Name: Przygotowanie bezkomórkowych rusztowań nerkowych u szczurów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-18T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: Poznaj metodę dekompozycji nerek szczura w celu uzyskania bezkomórkowych rusztowań naczyniowych. Technika usuwa jądra komórkowe z zachowaniem struktury macierzy pozakomórkowej, co umożliwia zastosowania w inżynierii tkankowej i transplantologii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie było wspierane przez grant Instytutu Badań Biomedycznych z Narodowego Szpitala Uniwersyteckiego w Pusan.

To badanie zostało zatwierdzone przez administrację Pusan National University of Medicine i zostało przeprowadzone zgodnie z etycznymi wytycznymi dotyczącymi użytkowania i opieki nad zwierzętami. (Certyfikat nr 2017-119). Przed przystąpieniem do jakichkolwiek badań na zwierzętach należy uzyskać zgodę instytucjonalną. 
UWAGA: Wszystkie instrumenty/sprzęt chirurgiczny i anestezjologiczny oraz odczynniki zalecane do pomyślnego przedstawienia chirurgicznego i obrazowania narządów jamy brzusznej są wyszczególnione w Tabeli 1.
1. Procedury przygotowawcze do pobierania nerek szczurów
<ol>
	<li>W ramach przygotowań do zabiegu umieść 8-tygodniowe szczury Sprague-Dawley (o wadze 200–250 g) na podkładce rozgrzewającej. Umieść sondę termometru doodbytniczego w odbytnicy, aby monitorować temperaturę rdzenia.</li>
	<li>Znieczulić szczura 5% mieszaniną izofluranu (indukcja: 5%, utrzymanie: 3%).</li>
	<li>Aby rozpocząć operację, po podaniu znieczulenia należy ułożyć szczura w pozycji leżącej. Zamontuj cztery kończyny szczura na stole operacyjnym za pomocą taśmy.</li>
	<li>Ogol i oczyść brzuch szczura dawcy mydłem bakteriobójczym. Stosuj 2% betadyny przez co najmniej 1-2 minuty i przetrzyj 70% roztworem etanolu. Powtórz tę sekwencję trzy razy.</li>
	<li>Przykryj pole operacyjne sterylnym obłożeniem z okienkami.</li>
	<li>Wykonaj pionowe nacięcie brzucha i odsłoń lewą nerkę, moczowód, aortę brzuszną i żyłę główną dolną.</li>
	<li>Wizualizuj i wypreparuj lewą nerkę, moczowód, aortę brzuszną i żyłę główną dolną tuż przed przecięciem szypułki.</li>
</ol>
2. Perfuzja przezsercowa
<ol>
	<li>Przed zabiegiem należy przygotować roztwór perfuzyjny.
	<ol>
		<li>Przygotować 50 ml roztworu perfuzyjnego na szczura.</li>
		<li>Zmieszać 1x PBS z około 10 U/ml heparyny (1 fiolka 25 kU da 2,5 l PBS+Hep).</li>
		<li>Wymieszaj równe objętości 8% paraformaldehydu z 1x PBS, aby uzyskać 4% roztwór PFA/1xPBS. 
		UWAGA: 8% PFA wyprodukowanego w wodzie można przechowywać w temperaturze 4 °C do 2 miesięcy. Jednak 4% PFA rozcieńczony w PBS jest stabilny tylko przez 1 tydzień w temperaturze 4 °C. Rozcieńczenie powinno być świeże.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przedłuż pionowe nacięcie brzucha czaszki. Pamiętaj, aby odsunąć nożyczki od narządów podczas cięcia, aby uniknąć uszkodzenia narządów wewnętrznych.</li>
	<li>Kontynuuj nacięcie przez klatkę piersiową, a następnie przetnij przeponę, unosząc mostek.</li>
	<li>Przypnij luźny płat skóry i uwolnij serce, rozrywając tkankę łączną kleszczami. 
	UWAGA: Nie używaj nożyczek do uwolnienia serca, ponieważ może to spowodować niepożądane krwawienie.</li>
	<li>Otwórz linię soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) i upewnij się, że linia płynie przed umieszczeniem igły w lewej komorze. Delikatnie przytrzymaj serce kleszczami i użyj hemostatu, aby kontrolować igłę. Igła powinna być włożona nie więcej niż 1/4 cala. 
	UWAGA: Wprowadzenie większej niż 1/4 cala może spowodować perforację na drugą stronę tkanki.</li>
	<li>Podpierając serce igłą i hemostatem, zlokalizuj prawy przedsionek i przetnij go nożyczkami do irydektomii. Oprzyj hemostat na ciele szczura i upewnij się, że igła jest nadal umieszczona w sercu. 
	UWAGA: Jeśli cięcie jest wystarczające, w jamie ciała powinna znajdować się krew, ponieważ ciśnienie z PBS wpływającego do szczura jest zmniejszane.</li>
	<li>Ostrożnie odpiąć przednie nóżki i płat skóry.</li>
	<li>Kontynuuj perfuzję PBS przez 4 minuty lub dłużej, jeśli w nerkach i wątrobie nadal widoczna jest krew.</li>
</ol>
3. Pobieranie nerek i decelularyzacja
<ol>
	<li>Zbierz lewą nerkę z aortą brzuszną i żyłą główną dolną.</li>
	<li>Podwiązać moczowód, aortę piersiową, żyłę główną górną i gałęzie aorty brzusznej.</li>
	<li>Utrzymuj narząd nawodniony w PBS (DPBS) firmy Dulbecco na 10-centymetrowej szalce Petriego.</li>
	<li>Kankaniuj aortę brzuszną i żyłę główną dolną za pomocą cewnika o rozmiarze 23. Aby usunąć resztki krwi, podłącz kaniulę do pompy perystaltycznej i przemyj DPBS (500 ml) i 16 μ/ml heparyny przez 90 minut z szybkością 5 obr./min w temperaturze 37 °C.</li>
	<li>Aby usunąć komórkowość nerki, należy perfundować nerkę 1% Triton X-100 (1 l) przez 3 godziny, a następnie 0,75% roztworem dodecylosiarczanu sodu (SDS) (2 l) przez 6 godzin pod stałym ciśnieniem 40 mmHg, 
	UWAGA: Nerka stanie się przezroczysta po 8 godzinach.</li>
	<li>Aby usunąć pozostałości SDS, należy perfuzjować próbkę z 1% penicyliną w wodzie destylowanej (6 l) przez 18 godzin (przez noc), a następnie sterylnym DPBS (500 ml) i heparyną 16 U/ml przez 90 minut.</li>
</ol>

