Name: Identyfikacja źródła wydzielanych białek w nerkach za pomocą wstrzyknięcia Brefeldin A (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: Poznaj metodę identyfikacji komórek produkujących cytokiny w uszkodzonych nerkach za pomocą Brefeldin A. Protokół umożliwia analizę typów komórkowych i stanu komórek w badaniach chorób nerek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Amerykańskie Towarzystwo Kardiologiczne (AHA): Kensei Taguchi, 20POST35200221; HHS | Światowy Urząd Gospodarczy (NIH Narodowy Instytut Cukrzycy i Chorób Układu Pokarmowego i Nerek (NIDDK): Craig Brooks, DK114809-01 DK121101-01.

<ol><li>GBD Chronic Kidney Disease Collaboration. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+burden+of+kidney+disease%2C+1990-2017%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2017%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national burden of kidney disease, 1990-2017: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017.</a> Lancet. 395 (10225), 709-733 (2020).</li>
<li>Canaud, G., Bonventre, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+cycle+arrest+and+the+evolution+of+chronic+kidney+disease+from+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Cell cycle arrest and the evolution of chronic kidney disease from acute kidney injury.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 30 (4), 575-583 (2015).</li>
<li>Chawla, L. S., Eggers, P. W., Star, R. A., Kimmel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+kidney+injury+and+chronic+kidney+disease+as+interconnected+syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute kidney injury and chronic kidney disease as interconnected syndromes.</a> New England Journal of Medicine. 371 (1), 58-66 (2014).</li>
<li>Berger, K., Moeller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+epithelial+repair+and+regeneration+after+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of epithelial repair and regeneration after acute kidney injury.</a> Seminars in Nephrology. 34 (4), 394-403 (2014).</li>
<li>Bonventre, J. V., Yang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+pathophysiology+of+ischemic+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">Cellular pathophysiology of ischemic acute kidney injury.</a> The Journal of clinical investigation. 121 (11), 4210-4221 (2011).</li>
<li>Kurts, C., Panzer, U., Anders, H. J., Rees, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immune+system+and+kidney+disease%3A+basic+concepts+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Immunology%22%5BJournal%5D)">The immune system and kidney disease: basic concepts and clinical implications.</a> Nature Reviews. Immunology. 13 (10), 738-753 (2013).</li>
<li>Panzer, U., Steinmetz, O. M., Stahl, R. A., Wolf, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+diseases+and+chemokines%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Kidney diseases and chemokines.</a> Current Drug Targets. 7 (1), 65-80 (2006).</li>
<li>Commins, S. P., Borish, L., Steinke, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunologic+messenger+molecules%3A+cytokines%2C+interferons%2C+and+chemokines%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunologic messenger molecules: cytokines, interferons, and chemokines.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 125 (2), Suppl 2 53-72 (2010).</li>
<li>Jaber, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+gene+promoter+polymorphisms+and+mortality+in+acute+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Cytokine gene promoter polymorphisms and mortality in acute renal failure.</a> Cytokine. 25 (5), 212-219 (2004).</li>
<li>Black, L. M., Lever, J. M., Agarwal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+inflammation+and+fibrosis%3A+A+double-edged+sword%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Renal inflammation and fibrosis: A double-edged sword.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 67 (9), 663-681 (2019).</li>
<li>van Kooten, C., Woltman, A. M., Daha, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+function+of+tubular+epithelial+cells%3A+the+functional+implications+of+CD40+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Immunological function of tubular epithelial cells: the functional implications of CD40 expression.</a> Experimental Nephrology. 8 (4-5), 203-207 (2000).</li>
<li>Canaud, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclin+G1+and+TASCC+regulate+kidney+epithelial+cell+G2-M+arrest+and+fibrotic+maladaptive+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cyclin G1 and TASCC regulate kidney epithelial cell G2-M arrest and fibrotic maladaptive repair.</a> Science Translational Medicine. 11 (476), (2019).</li>
<li>Burton, C. J., Combe, C., Walls, J., Harris, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretion+of+chemokines+and+cytokines+by+human+tubular+epithelial+cells+in+response+to+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology%2C+Dialysis%2C+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Secretion of chemokines and cytokines by human tubular epithelial cells in response to proteins.</a> Nephrology, Dialysis, Transplantation. 14 (11), 2628-2633 (1999).</li>
<li>Ripley, C. R., Fant, J., Bienkowski, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brefeldin+A+inhibits+degradation+as+well+as+production+and+secretion+of+collagen+in+human+lung+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Brefeldin A inhibits degradation as well as production and secretion of collagen in human lung fibroblasts.</a> Journal of Biological Chemistry. 268 (5), 3677-3682 (1993).</li>
<li>Kovacs, S. B., Oh, C., Aachoui, Y., Miao, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+cytokine+production+by+flow+cytometry+using+brefeldin+A+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Evaluating cytokine production by flow cytometry using brefeldin A in mice.</a> STAR Protocols. 2 (1), 100244(2021).</li>
<li>Fujiwara, T., Oda, K., Yokota, S., Takatsuki, A., Ikehara, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brefeldin+A+causes+disassembly+of+the+Golgi+complex+and+accumulation+of+secretory+proteins+in+the+endoplasmic+reticulum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Brefeldin A causes disassembly of the Golgi complex and accumulation of secretory proteins in the endoplasmic reticulum.</a> Journal of Biological Chemistry. 263 (34), 18545-18552 (1988).</li>
