Name: Procedura badania nawrotów heroiny wywołanych stresem Poszukiwanie abstynencji nałożonej karą (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Poznaj procedurę badania nawrotów heroiny wywołanych stresem po abstynencji nałożonej karą u szczurów. Metoda wykorzystuje warunkowanie operantowe i głodzenie, aby lepiej zrozumieć neuronalne mechanizmy uzależnienia.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Natural Sciences & Engineering Council Discovery Program (USA: RGPIN-2016-06694).

Wszystkie szczury są leczone zgodnie z wytycznymi Kanadyjskiej Rady ds. Opieki nad Zwierzętami. Zgoda na wszystkie procedury eksperymentalne została wydana przez Komisję Etyki Badań na Zwierzętach Uniwersytetu Concordia.
1. Zwierzęta
<ol>
	<li>Zdobądź szczury Long Evans o wadze 275-300 g (samce) lub 225-250 g (samice). Podwójne szczury domowe w standardowych plastikowych klatkach ze ściółką z kolb kukurydzy i rozdrobnionym papierem do czasu operacji.</li>
	<li>Utrzymuj szczury w odwróconym cyklu światło-ciemność (światła wyłączają się o 9:30, światła włączają się o 21:30).</li>
	<li>Zezwalaj na nieograniczony dostęp do jedzenia i wody, z wyjątkiem okresu testu na brak pożywienia. Używaj zwykłej karmy dla szczurów (20,9% białka, 67,2% węglowodanów i 11,8% tłuszczu).</li>
</ol>
2. Operacje dożylne
<ol>
	<li>Zbuduj cewniki i wykonaj operację dożylną zgodnie z opisem w Sedki et al. 201317 z następującymi różnicami: 1) Użyj izofluoranu 2-2,5% do znieczulenia, 2) Zmień dawkę penicyliny podawanej podczas operacji na 60 000 IU/szczura, poprzez wstrzyknięcie podskórne, oraz 3) Zwiększ dawkę gentamycyny w mieszaninie heparyny i gentamycyny używanej do płukania cewników do 7,5 IU + 800 μg; 0,2-0,3 ml.</li>
	<li>Ketoprofen lub karprofen, przeciwzapalny środek przeciwbólowy, należy wstrzykiwać dootrzewnowo lub podskórnie (5 mg/kg) bezpośrednio po zabiegu chirurgicznym (przed wyzdrowieniem ze znieczulenia) i przez kolejne 3 dni. Podczas 2-dniowego okresu rekonwalescencji podawaj rozgniecione jedzenie i ciepło (jeśli to konieczne), aby pomóc w rekonwalescencji. Codziennie waż i nadzoruj zwierzęta, aby sprawdzić, czy nie ma nagłej utraty wagi lub innych oznak problemów zdrowotnych.</li>
</ol>
3. Procedura behawioralna
<ol>
	<li>Komory kondycjonowania instrumentalnego:
	<ol>
		<li>Ustaw komory kondycjonowania instrumentalnego zgodnie z opisem w Sedki et al. 201317.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Dzień przyzwyczajenia:
	<ol>
		<li>Szczury należy umieścić w komorach treningowych po powrocie do zdrowia po operacji i pozwolić zwierzętom przyzwyczaić się do komory przez 24 godziny przed zainicjowaniem jakiegokolwiek protokołu. Trzymaj zwierzęta w pomieszczeniach operacyjnych przez cały czas trwania eksperymentu.</li>
		<li>Nie przymocuj szczurów do metalowej sprężyny i nie inicjuj żadnego protokołu eksperymentalnego (światło sygnału, dźwięk i dźwignie nie są dostępne w dniu przyzwyczajenia).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Samodzielne podawanie heroiny:
	<ol>
		<li>Przymocuj złącze 5-up do rurki Tygon i metalowej sprężyny.</li>
		<li>Ustal codzienne sesje treningowe polegające na samodzielnym podawaniu heroiny przez 6 godzin (0,1 mg/kg mc./infuzja) zgodnie z procedurą opisaną poniżej.</li>
		<li>Rozpocznij codzienne sesje treningowe na początku ciemnej fazy odwróconego cyklu światła (około 9:30 w reprezentatywnych wynikach) od wysunięcia dźwigni wyszukiwania (lub dźwigni take w ciągu pierwszych 2 dni; patrz poniżej), a także wyłączenia światła w domu.</li>
		<li>Samodzielne podawanie z użyciem tylko dźwigni pobierania dostępnej przy stałym przełożeniu 1 (FR1; 2 dni)
		<ol>
			<li>Zaprogramuj każdą próbę tak, aby rozpoczynała się od włożenia dźwigni pobierania.</li>
			<li>Gdy szczur naciśnie dźwignię pobierania jeden raz (FR1), wycofaj dźwignię zabierania, włącz lampkę sygnalizacyjną nad dźwignią i włącz sygnał dźwiękowy na 20-sekundowy okres czasu, wyłącz światło w domu i zezwól na podanie wlewu heroiny (0,1 mg/kg w 0,13 ml)</li>