<ol><li>Kawai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+report%3A+HLA-mismatched+renal+transplantation+without+maintenance+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Brief report: HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression.</a> New England Journal of Medicine. 358 (4), 353-361 (2008).</li>
<li>Rana, D., Zreiqat, H., Benkirane-Jessel, N., Ramakrishna, S., Ramalingam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+decellularized+scaffolds+for+stem+cell-driven+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Development of decellularized scaffolds for stem cell-driven tissue engineering.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (4), 942-965 (2017).</li>
<li>Fu, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+and+recellularization+technologies+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Decellularization and recellularization technologies in tissue engineering.</a> Cell Transplantation. 23 (4-5), 621-630 (2014).</li>
<li>Hopkinson, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+amniotic+membrane+%28AM%29+denuding+for+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of amniotic membrane (AM) denuding for tissue engineering.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 14 (4), 371-381 (2008).</li>
<li>Shupe, T., Williams, M., Brown, A., Willenberg, B., Petersen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+the+decellularization+of+intact+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Method for the decellularization of intact rat liver.</a> Organogenesis. 6 (2), 134-136 (2010).</li>
<li>Petersen, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+lungs+for+in+vivo+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered lungs for in vivo implantation.</a> Science. 329 (5991), 538-541 (2010).</li>
<li>Fernandez-Perez, J., Ahearne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+decellularization+methods+on+extracellular+matrix+derived+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The impact of decellularization methods on extracellular matrix derived hydrogels.</a> Scientific Reports. 9 (1), 14933(2019).</li>
<li>Naik, A., Griffin, M., Szarko, M., Butler, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+the+decellularization+process+of+an+upper+limb+skeletal+muscle%3B+implications+for+muscle+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Organs%22%5BJournal%5D)">Optimizing the decellularization process of an upper limb skeletal muscle; implications for muscle tissue engineering.</a> Artificial Organs. 44 (2), 178-183 (2020).</li>
<li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li>
<li>Mason, C., Dunnill, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+brief+definition+of+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">A brief definition of regenerative medicine.</a> Regenerative Medicine. 3 (1), 1-5 (2008).</li>
<li>Guyette, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+decellularization+of+whole+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Perfusion decellularization of whole organs.</a> Nature Protocols. 9 (6), 1451-1468 (2014).</li>
<li>Song, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+and+experimental+orthotopic+transplantation+of+a+bioengineered+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Regeneration and experimental orthotopic transplantation of a bioengineered kidney.</a> Nature Medicine. 19 (5), 646-651 (2013).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

