Name: Ocena terapeutyczna przeszczepu mikrobioty kałowej w mysim modelu z niedoborem interleukiny 10 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-06T13:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 41 s
Description: Poznaj metodę przeszczepu mikrobioty kałowej w mysim modelu z niedoborem IL-10. Technika ta pozwala ocenić terapeutyczny potencjał FMT w leczeniu zapalenia jelit i zaburzeń czynności serca.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była częściowo wspierana przez granty z National Institutes of Health (R01 HL152683 i R21 AI126097 dla Q. Li) oraz przez American Heart Association Grant-in-Aid 17GRNT33460395 (dla Q. Li) (heart.org).

Wszystkie procedury wykonywane na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Oddziału Medycznego Uniwersytetu Teksańskiego w Galveston (Protokół # 1512071A).
1. Zbieranie świeżych granulek kału
<ol>
	<li>Przygotuj sterylne ręczniki papierowe, kleszcze z końcami i stożkowe probówki o pojemności 50 ml.
	<ol>
		<li>Umieść kilka ręczników papierowych i kleszczyków w oddzielnych torebkach autoklawowych i sterylizuj je w autoklawie w temperaturze 180 °C w suchym ogniu przez 30 minut. Używaj również sterylnych probówek stożkowych. Zważ stożkowe rurki i zapisz ich wagę na probówkach.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Włącz szafę bezpieczeństwa biologicznego w pomieszczeniu dla zwierząt.</li>
	<li>Weź autoklawowaną, czystą klatkę na myszy bez pościeli i umieść ją w szafce bezpieczeństwa biologicznego. Zdejmij pokrywę i stojak na żywność i umieść je w szafce.</li>
	<li>Umieść sterylne ręczniki papierowe na dnie klatki i umieść metalowy stojak z powrotem na klatce.</li>
	<li>Zidentyfikuj dawców kału w tym samym wieku i umieść klatkę dla myszy w komorze bezpieczeństwa biologicznego. Otwórz klatkę i delikatnie chwyć mysz-dawcę (C57BL/6J) za ogon i umieść ją na metalowym stojaku na czystej klatce.</li>
	<li>Umieść pokrywę klatki na stojaku i poczekaj, aż zwierzę (zwierzęta) się wypróżni. 
	UWAGA: Umieść jednocześnie kilka rodzeństwa myszy na stojaku.</li>
	<li>Zbierz granulki kału i umieść je w sterylnej stożkowej probówce o pojemności 50 ml. Zbierz granulki według płci. Nie mieszaj granulek kału zebranych od samców i samic.</li>
	<li>Ponownie zważ probówkę i oblicz wagę granulek kału.</li>
</ol>
2. Przygotowanie zawiesiny kałowej
<ol>
	<li>Przygotuj sterylny roztwór (10% glicerol w soli fizjologicznej).</li>
	<li>Dodaj 10 ml 10% glicerolu/soli fizjologicznej do stożkowej probówki na każdy gram granulek kału. 
	UWAGA: W razie potrzeby zwiększyć objętość roztworu do 20 ml. W tym badaniu użyto również 1 ml roztworu na każdą osadkę (5-10 mg).</li>
	<li>Homogenizować mieszaninę na niskich obrotach za pomocą homogenizatora stołowego lub blendera umieszczonego w okapie wyciągowym w celu ponownego zawieszenia kału (3 x 30 s).</li>
	<li>Przefiltruj zawiesinę kałową przez 2 warstwy sterylnej gazy bawełnianej (10,2 cm x 10,2 cm). Filtrat należy przechowywać tymczasowo w lodówce do 6 godzin lub zapakować do sterylnych fiolek kriogenicznych i przechowywać w zamrażarce o temperaturze -80 °C.</li>
	<li>Dokładnie wyczyść homogenizator lub blender zgodnie ze standardową procedurą.</li>
</ol>
3. Podawanie zawiesiny kałowej przez zgłębnik doustny
<ol>