			<li>Zaprogramuj 30-sekundowy interwał między próbami, w którym nie są wyświetlane żadne sygnały, światło domowe jest wyłączane, a dźwignia jest cofana. Na początek następnej próby włóż dźwignię take i włącz światło w domu.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Samodzielne podawanie z łańcuchem poszukiwania-pobierania w ramach FR1 (5 dni)
		<ol>
			<li>Zaprogramuj system szkolenia operacyjnego tak, aby wkładał tylko dźwignię wyszukiwania i włączał światło domowe, aby zasygnalizować rozpoczęcie sesji. Dźwignia pobierania jest w stanie wsuniętym.</li>
			<li>Gdy szczur naciśnie jeden raz (FR1) na dźwignię wyszukiwania, program cofa dźwignię wyszukiwania i wkłada dźwignię pobierania.</li>
			<li>Jedno naciśnięcie dźwigni zabierania (FR1) powoduje cofnięcie dźwigni pobierania i zainicjowanie tej samej procedury, co w kroku 3.3.4.2 i 30-sekundowego interwału między próbami.</li>
			<li>Zaprogramuj system szkolenia operacyjnego tak, aby wstawiał dźwignię wyszukiwania po zakończeniu interwału między próbami i włączał światło domowe, aby zasygnalizować początek następnej próby.</li>
			<li>Zaprogramuj system szkolenia operacyjnego tak, aby zainicjował interwał między próbami, jeśli szczur nie wykona łańcucha szukania-brania w ciągu 10 minut (nie naciskając dźwigni wyszukiwania lub brania), aby reprezentować koniec próby i utratę możliwości podania leku.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Samodzielne podawanie z łańcuchem poszukiwania-pobierania w zmiennych odstępach czasu (VI5, VI30 i VI60)
		<ol>
			<li>Zaprogramuj wszystkie kroki w sekcji 3.3.5, ale wprowadź zmienny interwał 5 (VI5) jako nowy schemat zbrojenia na dźwigni szukania, zamiast FR1. Zezwól na samodzielne szkolenie w ramach harmonogramu VI5 przez 3 dni.</li>
			<li>Skonfiguruj oprogramowanie tak, aby pierwsze naciśnięcie dźwigni wyszukiwania powodowało aktywację harmonogramu VI5. W przypadku harmonogramu VI5 pozwól oprogramowaniu losowo wybrać czas interwału z listy 0,1 s, 5 s i 10 s, co daje średnio 5 s interwału. Pierwsze naciśnięcie dźwigni wyszukiwania po upływie wybranego interwału powoduje cofnięcie dźwigni wyszukiwania i wysunięcie dźwigni pobierania.</li>
			<li>Postępuj zgodnie z krokami 3.3.4.2, 3.3.5.4., 3.3.5.5., aby uzyskać instrukcje dotyczące dźwigni i końca próby.</li>
			<li>Następnie trenuj szczury przez 5 dni zgodnie z harmonogramem VI30 dla linku wyszukiwania, a następnie 3 dni zgodnie z harmonogramem VI60.</li>
			<li>W przypadku harmonogramu VI30 pozwól oprogramowaniu losowo wybrać czas z listy 15 s, 30 s i 45 s, średnio 30 s, podczas gdy w przypadku harmonogramu VI60 oprogramowanie losowo wybiera czas z listy 45 s, 60 s i 75 s.</li>
			<li>Zmieniaj interwały między próbami zgodnie z różnymi harmonogramami zbrojenia. Rozpocznij interwał między próbami po 30 s podczas FR1 i VI5, ale stopniowo zwiększaj do 7 minut podczas VI30 i VI60.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wstrzemięźliwość nałożona karą
	<ol>
		<li>Rozpocznij sesje karne od włożenia dźwigni wyszukiwania i włączenia światła w domu. Pozwól na sesje karne przez 8 dni, pod regularnym nadzorem, aby zagwarantować, że zwierzęta nie wykazują oznak nietypowego bólu lub żadnych problemów zdrowotnych.</li>
		<li>Zaprogramuj system szkolenia operacyjnego tak, aby po zakończeniu linku wyszukiwania pod VI60 dźwignia wyszukiwania cofała się, światło domowe było wyłączane, a na 30% ukończonych linków wyszukiwania podawany był łagodny wstrząs stopą zamiast wkładania dźwigni pobierania. Dźwignia take rozciąga się na pozostałe 70% zakończonych linków wyszukiwania, tak jak w normalnej próbie samodzielnego podawania.</li>
		<li>Zaprogramuj interwał między próbami wynoszący 7 minut ze wszystkimi wskazówkami i wyłączonym światłem domowym przed włożeniem dźwigni wyszukiwania i włączeniem światła domowego, aby zasygnalizować rozpoczęcie następnej próby.</li>