Do decelularyzacji narządów i innych tkanek stosowano różne protokoły. Optymalny protokół decelularyzacji powinien zachować trójwymiarową architekturę macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM). Ogólnie rzecz biorąc, takie protokoły polegają na lizie błony komórkowej poprzez przetwarzanie fizyczne lub roztwory jonowe, dysocjacji cytoplazmy i jądra od ECM przez przetwarzanie enzymatyczne lub detergenty, a następnie usuwaniu resztek komórkowych z tkanki3. Procesy fizyczne obejmują skrobanie, mieszanie roztwo...

Techniki hodowli komórkowych są stosowane do regeneracji funkcjonalnych tkanek i organów w celu zastąpienia chorych lub uszkodzonych narządów. Allogeniczne przeszczepienie narządów jest obecnie najczęstszą metodą leczenia nieodwracalnych uszkodzeń narządów; Takie podejście wymaga jednak zastosowania immunosupresji, aby zapobiec odrzuceniu przeszczepionego narządu. Co więcej, pomimo postępów w immunologii transplantacyjnej, 20% biorców przeszczepów może doświadczyć ostrego odrzucenia przeszczepu w ciągu 5 lat, a w ciągu 10 lat po przeszczepieniu 40% biorców może stracić przeszczepiony przeszczep lub umrzeć1.
Postępy w technologiach inżynierii tkankowej zaowocowały nowym paradygmatem przeszczepiania nowych organów bez odrzucania immunologicznego przy użyciu zróżnicowanych komórek macierzystych. Po różnicowaniu komórek macierzystych potrzebne jest rusztowanie, zwane syntetyczną macierzą zewnątrzkomórkową, aby ułatwić wytwarzanie trójwymiarowych narządów i umożliwić rozwój nowej tkanki w organizmie biorcy. Rusztowania z pozbawionych komórek narządów natywnych mają zalety, w tym bardziej efektywne środowisko do tworzenia komórek i zwiększania proliferacji komórek macierzystych, chociaż mechanizmy te nie zostały w pełni wyjaśnione2. W szczególności nerka jest odpowiednim narządem do wytwarzania rusztowań, ponieważ ma obfite krążenie i niszę do tworzenia komórek macierzystych. Dodatkowo, ze względu na złożoną budowę nerki, trudno jest sztucznie zregenerować nerki do przeszczepu narządów.
W tym raporcie przedstawiamy metodę tworzenia unaczynionych rusztowań przy użyciu bezkomórkowych organów w modelu szczurzym, aby ułatwić przyszłe badania na zwierzętach dla celów inżynierii tkankowej.

