Model obrzęku limfatycznego mysiego ogona

Obrzęk limfatyczny jest stanem przewlekłym, na który nie ma lekarstwa. Dotyka jedną trzecią pacjentek, które przeszły operację pachowych węzłów chłonnych i radioterapię w leczeniu raka piersi. Posiadanie prawidłowego modelu zwierzęcego ułatwia zrozumienie mechanizmu i opracowanie nowych strategii leczenia.

Model obrzęku limfatycznego na ogonie myszy jest wiarygodny i powtarzalny z szybkim początkiem. Wykazuje zmiany histologiczne zgodne z ludzkim obrzękiem limfatycznym. Procedurę zademonstruje dr Ganesh Mohan, doktor habilitowany z mojego laboratorium.

Na początek ułóż ośmiotygodniową uspokojoną mysz rufowo i przygotuj ogon 70% alkoholem izopropylowym. Użyj suwmiarki, aby zmierzyć średnicę ogona w krokach co pięć milimetrów, zaczynając 20 milimetrów od podstawy ogona. Zaznacz trzymilimetrowe wycięcie obwodu na ogonie 20 milimetrów od podstawy.

Pod mikroskopijnym powiększeniem chirurgicznym wykonaj skrupulatne wycięcie skóry o pełnej grubości trzech milimetrów, pozostawiając nienaruszone całe naczynie krwionośne znajdujące się pod spodem. Naciąć górny znak obwodowy najpierw przez skórę właściwą, a następnie nacięcie obwodowe o pełnej grubości trzy milimetry dystalnie do pierwszego nacięcia. Wykonaj prostopadłe pionowe nacięcie o pełnej grubości, aby połączyć dwa nacięcia, a następnie użyj drobnoziarnistego podbieracza, aby uchwycić krawędź natarcia i wyciąć głęboko w płaszczyźnie beznaczyniowej do skóry właściwej i powierzchownie do przydanki żylnej za pomocą mikronożyczek.

Wstrzyknąć 0,1 mililitra 1% błękitu izosulfanowego podskórnie proksymalnie do końca ogona. Zidentyfikuj dwa kanały limfatyczne, które stają się niebieskie z powodu wstrzyknięcia przylegającego do bocznych żył ogonowych. Ostrożnie przeciąć limfę, wycinając płaszczyznę między żyłą boczną a limfatyczną prostymi nożyczkami mikrochirurgicznymi.

Przełóż końcówkę jednego ostrza nożyczek między naczyniem limfatycznym a żyłą boczną i zamknij ostrza, aby przeciąć naczynie limfatyczne. Po zakończeniu opatruj ranę ogona sterylnym, przylegającym, wyraźnym adresem. Podawać zieleń indocyjaninową 0,1 mililitra podskórnie do dystalnego ogona myszy w pobliżu końcówki.

Przyciemnij światła w pomieszczeniu, a następnie umieść angiografię laserową w bliskiej podczerwieni w ustawieniu buforowania i wykonaj obrazowanie na żywo. Po podaniu błękitu izosulfanowego na końcówkę ogona, leki limfatyczne wykazywały niebieski kolor. Układ limfatyczny został zaburzony, podczas gdy sąsiednie żyły boczne zostały zachowane.

Postępujący obrzęk i utrzymujący się uporczywy obrzęk limfatyczny ogona myszy po indukcji obrzęku limfatycznego przedstawiono tutaj. Objętość ogona myszy, obliczona za pomocą równania ściętego stożka, osiągnęła szczyt w czwartym tygodniu i ustabilizowała się w szóstym tygodniu, po czym nastąpiła stopniowa poprawa, która utrzymywała się do 15 tygodnia. Przeprowadzono obrazowanie kontrastowe z laserowymi plamkami o wysokiej rozdzielczości, aby potwierdzić perfuzję ogona myszy w modelu ogona obrzęku limfatycznego, pokazując uszkodzone żyły boczne i nienaruszone żyły boczne w celu oceny drożności unaczynienia ogona.

Limfangiografia laserowa w bliskiej podczerwieni wykazała nienaruszone naczynia limfatyczne przed operacją i brak tranzytu ICG poza miejsce operacyjne po operacji, potwierdzając w ten sposób, że obrzęk był spowodowany dysfunkcją układu limfatycznego. Skuteczność dostarczania ładunku genetycznego przy użyciu technologii nanotransfekcji tkanek wykazano poprzez dostarczenie DNA znakowanego amidytem fluoresceiny do mysiego ogona. Wykorzystanie adaptacji dla modelu obrzęku limfatycznego ogona myszy i angiografii laserowej w bliskiej podczerwieni ICG jest klinicznie przekładalnym i ekscytującym modelem zwierzęcym z implikacjami terapeutycznymi.