		<li>Ustaw intensywność wstrząsu na 0,2 mA i zwiększaj o 0,1 mA na dzień kary, aż do 1,0 mA.</li>
		<li>Po tym, jak szczury nacisną dźwignię "take" (w próbach, gdy jest dostępna), powtórz krok 3.3.4.2 w celu wycofania dźwigni, podania wlewu heroiny i przedstawienia sygnałów, po czym następuje 7-minutowa przerwa między próbami.</li>
		<li>Rozpocznij następną próbę od włożenia dźwigni wyszukiwania i włączenia światła domowego.</li>
		<li>Jeśli szczur nie naciśnie żadnej dźwigni przez 10 minut, wykonaj krok 3.3.5.5.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Ostra deprywacja pokarmowa (24 h)
	<ol>
		<li>W dniu następującym po ostatnim dniu wymierzonej karą abstynencji należy podzielić szczury na dwie dobrane grupy (według masy ciała oraz średniej liczby wypitych dźwigni i naparów w ciągu ostatnich 3 dni treningu samodzielnego podawania): Pozbawione Pokarmu (FD) i Nasycone.</li>
		<li>Usuń pojemniki na żywność z komór (około 9:30 rano) dla szczurów, które przechodzą test nawrotu spowodowany deprywacją pokarmową i zachowaj pojemniki na żywność dla nasyconej grupy, która ma nieograniczony dostęp do jedzenia. Zapewnij nieograniczony dostęp do wody w obu grupach i nadzoruj zwierzęta, aby zagwarantować, że nie wykazują żadnych problemów zdrowotnych w okresie deprywacji pokarmowej.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Testy na heroinę wywołane deprywacją pokarmową
	<ol>
		<li>Następnego ranka po 24 godzinach pozbawienia pokarmu należy wykonać 3-godzinny test na obecność heroiny, zgodnie z harmonogramem VI60 z odstępem między badaniami wynoszącym 7 minut, bez podawania wstrząsu lub wlewów heroiny. Po 3-godzinnej sesji zwróć pojemniki na żywność szczurom pozbawionym pokarmu.</li>
		<li>Następnego ranka po pierwszym teście na obecność heroiny, wyjmij pojemniki na jedzenie z komór szczurów, które były nasycone podczas pierwszego testu nawrotu. Pozwól szczurom, które wcześniej były pozbawione pokarmu, nieograniczony dostęp do pożywienia (stan sytości) przed i w trakcie badania.</li>
		<li>Następnego dnia (po 24 godzinach pozbawienia pokarmu) wykonaj kolejny 3-godzinny test na obecność heroiny, jak w kroku 3.6.1.</li>
		<li>Dzień po teście poddać szczury eutanazji za pomocą komory na dwutlenek węgla (100% CO2 przy szybkości napełniania 30-70% objętości komory na minutę).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Jaffe, J. H. Drug addiction and drug abuse. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJaffe%2C+JH+%22Goodman+%26+Gilman%27s+the+Pharmacological+Basis+of+Therapeutics%22">Goodman & Gilman's the Pharmacological Basis of Therapeutics</a>. Gilman, A. G., Rall, T. W., Nies, A. S., Taylor, P. , Pergamon Press. New York. 522-573 (1990).</li>
<li>O'Brien, C. P., McLellan, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myths+about+the+treatment+of+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Myths about the treatment of addiction.</a> Lancet. 347, 237-240 (1996).</li>
<li>Miczek, K. A., de Wit, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+for+translational+psychopharmacology+research--some+basic+principles%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Challenges for translational psychopharmacology research--some basic principles.</a> Psychopharmacology (Berl). 199 (3), 291-301 (2008).</li>
<li>Sinha, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+does+stress+increase+risk+of+drug+abuse+and+relapse%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">How does stress increase risk of drug abuse and relapse.</a> Psychopharmacology. 158, 343-359 (2001).</li>
<li>Cheskin, L. J., Hess, J. M., Henningfield, J., Gorelick, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calorie+restriction+increases+cigarette+use+in+adult+smokers%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Calorie restriction increases cigarette use in adult smokers.</a> Psychopharmacology. 179, 430-436 (2005).</li>
