Name: Test mikrowzorcowy do pomiaru chiralności komórek (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Poznaj test mikrowzorcowy do pomiaru chiralności komórek in vitro. Ta metoda umożliwia automatyczną kwantyfikację asymetrii lewo-prawej w różnych typach komórek i jest kompatybilna z przesiewaniem wysokoprzepustowym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca została sfinansowana przez National Institutes of Health (OD/NICHD DP2HD083961 i NHBLI R01HL148104). Leo Q. Wan jest stypendystą Pew Scholar in Biomedical Sciences (PEW 00026185), wspieranym przez Pew Charitable Trusts. Haokang Zhang jest wspierany przez American Heart Association Predoctoral Fellowship (20PRE35210243).

1. Produkcja znaczków z polidimetylosiloksanu (PDMS)16
<ol>
	<li>Narysuj tablicę pierścieni w mikroskali za pomocą oprogramowania CAD, o średnicy wewnętrznej 250 μm i średnicy zewnętrznej 450 μm. Wzorzec używany w tym protokole to tablica 10 x 10 z odległością między pierścieniami 850 μm.</li>
	<li>Wydrukuj przezroczystą maskę wzoru w żądanej rozdzielczości, korzystając z usługi drukowania masek firmy zajmującej się mikrofabrykacją (patrz Tabela materiałów). 
	UWAGA: Udowodniono, że podane wymiary pierścienia działają dla wielu typów komórek7.</li>
	<li>Przeprowadź fotolitografię w ultrafiolecie (UV) przy użyciu maski zawierającej pożądane cechy, aby uzyskać ujemną formę fotorezystu (taką jak SU-8)8.
	<ol>
		<li>Przykryj płytkę krzemową pokrytą spinowo fotorezystem za pomocą maski przezroczystej wykonanej w krokach 1.1-1.2.</li>
		<li>Na nakładce kontaktowej UV spolimeryzuj fotorezystor pod przezroczystymi obszarami maski za pomocą światła UV. 
		UWAGA: Po dalszym myciu i opracowaniu, forma główna z pożądanymi cechami jest wytwarzana8. Szczegóły operacyjne zależą od konkretnego używanego sprzętu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotuj prepolimery elastomerowe PDMS, mieszając je z utwardzaczem w stosunku 10:1, a następnie odlej mieszaninę na formę na szalce Petriego.</li>
	<li>Umieść naczynie w komorze próżniowej na 30 minut w celu usunięcia pęcherzyków powietrza z PDMS i piecz w piekarniku w temperaturze 60 °C przez co najmniej 2 godziny.</li>
	<li>Po całkowitym utwardzeniu PDMS wytnij tablice wzorów na stemple. 
	UWAGA: Grubsze stemple (około 1 cm) mogą być preferowane ze względu na łatwość obsługi na późniejszych etapach druku mikrokontaktowego.</li>
</ol>
2. Powłoka szkiełek
<ol>
	<li>Wyczyść szkiełka podstawowe. Namocz szkiełka w kąpieli 100% etanolowej, sonikuj przez 5 minut, a następnie spłucz wodą.</li>
	<li>Powtórz ten krok najpierw z acetonem, następnie z izopropanolem, a następnie susz w strumieniu azotu.</li>
	<li>Użyj urządzenia do odparowywania wiązką elektronów (wiązką elektronów), aby pokryć warstwy tytanu i złota na szkiełkach szkiełkowych. 
	UWAGA: W przypadku warstwy tytanu pożądana grubość wynosi 15 A (1 A = 10-10 m). W przypadku warstwy złota pożądana grubość wynosi 150 A. Najpierw pokryj tytan, a następnie złoto, ponieważ warstwa tytanu służy jako klej między złotem a szkiełkiem.</li>
	<li>Oczyszczone szkiełka należy umieścić w komorze parowania i włożyć pod żaluzje tygle złote i tytanowe.</li>
	<li>Przepompuj w dół komory, aby wytworzyć podciśnienie niższe niż 10-5 Pa przed stopieniem metali. Skoncentruj wiązkę elektronów na metalu i dostosuj moc tak, aby szybkość osadzania była odpowiednia do kontrolowania grubości osadzania.</li>
	<li>Otwórz migawkę, aby rozpocząć osadzanie metalu. Zamknij żaluzję, gdy zostanie osiągnięta żądana grubość.</li>
	<li>Przełączać tygle między sekwencyjnym odparowywaniem dwóch metali.</li>
	<li>Poczekaj, aż tygle ostygną zgodnie z wymaganiami urządzenia, odwietrz komorę i wyjmij szkiełka pokryte złotem.</li>
	<li>Ponownie przepompuj komorę w dół w celu konserwacji sprzętu. 
	UWAGA: Szczegóły operacyjne mogą zależeć od konkretnego parownika z wiązką elektronową. Ważne jest, aby dobrze kontrolowany, niski stopień osadzania tytanu był ważny. Gruba warstwa tytanu często prowadzi do słabej widoczności, szczególnie w przypadku obrazowania fluorescencyjnego komórek. Po pokryciu szkiełka ze szkła pokrytego tytanem/złotem można przechowywać w suchej komorze próżniowej w temperaturze pokojowej przez co najmniej 1 miesiąc.</li>
</ol>
3. Druk mikrokontaktowy
<ol>
	<li>W razie potrzeby pokrój szkiełko pokryte tytanem/złotem na mniejsze kawałki. Do typowego zastosowania zalecany jest kwadratowy kształt 12 mm x 12 mm (<silna klasa="xfig">Rysunek 1B).</li>
	<li>Użyj noża do szkła, aby przesunąć się po powierzchni, aby pozostawić wgniecioną ścieżkę, a następnie przytrzymaj szkiełko po obu stronach i zegnij wgłębienie, aby rozbić się na małe ćwiartki. Unikaj dotykania powierzchni pokrytej złotem. 
	UWAGA: Aby wizualnie określić, która strona szkła jest powlekaną powierzchnią w przypadku przypadkowego przewrócenia, porównaj odbicie światła po obu stronach. Powierzchnia pokryta złotem będzie miała jaśniejsze odbicie, podczas gdy strona niepowlekana będzie miała ciemniejsze odbicie (od warstwy tytanu po drugiej stronie szkła). Alternatywnym sposobem jest obserwacja krawędzi prowadnicy, a stronę powłoki można określić na podstawie pionowej powierzchni cięcia.</li>
	<li>Wyczyść szkiełka, mocząc je w 100% etanolu na szalce Petriego złotą stroną do góry na wytrząsarce orbitalnej przez co najmniej 10 minut. Odessać etanol, a następnie wysuszyć każde szkiełko, przedmuchując strumieniem azotu.</li>
	<li>Wyczyść stemple PDMS wodą z mydłem, a następnie 100% etanolem. Wysuszyć stemple gazowym azotem.</li>
	<li>Przygotować 2 mM roztwór oktadekanetiolu (C18), rozpuszczając 5,74 mg proszku C18 w 10 ml 100% etanolu. 
	UWAGA: Zamknij i przechowuj roztwór C18 w temperaturze pokojowej. Drukowanie wzorów za pomocą C18 tworzy samoprzylepną, samoorganizującą się monowarstwę, do której preferencyjnie przyczepi się fibronektyna i komórki.</li>
	<li>Namocz stemple PDMS w roztworze C18 wzorzystą powierzchnią skierowaną w dół na 10 s i delikatnie osusz azotem przez 60 s. 
	UWAGA: Podczas suszenia najpierw umieść strumień z dala od stempla (około 1 m), aż większość płynu wyparuje, a następnie powoli przesuń strumień bliżej, aby całkowicie wysuszyć stempel. Ma to na celu uniknięcie zdmuchnięcia roztworu C18 zamiast wyschnięcia na stemplu.</li>
	<li>Połóż stempel stroną zadrukowaną do dołu na złotych szkiełkach przez 60 sekund przed usunięciem.</li>
	<li>Aby zapewnić prawidłowe stemplowanie, delikatnie postukaj pęsetą o stempele, aby prawidłowo przenieść wzory. Nie naciskaj zbyt mocno, a waga pęsety jest zwykle wystarczająca. 
	UWAGA: Oględziny stempla podczas stukania zapewnią, że stempel i szkiełko zetknęły się równomiernie.</li>
	<li>Przygotuj komory wilgotnościowe.
	<ol>
		<li>Odpipetować 1 ml 70% etanolu do odwróconej pokrywki szalki Petriego i położyć kawałek parafilmu, aby pokryć powierzchnię (przykryty stroną zadrukowaną do góry).</li>
		<li>Użyj pęsety, aby podnieść, połóż parafilm, aby upewnić się, że nie ma pęcherzyków powietrza, i w razie potrzeby usuń nadmiar etanolu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotować 2 mM ROZTWÓR HS-(CH 2)11-EG 3-OH (EG3): Rozcieńczyć 5 μl roztworu podstawowego w 5 ml 100% etanolu. 
