16 marca 2022
Przeprowadziliśmy jednopunktowe, lipofilowe wstrzyknięcie znacznika komórkowego w celu śledzenia komórek śródbłonka, a następnie arteriotomię i zszycie tętniaków ściany bocznej na aorcie szczura w jamie brzusznej. Tworzenie się neointima wydawało się zależne od tętnicy macierzystej w tętniakach pozbawionych komórek i było promowane przez rekrutację z komórek ściany tętniaka w ważnych ścianach bogatych w komórki.
Korzystając z bezpośredniego zastosowania znacznika komórek wewnątrzaortalnych, możemy przeanalizować rolę komórek śródbłonka pochodzących z tętnicy macierzystej w tworzeniu się neointima w dwóch różnych punktach czasowych. Dużą zaletą tej techniki jest bezpośrednie, jednopunktowe, interpretacyjne wstrzyknięcie in vivo, co sprawia, że model ten jest solidną i powtarzalną techniką. Przed zabiegiem należy inkubować worki tętnicze od szczurów dawców w 0,1% dodecylosiarczanie sodu przez 10 godzin w temperaturze 37 stopni Celsjusza, aby uzyskać tętniaki pozbawione komórek.
Woreczki te należy pobrać od zwierząt dawców na kilka dni przed zabiegiem. Na początek przeanalizuj zachowanie zwierzęcia i sprawdź błony śluzowe i turgor w ramach przedoperacyjnego badania klinicznego. Zapisz wagę każdego zwierzęcia.
W celu indukcji znieczulenia umieść wszystkie szczury w czystym pudełku wyposażonym w tlen do utraty przytomności po pięciu do 10 minutach. Sprawdź głębokość znieczulenia przy braku odruchu wycofania pedału. Ułóż szczury w pozycji leżącej na plecach i ogol okolicę piersiowo-brzuszną golarką elektryczną.
Za pomocą taśmy przymocuj łapy szczura do deski pokrytej poduszką grzewczą podłączoną do samoregulującej sondy doodbytniczej. Włóż sondę doodbytniczą do odbytu szczura, aby utrzymać żądaną temperaturę 37 stopni Celsjusza za pomocą poduszki grzewczej. Następnie zainstaluj czujnik na prawej tylnej nodze podłączony do skomputeryzowanego systemu do śródoperacyjnej kontroli parametrów życiowych.
W celu pielęgnacji okołoestetycznej nałóż sterylny lubrykant okulistyczny na oczy i przykryj je nieprzezroczystą maską foliową, aby zapobiec wysuszeniu i uszkodzeniom spowodowanym lampą chirurgiczną. Zdezynfekuj pole operacyjne jodowidonem i ułóż pole operacyjne w sterylny sposób. Umieść mikrowacik z fioletową wyściółką pod bliższą i dalszą częścią aorty, aby lepiej uwidocznić tętnicę, gdy tylko zostanie oddzielona od żyły głównej.
Następnie zabezpiecz brzuch białą gazą. W dniu operacji rozpuścić dwa mikrolitry znacznika komórkowego, pipetując jeden mililitr PBS. Przenieść mieszaninę do jednomililitrowej strzykawki wyposażonej w kaniulę.
Wyłącz światło na sali operacyjnej. Za pomocą mikroskopu wykonaj jednopunktowe wstrzyknięcie w środkową brzuszną część aorty za pomocą mikrokleszczyków i ostrożnie wstrzyknij jeden mililitr heparynizowanego 0,9% roztworu soli fizjologicznej. Ostrożnie wstrzyknąć znacznik komórek i natychmiast wyłączyć również mikroskop operacyjny.
Ponownie zabezpiecz brzuch mokrą gazą. Pozostaw barwnik do inkubacji przez co najmniej 15 minut. Następnie włącz mikroskop i oświetlenie sali operacyjnej.