<li>Krahn, D., Kurth, C., Demitrack, M., Drewnowski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+of+dieting+severity+and+bulimic+behaviors+to+alcohol+and+other+drug+use+in+young+women%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Substance+Abuse%22%5BJournal%5D)">The relationship of dieting severity and bulimic behaviors to alcohol and other drug use in young women.</a> Journal of Substance Abuse. 4, 341-353 (1992).</li>
<li>Shalev, U., Highfield, D., Yap, J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+and+relapse+to+drug+seeking+in+rats%3A+studies+on+the+generality+of+the+effect%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Stress and relapse to drug seeking in rats: studies on the generality of the effect.</a> Psychopharmacology. 150, 337-346 (2000).</li>
<li>Peck, J. A., Ranaldi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+abstinence%3A+exploring+animal+models+and+behavioral+treatment+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Drug abstinence: exploring animal models and behavioral treatment strategies.</a> Psychopharmacology (Berl). 231 (10), 2045-2058 (2014).</li>
<li>Cooper, A., Barnea-Ygael, N., Levy, D., Shaham, Y., Zangen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conflict+rat+model+of+cue-induced+relapse+to+cocaine+seeking%29%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">A conflict rat model of cue-induced relapse to cocaine seeking).</a> Psychopharmacology (Berl). 194 (1), 117-125 (2007).</li>
<li>Barnea-Ygael, N., Yadid, G., Yaka, R., Ben-Shahar, O., Zangen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cue-induced+reinstatement+of+cocaine+seeking+in+the+rat+%26%2334%3Bconflict+model%26%2334%3B%3A+effect+of+prolonged+home-cage+confinement%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Cue-induced reinstatement of cocaine seeking in the rat &#34;conflict model&#34;: effect of prolonged home-cage confinement.</a> Psychopharmacology (Berl). 219 (3), 875-883 (2012).</li>
<li>Fredriksson, I., Applebey, S. V., Minier-Toribio, A., Shekara, A., Bossert, J. M., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+dopamine+stabilizer+%28-%29-OSU6162+on+potentiated+incubation+of+opioid+craving+after+electric+barrier-induced+voluntary+abstinence%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Effect of the dopamine stabilizer (-)-OSU6162 on potentiated incubation of opioid craving after electric barrier-induced voluntary abstinence.</a> Neuropsychopharmacology. 45 (5), 770-779 (2020).</li>
<li>Pelloux, Y., Everitt, B. J., Dickinson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compulsive+drug+seeking+by+rats+under+punishment%3A+effects+of+drug+taking+history%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Compulsive drug seeking by rats under punishment: effects of drug taking history.</a> Psychopharmacology (Berl). 194 (1), 127-137 (2007).</li>
<li>Marchant, N. J., Campbell, E. J., Kaganovsky, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Punishment+of+alcohol-reinforced+responding+in+alcohol+preferring+P+rats+reveals+a+bimodal+population%3A+Implications+for+models+of+compulsive+drug+seeking%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neuro-Psychopharmacology+%26+Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Punishment of alcohol-reinforced responding in alcohol preferring P rats reveals a bimodal population: Implications for models of compulsive drug seeking.</a> Progress in Neuro-Psychopharmacology & Biological Psychiatry. 87, Pt A 68-77 (2018).</li>
<li>Krasnova, I. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incubation+of+methamphetamine+and+palatable+food+craving+after+punishment-induced+abstinence%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Incubation of methamphetamine and palatable food craving after punishment-induced abstinence.</a> Neuropsychopharmacology. 39 (8), 2008-2016 (2014).</li>
