Name: Ocena dyskinez wywołanych L-DOPA w jednostronnie szczurzym modelu choroby Parkinsona z 6-OHDA (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-10-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: Poznaj metodę oceny dyskinez wywołanych L-DOPA w szczurzym modelu 6-OHDA choroby Parkinsona. Technika ta pozwala systematycznie oceniać ruchy patologiczne i rozwijać nowe terapie antydyskinezyjne.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ta praca była wspierana przez Fundację Badawczą São Paulo (FAPESP, grant 2017/00003-0). Jesteśmy wdzięczni za Koordynację na rzecz Doskonalenia Kadr Szkolnictwa Wyższego (CAPES). Dziękujemy dr Anthony'emu R. Westowi, dr Heinzowi Steinerowi i dr Kuei Y. Tsengowi za wsparcie i mentoring.

Wszystkie eksperymenty zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi Komitetu Etyki Wydziału Filozofii, Nauk i Literatury w Ribeirão Preto (CEUA/FFCLRP 18.5.35.59.5).
1. Lesja 6-OHDA
<ol>
	<li>Wykorzystaj samce szczurów rasy Sprague-Dawley o masie 200-250 g na początku eksperymentów (6 tygodni). Utrzymuj zwierzęta (2-3 w klatce) w standardowych warunkach laboratoryjnych (cykl światła/ciemności 12:12 h, włączanie światła o 06:00 h, pomieszczenia z kontrolowaną temperaturą (22-24 °C), z dostępem do pokarmu i wody ad libitum. 
	UWAGA: Pełny opis sposobu generowania ciężkich uszkodzeń indukowanych 6-OHDA u szczurów opisano w innym opracowaniu42.</li>
	<li>Odpowiednio aklimatyzuj zwierzęta przed rozpoczęciem jakiejkolwiek procedury eksperymentalnej.</li>
	<li>Podaj (dojsiewnie, i.p.) inhibitor transportera norepinefryny, imipraminę (20 mg/kg, rozpuszczoną w 0,9% roztworze soli fizjologicznej) 30 min przed operacją. 
	UWAGA: Podanie imipraminy zwiększy selektywność 6-OHDA wobec neuronów dopaminergicznych.</li>
	<li>Podaj ketaminę/ksylazynę (70/10 mg/kg) dojśniewnie.</li>
	<li>Upewnij się, że zwierzę znajduje się w głębokiej narkozie (brak reakcji na uszczypnięcie palca) i jest umieszczone w pozycji brzusznej w aparacie stereotaksycznym na podkładce grzewczej.</li>
	<li>Usuń sierść z głowy i zdezynfekuj pole operacyjne 3 razy, naprzemiennie używając preparatu na bazie jodu oraz alkoholu.</li>
	<li>Za pomocą skalpela wykonaj nacięcie (około 1 cm) w miejscu, w którym zostanie wykonana mikroiniekcja.</li>
	<li>Oczyść obszar czaszki za pomocą patyczków higienicznych i upewnij się, że punkty Bregma i Lambda są odsłonięte.</li>
	<li>Upewnij się, że stereotaksyczne współrzędne MFB są odmierzone od bregma43,44,45: -4,3 mm przednio, 1,6 mm bocznie (strona prawa) i 8,3 mm brzusznie (od opony twardej).</li>
	<li>Podaj 6-OHDA z prędkością 0,4 µL/min (10 µg w 4 µL roztworu soli fizjologicznej zawierającego 0,1% kwasu askorbinowego) jednostronnie do prawego wiązki przedniego pola mózgu (MFB), używając szklanej strzykawki Hamiltona o pojemności 50 µL.</li>
	<li>Po zakończeniu operacji zaszyj nacięcie skóry głowy i nawodnij zwierzę ciepłym (~37 °C) sterylnym 0,9% roztworem soli fizjologicznej (~10 mL/kg, s.c.).</li>
	<li>Wyjmij zwierzę z ramy stereotaksycznej i umieść w ogrzewanej klatce do rekonwalescencji. Monitoruj do momentu odzyskania przytomności.</li>
	<li>Oceń skuteczność uszkodzenia dopaminergicznego 4 tygodnie po zabiegu, przeprowadzając test kroków (stepping test)46,47. 
	​UWAGA: W teście tym ocenia się akinezję kończyny przedniej przeciwległej do uszkodzenia poprzez liczbę kroków korygujących wykonywanych przednią łapą przeciwległą do uszkodzenia. Szczury wykonujące trzy lub mniej kroki korygujące kończyną przednią przeciwległą są włączane do badania jako domniemane szczury z ciężkim uszkodzeniem indukowanym 6-OHDA48.</li>
</ol>
2. Przewlekłe leczenie L-DOPA
<ol>
	<li>Rozpocząć przewlekłe leczenie w poniedziałek, 4 tygodnie po uszkodzeniu 6-OHDA. 
	UWAGA: Ponieważ AIM będą nagrywane wideo przez 3 kolejne dni w tygodniu (środa, czwartek i piątek) przez 3 tygodnie, zaleca się rozpoczęcie leczenia w poniedziałek.</li>