Za pomocą mikrokleszczyków i mikronożyczek wykonaj arteriotomię podłużną tak, aby jej długość była równa średnicy pobranego tętniaka. Umieść tętniaka obok aorty przed wykonaniem arteriotomii, aby zapewnić odpowiednią długość. Zszyj tętniaka ośmioma do 10 pojedynczymi szwami za pomocą niewchłanialnego szwu 10-0.
Przed ostatnim ściegiem dostarczyć cewkę o gęstości upakowania jednego centymetra. W tym modelu można wykonać leczenie cewką lub stentem. Następnie ostrożnie usuń tymczasowe zaciski, zaczynając dystalnie, pod ciągłym nawadnianiem heparynizowaną solą fizjologiczną.
Zamknij ranę warstwowo. Pod koniec zabiegu należy odwrócić znieczulenie za pomocą wstrzyknięcia podskórnego. Pozwól każdemu operowanemu zwierzęciu dojść do siebie w czystej klatce, aż całkowicie się obudzi i ogrzeje w razie potrzeby za pomocą lampy grzewczej.
Wyciągnięte wyjściowe objętości tętniaka w siódmym i 21 dniu nie różniły się istotnie w przypadku tętniaków pozbawionych komórek lub żywotnych między grupami leczonymi cewką lub stentem. Pobrane objętości FU dla tętniaków zdecellularnych wykazały nieistotny wzrost tętniaka w tętniakach zwiniętych w porównaniu ze stantami. Objętość wyciągniętego FU była znacznie większa w grupie zwiniętej niż w grupie ze stentem.
Ilości komórek dodatnich w neoincieli tętniaków pozbawionych komórek nie różniły się istotnie między grupami leczonymi stentem lub zwijakiem w siódmym dniu FU, ale były znacznie wyższe u szczurów ze stentami w dniu 21 FU.No znaczące różnice odnotowano u szczurów zszytych tętniakiem życiowym po siedmiu dniach lub 21 dniach FU.In tętniakach bez komórek po siedmiu dniach FU, Istotnie więcej komórek dodatnich pod względem znacznika komórkowego pozostało w skrzeplinie osoby leczonej stentem w porównaniu z grupą leczoną cewką. Różnicy tej nie zaobserwowano w tętniakach życiowych po siedmiu dniach FU. Pamiętaj, aby zawsze wyłączać światła na sali operacyjnej przed wstrzyknięciem znacznika komórkowego, aby zapobiec blaknięciu. Pozwól również inkubować barwnik przez co najmniej 15 minut.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Niniejsze badanie analizuje rolę komórek śródbłonka z tętnicy doprowadzającej w tworzeniu się neointimy z wykorzystaniem bezpośredniej metody znakowania komórek wewnątrz aorty. Badania przeprowadzono na decelularyzowanych tętniakach brzusznej aorty szczura, analizując różnice w rozwoju neointimy w zależności od zastosowanej metody leczenia. Główne wnioski ilustrują różnice w rekrutacji i retencji komórek pomiędzy tętniakami decelularyzowanymi a żywymi.
Bezpośrednia wewnątrzaortalna iniekcja znacznika komórkowego w modelu tętniaka u szczura umożliwia precyzyjne śledzenie pochodzenia komórek śródbłonka podczas tworzenia się neointymy, wypełniając krytyczną lukę w wiedzy o mechanizmach gojenia naczyń. Podejście to zwiększa wiarygodność prognostyczną w modelach przedklinicznych służących do oceny urządzeń oraz dostarcza informacji pomocnych w wyborze strategii terapeutycznej dla interwencji naczyniowych. Powtarzalność tej metody oraz jej wyniki ilościowe wspierają solidną walidację celów i ograniczanie ryzyka mechanistycznego na etapie przejścia z fazy odkryć do badań przedklinicznych.
Ten model śledzenia komórek łączy wczesną fazę odkryć z walidacją przedkliniczną, umożliwiając analizę dynamiki komórek śródbłonka w procesach uszkodzenia i naprawy naczyń krwionośnych w oparciu o postawione hipotezy.