	<li>Rozmrozić zamrożoną zawiesinę kału na lodzie, jeśli używa się zamrożonych próbek. Wymieszaj rozmrożoną zawiesinę kałową przez wirowanie.</li>
	<li>Przenieść świeżą lub rozmrożoną zawiesinę kału do strzykawek o pojemności 1 ml. 
	UWAGA: Każda mysz otrzyma łącznie 200 μl zawiesiny kałowej, a każda mysz IL-10-/- w grupie kontrolnej otrzyma 200 μl 10% glicerolu/soli fizjologicznej17.</li>
	<li>Zważ myszy i wybierz odpowiedni rozmiar igły do zgłębnika oraz maksymalną objętość dawki. 
	UWAGA: W przypadku myszy o masie ciała między 20-25 gramami użyj zakrzywionej igły do zgłębnika o wadze 20 G i długości 3,81 cm z kulką o średnicy 2,25 mm. Sprawdź gavageneedle.com, aby uzyskać więcej informacji.</li>
	<li>Przetestuj igłębnik do zgłębnika, mierząc długość od czubka nosa myszy do wyrostka mieczykowatego (spód mostka). Napełnić strzykawkę 10% glicerolem/solą fizjologiczną lub zawiesiną kałową i usunąć pęcherzyki powietrza z wnętrza strzykawki i igły. 
	UWAGA: Jeśli igła jest dłuższa niż długość, umieść znak na trzonie/rurce igły na poziomie nosa. Nie należy przekładać igły/rurki przez zwierzę poza ten punkt, aby zapobiec perforacji żołądka.</li>
	<li>Umieść jedną klatkę na myszy w szafie bezpieczeństwa biologicznego, zdejmij plastikową pokrywę klatki i pozostaw metalowy stojak na miejscu.</li>
	<li>Chwyć jedną mysz za ogon i połóż ją na metalowym stojaku. Jedną ręką trzymaj mysz za ogon, a drugą ręką kciukiem i środkowymi palcami drugiej ręki przytrzymuj zwierzę, chwytając skórę za ramiona. W ten sposób przednie łapy są rozciągnięte na boki, co zapobiegnie wypychaniu igły przez przednie stopy. Delikatnie wyciągnij głowę zwierzęcia do tyłu i przytrzymaj głowę jedną ręką. 
	UWAGA: Ćwicz obsługę myszy, aż eksperymentator będzie miał pełną pewność siebie, zanim przystąpisz do eksperymentu.</li>
	<li>Umieść igłębkę na języku w jamie ustnej. Delikatnie przesuwaj się wzdłuż górnego podniebienia, aż igła dotrze do przełyku. Przesunąć igłę płynnie jednym ruchem. Nie należy wciskać igły na siłę, jeśli wyczuwalny jest jakikolwiek opór. Wyjmij igłę i spróbuj ponownie.</li>
	<li>Po prawidłowym umieszczeniu i sprawdzeniu igły, powoli podawać materiał, wciskając strzykawkę przymocowaną do igły. Nie obracać igły ani nie popychać igły do przodu, ponieważ może to spowodować pęknięcie przełyku. Po podaniu należy delikatnie wyciągnąć igłę.</li>
	<li>Umieść mysz z powrotem w klatce domowej. Monitoruj zwierzę przez 5-10 minut, szukając oznak trudności w oddychaniu lub niepokoju. Ponownie monitoruj myszy między 12-24 godzinami po FMT.</li>
</ol>
4. Monitorowanie chorób i eutanazja
<ol>
	<li>Monitoruj myszy podłużnie pod kątem wystąpienia IBD za pomocą utajonej krwi kałowej i/lub kolonoskopii21. Oceń czynność serca za pomocą echokardiografii przezklatkowej22,23.</li>
	<li>Eutanazja zwierząt przez dekapitację w głębokim znieczuleniu za pomocą izofluranu (1%-4%).</li>
	<li>Zebrać krew do probówek do mikrowirówek z antykoagulantem i odwirować przy 1000-2000 x g przez 10 minut w wirówce z chłodzeniem (4 °C). Zachowaj supernatant, oznaczone osoczem w zamrażarce o temperaturze -80°C.</li>
	<li>Po eutanazji przygotuj okrężnicę myszy za pomocą techniki Swiss-roll24 do analizy histopatologicznej (barwienie H&E)25.</li>
	<li>Zmierz peptyd natriuretyczny (BNP) typu B w osoczu za pomocą zestawu do testu immunoenzymatycznego (EIA)23.</li>
</ol>

