment: examination of formulae.</a> European Journal of Cancer Care. 4 (1), 11-16 (1995).</li>
<li>Smeltzer, D. M., Stickler, G. B., Schirger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+lymphedema+in+children+and+adolescents%3A+a+follow-up+study+and+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Primary lymphedema in children and adolescents: a follow-up study and review.</a> Pediatrics. 76 (2), 206-218 (1985).</li>
<li>Maclellan, R. A., Greene, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema.</a> Seminars in Pediatric Surgery. 23 (4), 191-197 (2014).</li>
<li>Clavin, N. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta1+is+a+negative+regulator+of+lymphatic+regeneration+during+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%3A+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">TGF-beta1 is a negative regulator of lymphatic regeneration during wound repair.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 295 (5), 2113-2127 (2008).</li>
<li>Gnyawali, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retooling+Laser+Speckle+Contrast+Analysis+Algorithm+to+Enhance+Non-Invasive+High+Resolution+Laser+Speckle+Functional+Imaging+of+Cutaneous+Microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Retooling Laser Speckle Contrast Analysis Algorithm to Enhance Non-Invasive High Resolution Laser Speckle Functional Imaging of Cutaneous Microcirculation.</a> Scientific Reports. 7, 41048(2017).</li>
</ol>

Autorzy nie mają konkurujących ze sobą konfliktów interesów.

Obrzęk limfatyczny jest klasyfikowany jako pierwotne (wrodzone) lub wtórne (jatrogenne uszkodzenie układu chłonnego)38,39. Wtórny obrzęk limfatyczny stanowi 99% przypadków39. Wtórny obrzęk limfatyczny jest najczęściej spowodowany infekcją (filariozą) lub leczeniem poonkologicznym za pomocą limfadenektomii lub radioterapii 4,39. Translacyjny model zwierzęcy jest trudny w przypadku w...

Obrzęk limfatyczny to obrzęk kończyn spowodowany dysfunkcją układu limfatycznego. Kończyna dotknięta chorobą powiększa się z powodu nagromadzenia płynu, tkanki tłuszczowej i zwłóknienia1. Obrzęk limfatyczny dotyka 250 milionów ludzi na całym świecie2,3,4. Szacuje się, że u 20-40% pacjentów leczonych z powodu nowotworów złośliwych, takich jak rak piersi, czerniak, nowotwory ginekologiczne/urologiczne lub mięsaki, rozwija się obrzęk limfatyczny2,4,5. Zachorowalność na obrzęk limfatyczny obejmuje nawracające infekcje, ból i deformację6. Nie ma lekarstwa na tę postępującą, trwającą całe życie chorobę. Obecne terapie są różnie skuteczne7 i obejmują kompresję, pełną terapię obkurczającą przekrwienie przez fizjoterapeutów, zabiegi wycinające i operacje mikrochirurgiczne, w tym transfer unaczynionych węzłów chłonnych i obejście limfatyczne żylne7,8,9,10,11,12,13,14. Idealne leczenie obrzęku limfatycznego nie zostało jeszcze odkryte.
Badanie mechanizmu i terapii obrzęku limfatycznego zostało ograniczone. Średni okres opóźnienia w wystąpieniu urazu limfatycznego wynosi jeden rok po urazie limfatycznym15,16 i większość osób, które doświadczają jatrogennego urazu podczas promieniowania i operacji, nie rozwija obrzęku limfatycznego4,6,17. Chociaż opisano duże modele zwierząt, w tym psów, owiec i świń18,19,20, model ogona myszy jest najczęściej stosowany ze względu na łatwość, koszt i powtarzalność. Modele mysie do badania obrzęku limfatycznego obejmują model ogona, ablację limfatyczną za pośrednictwem toksyny błonicy oraz rozwarstwienie węzłów chłonnych pachowych lub podkolanowych21,22,23,24,25,26. Większość modeli ogonów wykorzystuje ogniskowe, pełnej grubości wycięcie skóry z przecięciem kanału limfatycznego, które jest wykonywane w pobliżu podstawy ogona22, co skutkuje obrzękiem ogona i cechami histologicznymi podobnymi do ludzkiego obrzęku limfatycznego24,27,28,29. Jednak standardowy model mysiego ogona zazwyczaj ustępuje spontanicznie w ciągu zaledwie 20 dni i towarzyszy mu okresowa martwica ogona30. Model ogona myszy z obrzękiem limfatycznym przedłuża utrzymujący się obrzęk limfatyczny poza 15 tygodni, wykazuje potwierdzoną drożność tętnic i żył oraz umożliwia ocenę funkcjonalnej dysfunkcji układu limfatycznego.
Model obrzęku limfatycznego z mysim ogonem pozwala na ocenę nowych metod leczenia obrzęku limfatycznego. Strategie oparte na genach zostały wykorzystane w modelu mysim, w którym pośredniczą wektory wirusowe31,32. Wykorzystujemy również nowatorską technologię nanotransfekcji tkanek (TNT) do dostarczania ładunku genetycznego do ogona myszy z obrzękiem limfatycznym. TNT ułatwia bezpośrednie, przezskórne dostarczanie genów za pomocą chipa z nanokanałami w szybko skoncentrowanym polu elektrycznym33,34,35,36. Model obejmuje użycie TNT2.0, aby umożliwić ogniskowe dostarczanie genów potencjalnych terapii opartych na genach do miejsca uszkodzenia układu limfatycznego ogona myszy35.