	<li>Podawać szczurom świeżo przygotowaną L-DOPA (podskórnie (s.c.), 1 mL/kg) wraz z chlorowodorkiem benserazydy (odpowiednio 5 mg/kg i 12,5 mg/kg) przez 3 tygodnie, raz dziennie od poniedziałku do piątku45. 
	UWAGA: Po ich wykształceniu, AIM będą pojawiać się przy każdym podaniu L-DOPA. W związku z tym podawanie L-DOPA 2–4 razy w tygodniu po 3-tygodniowym okresie indukcji jest wystarczające do utrzymania stabilnej ekspresji AIM48.</li>
</ol>
3. Rejestracja i ocena AIMs
<ol>
	<li>Przeprowadzaj eksperymenty między godziną 09:00 a 17:00. Upewnij się, że badacz nie posiada żadnej wiedzy na temat tożsamości szczurów i zastosowanego leczenia farmakologicznego.</li>
	<li>Ostrożnie umieść szczura wewnątrz przezroczystego cylindra (średnica 20 cm x wysokość 40 cm) i pozwól mu na aklimatyzację przez co najmniej 15 min. Upewnij się, że podłoże jest pokryte materiałem ściółkowym. Za cylindrem należy umieścić lustra, aby eksperymentator mógł obserwować zwierzę ze wszystkich możliwych kątów. 
	UWAGA: Jeśli w eksperymencie bierze udział więcej niż jeden szczur, użyj osobnego cylindra dla każdego zwierzęcia. Manipulowanie zwierzętami między sesjami może zakłócić analizę behawioralną.</li>
	<li>Ustaw kamerę wideo o wysokiej rozdzielczości w sposób, który ułatwia obserwację osiowych, kończynowych oraz orolingwalnych AIMs. Ponieważ w tych warunkach eksperymentalnych występuje zachowanie rotacyjne, lustra za cylindrem pozwolą na śledzenie AIMs pod kątem 360°. Użyj statywu lub przymocuj kamerę bezpośrednio do blatu. 
	UWAGA: Ocena orolingwalnych AIMs może być trudna, zwłaszcza przy wysokiej częstotliwości zachowań rotacyjnych. Nagrywanie filmów kamerą ustawioną nieco poniżej poziomu zwierząt pod kątem 15° pomoże w obserwacji tego podtypu ruchów.</li>
	<li>Delikatnie wyjmij zwierzę z cylindra i podaj L-DOPA (5 mg/kg w połączeniu z 12,5 mg/kg benserazydem, s.c.).</li>
	<li>Umieść zwierzę z powrotem w cylindrze i uruchom stoper, aby śledzić AIMs po wstrzyknięciu L-DOPA. Użyj kamery wideo, aby rejestrować AIMs przez 180 min po podaniu L-DOPA. Chociaż analiza może być przeprowadzona poprzez bezpośrednią obserwację zwierzęcia, zalecana jest ocena offline. 
	UWAGA: Upewnij się, że stoper jest również nagrywany, aby AIMs mogły być oceniane w precyzyjnych odstępach czasu po podaniu L-DOPA.</li>
	<li>Oceniaj AIMs w odstępach 30 min aż do 180 min po wstrzyknięciu L-DOPA (definicje w Tabeli 1), zgodnie z pierwotnym opisem20,23. Wyniki należy przypisywać w epokach trwających 1-2 min i klasyfikować jako osiowe, kończynowe lub orolingwalne (Rycina 1).</li>
	<li>Uważnie obserwuj każdy AIM i przypisz oceny pod kątem nasilenia oraz amplitudy. Instrukcje znajdują się w Tabeli 1. W ocenie nie należy uwzględniać normalnych zachowań, takich jak wspięcie się na tylne łapy, węszenie, pielęgnacja (grooming) i gryzienie. Łącznie będzie sześć okresów obserwacji (30, 60, 90, 120, 150 i 180 min).</li>
</ol>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>PODTYPY</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osiowa: skręcanie głowy, szyi i tułowia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kończyna: ruchy mimowolne zarówno w części dystalnej, jak i proksymalnej kończyny przedniej</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orolingualne: mimowolne ruchy mięśni twarzy i jamy ustnej</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CIĘŻKIEGO PRZEBIEGU</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0: Brak</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1: Sporadyczne (z przerwami, obecne przez mniej niż połowę czasu obserwacji)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2: Częste (z przerwami, ale występujące przez więcej niż połowę czasu obserwacji)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3: Ciągły, lecz