	UWAGA: Rozcieńczony roztwór EG3 można szczelnie zamknąć i przechowywać w temperaturze 4 °C, a nierozcieńczony roztwór EG3 należy przechowywać w temperaturze -20 °C. Obróbka EG3 służy do tego, aby szklany obszar bez C18 nie przywierał do komórek.</li>
	<li>Mikropipeta 40 μl kropelek EG3 na każdą ćwiartkę szkła wsunąć na parafilm w komorze wilgotnościowej, pozostawiając wystarczająco dużo miejsca między kropelkami, aby uwzględnić odstępy między złotymi szkiełkami.</li>
	<li>Użyj pęsety, aby umieścić złote szkiełka z nadrukiem C18 zadrukowane twarzą w dół na kropelkach i upewnij się, że pod szkiełkami nie ma pęcherzyków. Delikatnie dociśnij szkiełka do siebie, nie podnosząc ich, aby zminimalizować parowanie. 
	UWAGA: Umieść jedną krawędź szkiełka w dół w pobliżu kropli, a następnie powoli opuść drugi koniec szkiełka w dół. Jeśli bańka jest obecna, popchnij złoty szkiełko bez podnoszenia go, aż bańka zniknie.</li>
	<li>Szczelnie zamknąć szalkę Petriego parafilmem i pozostawić w temperaturze pokojowej na co najmniej 3 godziny 
	UWAGA: Jeśli pożądana jest intensywna inkubacja, należy dwukrotnie zamknąć szalkę Petriego i pozostawić ją na maksymalnie 24 godziny.</li>
	<li>W komorze bezpieczeństwa biologicznego umieść złote szkiełka zadrukowaną do góry na szalce Petriego, namocz i spłucz 3 razy w 70% etanolu, aby usunąć EG3, a następnie pozostaw w etanolu na 10 minut w celu sterylizacji.</li>
	<li>Odessać etanol i zastąpić go sterylnym PBS.</li>
	<li>Przygotuj kolejną komorę wilgotnościową zgodnie z opisem w kroku 3.9, z PBS zamiast etanolu. 
	UWAGA: Ze względu na różnicę w napięciu powierzchniowym łatwiej jest najpierw dodać 4-5 ml PBS, aby położyć parafilm i usunąć pęcherzyki, a następnie odessać nadmiar.</li>
	<li>Przygotować 50 μg/ml roztworu fibronektyny (inne białka, jeśli jest to pożądane) w sterylnym PBS i mikropipetować 50 μl kropelek roztworu fibronektyny na każdą ćwiartkę szkiełka na parafilm, pozostawiając trochę miejsca między kropelkami. 
	UWAGA: Powłoka Fibronektyny ułatwia przyleganie komórek do wzorzystych powierzchni.</li>
	<li>Użyj pęsety waflowej, aby umieścić szkiełka zadrukowaną w dół na kropelkach i upewnij się, że pod szkiełkami nie ma pęcherzyków. Delikatnie dociśnij prowadnice do siebie, nie podnosząc ich. 
	UWAGA: Do obsługi szkiełek zalecana jest pęseta do szkiełek lub pęseta waflowa z prostymi, szerokimi końcówkami.</li>
	<li>Pozostawić szalkę Petriego w komorze bezpieczeństwa biologicznego na 30 minut.</li>
	<li>Po 30 minutach umieść złote szkiełka zadrukowaną do góry w PBS po 3-krotnym spłukaniu. 
	UWAGA: Szkiełka z wzorem fibronektyny można przechowywać w PBS w temperaturze 4 °C przez około miesiąc.</li>
</ol>
4. Umieszczanie komórek na szkiełkach z mikrowzorami
<ol>
	<li>Podgrzej pożywkę do hodowli komórkowych i trypsynę w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C. 
	UWAGA: Poniższy opis subkultury dotyczy komórek NIH / 3T3. Warunki hodowli mogą się różnić w zależności od typu komórek.</li>
	<li>(Opcjonalnie) Namocz wzorzyste szkiełka w pożywkach hodowlanych na 12-dołkowej płytce, rozgrzej do 37 °C w inkubatorze przed trypsynizacją komórek w celu lepszego przyłączenia komórek.</li>
	<li>Trypsynizować komórki, neutralizować pożywką zawierającą FBS, odwirowywać przy 100 x g przez 3 minuty, a następnie ponownie zawiesić, dobrze mieszając ze świeżą pożywką. 
	UWAGA: Upewnij się, że komórki są całkowicie oddzielone od siebie.</li>
	<li>Policz komórki, rozcieńcz do 200 000 komórek/ml i dodaj 0,5 ml zawiesiny komórek do każdej studzienki zawierającej jedno złote szkiełko.</li>
	<li>Delikatnie potrząśnij płytką studzienki kilka razy, aby uzyskać równomierny wysiew komórek i przechowuj ją w inkubatorze przez 15 minut, aby umożliwić przyczepienie komórek.</li>
	<li>Po 15 minutach sprawdź przyczepienie komórek pod mikroskopem. W razie potrzeby daj dodatkowy czas. 
	UWAGA: Przyczepione komórki rozprzestrzenią się na powierzchni z widocznym filopodium lub spłaszczeniem i nie odsuną się od powierzchni, gdy płytka studzienki zostanie delikatnie stuknięta lub przesunięta.</li>
	<li>Odessać pożywkę zawierającą nieprzyłączone komórki z każdej studzienki i dodać 1 ml pożywki hodowlanej. W przypadku leczenia farmakologicznego na tym etapie należy uzupełnić dodatkowe odczynniki do pożywek hodowlanych.</li>
	<li>Hoduj komórki w inkubatorze przez 24 godziny i sprawdzaj zbieżność, aby określić, czy utworzyła się chiralności. 
	UWAGA: Powyżej 75% konfluencji jest zalecana dla większości typów komórek, a nadmierna konfluencja może wpływać na charakterystykę chiralności.</li>
</ol>
5. Kolekcja obrazów
<ol>
	<li>Napraw komórki po zbiegu.
	<ol>
		<li>Usunąć pożywkę hodowlaną z płytki studzienki i spłukać raz PBS.</li>
		<li>Dodać 4% roztwór paraformaldehydu, inkubować w temperaturze pokojowej przez 15 minut, a następnie spłukać 3 razy PBS. 
		UWAGA: Jeśli fiksacja znacząco zmienia morfologię komórki, zaleca się obrazowanie przed fiksacją</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Użyj mikroskopu z kontrastem fazowym z funkcją kamery, zobrazuj każdy pierścień na szkiełkach w wysokiej rozdzielczości (do analizy wystarczy soczewka obiektu 10x).</li>
</ol>
6. Charakterystyka chiralności komórek (<silna klasa="xfig">Rysunek 2)
<ol>
	<li>Pobierz pliki kodu MATLAB do charakterystyki chiralności z plików uzupełniających (Plik uzupełniający 1). 
	UWAGA: Kod został przetestowany pod kątem pracy z MATLAB_R2015b i nowszymi wersjami zarówno w systemach Windows, jak i macOS. Do uruchomienia plików wymagany jest również przybornik statystyk cyklicznych, który można znaleźć w katalogu reference17.</li>
	<li>Dodaj folder kodu i podfoldery (z cyklicznym przybornikiem statystycznym w środku) do ścieżki MATLAB i otwórz plik "ROI_selection.m". W wierszu 4 zmień katalog na żądany folder danych (dla użytkowników okien zmień "/" na "\" w wierszach 4 i 5).</li>
	<li>Zmień rozmiar obrazu w wierszu 14, przy czym pierwsze dwie cyfry reprezentują rozmiar wewnętrznego okręgu pierścienia, a pozostałe dwie reprezentują zewnętrzny. 
	UWAGA: Upewnij się, że rozmiary wszystkich obrazów w folderze, który ma być analizowany, są identyczne.</li>
	<li>Kliknij przycisk Uruchom, aby wykonać kod MATLAB "ROI_selection.m" w celu określenia obszaru zainteresowania (ROI) na obrazach z kontrastem fazowym.</li>
	<li>Ręcznie przeciągnij kwadrat zaznaczenia, aby pasował do pierścienia, a następnie kliknij dwukrotnie obraz, aby potwierdzić wybór.</li>
	<li>Powtórz ten krok dla każdego obrazu w folderze (następny obraz pojawi się automatycznie po potwierdzeniu wyboru ROI poprzedniego obrazu); zostanie wygenerowany plik ".mat" do przechowywania informacji o ROI dla każdego obrazu.</li>
	<li>Otwórz plik "Analysis_batch.m" i zmień katalog folderu tak samo, jak w kroku 6.2. (Dla użytkowników okien, przy pierwszym użyciu, zamień "/" na "\" w wierszach 5, 6, 124 i 130)</li>
	<li>Kliknij przycisk Uruchom, aby wykonać kod "Analysis_batch.m" w celu określenia chiralności wielu wzorców pierścieni komórkowych. Zostanie wygenerowany plik "datatoexcel.txt", zawierający statystyki kołowe dla każdego pierścienia, a także liczbę pierścieni zgodnych z ruchem wskazówek zegara, niechiralnych i przeciwnych do ruchu wskazówek zegara.</li>
</ol>

