Name: Mysi model in vivo całkowitego znieczulenia dożylnego podczas operacji resekcji raka (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-08T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: Poznaj protokół znieczulenia dożylnego propofolem u myszy podczas operacji resekcji nowotworu. Ta metoda pozwala badać wpływ anestezji na wyniki onkologiczne i nawrót raka po zabiegu chirurgicznym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy pragną podziękować członkom Laboratorium Neurologiczno-Immunologicznego Raka oraz dr Cameronowi Nowellowi z Monash Institute of Pharmaceutical Sciences, Monash University, Parkville. Prace te były wspierane przez granty z National Health and Medical Research Council 1147498, National Breast Cancer Foundation IIRS-20-025, Australian and New Zealand College of Anaesthetists (ANZCA), Perpetual i CTC for Cancer Therapeutics.

Wszystkie badania na zwierzętach zostały przeprowadzone za zgodą Instytucjonalnego Komitetu ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt na Uniwersytecie Monash. W tym badaniu wykorzystano samice myszy Balb/c w wieku 6-8 tygodni.
1. Przygotuj komórki rakowe
<ol>
	<li>Hodowla komórek nowotworowych w pożywce. Hodowla 66cl4 mysich komórek raka sutka w alfa-MEM zawierających 10% FBS i 200 mM glutaminy. Komórki powinny być ujemne dla mykoplazmy. OPCJONALNIE: Użyj komórek, które są stabilnie transdukowane w celu ekspresji lucyferazy świetlika do obrazowania bioluminescencyjnego, aby umożliwić monitorowanie nawrotu raka po operacji resekcji11 (patrz krok 4). 
	UWAGA: W tym badaniu wykorzystano linię komórkową i pożywkę wymienione powyżej.</li>
	<li>Hoduj komórki w temperaturze 37 °C z 5% CO2 . Komórki przechodzą aseptycznie w kapturze przy <80% zbiegu. Użyj komórek o niskim pasażu w logarytmicznej fazie wzrostu, aby uzyskać optymalne wyniki in vivo.</li>
	<li>Podnieś przylegające komórki za pomocą 0,5 mg/ml trypsyny w PBS z 10 mM EDTA; 2 ml dla kolby T75. Po podniesieniu dodaj pożywkę, aby dezaktywować trypsynę i umyj komórki w PBS.</li>
	<li>Policz komórki za pomocą hemocytometru. Rozcieńczyć komórki w PBS do wstrzykiwań. W przypadku 66cl4 komórek raka sutka wstrzyknij 1 x 105 komórek w 20 μl PBS na mysz.</li>
	<li>Przed wstrzyknięciem umieścić komórki na lodzie.</li>
</ol>
2. Wygeneruj mysi model raka piersi
<ol>
	<li>Użyj 4% izofluranu do znieczulenia myszy w komorze indukcyjnej. Następnie utrzymuj znieczulenie 2%-3% izofluranem za pomocą stożka nosowego. Potwierdź prawidłowe znieczulenie przez brak reakcji na uszczypnięcie palca.</li>
	<li>Przygotować miejsce wstrzyknięcia, wycierając czwarty lewy obszar poduszeczki sutkowej za pomocą jednorazowego wacika nasączonego alkoholem.</li>
	<li>Pobrać komórki nowotworowe (patrz krok 1.4) do strzykawki Hamiltona o pojemności 25 μl przymocowanej do sterylnej igły podskórnej o pojemności 27 G.</li>