przerywany przez zewnętrzne bodźce sensoryczne</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4: Ciągły i niezakłócony przez zewnętrzne bodźce sensoryczne</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMPLITUDA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osiowy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1: Skręt głowy i szyi na około 30° kąt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2: Skręt głowy i szyi pod kątem około 30° &lt; kąt ≤ 60°</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3: Rotacja głowy, szyi i górnej części tułowia o około 60° &lt; kąt ≤ 90°</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4: Skręt głowy, szyi i tułowia w &gt; 90° kąt, co często powoduje utratę równowagi u szczura</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kończyna</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1: Małe mimowolne ruchy dystalnej części kończyny przedniej</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2: Ruchy o niskiej amplitudzie powodujące translokację zarówno dystalnej, jak i proksymalnej części kończyny przedniej</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3: Mimowolne ruchy całej kończyny, w tym mięśni obręczy barkowej</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4: Silne ruchy kończyn i barków, często przypominające ballizm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jamowo-językowy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1: Niewielkie mimowolne ruchy mięśni twarzy i jamy ustnej</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2: Ruchy gębowo-twarzowe o wysokiej amplitudzie z wysunięciem języka</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1: Definicja i kryteria oceny AIMS.
<img alt="Badanie behawioralne gryzoni; sekwencja obrazów przedstawiająca ruchy osiowe, kończyn oraz ruchy żuchwowo-językowe; konfiguracja analizy." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62924/62924fig01.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1: Sekwencja zdjęć przedstawiająca poszczególne podtypy AIM. (A do A'") Osiowe AIM wykazujące ruchy przypominające dystonię pod różnymi kątami (A: kąt 30°, A': 30° &lt; kąt ≤ 60°, A": 60° &lt; kąt ≤ 90° oraz A'": kąt &gt; 90°). (B do B") AIM kończyn (czarne strzałki) wykazujące mimowolne ruchy części dystalnej (B i B') oraz całej przedniej kończyny (łącznie z barkiem, B"). (C) AIM żuchwowo-językowe (czerwona strzałka) o wysokiej amplitudzie z wysunięciem języka. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62924/62924fig01large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
4. Analiza danych
<ol>
	<li>Oblicz podtypy AIMs dla obszaru osiowego, kończyn lub obszaru obrębu jamy ustnej i języka, mnożąc wyniki nasilenia i amplitudy dla każdego okresu obserwacji po podaniu L-DOPA (tj. sześciu okresów obserwacji), zgodnie z wcześniejszym opisem20. Teoretyczna maksymalna liczba punktów, jaką jedno zwierzę może zgromadzić w jednej sesji testowej, wynosi 240 (maksymalna liczba punktów na okres obserwacji to 40, szczegóły znajdują się w Tabeli 1).</li>
	<li>Przedstaw na wykresie wyniki AIMs dla wszystkich sześciu okresów obserwacji zarejestrowanych w środy, czwartki i piątki w ciągu 3 tygodni przewlekłego podawania L-DOPA (Rysunek 2). Wyniki AIMs można zsumować, aby wskazać maksymalną liczbę punktów każdego zwierzęcia w każdym dniu oceny (Rysunek 3) lub w każdym tygodniu (Rysunek 4) w ciągu 3 tygodni przewlekłego podawania L-DOPA.</li>
	<li>Przed wyborem metody analizy statystycznej sprawdź, czy dane mają rozkład zbliżony do normalnego. 
	UWAGA: Skale ocen AIMs składają się z danych porządkowych i mogą być analizowane za pomocą statystyki nieparametrycznej. Testy parametryczne są powszechnie stosowane przy porównywaniu wyników AIMs w grupach eksperymentalnych po wielokrotnych sesjach testowych40.</li>
</ol>