<ol><li>D'Argenio, V., Salvatore, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+gut+microbiome+in+the+healthy+adult+status%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">The role of the gut microbiome in the healthy adult status.</a> Clinica Chimica Acta. 451, Pt A 97-102 (2015).</li>
<li>Baquero, F., Nombela, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbiome+as+a+human+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+and+Infection%22%5BJournal%5D)">The microbiome as a human organ.</a> Clinical Microbiology and Infection. 18, Suppl 4 2-4 (2012).</li>
<li>Hawrelak, J. A., Myers, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+causes+of+intestinal+dysbiosis%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Alternative+Medcine+Review%22%5BJournal%5D)">The causes of intestinal dysbiosis: a review.</a> Alternative Medcine Review. 9 (2), 180-197 (2004).</li>
<li>Carding, S., Verbeke, K., Vipond, D. T., Corfe, B. M., Owen, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysbiosis+of+the+gut+microbiota+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Ecology+in+Health+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Dysbiosis of the gut microbiota in disease.</a> Microbial Ecology in Health and Disease. 26 (1), 26191(2015).</li>
<li>Ma, H. Q., Yu, T. T., Zhao, X. J., Zhang, Y., Zhang, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fecal+microbial+dysbiosis+in+Chinese+patients+with+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Fecal microbial dysbiosis in Chinese patients with inflammatory bowel disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (13), 1464-1477 (2018).</li>
<li>Chu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+changes+of+enteric+mycobiota+and+virome+in+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Digestive+Diseases%22%5BJournal%5D)">Specific changes of enteric mycobiota and virome in inflammatory bowel disease.</a> Journal of Digestive Diseases. 19 (1), 2-7 (2018).</li>
<li>Manichanh, C., Borruel, N., Casellas, F., Guarner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gut+microbiota+in+IBD%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">The gut microbiota in IBD.</a> Nature reviews Gastroenterology and Hepatology. 9 (10), 599-608 (2012).</li>
<li>Podolsky, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Inflammatory bowel disease.</a> The New England Journal of Medicine. 347 (6), 417-429 (2002).</li>
<li>Tamboli, C. P., Neut, C., Desreumaux, P., Colombel, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysbiosis+in+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Dysbiosis in inflammatory bowel disease.</a> Gut. 53 (1), 1-4 (2004).</li>
<li>Shi, Y. C., Yang, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fecal+microbiota+transplantation%3A+Current+status+and+challenges+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22JGH+Open%3A+An+Open+Access+Journal+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Fecal microbiota transplantation: Current status and challenges in China.</a> JGH Open: An Open Access Journal of Gastroenterology and Hepatology. 2 (4), 114-116 (2018).</li>
<li>Markley, J. C., Carson, R. P., Holzer, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomembranous+enterocolitis%3A+A+clinico+pathologic+study+of+fourteen+cases+with+a+common+etiologic+factor%5BTitle%5D)+AND+%22AMA+Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Pseudomembranous enterocolitis: A clinico pathologic study of fourteen cases with a common etiologic factor.</a> AMA Archives of Surgery. 77 (3), 452-461 (1958).</li>
<li>Wilcox, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+difficile+infection+and+pseudomembranous+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Practice+and+Research+Clinical+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Clostridium difficile infection and pseudomembranous colitis.</a> Best Practice and Research Clinical Gastroenterology. 17 (3), 475-493 (2003).</li>
<li>Kelly, C. R., de Leon, L., Jasutkar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fecal+microbiota+transplantation+for+relapsing+Clostridium+difficile+infection+in+26+patients%3A+methodology+and+results%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Fecal microbiota transplantation for relapsing Clostridium difficile infection in 26 patients: methodology and results.</a> Journal of Clinical Gastroenterology. 46 (2), 145-149 (2012).</li>
<li>Borody, T. J., Warren, E. F., Leis, S., Surace, R., Ashman, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+ulcerative+colitis+using+fecal+bacteriotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Treatment of ulcerative colitis using fecal bacteriotherapy.</a> Journal of Clinical Gastroenterology. 37 (1), 42-47 (2003).</li>
<li>Cheng, F., Huang, Z., Wei, W., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fecal+microbiota+transplantation+for+Crohn%27s+disease%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Techniques+in+Coloproctology%22%5BJournal%5D)">Fecal microbiota transplantation for Crohn's disease: a systematic review and meta-analysis.</a> Techniques in Coloproctology. 25 (5), 495-504 (2021).</li>
<li>Scheinin, T., Butler, D. M., Salway, F., Scallon, B., Feldmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+the+interleukin-10+knockout+mouse+model+of+colitis%3A+antitumour+necrosis+factor-antibodies+suppress+the+progression+of+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Immunology%22%5BJournal%5D)">Validation of the interleukin-10 knockout mouse model of colitis: antitumour necrosis factor-antibodies suppress the progression of colitis.</a> Clinical and Experimental Immunology. 133 (1), 38-43 (2003).</li>
<li>Keubler, L. M., Buettner, M., Hager, C., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multihit+model%3A+Colitis+lessons+from+the+interleukin-10-deficient+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammatory+Bowel+Diseases%22%5BJournal%5D)">A multihit model: Colitis lessons from the interleukin-10-deficient mouse.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 21 (8), 1967-1975 (2015).</li>
<li>Kiesler, P., Fuss, I. J., Strober, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+inflammatory+bowel+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Experimental models of inflammatory bowel diseases.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 1 (2), 154-170 (2015).</li>
<li>Sikka, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin+10+knockout+frail+mice+develop+cardiac+and+vascular+dysfunction+with+increased+age%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Gerontology%22%5BJournal%5D)">Interleukin 10 knockout frail mice develop cardiac and vascular dysfunction with increased age.</a> Experimental Gerontology. 48 (2), 128-135 (2013).</li>
<li>Fecal microbiota transplantation-standardization study group. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanjing+consensus+on+methodology+of+washed+microbiota+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Medical+Journal+%28Engl%29%22%5BJournal%5D)">Nanjing consensus on methodology of washed microbiota transplantation.</a> Chinese Medical Journal (Engl). 133 (19), 2330-2332 (2020).</li>
<li>Kodani, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flexible+colonoscopy+in+mice+to+evaluate+the+severity+of+colitis+and+colorectal+tumors+using+a+validated+endoscopic+scoring+system%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Flexible colonoscopy in mice to evaluate the severity of colitis and colorectal tumors using a validated endoscopic scoring system).</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (80), e50843(2013).</li>
