Name: Przeszczep wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem z wykorzystaniem białej tkanki tłuszczowej najądrza (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Poznaj metodę przeszczepu wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem z wykorzystaniem białej tkanki tłuszczowej najądrza u myszy. Technika umożliwia wykrywanie przeszczepionych wysp bez bioklejów i szwów.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie zostało sfinansowane z grantu na badania naukowe (C) (19K09839, NS) z Ministerstwa Edukacji, Kultury, Sportu, Nauki i Technologii Japonii.

Poniższa procedura jest wykonywana w trzech krokach. Pierwszy etap obejmuje indukcję cukrzycy u myszy biorców i izolację wysp trzustkowych dawcy. Drugi krok polega na przygotowaniu wysp trzustkowych przed przeszczepem. W trzecim etapie wykonuje się przeszczepienie wysp trzustkowych na tkankę tłuszczową najądrza i pokrycie wysp trzustkowych za pomocą tkanki tłuszczowej. Następnie oceniono efekty terapeutyczne. Postępowanie z myszami i procedury eksperymentalne przeprowadzone w tym badaniu są zgodne z "Zasadami opieki nad zwierzętami laboratoryjnymi" (Przewodnik dotyczący opieki i wykorzystania zwierząt laboratoryjnych, publikacja National Institutes of Health wydanie 8, 2011), a protokół eksperymentalny został zatwierdzony przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Uniwersytetu Fukuoka (numer zgody: 186018).
1. Przygotowanie chirurgiczne
<ol>
	<li>Indukcja cukrzycy: Wywołać cukrzycę u samców myszy biorców o masie ciała 20-25 g masy ciała w wieku 8-12 tygodni poprzez dożylne wstrzyknięcie 18 mg / ml roztworu streptozotocyny przygotowanego w buforze 0,1 M cytrynianu (180 mg / kg masy ciała). Myszy z poziomem glukozy we krwi przekraczającym 400 mg/dl są uważane za cukrzyce. Myszy z cukrzycą należy stosować w ciągu 1 tygodnia po indukcji cukrzycy przed nadmiernym zanikiem białej tkanki tłuszczowej najądrza do pokrywania wysp trzustkowych.</li>
	<li>Izolacja wysp trzustkowych: Wykonaj izolację mysich wysp trzustkowych na dzień przed przeszczepem zgodnie z metodą Gotoh27 w celu izolacji wysp trzustkowych.</li>
	<li>Krótko mówiąc, trawić tkankę trzustki za pomocą roztworu kolagenazy. Wyizolować wysepki przez wirowanie w gradiencie gęstości przy użyciu odpowiedniego roztworu do separacji komórek. Następnie hoduj wysepki przez noc w inkubatorze w temperaturze 22 °C i 5% CO2 (stwierdzono, że hodowla w temperaturze <37 °C zapobiega śmierci wysp trzustkowych28,29,30,31). 
	UWAGA: Oczyszczone kultury wysp trzustkowych należy przechowywać w szafie bezpieczeństwa. Przefiltruj i wysterylizuj wszystkie roztwory używane do izolacji i hodowli wysp trzustkowych za pomocą filtra 0,22 μm.</li>
</ol>
2. Przygotowanie wysp trzustkowych do przeszczepu
<ol>
	<li>Zbierz odpowiednie instrumenty i materiały, jak wskazano w <silna klasa="xfig">Rysunek 1A.</li>
	<li>Ponieważ enzymy trawienne, takie jak amylaza i lipaza, mogą powodować uszkodzenie izolowanych i przeszczepionych wysp trzustkowych, a utrata wysp trzustkowych może nastąpić w wyniku uwięzienia w zanieczyszczających tkankach włóknistych w naczyniu hodowlanym, przed przeszczepem należy użyć kleszczy, aby ręcznie pobrać wszelkie dodatkowe składniki wysp trzustkowych, w tym tkanki groniaste i włókniste (<klasa silna = "xfig">Rysunek 1B), pod mikroskopem preparacyjnym. Po pobraniu użyj sitka do komórek, aby odfiltrować pojedyncze komórki groniaste.</li>
	<li>Przenieś przefiltrowane wyspy trzustkowe do nowej szalki hodowlanej zawierającej odpowiednią pożywkę hodowlaną lub roztwór buforowy (np. DMEM o niskiej zawartości glukozy, RPMI1640, CMRL1066 lub HBSS) uzupełniony surowicą bydlęcą lub albuminą, aby zapobiec przyczepianiu się wysp trzustkowych do plastiku i zakręć szalką, aby ustawić wysepki w środku naczynia (<silna klasa = "xfig">Rysunek 1C). Używając mikropipety P200 i mikroskopu, pobierz poszczególne wysepki do odpowiedniej probówki zbiorczej (<silna klasa="xfig">Rysunek 1D).</li>
	<li>Umieść nowe sitko o pojemności 40 μm na plastikowej probówce o pojemności 50 ml (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 1E po lewej i w środku) i umyj filtr świeżą pożywką (<silna klasa = "xfig" > Rysunek 1E po prawej).</li>
	<li>Użyj pipety o pojemności 1000 μl, aby dodać wysepki do sitka, aby oddzielić wyspy i pojedyncze komórki groniaste (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 1F1 i <silna klasa = "xfig"> Rysunek 1F2). 
	UWAGA: Oczyszczone wysepki na sitku komórkowym będą w około 100% czyste.</li>
	<li>Za pomocą kleszczy odwróć sitko na nowej, niepoddanej działaniu substancji naczyniu hodowlanym o wielkości 60 lub 100 mm, zawierającej pożywkę hodowlaną lub odpowiedni roztwór buforowy uzupełniony surowicą bydlęcą lub albuminą (<silna klasa = "xfig">Rysunek 1F3 i <silna klasa = "xfig">Rysunek 1F4). Użyj świeżej pożywki/bufora, aby przepłukać wysepki do nowego naczynia hodowlanego. Następnie dodaj wystarczającą ilość pożywki/buforu do naczynia hodowlanego, aby osiągnąć całkowitą objętość około 20 ml.</li>
	<li>Policz wysepki pod mikroskopem i podziel liczbę wysepek równo między poszczególne plastikowe probówki wirówkowe o pojemności 1,5 ml zgodnie z liczbą zwierząt dawców (<silna klasa="xfig">Rysunek 1G). Na przykład do każdej z dwóch probówek dodanoby dwieście odpowiedników wysepek o średnicy 100-200 μm (IEQ) pochodzących od dwóch myszy.</li>
	<li>Odwirować wysepki o stężeniu 2 100 x g w ciągu 1 minuty w temperaturze pokojowej i odrzucić sklarowany nad osadem. Około 20-30 μl pozostałego roztworu zwykle pozostaje w probówce (<silna klasa="xfig">Rysunek 1H).</li>
</ol>
3. Przeszczep wysp trzustkowych na tkankę tłuszczową najądrza i pokrycie białą tkanką tłuszczową najądrza
<ol>