	<li>Wstrzyknij komórki do czwartej lewej poduszeczki sutkowej. Użyj kleszczy, aby zabezpieczyć i podnieść skórę. Wstrzyknąć około 1 mm od smoczka.</li>
	<li>OPCJONALNIE: Jeśli komórki są znakowane lucyferazy, potwierdź udane wstrzyknięcie komórek nowotworowych za pomocą obrazowania bioluminescencyjnego. Wstrzyknąć 100 μl 150 mg/kg D-lucyferyny do bocznej żyły ogonowej znieczulonych myszy za pomocą strzykawki insulinowej o pojemności 0,5 ml z igłą podskórną 30 G.</li>
	<li>OPCJONALNIE: Umieść mysz w systemie obrazowania bioluminescencyjnego z podkładką sutkową skierowaną do góry. Odczekaj 2 minuty od wstrzyknięcia lucyferyny, aby uzyskać optymalny wychwyt lucyferyny w tkankach, a następnie obrazuj przez 10 sekund.</li>
	<li>Umieść mysz w czystej klatce i pozwól jej dojść do siebie po znieczuleniu.</li>
	<li>Dalsze monitorowanie dobrostanu zwierząt zgodnie z instytucjonalnymi wytycznymi etycznymi dotyczącymi zwierząt.</li>
</ol>
3. Wywołanie stabilnego znieczulenia za pomocą dożylnego podania propofolu
<ol>
	<li>Monitoruj wzrost guza pierwotnego za pomocą pomiaru suwmiarkowego i oblicz objętość guza za pomocą równania: Objętość (mm3) = (długość x (szerokość)2 ÷ 2).</li>
	<li>Wykonaj operację resekcji guza na myszach, gdy guz pierwotny osiągnie wymaganą objętość (tutaj 80-90 mm3).</li>
	<li>Skonfiguruj automatyczną pompę strzykawkową ze strzykawką insulinową o pojemności 30 g i pojemności 1 ml zawierającą preparat propofolu (2% Lipuro propofolu) (<silna klasa="xfig">Rysunek 1A).</li>
	<li>Wywołać znieczulenie myszy w komorze indukcyjnej z 3% sewofluranem lub izofluranem. 
	UWAGA: W tym przypadku zastosowano sewofluran, ponieważ jest to dominujący lotny składnik substancji czynnej stosowany klinicznie.</li>
	<li>Przenieś mysz do poduszki grzewczej o temperaturze 37 °C na czas zabiegu. Krótko utrzymuj znieczulenie za pomocą 2%-3% sewofluranu za pomocą stożka nosowego.</li>
	<li>Nałóż wodny lubrykant na oczy, aby zapobiec wysuszeniu. </li>
	<li>Wstrzyknąć podskórnie 0,05 mg/kg buprenorfiny w celu znieczulenia.</li>
	<li>Aby przygotować się do zabiegu, należy ogolić brzuch i przygotować skórę do zabiegu roztworem jodu i powidonu. Przetrzyj skórę chusteczką nasączoną alkoholem lub sterylną chusteczką.</li>
	<li>Aby dostarczyć TIVA na bazie propofolu, należy kanniulować boczną żyłę ogonową za pomocą sterylnej igły podskórnej 30 G przymocowanej do sterylnego cewnika poliuretanowego. Potwierdź prawidłowe umieszczenie przez cofnięcie się krwi do cewnika (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 1B). Dostosuj podawanie sewofluranu zgodnie z wymaganiami podczas kaniulacji dożylnej, aby utrzymać stabilną głębokość znieczulenia, co objawia się utratą odruchu rogówki i pedałowania oraz częstością oddechów < 100 oddechów na minutę.</li>
	<li>Podanie propofolu-TIVA należy rozpocząć od podania 2% propofolu w bolusie początkowym 27 mg/kg mc. przez ponad 1 minutę. Należy przerwać podawanie sewofluranu.</li>