<table><tbody>Mikroskop chirurgiczny <tr><td>Tegaderm Film</td><td></td><td>1626W</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Leica, Wetzlar, Niemcy</td><td>MSV266</td><td></td></tr><tr><td>Opatrunek adherentny (Tegaderm)</td><td>3M, St. Paul, Minn.</td>Plamka laserowa <td>1626 W</td><td></td></tr><tr><td>(system Pericam PSI)</td> <td>Perimed AB, Sztokholm, Szwecja)</td> <td>PSIZ</td><td></td></tr><tr><td>Laser bliskiej podczerwieni (LUNA)</td> <td>Stryker (dawniej Novadaq Technologies, Toronto, Kanada)</td> Myszy <td>LU3000</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6</td> Jackson <td>Laboratories</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Adson - 1x2 zęby</td><td>Fine Science Tools (USA) Inc.</td><td>11019-12</td><td></td></tr><tr><td>V-Hook</td><td>Fine Science Tools (USA) Inc.</td><td>18052-12</td><td></td></tr><tr><td>Skalpel SS NO15</td><td>Fischer Scientific</td><td>29556</td><td></td></tr><tr><td>Igła jednorazowa 30GX1</td><td>Nożyczki operacyjne Fischer Scientific</td><td>305128</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Fischer Scientific</td><td>12-460-796</td><td></td></tr><tr><td>Kleszczyki jubilerskie chirurgiczne, Sklar 4-1/2 w</td><td>Fischer Scientific</td><td>50-118-4255</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki sprężynowe - proste/ostre-ostre/ 8mm Cutting Edge</td><td>Fine Science Tools (USA) Inc.</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Cardiogreen</td><td>Sigma</td><td>I2633-25MG</td><td></td></tr><tr><td>IsosulfanBlue (limfazuryna)&nbsp; 50 mg/5ml</td><td>Mylan</td><td>67457-220-05</td><td></td></tr></tbody></table>