	<li>Przed zabiegiem należy zaopatrzyć się w aparat do znieczulania małych zwierząt, mikroskop stereoskopowy, źródło światła, mikropipetę 50-200 μl z końcówkami do mikropipet o pojemności 200 μl, waciki, zestaw do szycia 4-0 oraz zdezynfekowane narzędzia chirurgiczne (<klasa silna = "xfig">Ryc. 2A). Autoklawuj nożyczki miedziane, nożyczki okulistyczne, kleszczyki do grochu, pęsety i uchwyty na igły. Po autoklawowaniu zanurz sprzęt w 1% roztworze jodu powidonu (<klasa silna = "xfig">Rysunek 2A). Używaj wacików do mobilizacji białej tkanki tłuszczowej najądrza oraz do hemostazy w przypadku krwawienia. Do przeszczepu wysp trzustkowych należy użyć mikropipety z końcówkami o pojemności 50-200 μl.</li>
	<li>Podać znieczulenie myszy biorcy z cukrzycą za pomocą wziewnego środka znieczulającego (2% izofluranu w tlenie). Nałóż lubrykant okulistyczny na oba oczy, aby zapobiec wysuszeniu. Następnie umieść mysz w pozycji leżącej na plecach (<silna klasa="xfig">Rysunek 2B po lewej) i usuń włosy z brzucha, aby zapobiec infekcji, za pomocą maszynki do strzyżenia włosów i/lub kremu do depilacji. Zdezynfekuj brzuch i okolicę pachwinową za pomocą co najmniej trzech naprzemiennych rund roztworu jodu powidonu, a następnie 70% etanolu (<silna klasa="xfig">Rysunek 2B po prawej). Przed zabiegiem należy potwierdzić głębokość znieczulenia poprzez brak odruchu szczypania palca u nogi. Zapewnij śródoperacyjne wsparcie termiczne za pomocą poduszki grzewczej i użyj serwety chirurgicznej, aby zabezpieczyć sterylny obszar operacyjny.</li>
	<li>Naciąć skórę w dolnej środkowej części (<silna klasa="xfig">Rysunek 2C po lewej). Zalecane jest nacięcie skóry o długości około 2 cm. Zaciśnij lewą ścianę brzucha za pomocą kleszczyków Pean (można również użyć kleszczyków atraumatycznych lub retraktora) i przeciągnij tkankę na lewą stronę myszy, aby zabezpieczyć pole operacyjne (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2C po prawej). Po laparotomii należy zmniejszyć zawartość procentową izofluranu do 1,0-1,5% w celu utrzymania znieczulenia.</li>
	<li>Użyj bawełnianego wacika, aby zmobilizować jelito cienkie i grube po prawej stronie myszy (tj. po lewej stronie operatora). Biała tkanka tłuszczowa lewego najądrza w jamie brzusznej znajduje się w lewej okolicy pachwinowej. Zmobilizuj białą tkankę tłuszczową najądrza i lewe jądro na zewnątrz brzucha (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 2D po lewej) i rozciągnij tkankę (2D po prawej).</li>
	<li>Użyj mikropipety P200 wyposażonej w końcówkę do pipety o pojemności 200 μl, aby zebrać całą objętość wysepek z jednej probówki o pojemności 1,5 ml z delikatnym pipetowaniem (<silna klasa="xfig">Rysunek 2E po lewej), uważając, aby po pobraniu w probówce nie pozostały żadne wysepki. Pozwól, aby zebrane wysepki osiadły na końcówce pipety pod wpływem grawitacji (<silna klasa="xfig">Rysunek 2E po prawej).</li>
	<li>Delikatnie przyłóż końcówkę mikropipety do rozdętej tkanki tłuszczowej. Uważając, aby zapobiec nadmiernemu wypłukaniu pożywki/buforu w końcówce, ostrożnie wysepki wysiewki na tkance (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 2F po lewej). Po wysianiu potwierdź prawidłowe umieszczenie wysepek pod mikroskopem preparacyjnym (<silna klasa="xfig">Rysunek 2F po prawej).</li>
	<li>Przykryj wysepki białą tkanką tłuszczową najądrza (<silna klasa="xfig">Ryc. 2G). Nie jest konieczne stosowanie szwów ani środków wiążących biologicznie.</li>
	<li>Umieść lewe jądro pod białą tkanką tłuszczową najądrza i zwróć tkanki do jamy wewnątrzotrzewnowej (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 2H). Zamknij skórę w dwóch warstwach (otrzewnej, następnie mięśnia i skóry) za pomocą szwu 4-0 (można użyć dowolnych szwów, takich jak nylonowe lub wchłanialne) (<silna klasa="xfig">Rysunek 2I). Wstrzyknąć kwas acetylosalicylowy (300 mg/kg; SQ) w pobliżu rany w celu znieczulenia pooperacyjnego. Następnie umieść mysz pod lampą grzewczą i monitoruj aż do pełnego wyzdrowienia.</li>
</ol>
4. Monitorowanie po przeszczepieniu wysp trzustkowych (Podsumowanie)
<ol>
	<li>Oceń efekty terapeutyczne przeszczepu wysp trzustkowych, monitorując poziom glukozy we krwi, test tolerancji glukozy i ocenę histologiczną w dniu pooperacyjnym (POD) 28.
	<ol>
		<li>Monitoruj poziom glukozy we krwi, w tym pomiary stężenia glukozy we krwi w teście tolerancji glukozy, za pomocą małego glukometru.</li>
		<li>Zbierz próbki krwi (trochę mikrolitrów) z żyły ogonowej. Jeśli chodzi o ocenę histologiczną, mysia insulina (do wykrywania przeszczepionych wysp trzustkowych) i czynnik von Willebranda (do wykrywania naczyń, który jest dowodem na wszczepienie wysp trzustkowych) wykryto w przeszczepionych wyspach trzustkowych w odzyskanej tkanki tłuszczowej najądrza za pomocą immunohistochemii.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Barton, F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+in+outcomes+of+clinical+islet+transplantation%3A+1999-2010%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Improvement in outcomes of clinical islet transplantation: 1999-2010.</a> Diabetes Care. 35 (7), 1436-1445 (2012).</li>
<li>Balamurugan, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+product+characteristics+and+factors+related+to+successful+human+islet+transplantation+from+the+Collaborative+Islet+Transplant+Registry+%28CITR%29+1999-2010%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Islet product characteristics and factors related to successful human islet transplantation from the Collaborative Islet Transplant Registry (CITR) 1999-2010.</a> American Journal of Transplantation. 14 (11), 2595-2606 (2014).</li>
<li>Collaborative Islet Transplant Registry. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Collaborative+Islet+Transplant+Registry.+Annual+Report%22">Collaborative Islet Transplant Registry. Annual Report</a>. , (2017).</li>
<li>Rajab, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Total+Pancreatectomy+and+Islet+Autotransplantation+Following+Treated+Hepatitis+C+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Total Pancreatectomy and Islet Autotransplantation Following Treated Hepatitis C Infection.</a> Cell Transplantation. 27 (10), 1569-1573 (2018).</li>