<li>Sadeghipour, A., Babaheidarian, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+formalin-fixed%2C+paraffin+embedded+blocks%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Making formalin-fixed, paraffin embedded blocks.</a> Methods in Molecular Biology. 1897, 253-268 (2019).</li>
<li>Qin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cutting+and+floating+method+for+paraffin-embedded+tissue+for+sectioning%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">The cutting and floating method for paraffin-embedded tissue for sectioning.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (139), e58288(2018).</li>
<li>Honvo-Houeto, E., Truchet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indirect+immunofluorescence+on+frozen+sections+of+mouse+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Indirect immunofluorescence on frozen sections of mouse mammary gland.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (106), e53179(2015).</li>
<li>Chung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2+promotes+fibrosis+after+severe+acute+kidney+injury+by+enhancing+renal+macrophage+infiltration%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">TGF-β promotes fibrosis after severe acute kidney injury by enhancing renal macrophage infiltration.</a> JCI Insight. 3 (21), 123563(2018).</li>
<li>Meng, X. M., Nikolic-Paterson, D. J., Lan, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2%3A+the+master+regulator+of+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Nephrology%22%5BJournal%5D)">TGF-β: the master regulator of fibrosis.</a> Nature Reviews. Nephrology. 12 (6), 325-338 (2016).</li>
<li>Kok, H. M., Falke, L. L., Goldschmeding, R., Nguyen, T. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+CTGF%2C+EGF+and+PDGF+pathways+to+prevent+progression+of+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Targeting CTGF, EGF and PDGF pathways to prevent progression of kidney disease.</a> Nature Reviews. Nephrology. 10 (12), 700-711 (2014).</li>
<li>Engel, J. E., Williams, E., Williams, M. L., Bidwell, G. L., Chade, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+VEGF+%28vascular+endothelial+growth+factor%29+therapy+induces+long-term+renal+recovery+in+chronic+kidney+disease+via+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Targeted VEGF (vascular endothelial growth factor) therapy induces long-term renal recovery in chronic kidney disease via macrophage polarization.</a> Hypertension. 74 (5), 1113-1123 (2019).</li>
<li>Liu, B. C., Tang, T. T., Lv, L. L., Lan, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+tubule+injury%3A+a+driving+force+toward+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Renal tubule injury: a driving force toward chronic kidney disease.</a> Kidney International. 93 (3), 568-579 (2018).</li>
<li>de Haij, S., Woltman, A. M., Bakker, A. C., Daha, M. R., van Kooten, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+inflammatory+mediators+by+renal+epithelial+cells+is+insensitive+to+glucocorticoids%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Production of inflammatory mediators by renal epithelial cells is insensitive to glucocorticoids.</a> British Journal of Pharmacology. 137 (2), 197-204 (2002).</li>
<li>Hong, S., Healy, H., Kassianos, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emerging+role+of+renal+tubular+epithelial+cells+in+the+immunological+pathophysiology+of+lupus+nephritis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">The emerging role of renal tubular epithelial cells in the immunological pathophysiology of lupus nephritis.</a> Frontiers in Immunology. 11, 578952(2020).</li>
<li>Hwang, B., Lee, J. H., Bang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+sequencing+technologies+and+bioinformatics+pipelines%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+%26+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA sequencing technologies and bioinformatics pipelines.</a> Experimental & Molecular Medicine. 50 (8), 1-14 (2018).</li>
<li>See, P., Lum, J., Chen, J., Ginhoux, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-cell+sequencing+guide+for+immunologists%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">A single-cell sequencing guide for immunologists.</a> Frontiers in Immunology. 9, 2425(2018).</li>
<li>Gewin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deleting+the+TGF-%CE%B2+receptor+attenuates+acute+proximal+tubule+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Deleting the TGF-β receptor attenuates acute proximal tubule injury.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 23 (12), 2001-2011 (2012).</li>
<li>Nlandu-Khodo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blocking+TGF-%CE%B2+and+%CE%B2-catenin+epithelial+crosstalk+exacerbates+CKD%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Blocking TGF-β and β-catenin epithelial crosstalk exacerbates CKD.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (12), 3490-3503 (2017).</li>
<li>Brooks, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KIM-1-%2FTIM-1-mediated+phagocytosis+links+ATG5-%2FULK1-dependent+clearance+of+apoptotic+cells+to+antigen+presentation%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">KIM-1-/TIM-1-mediated phagocytosis links ATG5-/ULK1-dependent clearance of apoptotic cells to antigen presentation.</a> EMBO Journal. 34 (19), 2441-2464 (2015).</li>
<li>Kishi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximal+tubule+ATR+regulates+DNA+repair+to+prevent+maladaptive+renal+injury+responses%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Proximal tubule ATR regulates DNA repair to prevent maladaptive renal injury responses.</a> The Journal of Clinical Investigation. 129 (11), 4797-4816 (2019).</li>
<li>Yu, S. M., Bonventre, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+kidney+injury+and+maladaptive+tubular+repair+leading+to+renal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Nephrology+and+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Acute kidney injury and maladaptive tubular repair leading to renal fibrosis.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 29 (3), 310-318 (2020).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

Wiadomo, że PTC nerek regulują AKI i PChN poprzez wydzielanie TGF-β, TNF-α, CTGF, PDGF, czynnika wzrostu śródbłonka naczyniowego, a także wielu innych białek 20,21,22,23. Podobnie kłębuszki nerkowe, kanaliki dystalne i inne komórki nabłonka nerek, a także komórki śródmiąższowe, wydzielają te i/lub inne białka podczas urazu 24,25,26.<sup...