<ol><li>Wan, L. Q., Chin, A. S., Worley, K. E., Ray, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+chirality%3A+emergence+of+asymmetry+from+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Cell chirality: emergence of asymmetry from cell culture.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 371, 20150413(2016).</li>
<li>Rahman, T., Zhang, H., Fan, J., Wan, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+chirality+in+cardiovascular+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22APL+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Cell chirality in cardiovascular development and disease.</a> APL Bioengineering. 4 (3), (2020).</li>
<li>Inaki, M., Liu, J., Matsuno, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+chirality%3A+Its+origin+and+roles+in+left-right+asymmetric+development%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Cell chirality: Its origin and roles in left-right asymmetric development.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 371 (1710), 20150413(2016).</li>
<li>Utsunomiya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+with+broken+left-right+symmetry%3A+Roles+of+intrinsic+cell+chirality+in+left-right+asymmetric+epithelial+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Symmetry%22%5BJournal%5D)">Cells with broken left-right symmetry: Roles of intrinsic cell chirality in left-right asymmetric epithelial morphogenesis.</a> Symmetry. 11 (4), 505(2019).</li>
<li>Tamada, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chiral+neuronal+motility%3A+The+missing+link+between+molecular+chirality+and+brain+asymmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Symmetry%22%5BJournal%5D)">Chiral neuronal motility: The missing link between molecular chirality and brain asymmetry.</a> Symmetry. 11 (1), 102(2019).</li>
<li>Tee, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+chirality+arising+from+the+self-organization+of+the+actin+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Cellular chirality arising from the self-organization of the actin cytoskeleton.</a> Nature Cell Biology. 17 (4), 445-457 (2015).</li>
<li>Wan, L. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropatterned+mammalian+cells+exhibit+phenotype-specific+left-right+asymmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Micropatterned mammalian cells exhibit phenotype-specific left-right asymmetry.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (30), 12295-12300 (2011).</li>
<li>Fan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+chirality+regulates+intercellular+junctions+and+endothelial+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Cell chirality regulates intercellular junctions and endothelial permeability.</a> Science Advances. 4 (10), 2111(2018).</li>
<li>Singh, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotube-induced+loss+of+multicellular+chirality+on+micropatterned+substrate+is+mediated+by+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotube-induced loss of multicellular chirality on micropatterned substrate is mediated by oxidative stress.</a> ACS Nano. 8 (3), 2196-2205 (2014).</li>
<li>Zhang, H., Fan, J., Zhao, Z., Wang, C., Wan, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Alzheimer%27s+disease-related+proteins+on+the+chirality+of+brain+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Effects of Alzheimer's disease-related proteins on the chirality of brain endothelial cells.</a> Cellular and Molecular Bioengineering. 14, 231-240 (2021).</li>
<li>Chen, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left-right+symmetry+breaking+in+tissue+morphogenesis+via+cytoskeletal+mechanics%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Left-right symmetry breaking in tissue morphogenesis via cytoskeletal mechanics.</a> Circulation Research. 110 (4), 551-559 (2012).</li>
<li>Ray, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+cellular+chirality+regulates+left-right+symmetry+breaking+during+cardiac+looping%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Intrinsic cellular chirality regulates left-right symmetry breaking during cardiac looping.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (50), 11568-11577 (2018).</li>
<li>Fan, J., Zhang, H., Rahman, T., Stanton, D. N., Wan, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+organelle-based+analysis+of+cell+chirality%5BTitle%5D)+AND+%22Communicative+and+Integrative+Biology%22%5BJournal%5D)">Cell organelle-based analysis of cell chirality.</a> Communicative and Integrative Biology. 12 (1), 78-81 (2019).</li>
<li>Chen, C. S., Mrksich, M., Huang, S., Whitesides, G. M., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geometric+control+of+cell+life+and+death%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Geometric control of cell life and death.</a> Science. 276 (5317), 1425-1428 (1997).</li>
<li>Liu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanowire+magnetoscope+reveals+a+cellular+torque+with+left-right+bias%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Nanowire magnetoscope reveals a cellular torque with left-right bias.</a> ACS Nano. 10 (8), 7409-7417 (2016).</li>
<li>Wan, L. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geometric+control+of+human+stem+cell+morphology+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Biology%22%5BJournal%5D)">Geometric control of human stem cell morphology and differentiation.</a> Integrative Biology. 2 (7-8), 346-353 (2010).</li>
<li>Circular Statistics Toolbox. MathWorks. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.mathworks.com/matlabcentral/fileexchange/10676-circular-statistics-toolbox-directional-statistics">https://www.mathworks.com/matlabcentral/fileexchange/10676-circular-statistics-toolbox-directional-statistics</a> (2021).</li>
<li>Chin, A. S., Worley, K. E., Ray, P., Kaur, G., Fan, J., Wan, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell+chirality+revealed+by+three-dimensional+spontaneous+rotation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell chirality revealed by three-dimensional spontaneous rotation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (48), 12188-12193 (2018).</li>
<li>Worley, K. E., Chin, A. S., Wan, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage-specific+chiral+biases+of+human+embryonic+stem+cells+during+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Lineage-specific chiral biases of human embryonic stem cells during differentiation.</a> Stem Cells International. 2018, 1848605(2018).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Opisany tutaj test wzorca w kształcie pierścienia zapewnia łatwe w użyciu narzędzie do ilościowej charakterystyki chiralności wielokomórkowej, zdolne do uzyskania wysoce wiarygodnych i powtarzalnych wyników. Szybkie generowanie identycznie zdefiniowanych mikrośrodowisk i bezstronna analiza umożliwiają zautomatyzowane, wysokowydajne przetwarzanie próbek o dużych rozmiarach. Protokół ten omawia wytwarzanie mikrowzorów pierścieniowych, tworzenie wzorów komórek oraz automatyczną analizę tendencyjnego wyrównania komórek i ruc...