<li>Mellgren, A., Schnell Landstrom, A. H., Petersson, B., Andersson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+renal+subcapsular+site+offers+better+growth+conditions+for+transplanted+mouse+pancreatic+islet+cells+than+the+liver+or+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">The renal subcapsular site offers better growth conditions for transplanted mouse pancreatic islet cells than the liver or spleen.</a> Diabetologia. 29 (9), 670-672 (1986).</li>
<li>Hiller, W. F., Klempnauer, J., Luck, R., Steiniger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+deterioration+of+endocrine+function+after+intraportal+but+not+kidney+subcapsular+rat+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Progressive deterioration of endocrine function after intraportal but not kidney subcapsular rat islet transplantation.</a> Diabetes. 40 (1), 134-140 (1991).</li>
<li>Yasunami, Y., Lacy, P. E., Finke, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+site+for+islet+transplantation--a+peritoneal-omental+pouch%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A new site for islet transplantation--a peritoneal-omental pouch.</a> Transplantation. 36 (2), 181-182 (1983).</li>
<li>Kin, T., Korbutt, G. S., Rajotte, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+and+metabolic+function+of+syngeneic+rat+islet+grafts+transplanted+in+the+omental+pouch%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Survival and metabolic function of syngeneic rat islet grafts transplanted in the omental pouch.</a> American Journal of Transplantation. 3 (3), 281-285 (2003).</li>
<li>Kasoju, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+a+pre-vascularized+pouch+for+subsequent+islet+transplantation+using+VEGF-loaded+polylactide+capsules%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials+Science%22%5BJournal%5D)">Bioengineering a pre-vascularized pouch for subsequent islet transplantation using VEGF-loaded polylactide capsules.</a> Biomaterials Science. 8 (2), 631-647 (2020).</li>
<li>Sakata, N., Yoshimatsu, G., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White+Adipose+Tissue+as+a+Site+for+Islet+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantology%22%5BJournal%5D)">White Adipose Tissue as a Site for Islet Transplantation.</a> Transplantology. 1 (2), 55-70 (2020).</li>
<li>Osama Gaber, A., Chamsuddin, A., Fraga, D., Fisher, J., Lo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+independence+achieved+using+the+transmesenteric+approach+to+the+portal+vein+for+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Insulin independence achieved using the transmesenteric approach to the portal vein for islet transplantation.</a> Transplantation. 77 (2), 309-311 (2004).</li>
<li>Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+of+endoscopic+biopsy+of+islet+allografts+transplanted+into+the+gastric+submucosal+space+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Technique of endoscopic biopsy of islet allografts transplanted into the gastric submucosal space in pigs.</a> Cell Transplantation. 22 (12), 2335-2344 (2013).</li>
<li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategy+for+clinical+setting+in+intramuscular+and+subcutaneous+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%2FMetabolism+Research+and+Reviews%22%5BJournal%5D)">Strategy for clinical setting in intramuscular and subcutaneous islet transplantation.</a> Diabetes/Metabolism Research and Reviews. 30 (1), 1-10 (2014).</li>
<li>Cantarelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplant+Site+Influences+the+Immune+Response+After+Islet+Transplantation%3A+Bone+Marrow+Versus+Liver%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Transplant Site Influences the Immune Response After Islet Transplantation: Bone Marrow Versus Liver.</a> Transplantation. 101 (5), 1046-1055 (2017).</li>
<li>White, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risks+of+total+pancreatectomy+and+splenic+islet+autotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The risks of total pancreatectomy and splenic islet autotransplantation.</a> Cell Transplantation. 9 (1), 19-24 (2000).</li>
<li>Itoh, T., Nishinakamura, H., Kumano, K., Takahashi, H., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Spleen+Is+an+Ideal+Site+for+Inducing+Transplanted+Islet+Graft+Expansion+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The Spleen Is an Ideal Site for Inducing Transplanted Islet Graft Expansion in Mice.</a> PLoS One. 12 (1), 0170899(2017).</li>
<li>Sakata, N., Yoshimatsu, G., Kodama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Spleen+as+an+Optimal+Site+for+Islet+Transplantation+and+a+Source+of+Mesenchymal+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">The Spleen as an Optimal Site for Islet Transplantation and a Source of Mesenchymal Stem Cells.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), (2018).</li>
<li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+rat-to-mouse+bioartificial+pancreas+xenotransplantation+on+diabetic+renal+damage+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Effect of rat-to-mouse bioartificial pancreas xenotransplantation on diabetic renal damage and survival.</a> Pancreas. 32 (3), 249-257 (2006).</li>
<li>Nagaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effectiveness+of+bioengineered+islet+cell+sheets+for+the+treatment+of+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Effectiveness of bioengineered islet cell sheets for the treatment of diabetes mellitus.</a> Journal of Surgical Research. 227, 119-129 (2018).</li>
<li>Weaver, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculogenic+hydrogel+enhances+islet+survival%2C+engraftment%2C+and+function+in+leading+extrahepatic+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Vasculogenic hydrogel enhances islet survival, engraftment, and function in leading extrahepatic sites.</a> Science Advances. 3 (6), 1700184(2017).</li>