Szacuje się, że >10% światowej populacji cierpi na jakąś formę choroby nerek1. Definiowany przez szybki początek, AKI jest w dużej mierze uleczalny; jednak epizod AKI może predysponować pacjentów do rozwoju PChN w późniejszym życiu2,3. W przeciwieństwie do AKI, PChN charakteryzuje się postępującym zwłóknieniem i pogorszeniem czynności nerek, co prowadzi do schyłkowej niewydolności nerek wymagającej terapii nerkozastępczej. Większość urazów nerek jest ukierunkowana na wyspecjalizowane komórki nabłonkowe, takie jak podocyty lub komórki kanalików proksymalnych, które tworzą nephron4,5. Po urazie komórki nabłonka, które przeżyły, pomagają koordynować odpowiedź naprawczą poprzez wydzielanie cytokin i innych białek. W ten sposób komórki, które przeżyły, mogą modulować odpowiedź immunologiczną, kierować przebudową macierzy zewnątrzkomórkowej i wspomagać regenerację narządów.
Cytokiny to małe, wydzielane białka niezbędne do modulowania dojrzewania, wzrostu i reakcji organizmów wielokomórkowych6,7. Funkcjonują jako przekaźniki sygnałowe między różnymi typami komórek, w tym komórkami odpornościowymi i nabłonkowymi8. Chociaż uważa się, że cytokiny są wydzielane głównie przez komórki odpornościowe, wieloletnie badania wykazały, że komórki nabłonka nerek i śródmiąższowe również wydzielają cytokiny jako sygnały dla innych rezydentnych komórek nerkowych, takich jak komórki kanalików, komórki śródmiąższowe i komórki odpornościowe9,10. W szczególności PTC odgrywają ważną rolę w fazie inicjacji i odzyskiwania po AKI11. Wiadomo jednak, że nieprzystosowanie naprawione PTC wydzielają cytokiny profibrotyczne, takie jak transformujący czynnik wzrostu-β (TGF-β), płytkopochodny czynnik wzrostu D (PDGF-D) i czynnik wzrostu tkanki łącznej (CTGF), przyczyniając się do progresji PChN12. W ten sposób komórki nabłonka nerek wykorzystują wydzielane cytokiny do modulowania uszkodzenia nerek.
Chociaż wiadomo, że komórki nabłonka nerek wydzielają cytokiny, dokładne źródło i względny udział każdego typu komórek były trudne do określenia ze względu na techniczne wyzwania związane z badaniem wydzielanych białek13. Cytometria przepływowa, powszechne podejście stosowane do pomiaru cytokin, jest trudna do wykonania na uszkodzonych nerkach, zwłaszcza w nerkach silnie zwłóknieniowych. W przypadku rekombinazy Cre napędzanej przez promotor cytokin, myszy reporterowe cytokin są często używane do identyfikacji typu komórki, która wyraża daną cytokinę. Jednak użycie myszy reporterowych jest ograniczone ze względu na wymóg krzyżowania myszy reporterowych z różnymi tłami nokautującymi, brak odpowiednich reporterów oraz fakt, że tylko jedna cytokina może być analizowana na raz. Dlatego konieczne jest opracowanie prostej, wszechstronnej i niedrogiej techniki wykrywania komórek nerkowych uwalniających cytokiny.
Postawiliśmy hipotezę, że wstrzyknięcie BFA, inhibitora wydzielania, który blokuje endoplazmatyczny transport retikulum i Golgiego in vivo, pozwoliłoby na zabarwienie wydzielanych białek w tkance nerkowej (<silna klasa="xfig">Rysunek 1A,B), jak pokazano w testach opartych na cytometrii przepływowej14,15. Wraz z twórcami specyficznymi dla typu komórek, technika ta może być wykorzystana do identyfikacji źródła i względnego udziału komórek wytwarzających cytokin w uszkodzonych nerkach. W przeciwieństwie do próbek do cytometrii przepływowej, utrwalone tkanki mogą być przechowywane przez długi czas z zachowaniem białek i struktur komórkowych, co pozwala na dokładniejsze badanie komórek wydzielniczych. Aby przetestować tę hipotezę, nerki myszy zostały uszkodzone za pomocą modelu AKI (cisplatyny) i modelu PChN (nefropatii kwasu arystolochowego (AAN)), wstrzyknięto BFA i wybarwiono przy użyciu standardowych technik immunofluorescencyjnych.

