Stymulacja opony twardej i okołooczodołowe testy von Freya u myszy jako przedkliniczny model bólu głowy

Jakie zdarzenia zachodzą w oponach mózgowych, które przyczyniają się do bólu głowy przy braku uszkodzenia tkanek? W przeciwieństwie do wcześniejszego stosowania modeli stymulacji opony twardej u szczurów, pozwala to na wykorzystanie obszernego katalogu genetycznie modyfikowanych myszy. Podstawową walką byłoby zlokalizowanie skrzyżowania szwów lambdoidalnych i strzałkowych poprzez badanie palpacyjne czaszki za pomocą wstrzykiwacza.

Na początek stwórz zaparzacze dla myszy, modyfikując dostępną w handlu kaniulę wewnętrzną i zaparzacz za pomocą nasadki z tworzywa sztucznego ze stopionej krzemionki, która jest regulowana i wkładana do kaniuli prowadzącej o rozmiarze 28. Użyj suwmiarki, aby wyregulować nasadkę z tworzywa sztucznego ze stopionej krzemionki na zaparzaczu bez zginania zaparzacza. Dostosuj zaparzacz do długości 6 milimetrów mierzonej od końcówki zaparzacza do krawędzi nasadki z tworzywa krzemionkowego.

Wykonaj zastrzyki pilotażowe dla innych szczepów myszy i dostosuj długość, aby precyzyjnie wstrzyknąć oponę twardą. Następnie przymocuj długi koniec zaparzacza do plastikowej rurki o długości ośmiu cali lub więcej, aby pomieścić objętość pięciu mikrolitrów. Włóż rurkę, upewniając się, że metalowa część i górna część plastikowego korka znajdującego się na zaparzaczu, aby zapobiec gromadzeniu się pęcherzyków powietrza w przewodzie.

Następnie napełnij mikrostrzykawkę i przymocuj drugi koniec rurki do szklanej mikrostrzykawki o pojemności 10 mikrolitrów, zapewniając szczelne uszczelnienie nad metalową częścią strzykawki. Następnie napełnij strzykawkę pięcioma mikrolitrami PBS lub syntetycznego płynu śródmiąższowego lub innymi wybranymi nośnikami, aby zapobiec tworzeniu się pęcherzyków powietrza. W razie potrzeby zalej linię pojazdem, aby rozproszyć wcześniej uformowane pęcherzyki.

Alternatywnie, należy wstępnie napełnić strzykawkę, a po podłączeniu przepchnąć płyn przez podłączony przewód. Gdy linia wypełniona pojazdem zacznie działać wydajnie, załaduj pięć mikrolitrów roztworu do strzykawki Hamiltona. Gdy mysz zostanie całkowicie znieczulona, nałóż sterylną maść okulistyczną na oczy i ogol głowę zwierzęcia, a następnie zdezynfekuj skórę jodonem powidonu i etanolem.

Jedną ręką ustabilizuj głowę zwierzęcia, a drugą przytrzymaj zaparzacz ze strzykawką z lekiem. Następnie za pomocą zaparzacza dokładnie zbadaj, zlokalizuj i zweryfikuj połączenie szwów strzałkowych i lambdoidalnych na czaszce myszy. Po zlokalizowaniu szwu i umieszczeniu zaparzacza na miejscu, powoli i delikatnie poruszaj zaparzaczem w przód iw tył, aż zaparzacz przebije się przez skórę i opadnie do złącza aż do plastikowego korka, zapewniając włożenie całej 6-milimetrowej końcówki zaparzacza do złącza.

Następnie powoli wciśnij tłok strzykawki, aby usunąć pięć mikrolitrów płynu do opony twardej. W dniu testu, po aklimatyzacji do pokoju, wyjmij jedną mysz wraz z kubkiem z odpowiedniej komory. Utrzymuj kubek w pozycji poziomej, aby zapewnić równomierne rozłożenie ciężaru ciała, ponieważ nierównomierny rozkład ciężaru może zmienić reakcję zwierzęcia lub ją uniemożliwić.

Umieść kubek z myszką na podkładce chłonnej umieszczonej na stole pod stojakiem do testów. Następnie, w celu okołooczodołowego testu von Freya, umieść 07-gramowe włókno von Freya na środku twarzy między oczami i wywieraj wystarczający nacisk na włókno, aby włosy von Freya wygięły się w formację w kształcie litery C. Utrzymuj kontakt z filamentem przez około trzy do pięciu sekund lub do momentu, gdy mysz odsunie filament za pomocą głowy lub łap.

Aby postępować zgodnie z metodą Dixona góra-dół, nałóż następny filament o mniejszej wadze, jeśli mysz reaguje na filament, w przeciwnym razie zastosuj filament o większej wadze. Zabieg został wykorzystany do zbadania wpływu prolaktyny opony twardej na mechanicznie wywołaną nadwrażliwość twarzy. Wyniki badania wykazały znacznie obniżone progi wycofania twarzy u samic myszy ICR w odpowiedzi na pięć mikrogramów prolaktyny opony twardej.

Dziesięciokrotnie niższa dawka 5 mikrogramów prolaktyny wykazała również obniżone progi wycofania twarzy, podobnie jak w przypadku wysokiej dawki prolaktyny. Zastrzyki z prolaktyny wywoływały spontaniczne zachowania związane z bólem, które oceniano za pomocą grymasu. Opona twarda 5 mikrogramów prolaktyny spowodowała znaczny grymas u samic myszy i dodatkowo wykazała wyraźną rolę prolaktyny opony twardej w zachowaniach podobnych do migreny u kobiet Testy behawioralne z użyciem włókien von Freya lub grymasu twarzy w celu ustalenia, czy bodziec, przy braku urazu, powoduje reakcję na ból głowy.

Technika ta może być teraz wykorzystana do badania mechanizmów zapalnych w oponach mózgowych bez obaw o zastrzeżenia spowodowane kraniotomią i późniejszym stanem zapalnym.