<li>Dufour, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+ectopic+site+for+islet+transplantation%2C+using+biodegradable+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Development of an ectopic site for islet transplantation, using biodegradable scaffolds.</a> Tissue Engineering. 11 (9-10), 1323-1331 (2005).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epididymal+fat+pad+as+a+transplant+site+for+minimal+islet+mass%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The epididymal fat pad as a transplant site for minimal islet mass.</a> Transplantation. 84 (1), 122-125 (2007).</li>
<li>Sakata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+Transplanted+Islet+Engraftment+in+Visceral+White+Adipose+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Mechanism of Transplanted Islet Engraftment in Visceral White Adipose Tissue.</a> Transplantation. 104 (12), 2516-2527 (2020).</li>
<li>Navarro-Requena, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PEG+hydrogel+containing+calcium-releasing+particles+and+mesenchymal+stromal+cells+promote+vessel+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">PEG hydrogel containing calcium-releasing particles and mesenchymal stromal cells promote vessel maturation.</a> Acta Biomaterialia. 67, 53-65 (2018).</li>
<li>Phelps, E. A., Headen, D. M., Taylor, W. R., Thule, P. M., Garcia, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculogenic+bio-synthetic+hydrogel+for+enhancement+of+pancreatic+islet+engraftment+and+function+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Vasculogenic bio-synthetic hydrogel for enhancement of pancreatic islet engraftment and function in type 1 diabetes.</a> Biomaterials. 34 (19), 4602-4611 (2013).</li>
<li>Manzoli, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoisolation+of+murine+islet+allografts+in+vascularized+sites+through+conformal+coating+with+polyethylene+glycol%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Immunoisolation of murine islet allografts in vascularized sites through conformal coating with polyethylene glycol.</a> American Journal of Transplantation. 18 (3), 590-603 (2018).</li>
<li>Gotoh, M., Maki, T., Kiyoizumi, T., Satomi, S., Monaco, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+isolation+of+mouse+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">An improved method for isolation of mouse pancreatic islets.</a> Transplantation. 40 (4), 437-438 (1985).</li>
<li>Brandhorst, D., Brandhorst, H., Hering, B. J., Bretzel, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+survival%2C+morphology+and+in+vitro+function+of+isolated+pig+islets+under+different+culture+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Long-term survival, morphology and in vitro function of isolated pig islets under different culture conditions.</a> Transplantation. 67 (12), 1533-1541 (1999).</li>
<li>Noguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-temperature+preservation+of+isolated+islets+is+superior+to+conventional+islet+culture+before+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Low-temperature preservation of isolated islets is superior to conventional islet culture before islet transplantation.</a> Transplantation. 89 (1), 47-54 (2010).</li>
<li>Itoh, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+temperature+condition+prevents+hypoxia-induced+islet+cell+damage+and+HMGB1+release+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Low temperature condition prevents hypoxia-induced islet cell damage and HMGB1 release in a mouse model.</a> Cell Transplantation. 21 (7), 1361-1370 (2012).</li>
<li>Komatsu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+Temperature+and+Oxygen+Supports+Long-term+Culture+of+Human+Islets%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Optimizing Temperature and Oxygen Supports Long-term Culture of Human Islets.</a> Transplantation. 103 (2), 299-306 (2019).</li>
<li>Unger, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+overload+and+overflow%3A+metabolic+trauma+and+the+metabolic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology%2C+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Lipid overload and overflow: metabolic trauma and the metabolic syndrome.</a> Trends in Endocrinology, Metabolism. 14 (9), 398-403 (2003).</li>
<li>Mao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+macroporous+heparin-releasing+silk+fibroin+scaffold+improves+islet+transplantation+outcome+by+promoting+islet+revascularisation+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">A macroporous heparin-releasing silk fibroin scaffold improves islet transplantation outcome by promoting islet revascularisation and survival.</a> Acta Biomaterialia. 59, 210-220 (2017).</li>
<li>Wang, K., Wang, X., Han, C. S., Chen, L. Y., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffold-supported+Transplantation+of+Islets+in+the+Epididymal+Fat+Pad+of+Diabetic+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Scaffold-supported Transplantation of Islets in the Epididymal Fat Pad of Diabetic Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), e54995(2017).</li>
<li>Wang, X., Wang, K., Zhang, W., Qiang, M., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bilaminated+decellularized+scaffold+for+islet+transplantation%3A+Structure%2C+properties+and+functions+in+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A bilaminated decellularized scaffold for islet transplantation: Structure, properties and functions in diabetic mice.</a> Biomaterials. 138, 80-90 (2017).</li>
<li>Rios, P. D., Zhang, X., Luo, X., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mold-casted+non-degradable%2C+islet+macro-encapsulating+hydrogel+devices+for+restoration+of+normoglycemia+in+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Mold-casted non-degradable, islet macro-encapsulating hydrogel devices for restoration of normoglycemia in diabetic mice.</a> Biotechnology and Bioengineering. 113 (11), 2485-2495 (2016).</li>
</ol>