Asymetria lewo-prawo (LR) komórki, znana również jako komórkowa ręczność lub chiralności, opisuje polaryzację komórki na osi LR i jest uznawana za podstawową, zachowaną, biofizyczną właściwość1,2,3,4,5. Chiralność komórek obserwowano zarówno in vivo, jak i in vitro w wielu skalach. Poprzednie odkrycia ujawniły chiralne wirowanie cytoszkieletu aktynowego w pojedynczych komórkach wysianych na okrągłych wyspach6, tendencyjną migrację i wyrównanie komórek w ograniczonych granicach7,8,9,10,11, oraz asymetryczne zapętlenie rurki grzewczej kurczaka12.
Na poziomie wielokomórkowym chiralność komórek można określić na podstawie kierunkowej migracji lub wyrównania, rotacji komórek, dynamiki cytoszkieletu i pozycjonowania organelli komórkowych7,8,9,10,11,12,13. Opracowaliśmy test oparty na mikrowzorcach14, aby skutecznie scharakteryzować odchylenie chiralne komórek przylegających7,8,9,10. Dzięki mikrowzorom w kształcie pierścienia geometrycznie ograniczającym skupiska komórek, komórki łącznie wykazują migrację kierunkową i stronnicze wyrównanie. Opracowano program MATLAB, który automatycznie wykrywa i mierzy wyrównanie komórek na obrazach pierścienia z kontrastem fazowym. Kierunek lokalnego wyrównania komórek jest określany ilościowo za pomocą kąta spolaryzowanego, w zależności od jego odchylenia od kierunku obwodowego. Po analizie statystycznej układ pierścieni komórek jest oznaczany jako odchylenie w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara (CCW) lub odchylenie w kierunku zgodnym z ruchem wskazówek zegara (CW).
Ten test został użyty do scharakteryzowania chiralności wielu fenotypów komórkowych (Tabela 1), a asymetria LR komórek została uznana za specyficzną dla fenotypu7,11,15. Co więcej, zakłócenie dynamiki i morfologii aktyny może spowodować odwrócenie odchylenia chiralnego7,8, a stres oksydacyjny może również zmienić chiralność komórki9. Ze względu na prostotę procedury i solidność podejścia7,8,9,10, ten test chiralności 2D zapewnia wydajne i niezawodne narzędzie do określania i badania chiralności wielokomórkowej in vitro.
Celem tego protokołu jest zademonstrowanie użycia tej metody do scharakteryzowania chiralności komórek. Protokół ten opisuje, w jaki sposób wytwarzać wzorzyste macierze komórkowe za pomocą techniki drukowania mikrokontaktowego i przeprowadzać analizę chiralności w sposób zautomatyzowany za pomocą programu MATLAB.