	<li>Kontynuuj infuzję propofolu z szybkością podtrzymującą 2,2-4,0 mg/kg/min, aby utrzymać stabilną głębokość znieczulenia przez cały czas trwania zabiegu (<silna klasa = "xfig">Rycina 1C).</li>
</ol>
4. Wyciąć guz pierwotny
<ol>
	<li>Wykonaj proste 1 cm nacięcie poniżej guza w okolicy lewej czwartej poduszeczki sutkowej. Ostrożnie wyciąć guz i lewy pachwinowy węzeł chłonny, przeprowadzając sekcję kleszczami.</li>
	<li>OPCJONALNIE: Jeśli używasz komórek nowotworowych znakowanych lucyferazy, użyj obrazowania bioluminescencyjnego, aby potwierdzić wyraźne marginesy chirurgiczne. Wstrzyknąć 150 mg/kg D-lucyferyny do bocznej żyły ogonowej, odczekać 2 minuty, a następnie obrazować przez 60 s za pomocą systemu obrazowania bioluminescencyjnego. Jeśli zostanie zidentyfikowany resztkowy guz, wyciąć dodatkową tkankę z poduszeczki tłuszczowej sutka i ponownie wykonać obraz, aby uzyskać wyraźne marginesy.</li>
	<li>Zapewnij hemostazę w miejscu operacji i zamknij skórę za pomocą nylonowych szwów 5-0. Upewnij się, że futro nie dostanie się do miejsca operacji.</li>
	<li>Po zakończeniu operacji resekcji należy przerwać znieczulenie. Umieść mysz w czystej klatce na poduszce grzewczej o temperaturze 37 °C i pozwól jej dojść do siebie po znieczuleniu.</li>
	<li>Monitoruj co 15 minut po znieczuleniu, aż mysz powróci do normalnej czujności. Następnie monitoruj mysz co 12 godzin przez 48 godzin po zabiegu.</li>
	<li>Podawać 0,05 mg/kg buprenorfiny podskórnie co 12 godzin przez 48 godzin po zabiegu.</li>
	<li>Po 7-10 dniach zdejmij szwy za pomocą sterylnych zakrzywionych obcinaków do ściegów w krótkim znieczuleniu sewofluranem lub izofluranem.</li>
</ol>
5. Śledzenie nawrotów raka za pomocą obrazowania in vivo
<ol>
	<li>Użyj obrazowania bioluminescencyjnego, aby nieinwazyjnie śledzić nawroty raka po operacji resekcji. Użyj systemu obrazowania bioluminescencyjnego, aby monitorować myszy raz w tygodniu pod kątem dowodów na nawroty guza pierwotnego lub nawrót odległy, począwszy od tygodnia po operacji.</li>
	<li>Wywołać znieczulenie myszy w komorze indukcyjnej z 4% izofluranem. Następnie przenieś mysz do poduszki grzewczej o temperaturze 37 °C na czas znieczulenia i utrzymuj znieczulenie za pomocą 2%-4% izofluranu za pomocą stożka nosowego.</li>
	<li>Nałóż wodny lubrykant na oczy, aby zapobiec wysuszeniu.</li>
	<li>Wstrzyknąć D-lucyferynę w dawce 150 mg/kg do żyły ogonowej bocznej. Odczekaj 2 minuty, a następnie zmierz bioluminescencję w ciągu 60 sekund ekspozycji, aby wykryć nawrót guza pierwotnego lub przerzuty odległe.</li>
	<li>Jeśli guz pierwotny nawróci i stanie się wyczuwalny, rozpocznij monitorowanie wzrostu guza za pomocą pomiarów suwmiarkowych.</li>
	<li>Pod koniec eksperymentu humanitarnie zabij myszy zgodnie z zatwierdzonym protokołem. W tym przypadku zastosowano CO2 , a następnie zwichnięcie szyjki macicy.</li>
</ol>