<table><tbody><tr><td>Strzykawka 1 cc (sondy iniekcyjne i roztwory do pojazdów</td><td>Becton Dickinson</td><td>305217</td><td></td></tr><tr><td>10-0 ethilon do zespolenia naczyń</td><td>Ethicon</td><td>9032G</td><td></td></tr><tr><td>Igła prowadząca o średnicy 25 cali (do cewników naczyniowych)</td><td>Becton Dickinson</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>3-0 PDS szczur zamykający nacięcie</td><td>Ethicon</td><td>Z316H</td><td></td></tr><tr><td>3-0 Szczur</td> <td>zamykający nacięcie prolenuEthicon</td><td>8832H</td><td></td></tr><tr><td>3-0 jedwabna szpula dostępu naczyniowego/podwiązania u szczurów</td><td>Braintree Scientific</td><td>SUT-S 110</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Mysz z nacięciem PDS</td><td>Ethicon</td><td>Z773D</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Mysz z nacięciem prolenowym</td><td>Ethicon</td><td>8831H</td><td></td></tr><tr><td>5-0 jedwabna szpula dostęp naczyniowy/podwiązanie u myszy</td><td>Braintree Scientific</td><td>SUT-S 106</td><td></td></tr><tr><td>Cienkie nożyczki do cięcia powięzi / tkanki łącznej</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>Uchwyt igły Halsey</td><td>Fine Science Tools</td><td>12001-13</td><td></td></tr><tr><td>Kelly Hemostat dla szczurów: zacisk mięśniowy minimalizujący krwawienie po przecięciu</td><td>Fine Science Tools</td><td>13018-14</td><td></td></tr><tr><td>Rurka z polietylenu 50, rurka cewnika 100 stóp</td><td>Braintree</td> <td>Scientific.023" & razy; .038"</td><td></td></tr><tr><td>Zaciski naczyniowe Schwartz microserrefine</td><td>Fine Science Tools</td><td>18052-01 (proste)</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>18052-03 (zakrzywione)</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki chirurgiczne do cięcia skóry</td><td>Fine Science Tools</td><td>14002-12</td><td></td></tr><tr><td>Vannas-Tubingen Nożyczki sprężynowe do arteriotomii</td><td>Fine Science Tools</td><td>15003-08</td><td></td></tr></tbody></table>

przygotowanie bezkomórkowych rusztowań nerkowych u szczurów

Preparation of Decellularized Kidney Scaffolds in Rats

Inżynieria tkankowa to najnowocześniejsza dyscyplina w biomedycynie. Techniki hodowli komórkowych mogą być stosowane do regeneracji funkcjonalnych tkanek i narządów w celu zastąpienia chorych lub uszkodzonych narządów. Rusztowania są potrzebne, aby ułatwić wytwarzanie trójwymiarowych narządów lub tkanek przy użyciu zróżnicowanych komórek macierzystych in vivo. W tym raporcie opisujemy nowatorską metodę tworzenia unaczynionych rusztowań przy użyciu pozbawionych komórek nerek szczurów. W tym badaniu wykorzystano ośmiotygodniowe szczury Sprague-Dawley, a heparynę wstrzyknięto do serca, aby ułatwić przepływ do naczyń nerkowych, umożliwiając heparynę przenikającą do naczyń nerkowych. Otwarto jamę brzuszną i pobrano lewą nerkę. Pobrane nerki były perfundowane przez 9 godzin przy użyciu detergentów, takich jak Triton X-100 i dodecylosiarczan sodu, w celu decelularyzacji tkanki. Pozbawione komórek rusztowania nerkowe zostały następnie delikatnie przemyte 1% penicyliną/streptomycyną i heparyną w celu usunięcia resztek komórkowych i pozostałości chemicznych. Oczekuje się, że przeszczepianie komórek macierzystych za pomocą bezkomórkowych rusztowań naczyniowych ułatwi wytwarzanie nowych narządów. W ten sposób unaczynione rusztowania mogą w przyszłości stanowić podstawę inżynierii tkankowej przeszczepów narządowych.