<table><tbody><tr><td>200-procentowy system</td> mikroskopowy <td>Koptec</td><td>DSP-MD-43</td><td></td></tr><tr><td>BZX</td><td>Keyence</td><td>BZX-600</td><td></td></tr><tr><td>Zmodyfikowana pożywka orła (DMEM) firmy Dulbecco, wysoka glukoza</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Parownik wiązki elektronów</td><td>Temscal</td><td>BJD-1800</td><td>Powłoka złoto-tytanowa</td></tr><tr><td>Surowica bydlęca</td><td>płodu VWR</td><td>89510-186</td><td></td></tr><tr><td>Fibronektyna z osocza bydlęcego</td><td>Sigma</td><td>F1141-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Szkiełka mikroskopowe</td><td>szklane VWR</td><td>10024-048</td><td></td></tr><tr><td>Pęseta szklana</td><td>Exelta</td><td>390BSAPI Granulki</td><td></td></tr><tr><td>do odparowywania złota</td><td>Międzynarodowe materiały zaawansowane</td><td>AU18</td><td></td></tr><tr><td>HS-(CH2)11-EG3-OH (EG3)</td><td>Prochimia</td><td>TH 001-m11.n3-0.2</td><td></td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>Komórki Mathworks</td><td>MATLAB_R2020b</td><td></td></tr><tr><td>NIH/3T3</td><td>ATCC</td><td>CRL-1658</td><td></td></tr><tr><td>OAI Aligner kontaktowy</td><td>OAI</td><td>200</td><td>Fotolitografia UV</td></tr><tr><td>Oktadekanotiol (C18)</td><td>Sigma</td><td>O1858-25ML</td><td></td></tr><tr><td>Wytrząsarka orbitalna</td><td>VWR</td><td>89032-088</td><td></td></tr> Sól fizjologiczna <tr><td>buforowana fosforanami (PBS)</td><td>Produkt badawczy międzynarodowy</td><td>P32080-100T</td><td></td></tr><tr><td>Polidimetylosiloksan Sylgard 184</td><td>Dow Corning</td><td>DC4019862</td><td></td></tr><tr><td>Wafel krzemowy</td><td>University Wafer</td><td>ID#809</td><td></td></tr><tr><td>Pirogronian sodu</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>11360-070</td><td></td></tr><tr><td>SU-8 3050 fotorezystor</td><td>MicroChem</td><td>Y311075 0500L1GL</td><td></td></tr><tr><td>Tytanowe pelety do odparowywania International</td><td>Advanced Materiały</td><td>TI14</td><td></td></tr><tr><td>Maska przezroczysta (z funkcją Outputicity.com</td><td></td> <td>Nie dotyczy</td><td>usługi drukowania maski</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,25%)</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>25200-072</td><td></td></tr></tbody></table>