<ol><li>Sullivan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cancer+surgery%3A+delivering+safe%2C+affordable%2C+and+timely+cancer+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Global cancer surgery: delivering safe, affordable, and timely cancer surgery.</a> Lancet Oncology. 16 (11), 1193-1224 (2015).</li>
<li>Lim, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+propofol+and+sevoflurane+on+cancer+cell%2C+natural+killer+cell%2C+and+cytotoxic+T+lymphocyte+function+in+patients+undergoing+breast+cancer+surgery%3A+an+in+vitro+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">The effect of propofol and sevoflurane on cancer cell, natural killer cell, and cytotoxic T lymphocyte function in patients undergoing breast cancer surgery: an in vitro analysis.</a> BMC Cancer. 18 (1), 159(2018).</li>
<li>Pandit, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((5th+National+Audit+Project+%28NAP5%29+on+accidental+awareness+during+general+anesthesia%3A+protocol%2C+methods%2C+and+analysis+of+data%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">5th National Audit Project (NAP5) on accidental awareness during general anesthesia: protocol, methods, and analysis of data.</a> British Journal of Anaesthesia. 113 (4), 540-548 (2014).</li>
<li>Yap, A., Lopez-Olivo, M. A., Dubowitz, J., Hiller, J., Riedel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthetic+technique+and+cancer+outcomes%3A+a+meta-analysis+of+total+intravenous+versus+volatile+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Anesthesia%22%5BJournal%5D)">Anesthetic technique and cancer outcomes: a meta-analysis of total intravenous versus volatile anesthesia.</a> Canadian Journal of Anesthesia. 66 (5), 546-561 (2019).</li>
<li>Makito, K., Matsui, H., Fushimi, K., Yasunaga, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volatile+versus+total+intravenous+anesthesia+for+cancer+prognosis+in+patients+having+digestive+cancer+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Volatile versus total intravenous anesthesia for cancer prognosis in patients having digestive cancer surgery.</a> Anesthesiology. 133 (4), 764-773 (2020).</li>
<li>Oh, T. K., Kim, H. H., Jeon, Y. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrospective+analysis+of+1-year+mortality+after+gastric+cancer+surgery%3A+Total+intravenous+anesthesia+versus+volatile+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Anaesthesiologica+Scandinavica%22%5BJournal%5D)">Retrospective analysis of 1-year mortality after gastric cancer surgery: Total intravenous anesthesia versus volatile anesthesia.</a> Acta Anaesthesiologica Scandinavica. 63 (9), 1169-1177 (2019).</li>
<li>Lai, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propofol-based+total+intravenous+anesthesia+is+associated+with+better+survival+than+desflurane+anesthesia+in+hepatectomy+for+hepatocellular+carcinoma%3A+a+retrospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Propofol-based total intravenous anesthesia is associated with better survival than desflurane anesthesia in hepatectomy for hepatocellular carcinoma: a retrospective cohort study.</a> British Journal of Anaesthesia. 123 (2), 151-160 (2019).</li>
<li>Hong, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthetics+and+long-term+survival+after+cancer+surgery-total+intravenous+versus+volatile+anesthesia%3A+a+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Anesthetics and long-term survival after cancer surgery-total intravenous versus volatile anesthesia: a retrospective study.</a> BMC Anesthesiology. 19 (1), 233(2019).</li>
<li>Flecknell, P. Special Techniques. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFlecknell%2C+P+%22Laboratory+Animal+Anaesthesia.+Fourth+edition%22">Laboratory Animal Anaesthesia. Fourth edition</a>. , Elsevier. Chapter 3 (2015).</li>
<li>Cicero, L., Fazzotta, S., Palumbo, V. D., Cassata, G., Lo Monte, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia+protocols+in+laboratory+animals+used+for+scientific+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomedica%22%5BJournal%5D)">Anesthesia protocols in laboratory animals used for scientific purposes.</a> Acta Biomedica. 89 (3), 337-342 (2018).</li>
<li>Sloan, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sympathetic+nervous+system+induces+a+metastatic+switch+in+primary+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The sympathetic nervous system induces a metastatic switch in primary breast cancer.</a> Cancer Research. 70 (18), 7042-7052 (2010).</li>
<li>Al-Hashimi, M., Scott, S. W. M., Thompson, J. P., Lambert, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opioids+and+immune+modulation%3A+more+questions+than+answers%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Opioids and immune modulation: more questions than answers.</a> British Journal of Anaesthesia. 111 (1), 80-88 (2013).</li>
<li>DeMarco, G. J., Nunamaker, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Review+of+the+effects+of+pain+and+analgesia+on+immune+system+function+and+inflammation%3A+relevance+for+preclinical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">A Review of the effects of pain and analgesia on immune system function and inflammation: relevance for preclinical studies.</a> Comparative Medicine. 69 (6), 520-534 (2019).</li>
<li>Hiller, J. G., Perry, N. J., Poulogiannis, G., Riedel, B., Sloan, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+events+influence+cancer+recurrence+risk+after+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Perioperative events influence cancer recurrence risk after surgery.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 15 (4), 205-218 (2018).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów finansowych.

