Wsteczny wlew gruczołu przyusznego przez przewód Stensena u naczelnych innych niż człowiek w celu wektorowego dostarczania genów

Protokół ten jest ważny, ponieważ szczegółowo przedstawia procedurę wstecznej infuzji gruczołów ślinowych. Zabieg może być stosowany z różnych powodów medycznych, takich jak immunoprofilaktyka wektorowa lub terapia genowa. Ta technika jest łatwa do nauczenia i odtworzenia.

Autorom udało się przeprowadzić tę procedurę z powodzeniem przy wielu okazjach, mimo że nie są chirurgami szczękowymi ani nie mają takiego przygotowania. Po znieczuleniu użyj lup dentystycznych do powiększenia i zidentyfikuj brodawkę ślinianki przyusznej lub otwór przewodu Stensona na tylnym policzku przylegającym do górnego drugiego zęba trzonowego. Delikatnie rozszerz brodawkę ślinianki przyusznej, umieszczając punkt stożkowego rozszerzacza w środku lub otworze brodawki i obracaj rozszerzacz do przodu iz powrotem przez około 20 do 30 sekund.

Następnie za pomocą pęsety przytrzymaj zaznaczony koniec rurki polietylenowej przymocowanej do strzykawki zawierającej infuzat w odległości około 0,5 centymetra od dystalnego końca i delikatnie włóż końcówkę rurki do rozszerzonej brodawki. Delikatnie przesuwaj rurkę małymi ruchami obrotowymi, aby pomóc rurkom się przesuwać, a następnie ponownie wyreguluj pęsetę 0,5 centymetra proksymalnie do poprzedniego uchwytu. Powtarzaj ten proces, aż dwucentymetrowy znak dotrze do brodawki ślinianki przyusznej.

Następnie, aby uszczelnić brodawkę ślinianki przyusznej i zmniejszyć rozlewanie się nalewki z powrotem do jamy ustnej, należy nałożyć cyjanoakrylan na policzek wokół brodawki i na wprowadzoną rurkę. Po wyschnięciu cyjanoakrylanu należy powoli wstrzykiwać infylat przez pięć minut w tempie 100 mikrolitrów na minutę. Po zakończeniu infuzji należy pozostawić rurkę na miejscu na co najmniej pięć minut, utrzymując w ten sposób szczelny kanalik i pozwalając infuzji pozostać w śliniankach przyusznych.

Na koniec wyjmij rurkę z delikatnym pociągnięciem, a cyjanoakrylan uwolni się wraz z rurką. Fluoroskopia z użyciem wlewu z kontrastem radiowym wykazała rozgałęzianie się roztworu przez przewód Stensona do ślinianki przyusznej. Immuno jako analiza chemiczna ślinianki przyusznej wykazała dodatnie barwienie EGFP zarówno w komórkach przewodowych, jak i groniastych, co wskazuje na udaną transdukcję i transkrypcję w obu typach komórek.

Głównym wyzwaniem w tej procedurze jest prawdopodobnie wprowadzenie rurki polietylenowej do brodawki, co powinno odbywać się bardzo delikatnie i powoli.