Autorzy nie pozostają w konflikcie interesów.

Protokół ten pokazuje, jak indukować i analizować AIM w szczurzym modelu PD indukowanego przez jednostronne mikrowstrzyknięcie 6-OHDA do MFB. Przewlekłe codzienne podawanie małych dawek L-DOPA (5 mg/kg mc. w skojarzeniu z 12,5 mg/kg benzerazydu) powodowało rozwój AIM w ciągu 3 tygodni leczenia. Analiza czasowa wykazała znaczny wzrost AIM i dyskinezę dawki szczytowej obserwuje się między 30 a 90 minutą po podaniu L-DOPA. AIM to powtarzające się i bezcelowe ruchy wpływające na mięśnie osiowe, kończynowe i ustno-językowe. P...

Prekursor dopaminy L-3,4-dihydroksyfenyloalanina (L-DOPA) stanowi najskuteczniejsze leczenie objawów motorycznych choroby Parkinsona (PD)1. Terapia L-DOPA może łagodzić objawy motoryczne związane z chorobą Parkinsona, ale z czasem traci skuteczność. Wahania motoryczne, takie jak "fluktuacja zaniku" lub "pogorszenie stanu pod koniec dawki", objawiają się klinicznie skróceniem czasu działania pojedynczych dawek L-DOPA2. W innych przypadkach objawy kliniczne składają się z powolnych ruchów skrętnych i nieprawidłowej postawy (dystonia)3 i występują, gdy poziom dopaminy jest niski (dystonia poza okresem)4. Z drugiej strony, dyskinezy wywołane przez L-DOPA (LID) pojawiają się, gdy poziom dopaminy w osoczu i mózgu jest wysoki5.
LIDs powodują wyniszczające skutki uboczne, które obejmują komplikacje motoryczne, takie jak ruchy pląsawicowe, dystoniczne i balistyczne6. Po ustaleniu, LID występują po każdym podaniu L-DOPA. Powikłania motoryczne występują u 40%-50% pacjentów z chorobą Parkinsona poddawanych terapii L-DOPA przez 5 lat, a częstość występowania wzrasta wraz z upływem lat7. Chociaż mechanizmy patofizjologiczne zaangażowane w rozwój LIDs u pacjentów z chorobą Parkinsona nie są jeszcze w pełni wyjaśnione, zakres odnerwienia dopaminergicznego, pulsacyjne podawanie L-DOPA, dalsze zmiany w białkach i genach prążkowia oraz nieprawidłowości w systemach przekaźników niedopaminowych są czynnikami, które przyczyniają się do rozwoju tych niepożądanych skutków ubocznych6,8,9,10.
Neurotoksyna 6-hydroksydopamina (6-OHDA) jest dobrze scharakteryzowanym narzędziem do badania PD u gryzoni11,12,13,14. Ponieważ 6-OHDA nie przenika przez barierę krew-mózg, musi być wstrzykiwany bezpośrednio do szlaku nigrostriatal. Zubożenie dopaminergiczne wywołane przez 6-OHDA jest zależne od stężenia i miejsca15. Jednostronne podanie 6-OHDA w przyśrodkowym pęczku przodomózgowia (MFB) może spowodować poważne (>90%) uszkodzenie nigrostriatalne u gryzoni16,17,18,19. Przewlekłe podawanie L-DOPA ciężkim jednostronnie