Badanie to przedstawia protokół podawania całkowitego znieczulenia dożylnego (TIVA) z propofolem w mysim modelu raka piersi, który powiela kluczowe aspekty praktyki klinicznej w przypadku TIVA u pacjentów wymagających operacji raka. Protokół umożliwia badanie zarówno krótkoterminowych, jak i długoterminowych klinicznie istotnych wyników po operacji raka w mysim modelu progresji raka, w tym pomiar poziomu cytokin i nawrotu raka (ryc. 2 i ryc. 3). Metodologia ta b...

Ponad 60% pacjentów z rakiem otrzymuje znieczulenie do chirurgicznej resekcji1. Obecnie nie ma konkretnych wytycznych klinicznych, które określałyby wybór znieczulenia stosowanego u pacjentów z nowotworami. Ankiety przeprowadzone wśród anestezjologów wskazują na preferowanie znieczulenia opartego na lotności, w tym podczas operacji nowotworowych2,3. Istnieje jednak coraz więcej dowodów na to, że stosowanie całkowitego znieczulenia dożylnego na bazie propofolu (TIVA) podczas operacji raka może wiązać się z poprawą wyników pooperacyjnych (przeżycie wolne od progresji, przeżycie całkowite) w porównaniu ze znieczuleniem lotnym4. Kolejne badania kliniczne nadal podają sprzeczne wyniki5,6,7,8. Odkrycia te potwierdzają potrzebę badań przedklinicznych w celu lepszego zrozumienia mechanistycznego wpływu różnych środków znieczulających na wyniki związane z rakiem.
Jednak w badaniach in vivo, które modelują chirurgię nowotworową, znieczulenie jest często przypadkową częścią procedury. Uzasadnienie wyboru znieczulenia często nie jest przedmiotem projektu eksperymentalnego, a jego wpływ na punkty końcowe związane z rakiem może nie być oceniany. Na przykład w badaniach in vivo, które wymagają podtrzymania znieczulenia do operacji nowotworowych, najczęściej stosuje się wziewne znieczulenie lotne9. W przypadku gdy propofol był stosowany w badaniach in vivo, był on podawany w pojedynczym bolusie z podaniem dootrzewnowym, co nie powiela klinicznych protokołów znieczulenia onkologicznego10. Takie podejście do podawania propofolu indukuje lekkie znieczulenie, które jest odpowiednie do szybkich zabiegów. Nie pozwala jednak na utrzymanie znieczulenia, które jest wymagane do operacji resekcji raka, która może być długotrwała. Ponadto kinetyka wchłaniania po podaniu dootrzewnowym różni się od klinicznych metod podawania.
Model TIVA na bazie propofolu do chirurgii resekcji raka został opracowany w celu zaspokojenia tej potrzeby. Opracowano protokół ciągłego utrzymywania znieczulenia z miareczkowaniem środka znieczulającego w celu umożliwienia odpowiedzi na bodziec chirurgiczny w celu odtworzenia kluczowych aspektów podawania środka znieczulającego pacjentom poddawanym operacji onkologicznej. Uzyskany protokół jest stosowany z mysim modelem raka w celu zapewnienia TIVA podczas operacji resekcji raka. Oceniany jest wpływ na krótko- i długoterminowe wyniki związane z rakiem.