<li>Panlilio, L. V., Thorndike, E. B., Schindler, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reinstatement+of+punishment-suppressed+opioid+self-administration+in+rats%3A+an+alternative+model+of+relapse+to+drug+abuse%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Reinstatement of punishment-suppressed opioid self-administration in rats: an alternative model of relapse to drug abuse.</a> Psychopharmacology (Berl). 168 (1-2), 229-235 (2003).</li>
<li>Economidou, D., Pelloux, Y., Robbins, T. W., Dalley, J. W., Everitt, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+impulsivity+predicts+relapse+to+cocaine-seeking+after+punishment-induced+abstinence%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">High impulsivity predicts relapse to cocaine-seeking after punishment-induced abstinence.</a> Biological Psychiatry. 65 (10), 851-856 (2009).</li>
<li>Sedki, F., D'Cunha, T., Shalev, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+procedure+to+study+the+effect+of+prolonged+food+restriction+on+heroin+seeking+in+abstinent+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">A procedure to study the effect of prolonged food restriction on heroin seeking in abstinent rats.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (81), e50751(2013).</li>
<li>Venniro, M., Caprioli, D., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+drug+relapse+and+craving%3A+From+drug+priming-induced+reinstatement+to+incubation+of+craving+after+voluntary+abstinence%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models of drug relapse and craving: From drug priming-induced reinstatement to incubation of craving after voluntary abstinence.</a> Progress in Brain Research. 224, 25-52 (2016).</li>
<li>Deroche-Gamonet, V., Piazza, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychobiology+of+cocaine+addiction%3A+Contribution+of+a+multi-symptomatic+animal+model+of+loss+of+control%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Psychobiology of cocaine addiction: Contribution of a multi-symptomatic animal model of loss of control.</a> Neuropharmacology. 76, 437-449 (2014).</li>
<li>Pelloux, Y., Everitt, B. J., Dickinson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compulsive+drug+seeking+by+rats+under+punishment%3A+effects+of+drug+taking+history%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Compulsive drug seeking by rats under punishment: effects of drug taking history.</a> Psychopharmacology (Berl). 194 (1), 127-137 (2007).</li>
<li>Epstein, D. H., Kowalczyk, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compulsive+seekers%3A+Our+take.+Two+clinicians%27+perspective+on+a+new+animal+model+of+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Compulsive seekers: Our take. Two clinicians' perspective on a new animal model of addiction.</a> Neuropsychopharmacology. 43 (4), 677-679 (2018).</li>
<li>Hser, Y. I., Hoffman, V., Grella, C. E., Anglin, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+33-year+follow-up+of+narcotics+addicts%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+General+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">A 33-year follow-up of narcotics addicts.</a> Archives of General Psychiatry. 58 (5), 503-508 (2001).</li>
<li>Chen, B. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescuing+cocaine-induced+prefrontal+cortex+hypoactivity+prevents+compulsive+cocaine+seeking%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Rescuing cocaine-induced prefrontal cortex hypoactivity prevents compulsive cocaine seeking.</a> Nature. 496 (7445), 359-362 (2013).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

W artykule tym znajdują się dwie ważne demonstracje. Po pierwsze, uprawomocnienie wymierzonej karą abstynencji za pomocą łańcucha "szukaj i bierz" z heroiną. Po drugie, wykazano, że nawrót choroby wywołany stresem można zaobserwować w procedurze abstynencji nałożonej za karę. Są to ważne dowody, ponieważ: (i) procedura abstynencji wywołana karą bardziej naśladuje kondycję ludzką, ponieważ prowadzi do dobrowolnej abstynencji, tj. nie jest spowodowana wygaśnięciem poszukiwania narkotyków lub przymusowym usunięciem ze środo...