Makroskopowa morfologia nerek szczura była ciemnoczerwona (Rysunek 1A). Po decelularyzacji nerka stała się blada i półprzezroczysta (Rysunek 1D). Pozostałe DNA genomowe oceniono za pomocą komercyjnego zestawu zgodnie z instrukcją producenta w decelularyzowanych rusztowaniach nerkowych i porównano z jego ilością w nerkach natywnych (kontrola). Analiza ilościowa potwierdziła, że genomowe DNA tkankowe zostało niemal całkowicie usunięte po decelularyzacji. Z 14 przy...

Ten protokół wprowadza metodę tworzenia rusztowania przy użyciu pozbawionych komórek nerek szczurów. Protokół obejmuje procesy decelularyzacji i recelularyzacji w celu potwierdzenia biodostępności. Decelularyzacja odbywa się przy użyciu Triton X-100 i dodecylosiarczanu sodu.

Przygotowanie bezkomórkowych rusztowań nerkowych u szczurów

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs ...

Protokół ten umożliwia opracowanie unaczynionych rusztowań za pomocą nerek w modelu szczurzym. Nerka jest najodpowiedniejszym narządem do rusztowań ze zróżnicowanych komórek macierzystych. Jest to bardzo skuteczny protokół decelularyzacji nerki.Skutecznie usuwa jądra przy minimalnym zniszczeniu ultrastruktury ECM. Technika ta może być stosowana w medycynie transplantacyjnej i inżynierii tkankowej. Procedurę zademonstruje Kim Joo Hyoung, doktor medycyny i doktor chirurgii plastycznej z mojego laboratorium.Na początek umieść ośmiotygodniowego szczura Sprague Dawley na podkładce rozgrzewającej i umieść sondę termometru doodbytniczego w odbytnicy, aby monitorować temperaturę rdzenia. Po znieczuleniu szczura ułóż go w pozycji leżącej na plecach i przymocuj cztery kończyny do stołu taśmą. Ogol i oczyść brzuch mydłem bakteriobójczym.Nakładaj 2%Betadine na co najmniej jedną do dwóch minut, a następnie zetrzyj go 70% roztworem etanolu. Powtórz tę sekwencję trzy razy. Przykryj pole operacyjne sterylną, fenestrowaną obłożą.Wykonaj pionowe nacięcie brzucha i odsłoń lewą nerkę, moczowód, aortę brzuszną i żyłę główną dolną. Wypreparuj tkankę tuż przed przecięciem szypułki. Przygotuj 50 mililitrów roztworu perfuzyjnego na szczura, mieszając PBS z około 10 jednostkami na mililitr heparyny.Wymieszaj równe objętości 8% PFA z PBS, aby uzyskać 4% roztwór PFA. Przedłuż pionowe nacięcie brzucha czaszki, upewniając się, że podczas cięcia odciągasz nożyczki od narządów, aby uniknąć uszkodzenia. Kontynuuj nacięcie przez klatkę piersiową, a następnie przetnij przeponę, unosząc mostek.Wycofaj luźny płat skóry z drogi za pomocą zacisku Allis i uwolnij serce, rozrywając tkankę łączną kleszczami. Otwórz linię PBS i upewnij się, że płynie przed umieszczeniem igły w lewej komorze. Delikatnie przytrzymaj serce kleszczami i użyj hemostatu, aby kontrolować igłę.Igła powinna być włożona nie więcej niż ćwierć cala. Podpierając serce igłą i hemostatem, zlokalizuj prawy przedsionek i przetnij go nożyczkami do iridektomii. Oprzyj hemostat na ciele szczura i upewnij się, że igła jest nadal umieszczona w sercu.Kontynuuj perfuzję PBS przez cztery minuty lub dłużej, jeśli w nerkach i wątrobie nadal widoczna jest krew. Zbierz lewą nerkę z aortą brzuszną i żyłą główną dolną. Podwiązać moczowód, aortę piersiową, żyłę główną górną i gałęzie aorty brzusznej.Utrzymuj narząd nawodniony w DPBS na 10-centymetrowej szalce Petriego. Kankaniuluj aortę brzuszną i żyłę główną dolną za pomocą cewnika o rozmiarze 23. Aby usunąć resztki krwi, połącz kaniulę z pompą perystaltyczną i przemyj narząd 500 mililitrami DPBS i 16 jednostkami na mililitr heparyny przez 90 minut przy pięciu obrotykach i 37 stopniach Celsjusza.Aby usunąć komórkowość nerki, należy ją perfuzjować 1% Triton X-100 przez trzy godziny, a następnie 0,75% roztworem SDS przez sześć godzin pod stałym ciśnieniem 40 mililitrów rtęci. Aby usunąć resztki SDS, należy perfuzjować próbkę z 1% penicyliną w wodzie destylowanej przez 18 godzin, a następnie sterylnym DPBS i 16 jednostkami na mililitr heparyny przez 90 minut. Ogólna morfologia nerek szczura była ciemnoczerwona.Po decelularyzacji nerka stała się blada i półprzezroczysta. Szczątkowe genomowe DNA określono ilościowo w zdecelularnych rusztowaniach nerkowych i porównano z tym w natywnych nerkach, potwierdzając, że tkankowe genomowe DNA zostało prawie wyeliminowane po decelularyzacji. Z 14 przypadków średnia zawartość DNA wynosiła 115,05 nanogramów na mikrolitr dla grupy kontrolnej i 1,96 nanograma na mikrolitr dla rusztowania bezkomórkowego.W sumie usunięto 98,3% DNA. Zachowano trójwymiarową budowę, a w miąższu korowym zachowały się bezkomórkowe kłębuszki nerkowe. Podczas wkładania igły do lewej komory należy ją włożyć nie więcej niż ćwierć cala.Każde dalsze włożenie może wydostać się na drugą stronę. Jesteśmy przekonani, że technika ta otworzy nowe perspektywy w dziedzinie inżynierii tkankowej.