zmienionym 6-OHDA gryzoniom powoduje pojawienie się ruchów podobnych do dyskinetycznych zwanych nieprawidłowymi ruchami mimowolnymi (AIM ). Ruchy podobne do dyskinetycznych u gryzoni mają podobne mechanizmy molekularne, funkcjonalne i farmakologiczne związane z LIDs u pacjentów z chorobą Parkinsona5. Dlatego szczury z uszkodzeniami 6-OHDA20 i myszy21 są cennymi modelami przedklinicznymi do badania LIDs. W przypadku przewlekłego leczenia (7-21 dni) dawkami terapeutycznymi L-DOPA (5-20 mg/kg), jednostronnie szczury i myszy z 6-OHDA wykazują stopniowy rozwój AIM, które wpływają na kończyny przednie, tułów i mięśnie ustno-twarzowe przeciwlegle do zmiany17,18,19,20,22,23,24. Ruchy te są prezentowane w czasie podobnym do dyskinez szczytowych dawek wywołanych L-DOPA u pacjentów z PD25 i charakteryzują się hiperkinetycznymi ruchami i dystonią5. AIM są zwykle oceniane na podstawie ich dotkliwości (np. gdy występuje określony AIM) i amplitudy (np. charakteryzowanej przez amplitudę każdego ruchu)5,23,25.
6-OHDA-lesioned modele gryzoni LID prezentują ważność twarzy (tzn. model ma kilka cech, które wyglądają jak ludzka kondycja)5,11,26,27,28. AIM gryzoni, podobne do tego, co występuje u pacjentów z chorobą Parkinsona, są postrzegane jako ruchy hiperkinetyczne (kończyny przednie i ustnojęzykowe) i dystoniczne (osiowe) 29 i naśladują dyskinezę ze szczytową dawką. Na poziomie molekularnym i funkcjonalnym modele gryzoni mają wiele wspólnych cech patologicznych z pacjentami z PD5, takie jak regulacja w górę FosB/ΔFosB19,26,30,31,32,33 i transporter serotoniny (SERT)34,35. Jeśli chodzi o trafność predykcyjną, leki zmniejszające LIDs u pacjentów z PD (np. antagonista receptora N-metylo-D-asparaginianu (NMDA) amantadyna) wykazują skuteczność przeciwdyskinetyczną w modelu gryzoni22,36,37,38,39.
Skala oceny AIMów gryzoni została stworzona na podstawie czterech podtypów AIM obejmujących AIM wpływające na głowę, szyję i tułów (osiowe AIM ), hiperkinetyczne ruchy kończyn przednich (AIMy kończyn) i dyskinetyczne ruchy ustno-językowe (AIMy ustnojęzyczne). Chociaż rotacja kontralateralna (AIMy lokomotywy) występuje również u gryzoni z jednostronnym uszkodzeniem20,22,23,25,40, nie został oceniony jako ruch podobny do dyskinetycznego, ponieważ może nie reprezentować określonej miary LIDs22,37,41.
Tutaj opiszemy, jak indukować i analizować ruchy podobne do dyskinetycznych (osiowe, kończynowe i ustnojęzykowe) w ciężkim (>90%) jednostronnie uszkodzonym modelu szczurzym PD z 6-OHDA. Ułożyliśmy nasz protokół w oparciu o dotychczasową literaturę i naszą wiedzę laboratoryjną.