test mikrowzorcowy do pomiaru chiralności komórek

A Micropatterning Assay for Measuring Cell Chirality

Chiralność to wewnętrzna właściwość komórkowa, która obrazuje asymetrię w kategoriach polaryzacji wzdłuż osi lewy-prawa komórki. Ponieważ ta wyjątkowa właściwość przyciąga coraz większą uwagę ze względu na jej ważną rolę zarówno w rozwoju, jak i chorobie, ustandaryzowana metoda kwantyfikacji do charakteryzowania chiralności komórek przyczyniłaby się do postępu w badaniach i potencjalnych zastosowaniach. W tym protokole opisujemy wielokomórkowy test charakteryzujący chiralności, który wykorzystuje mikrowzorzyste układy komórek. Mikrowzory komórkowe są wytwarzane na szkiełkach pokrytych tytanem/złotem za pomocą druku mikrokontaktowego. Po wysiewie na geometrycznie zdefiniowanych (np. w kształcie pierścienia), pokrytych białkiem wyspach, komórki migrują kierunkowo i tworzą stronnicze wyrównanie w kierunku zgodnym z ruchem wskazówek zegara lub przeciwnym do ruchu wskazówek zegara, które może być automatycznie analizowane i określane ilościowo przez specjalnie napisany program MATLAB. Tutaj szczegółowo opisujemy wytwarzanie substratów mikrowzorcowych, wysiewanie komórek, zbieranie obrazów i analizę danych oraz pokazujemy reprezentatywne wyniki uzyskane przy użyciu komórek NIH / 3T3. Protokół ten został wcześniej zatwierdzony w wielu opublikowanych badaniach i jest skutecznym i niezawodnym narzędziem do badania chiralności komórek in vitro.

Piętnaście minut po wysianiu komórek NIH/3T3, adhezja komórek do wzoru w kształcie pierścienia została potwierdzona wizualnie za pomocą obrazowania w kontraście fazowym. Po kolejnej 24-godzinnej hodowli komórki na wzorach stały się konfluentne i wydłużone, wykazując wyraźnie asymetryczne ułożenie z preferencją w kierunku zgodnym z ruchem wskazówek zegara (Rysunek 2). Kierunkowa migracja przytwierdzonych komórek jest rejestrowana za pomocą obrazowania time-lapse, a ruchliwość i morfogeneza ko...

Przedstawiamy protokół do określania chiralności wielokomórkowej in vitro, przy użyciu techniki mikrowzorcowania. Test ten pozwala na automatyczną kwantyfikację odchyleń od lewej do prawej różnych typów komórek i może być stosowany do celów przesiewowych.

Test mikrowzorcowy do pomiaru chiralności komórek

Chirality is an intrinsic cellular property, which depicts the asymmetry in terms of polarization along the left-right axis of the cell. As this unique ...