model obrzęku limfatycznego mysiego ogona

A Murine Tail Lymphedema Model

Obrzęk limfatyczny to obrzęk kończyn spowodowany dysfunkcją układu limfatycznego. Dotknięta chorobą kończyna powiększa się z powodu nagromadzenia płynu, tkanki tłuszczowej i zwłóknienia. Nie ma lekarstwa na tę chorobę. Do badania obrzęku limfatycznego wykorzystano model ogona myszy wykorzystujący ogniskowe wycięcie skóry na pełnej grubości w pobliżu podstawy ogona, powodujący obrzęk ogona. Jednak model ten może powodować budowę naczyń krwionośnych i w konsekwencji martwicę ogona oraz wczesne ustąpienie obrzęku ogona, co ogranicza jego kliniczną translatowalność. Model przewlekłego obrzęku limfatycznego mysiego ogona wywołuje utrzymujący się obrzęk limfatyczny przez 15 tygodni i niezawodną perfuzję do ogona. Ulepszenia tradycyjnego modelu obrzęku limfatycznego mysiego ogona obejmują 1) precyzyjne wycięcie pełnej grubości i wycięcie limfy za pomocą mikroskopu chirurgicznego, 2) potwierdzenie pooperacyjnej perfuzji tętniczej i żylnej za pomocą plamki laserowej o wysokiej rozdzielczości oraz 3) ocenę funkcjonalną za pomocą limfangiografii laserowej w bliskiej podczerwieni w zieleni indocyjaninowej. Wykorzystujemy również technologię nanotransfekcji tkanek (TNT) do nowatorskiego, niewirusowego, przezskórnego, ogniskowego dostarczania ładunku genetycznego do układu naczyniowego ogona myszy.

Technika opracowania modelu trwałego obrzęku limfatycznego w ogonie myszy przedstawiona jest na Rysunku 1. Rysunek ukazuje istotne aspekty anatomiczne modelu ogona myszy. Rysunek 2 obrazuje postępujący obrzęk oraz trwały, utrzymujący się obrzęk limfatyczny w ogonie myszy po indukcji lymphedema. Objętość ogona myszy, obliczona zgodnie z równaniem dla stożka ściętego, osiąga maksimum w 4. tygodniu i utrzymuje się na stałym poziomie...

Obrzęk limfatyczny to obrzęk kończyn spowodowany dysfunkcją układu limfatycznego. Opisujemy przewlekły model obrzęku limfatycznego mysiego ogona i nowatorskie zastosowanie technologii nanotransfekcji tkanek (TNT) do dostarczania ładunku genetycznego do ogona.

Model obrzęku limfatycznego mysiego ogona

Lymphedema is extremity swelling caused by lymphatic dysfunction. The affected limb enlarges because of accumulation of fluid, adipose, and fibrosis. ...