<table><tbody><tr><td>Bromowodorek 6-hydroksydopaminy</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>H6507</td><td>Neurotoksyna powodująca zwyrodnienie zakończeń katecholaminergicznych</td></tr><tr><td>Chlorowodorek benzerazydu</td><td>Sigma</td><td>B7283</td><td>Obwodowy inhibitor dopa-dekarboksylazy</td></tr><tr><td>Kamera Bullet IR Turbo HD (HD-TVI)&nbsp; 2.8mm B</td><td>HIKVISION</td><td>DS-2CE16C0T-IRP</td><td>Kamera służąca do nagrywania wszystkich zachowań</td></tr><tr><td>Imipramina chlorek hidrochlorku</td><td>Alfa Aesar</td><td>J63723</td><td>Inhibitor transportera noradrenaliny (NET) stosowany do ochrony neuronów noradrenergicznych przed chlorowodorkiem ketaminy 6-OHDA</td></tr><tr><td></td><td>Ceva Animal Health</td><td></td><td>Anestezja do interwencji chirurgicznej</td></tr><tr><td>Ester metylowy (chlorowodorek L-3,4-dihydroksyfenyloalaniny (L-DOPA)</td><td></td> <td>16149</td><td>Prekursor dopaminy</td></tr><tr><td>Lustra</td><td></td><td></td><td>Służy do obserwacji zachowania zwierząt podczas eksperymentów we wszystkich kierunkach</td></tr><tr><td>Igły 0,30 x 13 mm</td><td>PrecisionGlide</td><td></td><td>Igły używane do wstrzykiwania narkotyków</td></tr><tr><td>Chlorek sodu (NaCl)</td>Strzykawki <td>solne Samtec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 ml Sterylne</td><td>strzykawki</td><td>BD Plastipak</td><td></td> używane do wstrzykiwania narkotyków</tr><tr><td>Przezroczyste cylindry</td><td></td><td></td><td>Służy do rejestrowania zachowania zwierząt podczas eksperymentów</td></tr><tr><td>Chlorowodorek ksylazyny</td><td>Ceva Animal Health</td><td></td><td>Środek uspokajający, przeciwbólowy i zwiotczający mięśnie do interwencji chirurgicznej</td></tr></tbody></table>

ocena dyskinez wywołanych l-dopa w jednostronnie szczurzym modelu choroby parkinsona z 6-ohda

Rating L-DOPA-Induced Dyskinesias in the Unilaterally 6-OHDA-Lesioned Rat Model of Parkinson's Disease

Dyskinezy wywołane L-DOPA (LID) odnoszą się do powikłań motorycznych, które wynikają z długotrwałego podawania L-DOPA pacjentom z chorobą Parkinsona (PD). Najczęstszym wzorcem obserwowanym w klinice jest dyskineza szczytowej dawki, która składa się z klinicznych objawów ruchów pląsawicowych, dystonicznych i balistycznych. Szczurzy model 6-hydroksydopaminy (6-OHDA) PD naśladuje kilka cech LID. Po wielokrotnym podaniu L-DOPA, szczury z uszkodzeniami 6-OHDA wykazują ruchy podobne do dyskinetycznych (np. Nieprawidłowe ruchy mimowolne, AIM ). Protokół ten pokazuje, jak indukować i analizować AIM u szczurów z uszkodzeniem 6-OHDA z 90%-95% zubożeniem dopaminergicznym w szlaku nigrostriatalnym. Wielokrotne podawanie (3 tygodnie) L-DOPA (5 mg/kg mc. w połączeniu z 12,5 mg/kg benzerazydu) może wywołać rozwój AIM Analiza przebiegu czasowego ujawnia znaczny wzrost AIM po 30-90 minutach (dyskineza dawki szczytowej). Modele LID u gryzoni są ważnym narzędziem przedklinicznym do identyfikacji skutecznych interwencji antydyskinetycznych.

Chociaż wzorce AIMs obserwowane u szczurów są prostsze i bardziej ograniczone w porównaniu z tymi zaobserwowanymi u ludzi i naczelnych, model ten odzwierciedla zarówno ruchy hiperkinetyczne, jak i ruchy przypominające dystonię wywołane przewlekłym podawaniem L-DOPY. Przedstawiamy tutaj dane zebrane z grupy (n = 10) szczurów z jednostronną lekcją 6-OHDA, które były leczone przewlekle L-DOPĄ (5 mg/kg w połączeniu z 12,5 mg/kg benserazydem) przez 3 tygodnie (od poniedziałku do piątku). Należy zauważyć, że dane przedstawione...

