Labeling of Extracellular Vesicles for Monitoring Migration and Uptake in Cartilage Explants

Maria Ant&#242;nia Forteza-Genestra; Miquel Antich-Rossell&#243;; Francisco Gabriel Ortega; Guillem Ramis-Munar; Javier Calvo; Antoni Gay&#224;; Marta Monjo; Joana Maria Ramis

doi:10.3791/62780

Znakowanie pęcherzyków zewnątrzkomórkowych w celu monitorowania migracji i wychwytu w eksplantata...

JoVE Journal
Bioengineering

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Bioengineering

Labeling of Extracellular Vesicles for Monitoring Migration and Uptake in Cartilage Explants

Znakowanie pęcherzyków zewnątrzkomórkowych w celu monitorowania migracji i wychwytu w eksplantatach chrząstki

Full Text

3,246 Views

07:58 min

October 4, 2021

DOI: 10.3791/62780-v

Maria Antònia Forteza-Genestra^1,2, Miquel Antich-Rosselló^1,2, Francisco Gabriel Ortega^1,2, Guillem Ramis-Munar³, Javier Calvo^1,2,4, Antoni Gayà^1,2,4, Marta Monjo^1,2, Joana Maria Ramis^1,2

¹Cell Therapy and Tissue Engineering Group, Research Institute on Health Sciences (IUNICS),University of the Balearic Islands, ²Health Research Institute of the Balearic Islands (IdISBa), ³Cellomics Unit, Institut Universitari d'Investigació en Ciències de la Salut (IUNICS),Universitat de les Illes Balears, ⁴Fundació Banc de Sang i Teixits de les Illes Balears (FBSTIB)

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol describes a method for labeling extracellular vesicles (EVs) derived from platelet lysate to observe their migration and uptake in cartilage explants, a model for osteoarthritis. The technique utilizes confocal microscopy for monitoring EV distribution and behavior in therapeutic contexts.

Key Study Components

Area of Science

Neuroscience
Cell Biology
Osteoarthritis Research

Background

Extracellular vesicles play a crucial role in intercellular communication.
Understanding EV behavior can provide insights into therapeutic applications.
Monitoring EVs in cartilage can help elucidate mechanisms in osteoarthritis.
Confocal microscopy is a powerful tool for visualizing EVs in biological samples.

Purpose of Study

To develop a straightforward protocol for labeling EVs.
To facilitate the monitoring of EV migration and uptake in cartilage explants.
To enhance the understanding of EV distribution in therapeutic settings.

Methods Used

Labeling of platelet lysate-derived EVs.
Use of confocal microscopy for imaging.
Preparation of columns and concentration of EV samples.
Consideration of particle loss during purification.

Main Results

The protocol allows for effective labeling and monitoring of EVs.
Confocal microscopy provides clear imaging of EV distribution.
EV migration and uptake can be easily assessed in cartilage explants.
The method is applicable for both in vitro and in vivo experiments.

Conclusions

This protocol is a valuable tool for researchers studying EVs in osteoarthritis.
It simplifies the process of monitoring EV behavior in biological models.
Future studies can leverage this technique for therapeutic evaluations.

Frequently Asked Questions

What are extracellular vesicles?

Extracellular vesicles are small membrane-bound particles released by cells that play a role in cell communication.

How does confocal microscopy work?

Confocal microscopy uses laser light to scan samples and create high-resolution images by eliminating out-of-focus light.

Why is monitoring EVs important in osteoarthritis research?

Monitoring EVs can provide insights into their role in disease mechanisms and potential therapeutic applications in osteoarthritis.

What are the key steps in the EV labeling protocol?

Key steps include concentrating the EV sample, preparing columns, and ensuring adequate initial volumes for labeling.

Can this protocol be used for other types of experiments?

Yes, the protocol is adaptable for both in vitro and in vivo studies involving EVs.

Tutaj prezentujemy protokół oznaczania pęcherzyków zewnątrzkomórkowych pochodzących z lizatu płytkowego w celu monitorowania ich migracji i pobierania w eksplantatach chrząstek, używanych jako model choroby zwyrodnieniowej stawów.

Ten prosty protokół pozwala na oznaczanie EV i monitorowanie ich za pomocą mikroskopii konfokalnej. Na przykład obrazowanie EV może pomóc w ocenie dystrybucji EV w przypadku stosowania go w terapii. Technika ta pozwala na łatwe monitorowanie migracji i wychwytu EV w eksplantatach chrząstek, za pomocą mikroskopii konfokalnej bez żadnej specjalnej funkcji.

Ten sam protokół może być stosowany w przypadku EV w eksperymentach in vitro lub in vivo. Upewnij się, że kolumny są przygotowane wcześniej i że początkowa objętość EV jest wystarczająca do osiągnięcia pożądanego końcowego stężenia cząstek, biorąc pod uwagę, że około 10% cząstek zostanie utraconych na etapie oczyszczania. Zacznij od zagęszczenia pęcherzyka zewnątrzkomórkowego lub EV próbki i kontroli.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Explore More Videos

Pęcherzyki zewnątrzkomórkowe znakowanie EV monitorowanie migracji monitorowanie wychwytu mikroskopia konfokalna eksplantaty chrząstek oczyszczanie EV analiza śledzenia nanocząstek łącznik PKH26 roztwór barwnika albumina surowicy bydlęcej eksperymenty in vitro eksperymenty in vivo