<li>Cheng, H. -W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+right+ventricular+structure+and+function+in+mouse+model+of+pulmonary+artery+constriction+by+transthoracic+echocardiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Assessment of right ventricular structure and function in mouse model of pulmonary artery constriction by transthoracic echocardiography.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (84), e51041(2014).</li>
<li>Tang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+colitis+upregulates+microRNAs+suppressing+brain-derived+neurotrophic+factor+in+the+adult+heart%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chronic colitis upregulates microRNAs suppressing brain-derived neurotrophic factor in the adult heart.</a> PLoS One. 16 (9), 0257280(2021).</li>
<li>Orner, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+tumorigenesis+in+the+Apc%28min%29+mouse%3A+down-regulation+of+beta-catenin+signaling+by+a+combination+of+tea+plus+sulindac%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Suppression of tumorigenesis in the Apc(min) mouse: down-regulation of beta-catenin signaling by a combination of tea plus sulindac.</a> Carcinogenesis. 24 (2), 263-267 (2003).</li>
<li>Kline, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+injury+increases+gut+permeability+by+epigenetically+suppressing+E-Cadherin+in+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Neonatal injury increases gut permeability by epigenetically suppressing E-Cadherin in adulthood.</a> The Journal of Immunology. 204 (4), 980-989 (2020).</li>
<li>DeGruttola, A. K., Low, D., Mizoguchi, A., Mizoguchi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+understanding+of+dysbiosis+in+disease+in+human+and+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammatory+Bowel+Diseases%22%5BJournal%5D)">Current understanding of dysbiosis in disease in human and animal models.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 22 (5), 1137-1150 (2016).</li>
<li>Chevalier, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+gut+microbiota+on+depressive-like+behaviors+in+mice+is+mediated+by+the+endocannabinoid+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Effect of gut microbiota on depressive-like behaviors in mice is mediated by the endocannabinoid system.</a> Nature Communications. 11 (1), 6363(2020).</li>
<li>Kao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+oral+capsule-+vs+colonoscopy-delivered+fecal+microbiota+transplantation+on+recurrent+clostridium+difficile+infection%3A+A+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Effect of oral capsule- vs colonoscopy-delivered fecal microbiota transplantation on recurrent clostridium difficile infection: A randomized clinical trial.</a> JAMA. 318 (20), 1985-1993 (2017).</li>
<li>Cammarota, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+consensus+conference+on+stool+banking+for+faecal+microbiota+transplantation+in+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">International consensus conference on stool banking for faecal microbiota transplantation in clinical practice.</a> Gut. 68 (12), 2111-2121 (2019).</li>
<li>Vemuri, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microgenderome+revealed%3A+sex+differences+in+bidirectional+interactions+between+the+microbiota%2C+hormones%2C+immunity+and+disease+susceptibility%5BTitle%5D)+AND+%22Seminar+Immunopathology%22%5BJournal%5D)">The microgenderome revealed: sex differences in bidirectional interactions between the microbiota, hormones, immunity and disease susceptibility.</a> Seminar Immunopathology. 41 (2), 265-275 (2019).</li>
<li>Wilkinson, N. M., Chen, H. -C., Lechner, M. G., Su, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Sex differences in immunity.</a> Annual Review of Immunology. , (2022).</li>
<li>Lee, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frozen+vs+fresh+fecal+microbiota+transplantation+and+clinical+resolution+of+diarrhea+in+patients+with+recurrent+clostridium+difficile+infection%3A+A+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Frozen vs fresh fecal microbiota transplantation and clinical resolution of diarrhea in patients with recurrent clostridium difficile infection: A randomized clinical trial.</a> JAMA. 315 (2), 142-149 (2016).</li>
<li>Hamilton, M. J., Weingarden, A. R., Sadowsky, M. J., Khoruts, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+frozen+preparation+for+transplantation+of+fecal+microbiota+for+recurrent+clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Standardized frozen preparation for transplantation of fecal microbiota for recurrent clostridium difficile infection.</a> American Journal of Gastroenterology. 107 (5), 761-767 (2012).</li>
<li>Tang, G., Yin, W., Liu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+frozen+fecal+microbiota+transplantation+as+effective+as+fresh+fecal+microbiota+transplantation+in+patients+with+recurrent+or+refractory+Clostridium+difficile+infection%3A+A+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostic+Microbiology+and+Infectious+Disease%22%5BJournal%5D)">Is frozen fecal microbiota transplantation as effective as fresh fecal microbiota transplantation in patients with recurrent or refractory Clostridium difficile infection: A meta-analysis.</a> Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 88 (4), 322-329 (2017).</li>
<li>Cui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fecal+microbiota+transplantation+through+mid-gut+for+refractory+Crohn%27s+disease%3A+safety%2C+feasibility%2C+and+efficacy+trial+results%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Fecal microbiota transplantation through mid-gut for refractory Crohn's disease: safety, feasibility, and efficacy trial results.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 30 (1), 51-58 (2015).</li>
<li>Li, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+for+the+second+fecal+microbiota+transplantation+to+maintain+the+long-term+benefit+from+the+first+treatment+for+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Timing for the second fecal microbiota transplantation to maintain the long-term benefit from the first treatment for Crohn's disease.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 103 (1), 349-360 (2019).</li>
<li>Moayyedi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+fecal+microbiota+transplantation+in+patients+with+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Update on fecal microbiota transplantation in patients with inflammatory bowel disease.</a> Gastroenterology and Hepatology. 14 (5), 319(2018).</li>
<li>Saha, S., Mara, K., Pardi, D. S., Khanna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+safety+of+fecal+microbiota+transplantation+for+recurrent+clostridioides+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Long-term safety of fecal microbiota transplantation for recurrent clostridioides difficile infection.</a> Gastroenterology. 160 (6), 1961-1969 (2021).</li>
<li>Perler, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+efficacy+and+safety+of+fecal+microbiota+transplantation+for+treatment+of+recurrent+clostridioides+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Long-term efficacy and safety of fecal microbiota transplantation for treatment of recurrent clostridioides difficile infection.</a> Journal of Clinical Gastroenterology. 54 (8), 701-706 (2020).</li>
<li>Safety alert regarding use of fecal microbiota for transplantation and risk of serious adverse events likely due to transmission of pathogenic organisms. FDA. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/vaccines-blood-biologics/safety-availability-biologics/safety-alert-regarding-use-fecal-microbiota-tramsplantation-and-risk-serious-adverse-events-likely">https://www.fda.gov/vaccines-blood-biologics/safety-availability-biologics/safety-alert-regarding-use-fecal-microbiota-tramsplantation-and-risk-serious-adverse-events-likely</a> (2020).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają sprzecznych interesów.