<table><tbody><tr><td>0,9% sól fizjologiczna</td><td>Fresnius Kabi</td><td>AUST R 197198</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze tętnicze</td><td>Proscitech</td><td>TS1322-140</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Temgesic</td><td>TEMG I</td><td></td></tr><tr><td>Podgrzewana mata chirurgiczna</td><td>Niestandardowa</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>igła podskórna (strzykawka insulinowa 30 G, 1 ml)</td><td>Terumo</td><td>NN3013R</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td></td>126274</tr><tr><td>Luciferin</td><td>Promega</td><td>P1041/2/3</td><td></td></tr><tr><td>Cewnik poliuretanowy</td><td>Intramedic</td><td>427401</td><td></td></tr><tr><td>Powidon Jod</td><td>Betadine</td><td>AUST R 29562</td><td></td></tr><tr><td>Propofol Lipuro, 2%</td><td>Braun</td><td>3521490</td><td></td></tr><tr><td>Sevoflurane</td><td>Baxter</td><td>ANZ2L9117</td><td></td></tr><tr><td>Parownik Sevoflurane</td><td>Vetquip</td><td>VQ1334</td><td></td></tr><tr><td>Sterylna gaza</td><td>Multigate Medical Products</td><td>11-600A</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki chirurgiczne</td><td>Proscitech</td><td>TS1044</td><td></td></tr><tr><td>Szwy, 5-0 nylon</td><td>Dynek</td><td>V504</td><td></td></tr><tr><td>Pompa strzykawkowa</td><td>Aparat Harvard</td><td>70-4500</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawki (1 mL)</td><td>Terumo</td><td>SS+01T</td><td></td></tr></tbody></table>

mysi model in vivo całkowitego znieczulenia dożylnego podczas operacji resekcji raka

An In Vivo Mouse Model of Total Intravenous Anesthesia During Cancer Resection Surgery

Znieczulenie jest rutynowym elementem opieki onkologicznej, który jest używany do procedur diagnostycznych i terapeutycznych. Technika znieczulania została ostatnio zaangażowana w wpływ na długoterminowe wyniki raka, prawdopodobnie poprzez modulację reakcji adrenergiczno-zapalnych, które wpływają na zachowanie komórek rakowych i funkcję komórek odpornościowych. Pojawiające się dowody sugerują, że całkowite znieczulenie dożylne na bazie propofolu (TIVA) może być korzystne dla długoterminowych wyników leczenia raka w porównaniu z wziewnym znieczuleniem lotnym. Jednak dostępne wyniki kliniczne są niespójne. Badania przedkliniczne, które identyfikują mechanizmy leżące u podstaw tego procesu, są niezwykle potrzebne, aby pokierować projektowaniem badań klinicznych, które przyspieszą uzyskanie wglądu. Większość przedklinicznych modeli znieczulenia została ekstrapolowana na podstawie zastosowania znieczulenia w badaniach in vivo i nie jest optymalnie zaprojektowana do badania wpływu samego znieczulenia jako pierwszorzędowego punktu końcowego. W artykule opisano metodę dostarczania znieczulenia propofol-TIVA w mysim modelu resekcji raka piersi, który odtwarza kluczowe aspekty dostarczania klinicznego u pacjentek z rakiem. Model może być wykorzystany do badania mechanizmów działania znieczulenia na wyniki leczenia nowotworów w różnych typach nowotworów i może być ekstrapolowany na inne nienowotworowe obszary badań przedklinicznych nad anestezjologią.

Niniejsza metoda opisuje model całkowitego znieczulenia dożylnego (TIVA) z użyciem propofolu podczas operacji resekcji nowotworu u myszy. Propofol jest podawany w tym modelu mysim poprzez cewnik dożylny przy użyciu pompy strzykawkowej (Rycina 1A,B), aby odtworzyć sposób podawania TIVA w warunkach klinicznych znieczulenia podczas operacji onkologicznych. Zastosowanie pompy strzykawkowej minimalizuje ekspozycję na anestetyki lotne, umożliwiając szybkie przejście z początkowej ...