Nie mamy konfliktu interesów.

Metoda przeszczepu wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem obejmuje techniki z dwóch różnych technik przeszczepu: przeszczep wysp dootrzewnowych i przeszczep wysp trzustkowych w tkance tłuszczowej. Ponieważ błona powierzchniowa białej tkanki tłuszczowej najądrza jest uważana za białą tkankę tłuszczową, która jest pokryta otrzewną i która jest przyczepiona do najądrza, metodę przeszczepu wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem można anatomicznie sklasyfikować jako rodzaj przeszczepu wysp dootrzewnowych. Technika, za pomocą kt...

Przeszczep wysp trzustkowych jest komórkową terapią zastępczą dla pacjentów z ciężką cukrzycą. Ostatnie doniesienia wykazały, że wskaźniki niezależności insulinowej po trzech latach od przeszczepu poprawiają się do 44%1 i że około 80% biorców, którzy otrzymują łącznie ponad 600 000 ekwiwalentów wysp trzustkowych, osiąga niezależność insulinową2. Co więcej, w najnowszym raporcie Collaborative Islet Transplant Registry ujawniono, że poziom glukozy we krwi na czczo utrzymywał się na poziomie 60-140 mg/dl przez okres 5 lat u ponad 70% pacjentów, którzy przeszli sam przeszczep wysp trzustkowych. Badanie wykazało również, że około 90% pacjentów, którzy otrzymali przeszczep samych wysp trzustkowych lub przeszczep wysp trzustkowych po przeszczepie nerki, nie rozwinęły żadnych poważnych zdarzeń hipoglikemicznych przez ponad 5 lat3.
Chociaż wyniki kliniczne tego leczenia ulegają poprawie, nadal należy rozwiązać pewne ograniczenia, w tym konieczność ustalenia optymalnego miejsca do przeszczepu. Wątroba jest typowym miejscem przeszczepu do klinicznego przeszczepu wysp trzustkowych, ponieważ jest to największy narząd, który może pomieścić dużą liczbę wysp trzustkowych. Jednak u niektórych pacjentów wątroba jest niedostępna (np. z powodu nadciśnienia wrotnego, zapalenia wątroby i/lub marskości wątroby4), a zatem w innych miejscach, w tym w przestrzeni podtorebkowej nerki5,6, omental pouch7,8,9,10, meskretka11, przewód pokarmowy12, mięśnie szkieletowe13, tkanka podskórna13, szpik kostny14, oraz spleen15,16,17, zostały uznane za alternatywne miejsca przeszczepu.
Chociaż dootrzewnowy przeszczep wysp trzustkowych może być łatwo przeprowadzony w znieczuleniu miejscowym, co czyni jamę wewnątrzotrzewnową atrakcyjnym miejscem do klinicznego przeszczepu wysp trzustkowych, po przeszczepie, wyspy są rozproszone po całej jamie wewnątrzotrzewnowej, co utrudnia wykrycie przeszczepu wysp trzustkowych i pomyślne potwierdzenie przeszczepu. Dlatego jama dootrzewnowa nie jest powszechnie uznawana za idealne kliniczne miejsce przeszczepu. Zamiast tego jest często wykorzystywany jako model kontrolny w badaniach przedklinicznych w celu zbadania skuteczności przeszczepionych encapsulated18 i bioinżynieryjnych islets19. Jednak dokładne porównanie wysepek bioinżynieryjnych i kontrolnych jest trudne do osiągnięcia ze względu na wyzwania związane z przeprowadzeniem dokładnej oceny wszczepienia.
Natomiast użycie dootrzewnowej białej tkanki tłuszczowej w woreczku omentalnym8, krezki i innych lokalizacji pozawątrobowych zostało dobrze opisane10,20,21,22,23 Wiele badań badających funkcję bioinżynieryjnych wysp trzustkowych przeszczepionych przy użyciu białej tkanki tłuszczowej było w stanie przynieść obiecujące wyniki terapeutyczne20,24,25,26. Ponieważ zastosowanie tkanki tłuszczowej najądrza ułatwia wykrywanie przeszczepionych wysp trzustkowych, opracowano "metodę przeszczepu wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem", wykorzystującą tkankę tłuszczową najądrza, w celu przezwyciężenia ograniczeń związanych z dootrzewnowym przeszczepem wysp trzustkowych. W pracy opisano przeszczep wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem z wykorzystaniem tkanki tłuszczowej najądrza.