Obrzęk limfatyczny jest stanem przewlekłym, na który nie ma lekarstwa. Dotyka jedną trzecią pacjentek, które przeszły operację pachowych węzłów chłonnych i radioterapię w leczeniu raka piersi. Posiadanie prawidłowego modelu zwierzęcego ułatwia zrozumienie mechanizmu i opracowanie nowych strategii leczenia.Model obrzęku limfatycznego na ogonie myszy jest wiarygodny i powtarzalny z szybkim początkiem. Wykazuje zmiany histologiczne zgodne z ludzkim obrzękiem limfatycznym. Procedurę zademonstruje dr Ganesh Mohan, doktor habilitowany z mojego laboratorium.Na początek ułóż ośmiotygodniową uspokojoną mysz rufowo i przygotuj ogon 70% alkoholem izopropylowym. Użyj suwmiarki, aby zmierzyć średnicę ogona w krokach co pięć milimetrów, zaczynając 20 milimetrów od podstawy ogona. Zaznacz trzymilimetrowe wycięcie obwodu na ogonie 20 milimetrów od podstawy.Pod mikroskopijnym powiększeniem chirurgicznym wykonaj skrupulatne wycięcie skóry o pełnej grubości trzech milimetrów, pozostawiając nienaruszone całe naczynie krwionośne znajdujące się pod spodem. Naciąć górny znak obwodowy najpierw przez skórę właściwą, a następnie nacięcie obwodowe o pełnej grubości trzy milimetry dystalnie do pierwszego nacięcia. Wykonaj prostopadłe pionowe nacięcie o pełnej grubości, aby połączyć dwa nacięcia, a następnie użyj drobnoziarnistego podbieracza, aby uchwycić krawędź natarcia i wyciąć głęboko w płaszczyźnie beznaczyniowej do skóry właściwej i powierzchownie do przydanki żylnej za pomocą mikronożyczek.Wstrzyknąć 0,1 mililitra 1% błękitu izosulfanowego podskórnie proksymalnie do końca ogona. Zidentyfikuj dwa kanały limfatyczne, które stają się niebieskie z powodu wstrzyknięcia przylegającego do bocznych żył ogonowych. Ostrożnie przeciąć limfę, wycinając płaszczyznę między żyłą boczną a limfatyczną prostymi nożyczkami mikrochirurgicznymi.Przełóż końcówkę jednego ostrza nożyczek między naczyniem limfatycznym a żyłą boczną i zamknij ostrza, aby przeciąć naczynie limfatyczne. Po zakończeniu opatruj ranę ogona sterylnym, przylegającym, wyraźnym adresem. Podawać zieleń indocyjaninową 0,1 mililitra podskórnie do dystalnego ogona myszy w pobliżu końcówki.Przyciemnij światła w pomieszczeniu, a następnie umieść angiografię laserową w bliskiej podczerwieni w ustawieniu buforowania i wykonaj obrazowanie na żywo. Po podaniu błękitu izosulfanowego na końcówkę ogona, leki limfatyczne wykazywały niebieski kolor. Układ limfatyczny został zaburzony, podczas gdy sąsiednie żyły boczne zostały zachowane.Postępujący obrzęk i utrzymujący się uporczywy obrzęk limfatyczny ogona myszy po indukcji obrzęku limfatycznego przedstawiono tutaj. Objętość ogona myszy, obliczona za pomocą równania ściętego stożka, osiągnęła szczyt w czwartym tygodniu i ustabilizowała się w szóstym tygodniu, po czym nastąpiła stopniowa poprawa, która utrzymywała się do 15 tygodnia. Przeprowadzono obrazowanie kontrastowe z laserowymi plamkami o wysokiej rozdzielczości, aby potwierdzić perfuzję ogona myszy w modelu ogona obrzęku limfatycznego, pokazując uszkodzone żyły boczne i nienaruszone żyły boczne w celu oceny drożności unaczynienia ogona.Limfangiografia laserowa w bliskiej podczerwieni wykazała nienaruszone naczynia limfatyczne przed operacją i brak tranzytu ICG poza miejsce operacyjne po operacji, potwierdzając w ten sposób, że obrzęk był spowodowany dysfunkcją układu limfatycznego. Skuteczność dostarczania ładunku genetycznego przy użyciu technologii nanotransfekcji tkanek wykazano poprzez dostarczenie DNA znakowanego amidytem fluoresceiny do mysiego ogona. Wykorzystanie adaptacji dla modelu obrzęku limfatycznego ogona myszy i angiografii laserowej w bliskiej podczerwieni ICG jest klinicznie przekładalnym i ekscytującym modelem zwierzęcym z implikacjami terapeutycznymi.

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Niedawno opracowane techniki obrazowania z wykorzystaniem fluorescencji w bliskiej podczerwieni (NIRF) mogą pomóc w wyjaśnieniu roli, jaką układ limfatyczny odgrywa w przerzutowaniu nowotworów, odpowiedzi immunologicznej, gojeniu ran oraz innych chorobach związanych z układem limfatycznym.

Nieinwazyjne obrazowanie optyczne naczyń limfatycznych myszy

W tym filmie komórki czerniaka są wstrzykiwane dożylnie przez żyłę ogonową w modelu mysim. Komórki czerniaka przemieszczają się dalej przez układ krążenia, przystosowując się do odległego mikrośrodowiska i powodując przerzuty w narządach, takich jak płuca.