preparation-of-decellularized-kidney-scaffolds-in-rats

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten film opisuje przygotowanie pozbawionej komórek nerki szczura. Uzyskane bezkomórkowe rusztowanie naczyniowe może posłużyć jako obiecująca platforma do inżynierii tkankowej przeszczepów narządowych.

Przygotowanie pozbawionej komórek nerki szczura: procedura generowania bezkomórkowego unaczynionego rusztowania całego narządu z pobranej nerki szczura

Przedstawione techniki pobierania wątroby, kaniulacji i perfuzji przy użyciu naszego zastrzeżonego urządzenia umożliwiają zaawansowane ustawienia perfuzji w celu usprawnienia eksperymentów z decelularyzacją i recelularyzacją w wątrobach szczurów.

Procedura decelularyzacji wątroby szczura w urządzeniu do perfuzji o oscylacyjnym ciśnieniu

Ten protokół opisuje decelularyzację nerek szczura Sprague Dawley poprzez wstępną perfuzję detergentów przez układ krwionośny, wytwarzając bezkomórkowe matryce zewnątrzkomórkowe nerek, które służą jako szablony do ponownego zasiedlenia ludzkimi komórkami nabłonka nerkowego. Recelularyzacja i zastosowanie testu perfuzji resazuryny do monitorowania wzrostu odbywa się w specjalnie zaprojektowanych bioreaktorach perfuzyjnych.

Repopulacja komórek nabłonkowych i przygotowanie rusztowań macierzy zewnątrzkomórkowej gryzoni do rozwoju tkanki nerkowej

Inżynierskie konstrukty nerkowe dostarczają rozwiązania na niedobór narządów i szkodliwe skutki dializy. W tym miejscu opisujemy protokół mikropreparacji mysich nerek w celu izolacji segmentów korowo-rdzeniowych. Segmenty te są wszczepiane do konstruktów komórkowych wolnych od rusztowań, tworząc organoidy nerkowe.