Test chiralności komórek łykowych z mikrowzorcami jest potężnym narzędziem do badania wielokomórkowej morfogenezy chiralnej w rozwoju choroby. Jest to również ważne dla badań nad komórkami. Ten system makrowzorców jest łatwy w produkcji i obsłudze, jest w stanie generować wysoce wiarygodne i powtarzalne wyniki, a także jest kompatybilny z automatycznym przetwarzaniem o wysokiej przepustowości dla dużych rozmiarów próbek.Zacznij od pocięcia szkiełka pokrytego tytanowym złotem na małe kwadratowe kawałki o wymiarach około 12 na 12 milimetrów. Za pomocą noża do szkła przesuń po powierzchni, aby pozostawić wgniecioną ścieżkę, a następnie przytrzymaj szkiełko po obu stronach i zegnij w miejscu wgniecenia, aby rozbić się na małe ćwiartki. Aby wyczyścić szkiełko, zanurz je złotą stroną do góry w 100% etanolu zawartym na szalce Petriego na wytrząsarce orbitalnej przez co najmniej 10 minut.Po zassaniu etanolu osuszyć szkiełko, przedmuchując je strumieniem azotu. Wyczyść stempel z polidimetylosiloksanu lub PDMS wodą z mydłem przed wysuszeniem stempla gazowym azotem. Rozpuść 5,74 miligrama oktadekanetiolu lub C18 w 10 mililitrach 100% etanolu, aby uzyskać dwumilimolowy roztwór C18, a następnie wyczyść znaczki PDMS 100% etanolem.Namocz stempel PDMS powierzchnią wzoru skierowaną w dół w roztworze C18 przez 10 sekund, a następnie delikatnie osusz go azotem przez 60 sekund. Po wyschnięciu połóż stempel ekranem do dołu na złotym szkiełku na 60 sekund przed usunięciem. Aby zapewnić prawidłowe stemplowanie, delikatnie postukaj pęsetą w stempel, aby prawidłowo przenieść wzory.Następnie przygotuj komory wilgotnościowe, pipetując jeden mililitr 70% etanolu do odwróconej pokrywki szalki Petriego. I za pomocą pęsety połóż kawałek parafilmu, aby przykryć powierzchnię, upewniając się, że nie pozostały żadne pęcherzyki. W razie potrzeby usuń nadmiar etanolu.Dodaj 40 mikrolitrów kropelek roztworu EG3 na każdą ćwiartkę szkła na parafilm w komorze wilgotnościowej, pozostawiając wystarczająco dużo miejsca między kropelkami, aby uwzględnić odstępy między złotymi szkiełkami. Użyj pęsety, aby umieścić wydrukowane w kolorze C18 złote szkiełko skierowane w dół na kropli, upewniając się, że pod szkiełkiem nie pozostały żadne bąbelki. Delikatnie dociśnij szkiełka do siebie, nie podnosząc ich, aby zminimalizować parowanie.Po szczelnym zamknięciu szalki Petriego parafilmem, pozostaw ją w temperaturze pokojowej na co najmniej trzy godziny. W komorze bezpieczeństwa biologicznego namocz i opłucz złote szkiełko trzykrotnie skierowane do góry w 70% etanolu, aby usunąć EG3, a następnie pozostaw w etanolu na 10 minut w celu sterylizacji. Po zaessaniu etanolu dodać sterylny PBS.Przygotuj kolejną komorę wilgotnościową z PBS zamiast etanolu, jak pokazano. Następnie dodaj 50 mikrolitrów kropelek roztworu fibronektyny na każdą ćwiartkę szkiełka na parafilm, pozostawiając trochę miejsca między kropelkami. Następnie umieścić szkiełko skierowane w dół na kropli, jak pokazano wcześniej, i pozostawić szalkę Petriego w komorze bezpieczeństwa biologicznego na 30 minut.Po trzykrotnym wypłukaniu szkiełka pokrytego złotem, umieść szkiełko skierowane do góry w PBS. Przed wysianiem komórek podgrzej pożywkę i trypsynę w łaźni wodnej o temperaturze 37 stopni Celsjusza. Aby uzyskać lepsze przyleganie komórek, namocz szkiełko wzorcowe w 12-dołkowej płytce zawierającej pożywkę hodowlaną i podgrzej ją w temperaturze 37 stopni Celsjusza w inkubatorze.Gdy komórki zostaną wytrypsynizowane, zneutralizuj komórki za pomocą pożywki zawierającej FBS, osadzaj komórki w temperaturze 100 razy G przez trzy minuty, a następnie ponownie zawieś osad komórkowy w świeżej pożywce. Policz komórki i rozcieńcz zawiesinę komórek, aby osiągnąć stężenie 200 000 komórek na mililitr. Dodaj 0,5 mililitra zawiesiny komórek do każdej studzienki zawierającej jedno złote szkiełko.Delikatnie potrząśnij płytką kilka razy, aby uzyskać równomierny wysiew komórek, a następnie inkubuj przez 15 minut w celu przyłączenia komórek. Po 15 minutach sprawdź przyczepienie komórek pod mikroskopem i, jeśli to konieczne, inkubuj jeszcze przez jakiś czas. Po przyłączeniu komórek odessać pożywkę zawierającą nieprzyłączone komórki z każdej studzienki i dodać jeden mililitr świeżej pożywki hodowlanej.Hoduj komórki w inkubatorze przez 24 godziny i sprawdzaj konfluencję, aby określić, czy utworzyła się chiralności. Po osiągnięciu wymaganej konfluencji utrwal komórki, usuwając pożywkę hodowlaną. Po jednokrotnym spłukaniu PBS dodać 4% roztwór paraformaldehydu do szkiełka i inkubować w temperaturze pokojowej przez 15 minut, a następnie ponownie spłukać PBS trzy razy.Aby uzyskać obrazy, użyj mikroskopu z kontrastem fazowym z funkcją kamery i uchwyć każdy pierścień na szkiełku w wysokiej rozdzielczości. Aby scharakteryzować chiralności, pobierz pliki kodu MATLAB, dodaj folder kodu i podfoldery do ścieżki MATLAB i otwórz ROI_selection. m pliku.W wierszu czwartym zmień katalog na żądany folder danych. Zmień rozmiar obrazu w wierszu 14, tak aby pierwsze dwie cyfry reprezentowały rozmiar wewnętrznego okręgu pierścienia, a pozostałe dwie reprezentowały zewnętrzny. Aby określić obszar zainteresowania lub ROI na obrazach kontrastu fazowego, wykonaj kod MATLAB ROI_selection.m, klikając przycisk Uruchom. Ręcznie przeciągnij kwadrat zaznaczenia, aby pasował do pierścienia, a następnie kliknij dwukrotnie obraz, aby potwierdzić wybór. Po wybraniu ROI ze wszystkich obrazów w folderze, zostanie wygenerowany plik mat do przechowywania informacji o ROI dla każdego obrazu.Następnie otwórz plik analysis_batch. m i zmień katalog folderu, jak pokazano wcześniej. Kliknij przycisk Uruchom, aby wykonać kod analysis_batch.m w celu określenia chiralności wielu komórkowych wzorców pierścieni. A datatoexcel. Zostanie wygenerowany plik txt zawierający statystyki kołowe dla każdego pierścienia, a także liczby pierścieni niechiralnych i przeciwnych do ruchu wskazówek zegara.Obecne wyniki wskazują na użyteczność eksperymentalnie opracowanego testu chiralności wzoru pierścieniowego, a także wrażliwość tego testu na zmiany w cytoszkielecie. W niniejszym badaniu stwierdzono, że poprzez zakłócenie polimeryzacji aktyny za pomocą 50 nanomolowych latrunkuliny A, mysie komórki mioblastu C2C12 wykazywały zmianę odchylenia chiralnego w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara lub CCW na CW.In zgodnie z ruchem wskazówek zegara lub dodatkowo, ludzkie komórki śródbłonka naczyń pępowinowych lub hUVEC, które były traktowane octanem 12-o-tetradekanoiloforbol-13 lub TPA w celu aktywacji kinazy białkowej C, wykazywały zależne od dawki przesunięcie chiralności komórek z CW do CCW. Po wysiewie komórek do wzorców, chemikalia lub leki mogą być uzupełnione do pożywki w celu zbadania odpowiedzi, a system transwell może być włączony do badania kohodowli komórek.Test ten stanowi skuteczne narzędzie do badania chiralności wielokomórkowej w różnych warunkach eksperymentalnych, oferując ważne informacje na temat roli chiralności komórek w różnych zjawiskach i procesach biologicznych.

a-micropatterning-assay-for-measuring-cell-chirality

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

Przedstawiamy prostą metodę rozmieszczania komórek w wybranych miejscach na podłożu. Metoda ta polega na tworzeniu wzorów komórkowych poprzez odwrócenie krzemowego chipa zawierającego wypełnione komórkami mikrownęki i dociśnięcie go do podłoża. Metoda ta stanowi nowy sposób modulowania sygnalizacji dyfuzyjnej oraz jukstakrynnej między komórkami.