Jako innowacyjna terapia eksperymentalna, FMT stała się w ostatnich latach gorącym tematem w leczeniu różnych zaburzeń, ponieważ dysbioza mikrobioty komensalnej jest zaangażowana w patogenezę wielu chorób człowieka, w tym IBD, otyłości, cukrzycy, autyzmu, chorób serca i raka26. Chociaż mechanizm nie został ustalony, uważa się, że FMT działa poprzez budowę nowej flory biologicznej i zapobieganie utracie resztkowych bakterii. Przedstawiona w niniejszym dokumencie metoda przyjęła zgłębnik doustny jak...

Mikroekosystem jelitowy człowieka jest niezwykle złożony, z ponad 1000 gatunków bakterii w jelicie zdrowej osoby1. Flora jelitowa bierze udział w utrzymaniu prawidłowych funkcji fizjologicznych jelit i odpowiedzi immunologicznej oraz ma nierozerwalny związek z organizmem człowieka. Coraz więcej dowodów sugeruje, że mikrobiom jelitowy stanowi ostatni ludzki narząd, który jest częścią ludzkiego ciała, a nie tylko grupą pasożytów2. "Zdrowa" symbioza między mikrobiotą jelitową, jej metabolitami a układem odpornościowym gospodarza, która powstała we wczesnym okresie życia, ma kluczowe znaczenie dla utrzymania homeostazy jelit. W niektórych nieprawidłowych stanach, takich jak przewlekłe zapalenie, zmiany w wewnętrznym i zewnętrznym środowisku organizmu poważnie zaburzają homeostazę jelit, powodując utrzymujący się brak równowagi społeczności mikrobiologicznej jelit, zwany dysbiozą3. W rzeczywistości narażenie na wiele czynników środowiskowych, w tym dietę, leki i patogeny, może prowadzić do zmian w mikrobiocie.
Dysbioza jest związana z patogenezą różnych chorób jelit, takich jak nieswoiste zapalenie jelit (IBD), zespół jelita drażliwego (IBS) i rzekomobłoniaste zapalenie jelit, a także rosnącą listę zaburzeń pozajelitowych, w tym chorób układu krążenia, otyłości i alergii4. Profilowanie mikrobioty wykazało, że pacjenci z IBD mają dramatyczny spadek różnorodności bakteryjnej, a także wyraźne zmiany w populacjach niektórych określonych szczepów bakteryjnych5,6. Badania te wykazały mniej Lachnospiraceae i Bacteroidetes, ale więcej Proteobacteria i Actinobacteria u pacjentów z IBD. Uważa się, że patogeneza IBD jest związana z różnymi czynnikami chorobotwórczymi, w tym nieprawidłową florą jelitową, rozregulowaną odpowiedzią immunologiczną, wyzwaniami środowiskowymi i wariantami genetycznymi7. Liczne dowody sugerują, że bakterie jelitowe odgrywają rolę w fazie inicjacji i stosowania IBD8,9, co wskazuje, że korygowanie dysbiozy jelitowej może stanowić nowatorskie podejście do terapii i/lub leczenia podtrzymującego IBD.
Prototyp przeszczepu mikrobioty kałowej (FMT) rozpoczął się w starożytnych Chinach10. W 1958 roku dr Eiseman i jego koledzy z powodzeniem wyleczyli cztery przypadki ciężkiego rzekomobłoniastego zapalenia jelit kałem od zdrowych dawców za pomocą lewatywy, otwierając nowy rozdział we współczesnej medycynie zachodniej wykorzystującej ludzki kał do leczenia chorób ludzkich11. Stwierdzono, że zakażenie Clostridium difficile (CDI) jest główną przyczyną rzekomobłoniastego zapalenia jelit12, a FMT jest wysoce skuteczne w leczeniu CDI. W ciągu ostatnich ośmiu lat FMT stała się standardową terapią w leczeniu nawracających CDI13, co skłoniło do dalszych badań nad rolą FMT w innych zaburzeniach, takich jak IBD. W ciągu ostatnich dwudziestu lat liczne opisy przypadków i badania kohortowe udokumentowały stosowanie FMT u pacjentów z IBD14. Metaanaliza, obejmująca 12 badań, wykazała, że 62% pacjentów z chorobą Leśniowskiego-Crohna (CD) osiągnęło remisję kliniczną po FMT, a 69% pacjentów z CD miało odpowiedź kliniczną15. Pomimo tych zachęcających wyników, rola FMT w leczeniu IBD pozostaje niepewna, a mechanizmy, za pomocą których FMT łagodzi stan zapalny jelit, są słabo poznane. Konieczne są dalsze badania, zanim FMT będzie mogło dołączyć do obecnego arsenału opcji leczenia IBD w klinikach.
W tym protokole zastosowaliśmy FMT na myszach IL-10-/-, u których zapalenie jelita grubego rozwija się spontanicznie po odsadzeniu i posłużyło jako złoty standard odzwierciedlający wieloczynnikową naturę IBD16,17,18. IL-10−/− myszy są szeroko wykorzystywane do analizy etiologii IBD, ponieważ wykazują podobne cechy molekularne i histologiczne do pacjentów z IBD i, podobnie jak pacjenci, choroba może być złagodzona za pomocą terapii anty-TNFα16. Starzejące się myszy IL10−/− (>9 miesięcy) mają zwiększoną wielkość serca i upośledzoną czynność serca w porównaniu z dopasowanymi wiekowo myszami typu dzikiego19, co czyni je doskonałym modelem do badania chorób serca wywołanych zapaleniem jelita grubego. Jednak można również zastosować inne mysie modele zapalenia jelita grubego, takie jak model siarczanu sodu dekstranu i model zapalenia jelita grubego wywołanego przez limfocyty T. Podawaliśmy zawiesinę kałową przez zgłębnik doustny, która okazała się skuteczną i lepszą drogą niż lewatywa u ludzi20.