Mikrodysekcja pierwotnych segmentów tkanki nerkowej i włączenie do niej nowatorskiej technologii konstrukcji bez rusztowań

Tutaj prezentujemy protokół wytwarzania hydrożelu pochodzącego z macierzy zewnątrzkomórkowej kory nerki, aby zachować naturalny skład strukturalny i biochemiczny macierzy zewnątrzkomórkowej nerki (ECM). Opisano proces wytwarzania i jego zastosowania. Na koniec omówiono perspektywę wykorzystania tego hydrożelu do wspomagania specyficznej dla nerek regeneracji komórek i tkanek oraz bioinżynierii.

Wytwarzanie hydrożelu pochodzącego z macierzy zewnątrzkomórkowej kory nerkowej

Ten protokół opisuje metodę generowania powtarzalnych, małych tkanek płuc, poprzez ponowne zaludnienie decelularyzowanych, precyzyjnie wyciętych wycinków płuc komórkami nabłonka pęcherzyków płucnych typu 2, fibroblastami i komórkami śródbłonka.

Zmodyfikowane tkanki płuc przygotowane z bezkomórkowych plastrów płuc

Opisujemy technikę chirurgiczną i proces decelularyzacji kompozytowych kończyn tylnych szczurów. Decelularyzacja odbywa się przy użyciu dodecylosiarczanu sodu o niskim stężeniu przez system perfuzji maszynowej ex vivo.

Pobieranie i decelularyzacja kończyn tylnych szczura przy użyciu bioreaktora opartego na perfuzji ex vivo do unaczynionej allotransplantacji kompozytowej

W tej pracy zoptymalizowano protokół decelularyzacji w celu uzyskania zdecelularyzowanych matryc mięśni szkieletowych płodu myszy. Mioblasty C2C12 mogą kolonizować te matryce, namnażać się i różnicować. Ten model in vitro może być wykorzystany do badania zachowania komórek w kontekście chorób mięśni szkieletowych, takich jak dystrofie mięśniowe.

Przygotowanie 3D bezkomórkowych matryc z mięśni szkieletowych płodu myszy do hodowli komórkowej

W tym badaniu szczegółowo opisujemy metody decelularyzacji, charakterystyki fizycznej, obrazowania i implantacji in vivo biomateriałów pochodzenia roślinnego, a także metody sadzenia i różnicowania komórek w rusztowaniach. Opisane metody pozwalają na ocenę biomateriałów pochodzenia roślinnego do zastosowań w inżynierii tkanki kostnej.

Bezkomórkowe rusztowania pochodzące z jabłek do inżynierii tkanki kostnej in vitro i in vivo

Bezkomórkowa matryca śledziony (DSM) ma obiecujące zastosowania w dziedzinie inżynierii tkankowej wątroby. Protokół ten określa procedurę przygotowania DSM dla szczurów, która obejmuje zbieranie śledziony szczurów, ich decellularację poprzez perfuzję i ocenę powstałego DSM w celu potwierdzenia jego cech.

Wytwarzanie zdecelularizowanej matrycy śledziony pochodzącej od szczurów

Protokół ten opisuje ekspresję nerek szczura metodą normotermiczną z maszyną ex vivo , przeznaczoną do późniejszego przeszczepu do szczura biorcy.

Normotermiczna perfuzja nerek szczurów do przeszczepu

Poznaj metodę dekompozycji nerek szczura w celu uzyskania bezkomórkowych rusztowań naczyniowych. Technika usuwa jądra komórkowe z zachowaniem struktury macierzy pozakomórkowej, co umożliwia zastosowania w inżynierii tkankowej i transplantologii.

Przygotowanie bezkomórkowych rusztowań nerkowych u szczurów

Przeglądaj więcej filmów