<table><tbody><tr><td>4-0 Nylon</td><td>Alfresa</td><td>ER2004NA45-KF2</td><td>Zamykanie brzucha</td></tr><tr><td>Alexa 488-sprzężony osł anty-świnka</td><td>morska Jackson Immunoresearch</td><td>706-546-148</td><td>Przeciwciało drugorzędowe dla przeciwciała insulinowego</td></tr><tr><td>Alexa 647-sprzężony osioł anty-królik</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>711-606-152</td><td>Przeciwciało drugorzędowe dla przeciwciała czynnika von Willebranda</td></tr><tr><td>DMEM, niski poziom glukozy, pirogronian</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11885084</td><td>Hodowla wysepek, przesadzanie wysepek</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Fujifilm Wako Chemicals</td><td>051-06515</td><td>Używanie do barwienia tkanek przez eozynę</td></tr><tr><td>Eppendorf Probówki Safe-Lock, 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30120086</td><td>Zbieranie wysepek&nbsp;</td></tr><tr><td>Stożkowe probówki wirówkowe Falcon 15 ml</td><td>Corning</td><td>352095</td><td>Wysepki zbierające</td></tr><tr><td>Falcon 40 & m Sitko do komórek</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td>Służy do oddzielania wysp trzustkowych od innych tkanek trzustki</td></tr><tr><td>Stożkowe probówki wirówkowe Falcon 50 ml</td><td>Corning</td><td>352070</td><td>Odrzucanie nadmiernej pożywki/buforu</td></tr><tr><td>Antyinsulina świnki morskiej</td><td>Agilent Technologies Japan, Ltd. (Dako)</td> <td>IR002</td><td>Pierwszorzędowe przeciwciało dla mysiej insuliny</td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Muto Pure Chemicals Co., Ltd.</td><td>30002</td><td>Służy do barwienia tkanek roztworem izodyny hematoksyliny</td></tr><tr><td>10%</td> <td>Shionogi & Co., Ltd.</td><td>nr numer katalogowy</td><td>Używanie do dezynfekcji</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Fujifilm Wako Chemicals</td><td>095-06573</td><td>Używanie do znieczulenia</td></tr><tr><td>Labcon 1000 &micro; L ZapSilk Końcówki do pipet o niskiej retencji</td><td>Labcon</td><td>1177-965-008</td><td>Służy do oddzielania wysp trzustkowych od innych tkanek trzustki</td></tr><tr><td>Labcon 200 &micro; L ZapSilk Końcówki do pipet o niskiej retencji</td><td>Labcon</td><td>1179-965-008</td><td>Służy do wysiewania wysepek na białej tkance tłuszczowej najądrza</td></tr><tr><td>Mintsensor</td><td>Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd.,</td> <td>8AEB02E</td><td>Służy do monitorowania poziomu glukozy we krwi</td></tr><tr><td>Pipetteman P-1000</td><td>Gilson</td><td>F123602</td><td>Służy do oddzielania wysp trzustkowych od innej tkanki trzustki</td></tr><tr><td>Pipetman P-200</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td>Służy do wysiewu wysepek na najądrza białą tkankę tłuszczową</td></tr><tr><td>Królik anty-vWF</td><td>Abcam</td><td>ab6994</td><td>Pierwszorzędowe przeciwciało dla mysiego czynnika von Willebranda</td></tr></tbody></table>

przeszczep wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem z wykorzystaniem białej tkanki tłuszczowej najądrza

Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue

Przeszczep wysp trzustkowych to komórkowa terapia zastępcza w przypadku ciężkiej cukrzycy. Jama dootrzewnowa jest zazwyczaj miejscem przeszczepu tej procedury. Jednak dootrzewnowe przeszczepienie wysp trzustkowych ma pewne ograniczenia, w tym słabą skuteczność przeszczepu, trudną zdolność wykrywania przeszczepu i brak możliwości graftektomii do analizy po przeszczepie. W tym artykule "przeszczep wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem", metoda dootrzewnowego przeszczepu wysp trzustkowych, która wykorzystuje białą tkankę tłuszczową najądrza, jest stosowana do oceny efektów terapeutycznych bioinżynieryjnych wysp trzustkowych. Prostota metody polega na wysiewaniu wysepek na białą tkankę tłuszczową najądrza i wykorzystaniu tej tkanki do pokrycia wysepek. Chociaż metodę tę można sklasyfikować jako technikę przeszczepu wysp dootrzewnowych, ma ona wspólne cechy z przeszczepem wysp w obrębie tkanki tłuszczowej. Metoda przeszczepu wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem wykazuje jednak silniejsze efekty terapeutyczne niż przeszczepianie wysp trzustkowych w tkance tłuszczowej, w tym poprawę poziomu glukozy i insuliny we krwi oraz możliwość usunięcia przeszczepu. Zalecamy przyjęcie tej metody do oceny mechanizmów wszczepiania się wysp trzustkowych do białej tkanki tłuszczowej oraz efektów terapeutycznych bioinżynieryjnych wysp trzustkowych.

Aby porównać skuteczność przeszczepu wysepek pokrytych tłuszczem z przeszczepem wysepek do jamy otrzewnowej, taką samą liczbę wysepek wszczepiono na otrzewną w lewym obszarze parakolicznym u kontrolnych zwierząt biorców z cukrzycą. Zaobserwowano, że poziomy glukozy we krwi myszy po przeszczepie wysepek pokrytych tłuszczem stopniowo i istotnie spadały w porównaniu z myszami po przeszczepie wysepek do jamy otrzewnowej (p = 0,0023; Rysunek 3A). Miesiąc po transplantacji, poziom glukozy we krwi ...