<table><tbody><tr><td>Strzykawka BD, 1 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-829-10F</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze</td><td>Knipex</td><td>926443</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw EIA peptydu natriuretycznego mózgu Myszy</td><td>Sigma</td><td>RAB0386</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J Wirówka</td> do <td>000664</td><td></td><td>Jackson Lab</td></tr><tr><td></td><td>Eppendorf</td><td>5415R</td><td></td></tr><tr><td>Rurki stożkowe</td><td>ThermoFisher</td><td>339650</td><td></td></tr><tr><td>Zakrzywione igły do karmienia</td><td>Kent Scientific</td><td>FNC-20-1.5-2</td><td></td></tr><tr><td>GLH-115 homogenizator</td><td>Omni International</td><td>GLH-115</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>MiliporeSigma</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>IL-10 nokaut myszy</td><td>Jackson Lab</td><td>004366</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Critical care</td><td>NDC66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>USP sól fizjologiczna normalna</td><td>Waporyzator Grainger</td><td>6280</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Euthanex Corp.</td><td>EZ-108SA</td><td></td></tr></tbody></table>

ocena terapeutyczna przeszczepu mikrobioty kałowej w mysim modelu z niedoborem interleukiny 10

Therapeutic Evaluation of Fecal Microbiota Transplantation in an Interleukin 10-Deficient Mouse Model

Wraz z rozwojem mikroekologii w ostatnich latach, związek między bakteriami jelitowymi a nieswoistymi zapaleniami jelit (IBD) przyciągnął znaczną uwagę. Coraz więcej dowodów sugeruje, że mikrobiota dysbiotyczna odgrywa aktywną rolę w wyzwalaniu lub pogarszaniu procesu zapalnego w IBD oraz że przeszczep mikrobioty kałowej (FMT) jest atrakcyjną strategią terapeutyczną, ponieważ przeniesienie zdrowej mikrobioty do pacjenta z IBD może przywrócić odpowiednią komunikację między gospodarzem a mikrobiotą. Jednak mechanizmy molekularne są niejasne, a skuteczność FMT nie została zbyt dobrze ustalona. W związku z tym konieczne są dalsze badania na zwierzęcych modelach IBD. W tej metodzie zastosowaliśmy FMT od myszy C57BL / 6J typu dzikiego do myszy z niedoborem IL-10, szeroko stosowanego mysiego modelu zapalenia jelita grubego. Badanie koncentruje się na zbieraniu granulek kału od myszy dawców, wytwarzaniu roztworu/zawiesiny kałowej, podawaniu roztworu kałowego i monitorowaniu choroby. Odkryliśmy, że FMT znacząco złagodził upośledzenie czynności serca u myszy z nokautem IL-10, podkreślając jego potencjał terapeutyczny w leczeniu IBD.

Przeprowadziliśmy przeszczep mikrobioty jelitowej (FMT) od zdrowych dawców 3 razy (raz w miesiącu przez 3 miesiące) u 2-miesięcznych myszy szczepu C57BL/6J typu dzikiego (WT) oraz myszy z nokautem genu IL-10. Myszy C57BL/6J w podobnym wieku (różnica wieku powinna wynosić &lt;2 miesiące) służyły jako dawcy kału; za każdym razem wykorzystywano świeże granulki kału. Analizy EIA wykazały, że poziom BNP w osoczu myszy z niedoborem IL-10 był wyraźnie podwyższony, a FMT od zdrowego dawcy znacząco złagodziło wzrost poziomu BNP (...

Interakcja genetycznej podatności, odporności błony śluzowej i mikroekologicznego środowiska jelitowego jest zaangażowana w patogenezę nieswoistego zapalenia jelit (IBD). W tym badaniu zastosowaliśmy przeszczep mikrobioty kałowej myszom z niedoborem IL-10 i zbadaliśmy jej wpływ na zapalenie okrężnicy i czynność serca.

Ocena terapeutyczna przeszczepu mikrobioty kałowej w mysim modelu z niedoborem interleukiny 10

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted ...