<table><tbody><tr><td>1 ml Strzykawki insulinowe</td><td>BD</td><td>329654</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Strzykawka</td><td>BD</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>Probówka 2 ml</td><td>Marka Fisher</td><td>05-408-138</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka 20 ml</td><td>BD</td><td>302830</td><td></td></tr><tr><td>Igły 25 G</td><td>BD</td><td>305125</td><td></td></tr><tr><td>28 G</td><td>BD</td><td>329424</td><td></td></tr><tr><td>96-dołkowa</td><td>płytka Corning</td><td>9017</td><td></td></tr><tr><td>Kwas arystolochowy-I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9461</td><td></td></tr><tr><td>&alfa;-SMA przeciwciało sprzężone z Cy3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6198</td><td>RRID:AB_476856</td></tr><tr><td>Ostrze do kriostatu</td><td>CL Sturkey. Inc</td><td>DT315R50</td><td></td></tr><tr><td>Albumina surowicy bydlęcej (BSA)</td><td>&nbsp; Sigma-Aldrich</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Brefeldin A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B6542</td><td></td></tr><tr><td>Cisplatyna</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4394</td><td></td></tr><tr><td>Kwas cytrynowy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>791725</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop konfokalny</td><td>ZEISS</td><td>&nbsp; LSM710</td><td></td></tr><tr><td>Obiektywy do mikroskopii konfokalnej</td><td>ZEISS</td><td>40x / 1.10 LD C-Apochromat WATER</td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie konfokalne</td><td>ZEISS</td><td>ZEN</td><td></td></tr><tr><td>Słoik Coplin</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-4</td><td></td></tr><tr><td>Szkło nakrywkowe</td><td>marki Fisher</td><td>12545F</td><td></td></tr><tr><td>Kriostat</td><td>Leica</td><td>CM1850</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciało CTGF</td><td>Genetex</td><td>GTX124232</td><td>RRID:AB_11169640</td></tr><tr><td>Cy3-AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L)</td><td>Jackson immunoresearch</td><td>711-165-152</td><td>RRID: AB_2307443</td></tr><tr><td>Cy5-AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L)</td><td>Jackson immunoresearch</td><td>705-175-147</td><td>RRID: AB_2340415</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>Dimetylosulfotlenek (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>Jednorazowe formy bazowe</td><td>marki Fisher</td><td>22-363-553</td><td></td></tr><tr><td>surowica osła</td><td>Jackson immunoresearch</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon Labs, Inc.</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze</td><td>VETUS</td><td>ESD-13</td><td></td></tr><tr><td>Glicyna</td><td>marki Fisher</td><td>12007-0050</td><td></td></tr><tr><td>Poduszki grzewcze</td><td>Kent scientific</td><td>DCT-20</td><td></td></tr><tr><td>Sól sodowa heparyny</td><td>ACROS organics</td><td>41121-0010</td><td>100mg/15ml dH2O</td></tr><tr><td>Komora nawilżana</td><td>Invitrogen</td><td>44040410</td><td>Plastikowe pudełko pokryte folią może służyć jako alternatywna komora nawilżana.</td></tr><tr><td>Strzykawki insulinowe</td><td>BD</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop odwrócony</td><td>NIKON</td><td>Eclipse Ti-E2</td><td>immunofluorescencja</td></tr><tr><td>KIM-1 przeciwciało</td><td>R & D</td><td>AF1817</td><td>RRID: AB_2116446</td></tr><tr><td>Lemozol (Histo-clear)</td><td>Diagnostyka krajowa</td><td>HS-200</td><td></td></tr><tr><td>lektyna lotus tetragonolobus Vector</td><td></td><td>FL-13212</td><td></td></tr><tr><td>Szkiełko mikroskopowe</td><td>Fisher scientific</td><td>12-550-343</td><td></td></tr> Mikrotomowa monochromatyczna kamera CMOS <tr><td></td><td>Reichert</td><td>Jung 820 II</td><td></td></tr><tr><td></td><td>NIKON&</td><td>nbsp; Zestaw chirurgiczny myszy DS-Qi-2</td><td></td></tr> Kent <tr><td></td><td>scientific</td><td>INSMOUSEKIT</td><td></td></tr><tr><td>NIS Elements</td><td>Obiektywy NIKON</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie</td> do akwizycji obrazów <td>NIKON</td><td>Plan Apo 20x/0.75</td><td>połączone z Eclipse Ti-E2 (mikroskop odwrócony)</td></tr> <tr><td>Związek OCT</td><td>Scigen</td><td>4586</td><td></td></tr><tr><td>Pióro do patodonu</td><td>Vector</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>PBS z wapniem i magnezem</td><td>Corning</td><td>21-030-CV</td><td></td></tr><tr><td>PBS bez wapnia i magnezu</td><td>&nbsp; Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciało PDGF-D</td><td>Thermo-Fisher scientific</td><td>40-2100</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopia elektronowa PFA</td><td>Science</td><td>15710</td><td>RRID: AB_2533455</td></tr><tr><td>Czytnik płytek</td><td>Promega</td><td>GloMax&reg; Discover Microplate Reader</td><td>4% PFA jest rozcieńczony od 16% w PBS.</td></tr><tr><td>powidon-jod (Betadine)</td><td>Avrio Health L.P.</td><td>NDC 67618-151-17</td><td></td></tr><tr><td>Szybkowar</td><td>&nbsp; Tristar 8</td><td>Qt. Power Cooker Plus</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Gold Odczynnik przeciw blaknięciu</td><td>Invitrogen</td><td>P36930</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do oznaczania mocznika Quantichrom (BUN) II Systemy</td><td>testów biologicznych</td><td>DUR2-100</td><td></td></tr><tr><td>Jednoostrzowa żyletka do rozwarstwiania nerek (.009", 0.23 mm)</td><td>Narzędzia IDL</td><td>521013</td><td></td></tr><tr><td>Podgrzewacz do slajdów</td><td>Lab Scientific Inc.,</td> <td>XH-2001</td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie</td><td>NIKON</td><td>NIS elementy</td><td></td></tr><tr><td>sacharozy</td><td>RPI</td><td>S24060</td><td></td></tr><tr><td>TGF-b1 anitbody</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SAB4502954</td><td></td></tr><tr><td>Tris EDTA buffer</td><td>Corning</td><td>46-009-CM</td><td>RRID: AB_10747473</td></tr><tr><td>Cytrynian trisodowy dwuwodny</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SLBR6660V</td><td></td></tr><tr><td>Cytrynian trisodowy dwuwodny</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td>SLBR6660V</tr><tr><td>Triton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Szkiełko mikroskopowe z białym szkłem, rozmiar 25 x 75 mm, szlifowane krawędzie, niebieska matowa</td><td>kula ziemska Scientific</td><td>1358D</td><td></td></tr></tbody></table>