Ta metoda przeszczepiania wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem jest odpowiednia do wykrywania wszczepionych wysp trzustkowych w jamie wewnątrzotrzewnowej. Co ważne, nie wymaga stosowania środków wiążących biologicznie ani szycia.

Przeszczep wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem z wykorzystaniem białej tkanki tłuszczowej najądrza

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this ...

Protokół ten umożliwia ocenę mechanizmu wszczepiania się wysp trzustkowych w białą tkankę tłuszczową. Główną zaletą tej metody przeszczepu wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem jest to, że jest ona technicznie łatwa do odtworzenia. Metodę można zastosować do innych modeli chorobowych.Na przykład można go użyć do stworzenia mysiego modelu raka. Procedurę zademonstruje Naoaki Sakata, profesor nadzwyczajny na Uniwersytecie Fukuoka. Pod mikroskopem preparacyjnym użyj mikropipety P 200, aby usunąć wszelkie dodatkowe składniki wysp trzustkowych z trawienia trzustki, w tym tkanki groniaste i włókniste.Następnie użyj sitka do komórek, aby odfiltrować pojedyncze komórki groniaste. Przefiltrowane wysepki przenieść do nowej pożywki hodowlanej zawierającej odpowiednią pożywkę hodowlaną lub roztwór buforowy uzupełniony surowicą bydlęcą lub albuminą i zamieszać szalkę, aby umieścić wysepki pośrodku. Za pomocą mikropipety P 200 pobrać poszczególne wysepki do odpowiedniej probówki zbiorczej.Umieść nowe sitko o średnicy 40 mikrometrów na 50-mililitrowej plastikowej tubie. Użyj pipety o pojemności 1000 mikrolitrów, aby dodać wysepki do sitka, aby oddzielić wysepki i pojedyncze komórki groniaste. Za pomocą kleszczy odwrócić sitko na nowym, niepoddanym działaniu substancji naczyniu hodowlanym o wielkości 60 lub 100 mililitrów, zawierającym pożywkę hodowlaną lub odpowiedni roztwór buforowy, uzupełniony surowicą lub albuminą bydlęcą.Użyj świeżej pożywki lub buforu, aby przepłukać wysepki do nowego naczynia hodowlanego, a następnie dodaj wystarczającą ilość pożywki lub buforu do szalki hodowlanej, aby osiągnąć całkowitą objętość około 20 mililitrów. Policz wysepki pod mikroskopem i podziel liczbę wysepek równo między poszczególne 1,5 mililitrowe plastikowe probówki wirówkowe w zależności od liczby zwierząt dawców. Odwirować wysepki w stężeniu 2,100 G przez jedną minutę w temperaturze pokojowej i odrzucić supernatant.W probówce zwykle pozostaje około 20 do 30 mikrolitrów pozostałego roztworu. Po usunięciu włosów z brzucha, aby zapobiec infekcji, umieść mysz w pozycji leżącej. Po zdezynfekowaniu brzucha i okolicy pachwinowej naciąć skórę w dolnej części środkowej, tworząc nacięcie skóry o długości około dwóch centymetrów.Zaciśnij lewą ścianę brzucha za pomocą kleszczy lub retraktorów i pociągnij tkankę na lewą stronę myszy, aby zabezpieczyć pole operacyjne. Użyj bawełnianego wacika, aby zmobilizować jelito cienkie i grube po prawej stronie myszy. Biała tkanka tłuszczowa naskórka lewego w jamie brzusznej znajduje się w lewej okolicy pachwinowej.Zmobilizuj białą tkankę tłuszczową naskórka i lewe jądro na zewnątrz brzucha i rozciągnij tkankę. Użyj mikropipety P 200, aby zebrać całą objętość wysepek z jednej probówki o pojemności 1,5 mililitra, uważając, aby po pobraniu w probówce nie pozostały żadne wysepki. Pozwól, aby zebrane wysepki osiadły na końcówce pipety pod wpływem grawitacji.Delikatnie przyłóż końcówkę mikropipety do rozdętej tkanki tłuszczowej, uważając, aby zapobiec nadmiernemu wypłukaniu pożywki lub buforu w końcówce. Ostrożnie wysepki wysiewamy na tkance. Po wysianiu potwierdź prawidłowe ułożenie wysepek pod mikroskopem preparacyjnym.Przykryj wyspy trzustkowe białą tkanką tłuszczową naskórka, następnie umieść lewe jądro pod episomalną białą tkanką tłuszczową i wróć do jamy wewnątrzotrzewnowej. Zamknij skórę w dwóch warstwach za pomocą szwu 4-o. Po zakończeniu umieść mysz pod lampą grzewczą i monitoruj ją aż do pełnego wyzdrowienia.Aby porównać skuteczność przeszczepu wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem z tą po przeszczepieniu wysp dootrzewnowych, taką samą liczbę wysp wszczepiono do otrzewnej w lewej przestrzeni parakolkowej u kontrolnych biorców zwierząt z cukrzycą. Zaobserwowano, że poziom glukozy we krwi myszy z przeszczepem wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem stopniowo i znacząco spada w porównaniu z myszami, którym przeszczepiono wyspę trzustkową dootrzewnowo. Dootrzewnowe badanie tolerancji glukozy wykonano miesiąc po przeszczepie.Poziom glukozy we krwi u myszy z przeszczepem wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem utrzymywał się na niższym poziomie niż obserwowany u myszy z przeszczepem wysp otrzewnowych. W badaniu histologicznym oceniono wszczepienie wysp trzustkowych w białą tkankę tłuszczową naskórka. U zwierząt pokrytych tłuszczem po przeszczepie wysp trzustkowych barwienie eocenem hematoksyliny ujawniło obecność wysp w białej tkance tłuszczowej naskórka.Ponadto barwienie przeciwciałami sprzężonymi z fluorescencją wysp trzustkowych insulinododatnich ułatwiło wykrywanie mikronaczyń dodatnich pod wpływem czynnika von Willebranda w naskórkowej białej tkance tłuszczowej wszystkich myszy biorców. Aby ta procedura zakończyła się sukcesem, upewnij się, że wysepki całkowicie osiądą na końcówce pipety i umieść je na tkance tłuszczowej bez rozlewania.