Modele dyskinez wywołanych przez L-DOPA są nieocenionymi narzędziami do identyfikowania interwencji terapeutycznych w celu osłabienia rozwoju lub złagodzenia objawów, które pojawiają się w wyniku wielokrotnego podawania L-DOPA. Protokół ten pokazuje, jak indukować i analizować ruchy podobne do dyskinetycznych w jednostronnie zmienionym 6-OHDA szczurzym modelu choroby Parkinsona.

Ocena dyskinez wywołanych L-DOPA w jednostronnie szczurzym modelu choroby Parkinsona z 6-OHDA

L-DOPA-induced dyskinesias (LIDs) refer to motor complications that arise from prolonged L-DOPA administration to patients with Parkinson's disease (PD). ...

Ocena dyskinez wywołanych przez L-DOPA w szczurzym modelu choroby Parkinsona z 6-hydroksydopaminą jest ważnym narzędziem przedklinicznym do identyfikacji skutecznych interwencji antydyskinetycznych. Ten model jest stosunkowo prosty, przedstawia niski koszt i ma podobieństwa do tego, co dzieje się w klinice. Procedura zostanie zademonstrowana przez Danilo Leandro Ribeiro, doktoranta w laboratorium.Rozpocznij eksperyment od samców szczurów Sprague-Dawley o wadze od 200 do 250 gramów. Trzymanie od dwóch do trzech zwierząt w klatce w standardowych warunkach laboratoryjnych, z jedzeniem i wodą dostępną ad libitum. Przed zabiegiem należy podać szczurowi inhibitor transportera noradrenaliny, imipraminę, dootrzewnowo.Po potwierdzeniu znieczulenia przez brak reakcji na uszczypnięcie palca, umieść szczura w pozycji leżącej w aparacie stereotaktycznym na poduszce grzewczej. Po ustawieniu szczura użyj skalpela, aby wykonać jednocentymetrowe nacięcie w miejscu, w którym nastąpi mikrowstrzyknięcie. Następnie oczyść obszar czaszki bawełnianymi wacikami i upewnij się, że bregma i lambda są odsłonięte.Weźmy przyśrodkową wiązkę przodomózgowia lub MFB, współrzędne stereotaktyczne z bregma w odległośc

rating-l-dopa-induced-dyskinesias-unilaterally-6-ohda-lesioned-rat

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Choroba Parkinsona jest spowodowana utratą unerwienia dopaminergicznego prążkowia, którą można wywołać eksperymentalnie za pomocą 6-OH-dopaminy. Opisujemy sposób wykonania stereotaktycznej lekcji oraz monitorowania zachowania rotacyjnego indukowanego apomorfiną u myszy. Model ten jest użyteczny i wiarygodny w testowaniu nowych terapii choroby Parkinsona.

Model mysi choroby Parkinsona: od uszkodzenia dopaminergicznego 6-OHDA do testów behawioralnych

Opisano protokół wykonywania jednostronnych uszkodzeń wiązki przedniej części mózgu (MFB) za pomocą 6-OHDA u myszy. Metoda ta charakteryzuje się niskim wskaźnikiem śmiertelności (13,3 %), przy czym u 89% przeżywających zwierząt stwierdzono &gt;95% ubytku dopaminy w prążkowiu oraz tendencję do rotacji ipsypsilaternej w stronę strony uszkodzenia na poziomie 90,63±-4,02 %.

Opracowanie jednostronnego modelu choroby Parkinsona u myszy z wykorzystaniem lekcji 6-OHDA

Ten film pokazuje proces wywoływania dyskinez wywołanych lewodopą w modelu szczurzym z chorobą Parkinsona poprzez podawanie lewodopy wraz z inhibitorem konwersji dopaminy. Powtarzające się zastrzyki nadmiernie stymulują neurony mózgu, powodując dysfunkcję motoryczną.