Eksperymentalny mysi model czerniaka z przerzutami: platforma do badania potencjału przerzutowego komórek czerniaka w płucach

Ten film opisuje technikę in vivo generowania obrzęku limfatycznego mysiego ogona, nieprawidłowego gromadzenia się płynu w przestrzeni tkanki śródmiąższowej prowadzącej do obrzęku ogona. Model jest stosowany do badania mechanizmów i terapii obrzęku limfatycznego.

Model obrzęku limfatycznego mysiego ogona: technika in vivo generowania trwałego obrzęku limfatycznego w mysim ogonie

Ten film demonstruje procedurę chirurgicznej izolacji węzła chłonnego drenującego pachwinę na modelu mysim. Nacięcie okolicy brzusznej zapewnia dostęp do pachwinowego węzła chłonnego, który jest pobierany chirurgicznie. Pobrany półprzezroczysty pachwinowy węzeł chłonny można wykorzystać do badań immunologicznych.

Pobieranie węzła chłonnego drenującego pachwiny z modelu mysiego

Ten model zwierzęcy umożliwia badaczom wywołanie statystycznie istotnego wtórnego obrzęku limfatycznego w tylnej kończynie myszy, trwającego co najmniej 8 tygodni. Model może być wykorzystany do badania patofizjologii obrzęku limfatycznego i badania nowych opcji leczenia.

Zmieniona metoda wywoływania wtórnego obrzęku limfatycznego w tylnej kończynie myszy

Przedstawiono protokół blokowania przepływu limfy poprzez chirurgiczne zszywanie doprowadzających naczyń limfatycznych.

Blokowanie przepływu limfy poprzez zszywanie aferentnych naczyń limfatycznych u myszy

Tutaj prezentujemy skuteczną i efektywną metodę wstrzykiwania żył ogonowych gryzoni za pomocą unikalnie zaprojektowanego urządzenia rozgrzewającego/krępującego. Usprawniając inicjację procesów rozszerzania naczyń krwionośnych i ograniczania, protokół ten umożliwia dokładne i terminowe wstrzyknięcia dożylne dużym grupom zwierząt przy minimalnym stresie.

Nowoczesne urządzenie rozgrzewające/ograniczające do skutecznych iniekcji żył ogonowych w mysim modelu sepsy grzybiczej

Czerniak jest bardzo agresywną chorobą, która szybko rozprzestrzenia się na inne narządy. Protokół ten opisuje zastosowanie obrazowania ultrasonograficznego o ultrawysokiej częstotliwości, w połączeniu z renderowaniem 3D, do monitorowania objętości pachwinowych węzłów chłonnych w mysim modelu czerniaka z przerzutami Braf/Pten.

Analiza objętości węzłów chłonnych za pomocą obrazowania ultrasonograficznego o ultrawysokiej częstotliwości w genetycznie zmodyfikowanym mysim modelu czerniaka Braf/Pten

Przedstawiony tutaj eksperymentalny projekt dostarcza użytecznego modelu reprodukcyjnego do badań specyficznych dla antygenu limfocytów T CD8+ podczas przerzutów do węzłów chłonnych (LN), co wyklucza zaburzenia limfocytów T CD8+ osób postronnych.

Model przerzutów do węzłów chłonnych drenujących do oceny dynamiki limfocytów T CD8+ specyficznych dla antygenu podczas nowotworzenia

Protokół ma na celu opisanie mysiego modelu generującego nawroty ostrej białaczki limfoblastycznej, oparty na dynamice odpowiedzi na chemioterapię indukcyjną.

Model myszy nawrotu białaczki do indukcyjnej chemioterapii ostrej białaczki limfoblastycznej

Poznaj model obrzęku limfatycznego mysiego ogona z wykorzystaniem technologii nanotransfekcji tkankowej TNT do dostarczania materiału genetycznego. Ta metoda umożliwia badanie mechanizmów obrzęku i rozwój nowych strategii terapeutycznych w medycynie regeneracyjnej.

Model obrzęku limfatycznego mysiego ogona

Przeglądaj więcej filmów