Ten artykuł opisuje metodę modelowania całkowitego znieczulenia dożylnego (TIVA) podczas operacji resekcji raka u myszy. Celem jest odtworzenie kluczowych cech podawania znieczulenia pacjentom z rakiem. Metoda pozwala na zbadanie, jak technika anestezjologiczna wpływa na nawrót nowotworu po operacji resekcji.

Mysi model in vivo całkowitego znieczulenia dożylnego podczas operacji resekcji raka

Anesthesia is a routine component of cancer care that is used for diagnostic and therapeutic procedures. The anesthetic technique has recently been ...

Ten nowatorski protokół opisuje znieczulenie chirurgiczne u myszy przy użyciu znieczulenia propofolem. Metoda umożliwia prowadzenie badań nad znieczuleniem propofolem w mysich modelach choroby. Protokół pozwala na ocenę całkowitego znieczulenia dożylnego i unika stosowania znieczulenia lotnego.Protokół może być wykorzystany do zbadania, w jaki sposób znieczulenie propofolem wpływa na wyniki związane z chorobą. Na przykład tutaj oceniamy krótko- i długoterminowe wyniki raka po operacji usunięcia guza. Na początek posadź 66 komórek raka sutka CL4 Mirai, które są stabilnie transdukowane w celu ekspresji lucyferazy świetlików w pożywce alpha MEM zawierającej 10% FBS i 200 milimolową glutaminę.Inkubuj komórki w temperaturze 37 stopni Celsjusza, ale 5% dwutlenku węgla. Subkulturuj komórki, gdy komórki osiągną około 80% zbieżności. Gdy komórki znajdują się w logarytmicznej fazie wzrostu z dwoma mililitrami kroplówek w roztworze EDTA, podnieś przylegające komórki i policz komórki za pomocą hemocytometru.Następnie rozcieńczyć komórki w PBS i trzymać rozcieńczoną zawiesinę komórkową na lodzie, aż mysz będzie gotowa do wstrzyknięcia. Gdy mysz zostanie całkowicie znieczulona, przetrzyj czwarty

an-vivo-mouse-model-total-intravenous-anesthesia-during-cancer

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Myszie kompletne model stazy w zakrzepicy żyły głównej dolnej pozwala na uzyskanie mierzalnych ilości tkanki ściany żyły oraz zakrzepu. Model ten okazał się użyteczny w ocenie oddziaływań między ścianą żyły a zakrzepem zamykającym światło naczynia oraz w analizie przejścia od stanu ostrego do chronicznego stanu zapalnego.

Myszy w całkowitym modelu zastoju zakrzepicy żyły głównej dolnej

Źródło: Shannonhouse, J., et al. In vivo Obrazowanie wapniowe zespołów neuronalnych w sieciach pierwotnych neuronów czuciowych w nienaruszonych zwojach korzenia grzbietowego. J. Vis. Exp. (2023). Film przedstawia technikę obrazowania wapnia in vivo w celu monitorowania aktywności neuronalnej w zwojach korzenia grzbietowego (DRG) myszy transgenicznej. Neurony DRG wyrażają wskaźnik wapnia, który zwiększa intensywność fluorescencji po związaniu się z wapniem. Bodźce mechaniczne lub termiczne...

Obrazowanie in vivo wapnia zespołów neuronalnych w nienaruszonych zwojach korzenia grzbietowego myszy

Źródło: Alomari, S., et al. Wdrożenie minimalnie inwazyjnej resekcji guza mózgu u gryzoni w celu pobrania tkanek o wysokiej żywotności. J. Vis. Exp. (2022)Ten film pokazuje zastosowanie minimalnie inwazyjnego systemu resekcji (MIRS) do wycięcia tkanki nowotworowej od znieczulonej myszy, której wszczepiono guz. Procedura polega na przymocowaniu myszy do ramy stereotaktycznej, ponownym otwarciu poprzedniego miejsca operowanego w celu uzyskania dostępu do mózgu i wprowadzeniu specjalistycznej...