identyfikacja źródła wydzielanych białek w nerkach za pomocą wstrzyknięcia brefeldin a

Identification of the Source of Secreted Proteins in the Kidney by Brefeldin A Injection

Przewlekła choroba nerek (PChN) jest jedną z dziesięciu głównych przyczyn zgonów w USA. Ostre uszkodzenie nerek (AKI), choć często możliwe do wyleczenia, predysponuje pacjentów do PChN w późniejszym życiu. Komórki nabłonka nerek zostały zidentyfikowane jako kluczowe węzły sygnalizacyjne zarówno w AKI, jak i PChN, dzięki czemu komórki mogą określać przebieg choroby poprzez wydzielanie cytokin i innych białek. Szczególnie w przypadku PChN kilka linii dowodów wykazało, że nieprzystosowanie naprawione komórki kanalików napędzają postęp choroby poprzez wydzielanie transformującego czynnika wzrostu beta (TGF-β), czynnika wzrostu tkanki łącznej (CTGF) i innych cytokin profibrotycznych. Jednak identyfikacja źródła i względnej liczby wydzielanych białek z różnych typów komórek in vivo pozostaje wyzwaniem.
Ten artykuł opisuje technikę wykorzystującą brefeldynę A (BFA) do zapobiegania wydzielaniu cytokin, umożliwiając barwienie cytokin w tkance nerkowej przy użyciu standardowych technik immunofluorescencyjnych. BFA hamuje transport retikulum endoplazmatycznego (ER) do aparatu Golgiego, który jest niezbędny do wydzielania cytokin i innych białek. Wstrzyknięcie BFA na 6 godzin przed uśmierceniem prowadzi do nagromadzenia TGF-β, PDGF i CTGF wewnątrz komórek kanalików proksymalnych (PTC) w mysim modelu cisplatyny AKI i TGF-β w mysim modelu PChN z kwasem arystolochowym (AA). Analiza wykazała, że BFA + cisplatyna lub BFA + AA znacznie zwiększyły TGF-β-dodatni sygnał w porównaniu z BFA + solą fizjologiczną, cisplatyną lub samym AA. Dane te sugerują, że BFA może być używany do identyfikacji typu komórki produkującej określone cytokin i ilościowego określania względnych ilości i/lub różnych typów wytwarzanych cytokin.

Aby zbadać rolę komórek nabłonkowych kanalików w produkcji cytokin po AKI indukowanym cisplatyną, wstrzyknięto cisplatynę w stężeniu 20 mg/kg, a następnie w 3. dobie po wstrzyknięciu cisplatyny podano dożylnie 0,25 mg BFA. Nerki pobrano 6 h później. Nerki zatopione w parafinie poddano sekcjonowaniu i barwieniu na TGF-β, PDGF-D oraz CTGF, będące reprezentatywnymi cytokinami odpowiedzialnymi za naprawę tkanek w AKI. Jak pokazano na Rysunku 2A, w nerkach leczonych cisplatyną w obecności BFA w P...

Identyfikacja typu komórki odpowiedzialnej za wydzielanie cytokin jest niezbędna do zrozumienia patobiologii choroby nerek. W tym miejscu opisujemy metodę ilościowego barwienia tkanki nerkowej pod kątem cytokin wytwarzanych przez komórki nabłonka nerki lub śródmiąższu przy użyciu brefeldyny A, inhibitora wydzielania i markerów specyficznych dla typu komórkowego.

Identyfikacja źródła wydzielanych białek w nerkach za pomocą wstrzyknięcia Brefeldin A

Chronic kidney disease (CKD) is one of the top ten leading causes of death in the USA. Acute kidney injury (AKI), while often recoverable, predisposes ...