Indukcja dyskinez wywołanych lewodopą w szczurzym modelu choroby Parkinsona

Model 6-hydroksydopaminy (6-OHDA) jest używany od dziesięcioleci do pogłębiania wiedzy na temat choroby Parkinsona. W tym protokole pokazujemy, jak wykonać jednostronne zmiany nigrostriatalne u szczura poprzez wstrzyknięcie 6-OHDA w pęczek przyśrodkowy przodomózgowia, ocenić deficyty motoryczne i przewidzieć zmiany za pomocą testu krokowego.

Szczurzy model choroby Parkinsona z 6-hydroksydopaminą

Ten artykuł opisuje metody wywoływania i oceny dyskinez wywołanych lewodopą w szczurzym modelu choroby Parkinsona. Protokół zawiera szczegółowe informacje dotyczące intensywności i częstotliwości szeregu zachowań dyskkinetycznych, zarówno dystonicznych, jak i hiperkinetycznych, zapewniając niezawodne narzędzie do testowania terapii ukierunkowanych na tę niezaspokojoną potrzebę medyczną.

Indukcja i ocena dyskinez wywołanych lewodopą w szczurzym modelu choroby Parkinsona

Ole Isacson przedstawia zwięzły przegląd choroby Parkinsona, jej przyczyn, strategii terapeutycznych oraz postępów w badaniach nad tą chorobą.

Ole Isacson: Opracowanie nowych terapii choroby Parkinsona

Skala sprawnego sięgania dzieli ruch przedniej kończyny podczas próby zdobycia pokarmu na elementy składowe, z których każdy jest oceniany w trzystopniowej skali. Skala ocen została opracowana dla prawidłowo funkcjonującego szczura i może być stosowana do oceny neurologicznych zaburzeń motorycznych.

Struktura umiejętnego sięgania kończyną przednią u szczura: skala oceny ruchu

W niniejszym filmie zaprezentowano sposób wykorzystania C. elegans do oceny neurodegeneracji neuronów dopaminergicznych jako modelu choroby Parkinsona. Ponadto zastosowano przesiewy genetyczne w celu zidentyfikowania czynników, które albo nasilają degenerację, albo wykazują działanie neuroprotekcyjne.

Zastosowanie testu degeneracji neuronów dopaminergicznych u C. elegans w celu walidacji potencjalnych genów choroby Parkinsona

Ilościowe oznaczanie pęknięć obu nici DNA z wykorzystaniem formowania γH2AX jako markera molekularnego stało się nieocenionym narzędziem w radiobiologii. W niniejszej pracy demonstrujemy zastosowanie testu immunofluorescencyjnego do ilościowego oznaczania ognisk γH2AX po narażeniu komórek na promieniowanie.

Ilościowe oznaczanie ognisk &gamma;H2AX w odpowiedzi na promieniowanie jonizujące

Analiza mikroskopowa ognisk γH2AX, które tworzą się po fosforylacji H2AX w Ser-139 w odpowiedzi na pęknięcia dwuniciowe DNA, stała się nieocenionym narzędziem w radiobiologii. W niniejszej pracy wykorzystaliśmy przeciwciało przeciwko monometylowanej histonie H3 w lizynie 4 jako marker epigenetyczny aktywnie transkrybowanej euchromatyny, aby ocenić przestrzenną dystrybucję powstawania indukowanych promieniowaniem ognisk γH2AX w jądrze komórkowym.

Ocena rozkładu przestrzennego $\gamma$H2AX po napromieniowaniu jonizującym

Poznaj metodę oceny dyskinez wywołanych L-DOPA w szczurzym modelu 6-OHDA choroby Parkinsona. Technika ta pozwala systematycznie oceniać ruchy patologiczne i rozwijać nowe terapie antydyskinezyjne.

Ocena dyskinez wywołanych L-DOPA w jednostronnie szczurzym modelu choroby Parkinsona z 6-OHDA

Przeglądaj więcej filmów