Resekcja guza mózgu u myszy przy użyciu minimalnie inwazyjnego systemu resekcji

Opisujemy metodę obrazowania odpowiedzi na leczenie przeciwnowotworowe in vivo i w rozdzielczości pojedynczej komórki.

Obrazowanie na żywo odpowiedzi na leki w mikrośrodowisku guza w mysich modelach raka piersi

Przedstawiona tutaj jest prosta metoda izolacji i analizy metodą cytometrii przepływowej komórek jednojądrzastych krwi obwodowej naciekającej glejak, która dostarcza zależnych od czasu danych ilościowych na temat liczby i statusu aktywacji komórek odpornościowych wchodzących do wczesnego mikrośrodowiska guza mózgu.

Izolacja i analiza cytometryczna przepływowa jednojądrzastych komórek krwi obwodowej naciekających glejaka

Ten manuskrypt opisuje rozwój modelu zwierzęcego, który pozwala na bezpośrednie testowanie wpływu niedotlenienia guza na przerzuty i rozszyfrowywanie mechanizmów jego działania. Chociaż opisane tutaj eksperymenty koncentrują się na mięsaku Ewinga, podobne podejście można zastosować do innych typów nowotworów.

In vivo (in vivo) Model do badania wpływu hipoksji na przerzuty nowotworu

Ten protokół opisuje wszczepienie szklanego okienka do rdzenia kręgowego myszy w celu ułatwienia wizualizacji za pomocą mikroskopii przyżyciowej.

Laminektomia i implantacja okienka rdzenia kręgowego u myszy

Szczegółowo opisujemy klinicznie istotny model raka jelita grubego z przerzutami do wątroby (CRLM) oraz wpływ reperfuzji niedokrwienia wątroby (I/R) na wzrost guza i przerzuty. Model ten może pomóc w lepszym zrozumieniu mechanizmów leżących u podstaw indukowanego przez operację wzrostu przerzutów do wątroby.

Mysi model przerzutowych guzów wątroby w warunkach uszkodzenia reperfuzyjnego niedokrwiennego

W tym protokole opisujemy mysi model niekompletnej chirurgicznej resekcji mięsaka tkanek miękkich do testowania terapii (neo)adjuwantowych.

Mysi model niekompletnie wyciętego mięsaka tkanek miękkich do testowania terapii (neo)adjuwantowych

Przedstawiamy protokół odsłaniania pnia mózgu dorosłej myszy od strony brzusznej. Dzięki zastosowaniu soczewki o indeksie gradientowo-refrakcyjnym z miniaturowym mikroskopem, obrazowanie wapnia można wykorzystać do zbadania aktywności somatów nerwowych dolnych oliwek in vivo.

In vivo (in vivo) Obrazowanie wapnia u myszy z oliwek dolnych

Obecny protokół opisuje standaryzowaną resekcję guzów mózgu u gryzoni za pomocą minimalnie inwazyjnego podejścia ze zintegrowanym systemem konserwacji tkanek. Technika ta ma implikacje dla dokładnego odzwierciedlenia standardu opieki w modelach gryzoni i innych zwierząt.

Wdrożenie minimalnie inwazyjnej resekcji guza mózgu u gryzoni w celu pobrania tkanek o wysokiej żywotności

Poznaj protokół znieczulenia dożylnego propofolem u myszy podczas operacji resekcji nowotworu. Ta metoda pozwala badać wpływ anestezji na wyniki onkologiczne i nawrót raka po zabiegu chirurgicznym.

Mysi model in vivo całkowitego znieczulenia dożylnego podczas operacji resekcji raka

Przeglądaj więcej filmów