Nasza technika pozwala nam zidentyfikować źródło i względny udział komórek produkujących cytokiny w uszkodzonych nerkach. Stosowanie Brefeldiny A w celu zapobiegania wydzielaniu białek pozwala nam zebrać więcej informacji o komórkach produkujących cytokiny w narządach stałych, takich jak typ komórki i stan tych komórek.Nasz protokół powinien być łatwy do dostosowania do wielu układów narządów. Ponieważ Brefeldyna A jest małą cząsteczką przepuszczalną dla komórek, powinna hamować wydzielanie w większości typów komórek, umożliwiając wykrywanie cytokin i innych wydzielanych białek.Wstrzyknięcie kości ogonowej jest najtrudniejszym technicznie krokiem, ponieważ kość ogonowa myszy jest dość mała. Zalecamy przećwiczenie tego kroku przed wykonaniem naszego protokołu na zwierzętach doświadczalnych.[Instruktor] Zacznij od umieszczenia klatki do połowy, a połowy z poduszki grzewczej na 10 minut, aby upewnić się, że myszy są ciepłe. Po umieszczeniu myszy w urządzeniu przytrzymującym należy trzykrotnie zdezynfekować ogon za pomocą wacika z jodonem i alkoholem. Trzymaj ogon poziomo i wizualizuj boczne żyły ogonowe. Następnie włóż igłę o rozmiarze 28, trzymając igłę i strzykawkę równolegle do żyły w kierunku głowy. Wstrzyknąć 200 mikrolitrów 1,25 miligrama na mililitr roztworu BFA. Żyła powinna stać się czysta, gdy krew zostanie zastąpiona roztworem do wstrzykiwań. Następnie wyjmij igłę i delikatnie dociśnij ogon, aż krwawienie ustanie. Umieść myszy z powrotem w klatce i monitoruj je pod kątem dodatkowego krwawienia lub oznak niepokoju. Użyj strzykawki o pojemności 20 mililitrów i przeprowadź mysz z 10 do 20 mililitrami PBS przez lewą komorę z szybkością przepływu od dwóch do czterech mililitrów na minutę, aż perfuzat stanie się przezroczysty. Usuń nerki, przytrzymując tętnicę nerkową i żyłę blisko brodawki i przecinając naczynie z boku od nerki. Następnie delikatnie wyjmij torebkę nerkową, odklejając ją ręcznie lub za pomocą cienkich sterylnych kleszczyków. Użyj markera do bariery hydrofobowej i obrysuj odcinki tkanki, zachowując co najmniej pięć milimetrów odległości od tkanki do konturu bariery hydrofobowej. Następnie dodać 50 mikrolitrów buforu blokującego zawierającego 3% surowicy osła i 0,1% trytonu w 1% albuminy surowicy bydlęcej TBS na wierzchu sekcji. Inkubuj temperaturę pokojową przez godzinę w wilgotnej komorze. Rozcieńczyć przeciwciała pierwszorzędowe PBS w odpowiednim stężeniu. Aby wykryć cytokiny, rozcieńczyć przeciwciała skierowane przeciwko TGF beta one, PDGF-D lub CTGF w 50 mikrolitrach PBS. Dodaj pierwszorzędowe przeciwciało anty-alfa SMA sprzężone z Cy3 do roztworu przeciwciała pierwszorzędowego w rozcieńczeniach 1:200 w celu znakowania miofibroblastów. Usuń bufor blokujący i dodaj pierwszorzędowe przeciwciała do sekcji, upewniając się, że nie wycieka ona z okrągłego hydrofobowego konturu. Inkubować przez noc w temperaturze czterech stopni Celsjusza w wilgotnej komorze. Wyjmij wilgotną komorę z inkubatora i umyj szkiełka PBS trzy razy przez pięć minut. Następnie rozcieńczyć odpowiednie przeciwciała drugorzędowe w stosunku jeden do 200 za pomocą PBS. Inkubować próbki z 50 mikrolitrami roztworów przeciwciał wtórnych przez godzinę w temperaturze pokojowej w wilgotnej komorze. Wyjmij szkiełka z nawilżonej komory i myj PBS przez pięć minut. Rozcieńczyć lektynę tetragonolobusu lotosu sprzężoną z fluoresceiną w PBS z wapniem i magnezem w stężeniu 10 mikrogramów na mililitr. Następnie inkubować tkanki z 50 mikrolitrami roztworu LTL przez 30 minut w temperaturze pokojowej w wilgotnej komorze. Wyjmij szkiełka z nawilżonej komory i myj je PBS z wapniem i magnezem przez pięć minut. Inkubować tkanki z 50 mikrolitrami DAPI, aby barwić jądra DNA przez pięć minut w temperaturze pokojowej. Umyj jeden raz za pomocą PBS. Dodaj 20 mikrolitrów odczynnika montażowego zapobiegającego blaknięciu do tkanki, aby zamontować szkiełka nakrywkowe, a następnie powoli umieść szkiełko nakrywkowe. Odczekaj 24 godziny, aż odczynnik zapobiegający blaknięciu stwardnieje przed obrazowaniem. Włącz mikroskop odwrócony z automatycznym stolikiem XY i wybierz obiektyw 20x. Umieść