Wzorowanie embrionalnych komórek macierzystych z wykorzystaniem Bio Flip Chip

Adhezyjne mikrowzory normalizujące architekturę komórkową mogą być wykorzystane do zwiększenia czułości w wykrywaniu efektów działania leków, poprawy powtarzalności oraz uproszczenia zautomatyzowanego pozyskiwania i analizy obrazów. Taka technologia przyniesie korzyści w testach przesiewowych leków/siRNA, które są przeprowadzane na konwencjonalnych podłożach do hodowli komórkowej i w konsekwencji obarczone są nadmierną zmiennością międzykomórkową.

Udoskonalona wizualizacja i analiza ilościowa efektów działania leków z wykorzystaniem komórek rozmieszczonych w mikrowzorach

W tym filmie opisujemy test chiralności komórek w celu określenia odchylenia wyrównania komórek w ograniczonej granicy geometrycznej, takiej jak mikrowzór pierścieniowy. Chiralność jest nieodłączną właściwością większości typów komórek i jest determinowana przez czynniki genetyczne i środowiskowe. Znajomość chiralności normalnej populacji komórek może pomóc w badaniach przesiewowych komórek leczonych lekami.

Test chiralności komórek w kształcie pierścienia: technika in vitro do określania chiralności wielokomórkowej na podstawie wyrównania komórek na mikrowzorcach w kształcie pierścienia

Ten protokół opisuje metodę tworzenia wzorów komórkowych na SiO2 kompatybilną z mikrofabrykacją. Predefiniowany wzór parylenu-C jest drukowany fotolitograficznie na płytkach SiO2. Po inkubacji z surowicą (lub innym roztworem aktywacyjnym) komórki przylegają specyficznie (i rosną zgodnie z zgodnością) leżącego poniżej parylenu-C, będąc jednocześnie odpychane przez regiony SiO2.

Wzorcowanie komórek na zdefiniowanych fotolitograficznie 
Parylene-C: Substraty SiO2

Ten artykuł przedstawia metody hodowli miocytów serca o różnych kształtach, które reprezentują różne patologie, oraz sortowania tych przylegających miocytów serca na podstawie ich morfologii na poziomie pojedynczej komórki. Proponowana platforma zapewnia nowatorskie podejście do wysokoprzepustowych badań przesiewowych i badań przesiewowych leków w kierunku różnych rodzajów niewydolności serca.

Podejście do badania transkryptomiki zależnej od kształtu na poziomie pojedynczej komórki

Tutaj prezentujemy protokół do mikrowzorcowania komórek w rozdzielczości pojedynczej komórki za pomocą adhezji programowanej przez DNA. Protokół ten wykorzystuje laboratoryjną platformę fotolitograficzną do tworzenia wzorów oligonukleotydów DNA na szkiełku szkiełkowym, a następnie znakuje błony komórkowe dostępnymi na rynku komplementarnymi oligonukleotydami. Hybrydyzacja oligonukleotydów powoduje zaprogramowaną adhezję komórek.

Proste, niedrogie i modułowe modelowanie komórek za pomocą DNA

Przedstawiony tutaj protokół umożliwia zautomatyzowane wytwarzanie mikrowzorów, które standaryzują kształt komórki, do badania struktur cytoszkieletu w komórkach ssaków. Ta przyjazna dla użytkownika technika może być skonfigurowana z dostępnymi na rynku systemami obrazowania i nie wymaga specjalistycznego sprzętu niedostępnego dla standardowych laboratoriów biologii komórki.

Kontrola geometrii komórki za pomocą mikromodelowania wspomaganego laserem w podczerwieni

Prezentujemy technologię, która wykorzystuje wspomagany kapilarność montaż w platformie mikroprzepływowej do modelowania mikroobiektów zawieszonych w cieczy, takich jak bakterie i koloidy, w określone tablice na podłożu z polidimetylosiloksanu.

Modelowanie mikroorganizmów i mikrocząstek poprzez sekwencyjny montaż wspomagany kapilarnością

Opisujemy ulepszenia standardowej metody pomiaru sił trakcyjnych komórek, opartej na drukowaniu mikrokontaktowym z pojedynczym krokiem subtraktywnego tworzenia wzorów układów punktowych białek macierzy zewnątrzkomórkowej na miękkich hydrożelach. Metoda ta pozwala na prostsze i bardziej spójne wytwarzanie wzorów wyspowych, niezbędnych do kontrolowania kształtu klastrów komórek.

Generowanie wzorców dla mikroskopii trakcyjnej mikrowzorców

Tradycyjnie, hodowla komórkowa jest przeprowadzana na płaskich podłożach, które słabo naśladują naturalne środowisko komórek in vivo. W tym miejscu opisujemy metodę wytwarzania substratów do hodowli komórkowych o fizjologicznie istotnych zakrzywionych geometriach i mikrowzorach białek zewnątrzkomórkowych, co pozwala na systematyczne badania nad komórkowym wykrywaniem tych zewnątrzkomórkowych sygnałów.

Generowanie wielokierunkowych mikrośrodowisk komórkowych za pomocą fotomodelingu UV trójwymiarowych substratów do hodowli komórkowych

Przedstawiamy dynamiczną i odwracalną platformę do testowania sztywności wykonaną z ultramiękkiego silikonowego elastomeru (polidimetylosiloksan, PDMS) z osadzonymi cząstkami żelaza. Ten nowatorski test nadaje się do badania pojawiających się czasowo zależnych zmian fizycznych w fenotypach komórek, w tym naprowadzania kontaktowego. Tutaj mierzymy wyrównanie kardiomiocytów noworodków szczurów po usztywnieniu macierzy za pomocą magnetyki.

Mikrowzorowane elastomery magneto-reologiczne do wywoływania zmian w ustawieniu kardiomiocytów

Poznaj test mikrowzorcowy do pomiaru chiralności komórek in vitro. Ta metoda umożliwia automatyczną kwantyfikację asymetrii lewo-prawej w różnych typach komórek i jest kompatybilna z przesiewaniem wysokoprzepustowym.

Test mikrowzorcowy do pomiaru chiralności komórek

Przeglądaj więcej filmów