Trzy eksperymenty kliniczne sugerują, że przeszczep mikrobioty kałowej niesie ze sobą potencjał terapeutyczny w przypadku wielu chorób u ludzi. Dalsze badania mechanistyczne pomogą przenieść FMT z laboratorium do łóżka pacjenta. Ta metoda przyjmuje zgłębnik doustny do drogi porodu, umożliwiając bardziej precyzyjne dostarczanie objętości i szybkie wchłanianie.Wymaga jedynie umiarkowanych umiejętności technicznych. Procedurę zademonstruje Xioying Zhong, starszy pracownik naukowy z naszego laboratorium. Zacznij od przygotowania sterylnych ręczników papierowych, kleszczyków z końcami i stożkowych probówek o pojemności 50 mililitrów.Umieść kilka ręczników papierowych i kleszczyków w osobnych workach autoklawu i sterylizuj je w autoklawie w temperaturze 180 stopni Celsjusza w suchym ogniu przez 30 minut. Zważ sterylne probówki stożkowe i zapisz ich wagę na probówkach. Włącz szafę bezpieczeństwa biologicznego w pomieszczeniu dla zwierząt.Weź autoklawowaną, czystą klatkę na myszy bez pościeli i umieść ją w szafce bezpieczeństwa biologicznego. Zdejmij pokrywę i stojak na żywność i umieść je w szafce. Umieść sterylne ręczniki papierowe na dnie klatki i umieść metalowy stojak z powrotem na klatce.Zidentyfikuj dawców kału dopasowanych do wieku i umieść klatkę dla myszy w komorze bezpieczeństwa biologicznego. Otwórz klatkę i delikatnie chwyć mysz dawcy za ogon i umieść ją na metalowym stojaku na czystej klatce. Umieść pokrywę klatki na stojaku i poczekaj, aż zwierzę się wypróżni.Zbierz granulki kału i umieść je w sterylnej stożkowej probówce o pojemności 50 mililitrów. Ciągnij granulki według płci. Ponownie zważyć probówkę i obliczyć wagę granulek kału.Przygotuj sterylny roztwór, dodając 10% roztwór glicerolu do zwykłej soli fizjologicznej. Dodaj 10 mililitrów tego roztworu do stożkowej probówki na każdy gram granulek kału. Homogenizować tę mieszaninę na niskich obrotach trzy razy przez 30 sekund za pomocą homogenizatora stołowego wewnątrz okapu wyciągowego w celu ponownego zawieszenia kału.Przefiltruj zawiesinę kałową przez dwie warstwy sterylnej gazy bawełnianej. Filtrat należy przechowywać tymczasowo w lodówce do sześciu godzin lub zapakować do sterylnych fiolek kriogenicznych i przechowywać w zamrażarce o temperaturze minus 80 stopni. Dokładnie wyczyść homogenizator lub blender zgodnie ze standardową procedurą.Rozmrozić zamrożoną zawiesinę kału na lodzie, jeśli używa się zamrożonych próbek. Wymieszaj rozmrożoną zawiesinę kałową przez wirowanie. Przenieść świeżą lub rozmrożoną zawiesinę kału do jednomililitrowych strzykawek.Zważ myszy i wybierz odpowiedni rozmiar igły do zgłębnika oraz maksymalną objętość dawki. Przetestuj igłębkę, mierząc długość od czubka nosa myszy do dolnej części mostka. Napełnić strzykawkę 10% glicerolem w roztworze soli fizjologicznej lub zawiesiny kałowej i usunąć pęcherzyki powietrza z wnętrza strzykawki i igły.Umieść jedną klatkę na myszy w szafie bezpieczeństwa biologicznego. Zdejmij plastikową pokrywę klatki i pozostaw metalowy stojak na miejscu. Otwórz metalowy stojak jedną ręką.Chwyć jedną mysz za ogon i połóż ją na metalowym stojaku. Jedną ręką trzymaj mysz za ogon, a drugą ręką kciukiem i środkowymi palcami drugiej ręki przytrzymuj zwierzę, chwytając skórę za ramiona. Delikatnie wyciągnij głowę zwierzęcia do tyłu i przytrzymaj głowę na miejscu jedną ręką.Umieść igłębkę na języku w jamie ustnej. Delikatnie przesuwaj się wzdłuż górnej palety, aż igła dotrze do przełyku. Przesunąć igłę płynnie jednym ruchem.Po prawidłowym umieszczeniu i sprawdzeniu igły, powoli podawać materiał, wciskając strzykawkę przymocowaną do igły. Po podaniu należy delikatnie wyciągnąć igłę. Zaznacz mysz i umieść ją z powrotem w klatce domowej.Monitoruj zwierzę przez pięć do 10 minut, szukając oznak ciężkiego oddychania lub niepokoju. Należy ponownie monitorować myszy w okresie od 12 do 24 godzin po przeszczepie mikrobioty kałowej. Test immunologiczny enzymatyczny wykazał, że peptyd natriuretyczny typu B był znacznie podwyższony w osoczu myszy z niedoborem interleukiny 10.Przeszczepienie mikrobioty kałowej od zdrowego dawcy znacznie złagodziło wzrost poziomu peptydów natriuretycznych typu B. Echokardiografia wykryła znaczny spadek frakcji wyrzutowej lewej komory u myszy z niedoborem interleukiny 10 w porównaniu z myszami typu dzikiego. Spadek ten został znacznie zniwelowany przez przeszczep mikrobioty kałowej.Wyniki te sugerują, że przeszczep mikrobioty kałowej zdrowego dawcy złagodził zapalenie jelita grubego wywołane zaburzeniem czynności serca. Podczas prób wdrożenia protokołu niezbędny jest wybór odpowiedniej igły do zgłębnika. Elastyczne plastikowe rurki do karmienia mogą być lepszym wyborem dla początkujących.Ważne jest również, aby przećwiczyć obchodzenie się ze zwierzętami przed zgłębnikowaniem.

therapeutic-evaluation-fecal-microbiota-transplantation-an

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Ten film demonstruje metodę generowania podwójnie humanizowanej myszy BLT (szpik, wątroba i grasica) z funkcjonalnym ludzkim układem odpornościowym i stabilnym, wszczepionym ludzkim mikrobiomem jelitowym.