szkiełko na stoliku mikroskopu i zlokalizuj wycinek tkanki. Następnie otwórz oprogramowanie do akwizycji obrazu i kliknij na żywo, aby otworzyć okno podglądu na żywo. Znajdź sekcję tkanki, upewniając się, że jest ostra. Kliknij menu pobierania i wybierz opcję skanowania dużego obrazu. Ustaw obszar do skanowania, przesuwając stolik za pomocą joysticka do skrajnej lewej części sekcji tkanki, a następnie kliknij strzałkę w lewo. Powtórz to dla górnego, prawego i dolnego segmentu tkanki. Kliknij menu pobierania i upewnij się, że pole wyboru przechwytywania wielokanałowego jest zaznaczone. Aby uchwycić obrazy wielokanałowe, kliknij zakładkę lambda, kliknij każdy kanał i ustaw czas ekspozycji na poziom, w którym barwienie jest widoczne bez nasycania jakiejkolwiek części obrazu. Powtórz tę czynność dla każdego kanału, który ma zostać zebrany. Następnie kliknij Skanuj. Otwórz oprogramowanie do pobierania obrazów i kliknij Plik. Następnie kliknij Otwórz i wybierz obraz. Kliknij prawym przyciskiem myszy okno obrazu i wybierz Wielokątny zwrot z inwestycji. Obrysuj zwrot z inwestycji za pomocą narzędzia odręcznego. Następnie nakreśl komórki kanalików LTL dodatnich lub komórki śródmiąższowe alfa SMA. Kliknij zakładkę pomiaru, a następnie próg. Ustaw górny i dolny próg graniczny, dostosowując suwaki po obu stronach obszaru sygnału dodatniego. Następnie kliknij zakładkę ROI. Na koniec kliknij ikonę eksportu, aby zapisać wartości. Użyj arkusza kalkulacyjnego, aby obliczyć procentowy udział obszaru sygnału dodatniego według obszaru ROI.[Prezenter] Pęcherzyki TGF beta dodatnie w trzecim dniu po podaniu cisplatyny lub soli fizjologicznej są pokazane na reprezentatywnych obrazach. Pęcherzyki TGF beta dodatnie obserwuje się w PTC znakowanych LTL w nerkach leczonych cisplatyną w obecności BFA. Jednak pęcherzyków tych nie zaobserwowano w nerkach nieuszkodzonych lub nieleczonych BFA.Modyfikacja wykazała wzrost obszaru TGF beta dodatniego po leczeniu BFA w ostrym uszkodzeniu nerek wywołanym cisplatyną. Podobnie jak TGF beta, pęcherzyki PTGF-D dodatnie lub CTGF również gromadziły się podczas leczenia BFA w AKI indukowanym cisplatyną. Kwantyfikacja wykazała, że obszary PDGF-D dodatnie i CTGF były również znacznie zwiększone w przypadku BFA: W LTL dodatnich komórkach kanalików proksymalnych wstrzyknięcie BFA nie zwiększyło znacząco poziomu BUN w osoczu w trzecim dniu po wstrzyknięciu cisplatyny. Pęcherzyki TGF beta dodatnie obserwowano w komórkach śródmiąższowych znakowanych alfa SMA w cisplatynie AKI z leczeniem BFA. Modyfikacja wykazała, że obszary TGF beta dodatnie w obszarze alfa SMA dodatnim były znacznie zwiększone po leczeniu BFA cisplatyną AKI. Podobnie jak pęcherzyki TGF beta dodatnie, pęcherzyki dodatnie CTGF również zwiększyły się po leczeniu BFA. Ocena ilościowa wykazała, że leczenie BFA zwiększyło stosunek obszaru dodatniego CTGF do obszaru dodatniego alfa SMA w AKI indukowanym cisplatyną. W porównaniu z uszkodzeniem wywołanym cisplatyną, pęcherzyki TGF-beta dodatnie w PTC były znacznie mniejsze w przewlekłej fazie AA. Stwierdzono minimalne dodatnie barwienie w LTL dodatnich PTC. Jednak intensywność sygnału TGF beta w cząsteczce uszkodzenia nerki z dodatnim PTC została zwiększona podczas leczenia BFA. Średni poziom intensywności TGF beta był trzykrotnie wyższy po wstrzyknięciu BFA niż bez BFA.Najważniejszym krokiem jest upewnienie się, że wstrzyknięcie żyły ogonowej zakończyło się sukcesem. Nieudany zastrzyk mógłby zniweczyć wyniki. Więc proszę szukać oznak sukcesu, takich jak żyła, która staje się czysta po wstrzyknięciu, i proszę szukać oznak porażki, takich jak obrzęk nad ogonami.Wstrzyknięcie Brefeldiny A można połączyć z wieloma testami, w tym western blot lub cytometrią przepływową, w celu oceny produkcji cytokin w skali narządu lub pojedynczej komórki.Korzystając z tej techniki, byliśmy w stanie zidentyfikować nowe cytokiny wydzielane przez komórki nabłonka nerek, które wcześniej uważano za pochodzące z innych typów komórek. Może być wykorzystany do rozstrzygnięcia długotrwałych debat na temat udziału określonych typów komórek w uszkodzeniach.