fat-covered-islet-transplantation-using-epididymal-white-adipose

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Nasz protokół został opracowany w celu czystego i łatwego wprowadzania wysepek lub komórek pod torebkę nerkową myszy. Komórki są zagęszczane w postaci pelletów w końcowej części cewki używanej do transplantacji komórek pod torebkę nerkową. Prostota tej techniki zmniejsza stres dla komórek oraz myszy.

Transplantacja wysepek trzustkowych do torebki nerki u myszy z cukrzycą

Przeszczepianie wyizolowanych wysepek zostało zaproponowane jako potencjalna metoda leczenia cukrzycy typu 1. W niniejszym materiale opisujemy metodę izolacji wysepek z trzustek myszy oraz ich transplantacji do przestrzeni podtorebkowej nerki.

Metoda izolacji wysepek mysich i przeszczepiania podtorebkowego do nerki

Ten protokół demonstruje izolację mysich wysepek i zasiewanie ich na rusztowaniu zdecelularycznym. Wyspy trzustkowe wsparte na rusztowaniach przeszczepiono do poduszeczki tłuszczowej najądrza myszy z cukrzycą indukowaną streptozotocyną (STZ). Wyspy trzustkowe przetrwały w miejscu przeszczepu i odwróciły stan hiperglikemii.

Wspomagany rusztowaniem przeszczep wysp trzustkowych w poduszce tłuszczowej najądrza myszy z cukrzycą

Wprowadzono metodę przeszczepiania wysp trzustkowych u myszy. Wyizolowane wysepki miesza się z hydrożelem, a mieszaninę umieszcza się w woreczku omentalnym myszy z cukrzycą. Następnie monitorowany jest poziom glukozy we krwi i wykonywana jest analiza immunohistochemiczna.

Metoda przeszczepu wysp trzustkowych do sieci u myszy

Przeszczep wysp trzustkowych jest sposobem na osiągnięcie normoglikemii w cukrzycy typu 1. Ten artykuł koncentruje się na technice przeszczepiania drogą wewnątrzwrotną w celu utrzymania prawidłowego poziomu glukozy u myszy z cukrzycą.

Wewnątrzportalowy przeszczep wysp trzustkowych w modelu mysim

Tutaj prezentujemy protokół walidacji in vivo terapii komórkowej opartej na hydrożelu, zilustrowany przykładem przeszczepu wysp trzustkowych. Implantacja h-Omental Matrix Islet filliNG (hOMING) pozwala na implantację mieszaniny komórkowo-hydrożelowej między warstwami omentalnymi, w pobliżu naczyń krwionośnych, aby zmaksymalizować wszczepienie w odpowiednim środowisku metabolicznym.

Przeszczep wysp trzustkowych wewnątrzomentalnych za pomocą h-Omental Matrix Islet filliNG (hOMING)

W tym protokole opisana jest metoda izolacji i przeszczepu mysich wysp trzustkowych do pachwinowej podskórnej białej tkanki tłuszczowej. Izolowane syngeniczne mysie wysepki są przeszczepiane mysiemu biorcy za pomocą hydrożelu z błony podstawnej. Monitorowany jest poziom glukozy we krwi biorców i przeprowadzana jest analiza histologiczna przeszczepów wysp trzustkowych.

Pachwinowy podskórny model przeszczepu białej tkanki tłuszczowej (ISWAT) mysich wysp trzustkowych

Tutaj prezentujemy wyrafinowane procedury chirurgiczne dotyczące skutecznego przeprowadzenia przeszczepu wysp trzustkowych wewnątrz portalu, klinicznie istotnej, ale technicznie trudnej procedury chirurgicznej u myszy.

Minimalizacja krwawienia z żyły wrotnej po infuzji podczas przeszczepu wysp trzustkowych wewnątrzwątrobowych u myszy

Oferujemy minimalnie inwazyny protokół do domięśniowej transplantacji wyspików komórek macierzystych trzustki pochodzących z ludzkich komórek macierzystych do szczurów immunodeficytarnych w celu in vivo implantacji i dalszej analizy.

Przeszczep domięśniowy ludzkich pluripotentnych komórek macierzystych pochodzenia trzustkowego do szczurów

Aby zrozumieć komórkowe i molekularne mechanizmy leżące u podstaw powstawania nowotworów i rozwoju zwężeń w zastawkach serca z inżynierii tkankowej, opracowano mysi model heterotopowego przeszczepu zastawki serca. Zastawkę płucną serca przeszczepiono biorcy przy użyciu techniki heterotopowego przeszczepiania serca.

Przeszczepienie zastawki płucnej z wykorzystaniem mysiego modelu heterotopowego przeszczepienia serca

Poznaj metodę przeszczepu wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem z wykorzystaniem białej tkanki tłuszczowej najądrza u myszy. Technika umożliwia wykrywanie przeszczepionych wysp bez bioklejów i szwów.

Przeszczep wysp trzustkowych pokrytych tłuszczem z wykorzystaniem białej tkanki tłuszczowej najądrza

Przeglądaj więcej filmów