Generowanie podwójnie humanizowanego modelu myszy BLT (szpik kostny, wątroba, grasica)

Ten film pokazuje procedurę przeszczepu mikrobioty kałowej u myszy z niedoborem interleukiny-10 z zapaleniem jelita grubego. Skolonizowane drobnoustroje kałowe w jelitach uwalniają metabolity wtórne, wywołując uwalnianie cytokin przeciwzapalnych i zmniejszając stan zapalny jelita grubego.

Ocena skutków przeszczepu mikrobioty kałowej u myszy z niedoborem interleukiny-10

Przeszczep mikrobioty kałowej za pomocą kolonoskopii jest bezpiecznym i skutecznym sposobem leczenia nawracających i opornych na leczenie infekcji C.difficile. Systematyczne podejście do badań przesiewowych pacjenta i dawcy, przygotowania stolca i dostarczania stolca podczas kolonoskopii zmaksymalizuje sukces terapeutyczny.

Przeszczep mikrobioty kałowej za pomocą kolonoskopii w przypadku nawrotu zakażenia C. difficile

Opisujemy metody długotrwałego monitorowania skuteczności terapii w leczeniu patologii jelita grubego u myszy za pomocą sztywnego endoskopu. Protokół ten może być z łatwością wykorzystany do scharakteryzowania odpowiedzi terapeutycznej pojedynczego guza u żywych myszy, a także do monitorowania potencjalnego nawrotu choroby.

Nieinwazyjna ocena skuteczności nowych terapii patologii jelitowych za pomocą seryjnego obrazowania endoskopowego żywych myszy

Tutaj prezentujemy protokół indukowania zapalenia jelita grubego u myszy poprzez adoptywny transfer syngenicznych limfocytów T CD4+CD45RB do biorców z niedoborem limfocytów T i B. Cechy kliniczne i histopatologiczne naśladują choroby zapalne jelit u ludzi. Metoda ta pozwala na badanie inicjacji zapalenia jelita grubego i postępu choroby.

Indukcja zapalenia jelit myszy przez adoptywny transfer efektorowych limfocytów T CD4 + CD45RB do myszy z niedoborem odporności

Opisujemy nowatorską metodę generowania podwójnie humanizowanych myszy BLT, które posiadają funkcjonalny ludzki układ odpornościowy i stabilny, wszczepiony ludzki mikrobiom jelitowy. Protokół ten może być stosowany bez konieczności stosowania myszy wolnych od zarazków lub urządzeń gnotobiotycznych.

Podwójnie humanizowany model myszy BLT ze stabilnym mikrobiomem jelitowym podobnym do ludzkiego i ludzkim układem odpornościowym

W tym protokole opisany jest model adoptywnego transferowego zapalenia jelita grubego dla antygenu mikrobioty jelitowej z limfocytów T. Limfocyty T CD4 + izoluje się od myszy transgenicznych CBir1 TCR. Są one specyficzne dla immunodominującego antygenu mikrobioty jelitowej CBir1 flageliny, który jest przenoszony do myszy biorcy Rag1-/-, prowadząc do zapalenia jelit.

Indukcja zapalenia jelit przez adoptywny transfer transgenicznych limfocytów T CD4 + CBir1 TCR do myszy z niedoborem odporności

Celem jest tutaj nakreślenie protokołu do badania mechanizmów dysbiozy w chorobach sercowo-naczyniowych. W artykule omówiono, jak aseptycznie pobierać i przeszczepiać próbki kału myszy, izolować jelita i stosować metodę "Swiss-roll", a następnie techniki barwienia immunologicznego w celu zbadania zmian w przewodzie pokarmowym.

Izolacja kału myszy i przeszczep mikrobioty

Protokół ten pokazuje, jak model myszy zawierający domenę homologii 2 zawierający domenę 5'-inozytol fosfatazy (SHIP) niedoborowy dla zapalenia i włóknienia kości typu Leśniowskiego-Crohna (CD) podobnego do choroby Leśniowskiej (CD) może być wykorzystywany do testowania nowych terapii dla CD.

Ocena interwencji terapeutycznych w modelu mysim niedoborowym SHIP zapalenia i włóknienia choroby Leśniowskiego-Crowna podobnego do choroby Leśniowskiego-CRUNA

W tym filmie prezentujemy procedurę aktywacji CD40 i ekspansji mysich limfocytów B z splenocytów myszy C57BL/6, które mogą służyć jako model komórki prezentującej antygen (APC) do badania indukcji odporności.

Mysi model aktywacji limfocytów B przez CD40

Poznaj metodę przeszczepu mikrobioty kałowej w mysim modelu z niedoborem IL-10. Technika ta pozwala ocenić terapeutyczny potencjał FMT w leczeniu zapalenia jelit i zaburzeń czynności serca.

Ocena terapeutyczna przeszczepu mikrobioty kałowej w mysim modelu z niedoborem interleukiny 10

Przeglądaj więcej filmów