identification-source-secreted-proteins-kidney-brefeldin

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Technika wykorzystująca mikroskopię 2-fotonową intavital o wysokiej rozdzielczości do bezpośredniej wizualizacji i ilościowego określenia filtracji gloemrarnej w kłębuszkach nerkowych na powierzchni. Metoda ta pozwala na bezpośrednie określenie charakterystyk przepuszczalności makrocząsteczek zarówno w stanie normalnym, jak i chorobowym.

Kwantyfikacja przepuszczalności kłębuszkowej makrocząsteczek fluorescencyjnych za pomocą mikroskopii 2-fotonowej u szczurów Wistar w Monachium

Dorosła nerka danio pręgowanego jest doskonałym systemem do regeneracji nerek i badań nad chorobami.  Istotnym aspektem takich badań jest ocena struktury i funkcji nefronu. Protokół ten opisuje kilka metodologii, które można zastosować do oceny składu kanalików nefronowych i oceny wchłaniania zwrotnego przez nerki.

Analiza składu i funkcji nefronów w nerce dorosłego danio pręgowanego

Inżynierskie konstrukty nerkowe dostarczają rozwiązania na niedobór narządów i szkodliwe skutki dializy. W tym miejscu opisujemy protokół mikropreparacji mysich nerek w celu izolacji segmentów korowo-rdzeniowych. Segmenty te są wszczepiane do konstruktów komórkowych wolnych od rusztowań, tworząc organoidy nerkowe.

Mikrodysekcja pierwotnych segmentów tkanki nerkowej i włączenie do niej nowatorskiej technologii konstrukcji bez rusztowań

Ten protokół opisuje pełne badanie nerek, które powinno być przeprowadzone na mysich modelach choroby kłębuszków nerkowych. Metody te pozwalają na szczegółową analizę funkcjonalną, strukturalną i mechanistyczną funkcji kłębuszków nerkowych, którą można zastosować do wszystkich mysich modeli choroby kłębuszków nerkowych.

Ocena czynności nerek w mysich modelach choroby kłębuszków nerkowych

Tutaj prezentujemy protokół do mysiego znakowania in vivo białek powierzchniowych komórek kłębuszkowych za pomocą biotyny. Protokół ten zawiera informacje o tym, jak perfuzja nerek myszy, izolowanie kłębuszków nerkowych i przeprowadzanie endogennej immunoprecypitacji białka będącego przedmiotem zainteresowania.

Izolacja kłębuszków nerkowych i znakowanie in vivo białek powierzchniowych komórek kłębuszków nerkowych

Tutaj prezentujemy protokół do badania przepuszczalności kłębuszków nerkowych u myszy za pomocą bardzo czułego, nieradioaktywnego znacznika. Metoda ta pozwala na powtarzalne analizy moczu przy małych objętościach moczu.

Bardzo czuły pomiar przepuszczalności kłębuszków nerkowych u myszy z izotiocyjanianem fluoresceiny i polisarozą 70

Połączenie znakowania przeciwciałami, optycznego oczyszczania i zaawansowanej mikroskopii świetlnej pozwala na trójwymiarową analizę całych struktur lub organów. Opisano tutaj prostą metodę łączenia znakowania immunologicznego grubych plasterków nerki, oczyszczania optycznego za pomocą cynamonianu etylu oraz obrazowania konfokalnego, które umożliwia wizualizację i kwantyfikację trójwymiarowych struktur nerkowych.

Optyczne oczyszczanie i obrazowanie znakowanej immunologicznie tkanki nerki

Obecny protokół opisuje metodę śledzenia postępu tocznia u myszy. Przedstawiono dwie dodatkowe procedury w celu scharakteryzowania toczniowego zapalenia nerek w oparciu o naciek komórek i odkładanie się białek w nerkach.

Analizy białkomoczu, naciekania leukocytów przez nerki i odkładania się białek przez nerki u myszy MRL/lpr podatnych na toczeń

Obecny protokół opisuje tworzenie zwierzęcego modelu nefropatii błoniastej (MN) oraz jak hamowanie Kemeng Fanga zmniejsza apoptozę podocytów szczurów MN poprzez aktywację szlaku sygnałowego PI3K/AKT.

Mechanizm hamowania apoptozy podocytów przez Kemeng Fang u szczurów z nefropatią błoniastą poprzez szlak sygnałowy PI3K / AKT

Ten protokół opisuje metodę wywoływania jednostronnej niedrożności moczowodu (UUO) u myszy w celu zbadania postępu zwłóknienia tkanek w nefropatii obturacyjnej. Obejmuje zabiegi chirurgiczne, opiekę pooperacyjną i metody oceny zwłóknienia.

Model jednostronnej niedrożności moczowodu do badania zwłóknienia śródmiąższowego nerek

Poznaj metodę identyfikacji komórek produkujących cytokiny w uszkodzonych nerkach za pomocą Brefeldin A. Protokół umożliwia analizę typów komórkowych i stanu komórek w badaniach chorób nerek.

Identyfikacja źródła wydzielanych białek w nerkach za pomocą wstrzyknięcia Brefeldin A

Przeglądaj więcej filmów