Nawrót choroby jest najtrudniejszym problemem w leczeniu zażywania narkotyków1,2. Jednak tylko kilka terapii farmakologicznych zostało zatwierdzonych, aby uniknąć nawrotu choroby u ludzi3. Epidemia opioidowa, z którą boryka się obecnie Ameryka Północna, jest tego uderzającym przykładem i wymaga rozważenia różnych podejść do zwierzęcych modeli nawrotu do opioidów.
Wykazano, że ostry stres jest kluczowym czynnikiem powodującym nawroty choroby u ludzi4. Jednym ze stresorów środowiskowych, który często wiąże się z uzależnieniem od narkotyków, jest brak jedzenia. Osoby zażywające narkotyki często decydują się przeznaczyć zasoby na zdobywanie narkotyków zamiast na żywność. Wykazano, że deficyt kaloryczny jest skorelowany z częstszym nawrotem do używania papierosów5 i alcohol6. Ze względu na kwestie etyczne i praktyczne, w ciągu ostatnich dziesięcioleci opracowano modele zwierzęce, aby ułatwić badania w tej dziedzinie. W modelach zwierzęcych wykazano, że ostra deprywacja żywności zdecydowanie przywraca wygasłą heroinę seeking7. Obecnie większość zwierzęcych modeli nawrotu opiera się na procedurach abstynencji, które albo nie są reprezentatywne dla abstynencji u ludzi (np. modele oparte na wymieraniu), albo obejmują tylko niewielki odsetek osób zażywających narkotyki, które są zmuszone do powstrzymania się od abstynencji z powodu uwięzienia lub leczenia szpitalnego (np. modele wymuszonej abstynencji). Głównym powodem, dla którego użytkownicy narkotyków decydują się na powstrzymanie się od narkotyków, są negatywne konsekwencje związane z poszukiwaniem narkotyków i zażywaniem8. Abstynencja narzucona przez karę jest modelem zwierzęcym, który naśladuje negatywne konsekwencje związane z poszukiwaniem narkotyków na narzuconą sobie abstynencję u ludzi. Model ten wprowadza bodziec awersyjny, np. łagodny wstrząs stopy, z poszukiwaniem lub zażywaniem narkotyków, co prowadzi zwierzę do dobrowolnego zaprzestania przyjmowania narkotyku. Inną procedurą, która zawiera negatywne konsekwencje dla poszukiwania narkotyków, jest model konfliktu bariery elektrycznej dla abstynencji narkotykowej i nawrotu9. Szczur musi przekroczyć barierę elektryczną, aby wykonać zachowanie operacyjne związane z samodzielnym podawaniem leku. Model został z powodzeniem wykorzystany do zademonstrowania dobrowolnej abstynencji i nawrotu do psychostymulantów i leków opioidowych10,11. Jednak w ramach procedury bariery elektrycznej wysiłki związane z poszukiwaniem narkotyków zawsze wiążą się ze zdarzeniem awersyjnym, w przeciwieństwie do kondycji ludzkiej. Co więcej, samo zażywanie narkotyków może nakładać się na elektryczny wstrząs stopy, gdy zwierzę wraca do bezpiecznego obszaru po infuzji, ponownie przekraczając barierę.
Karana abstynencja była stosowana z innymi narkotykami, takimi jak kokaina12, alcohol13, metamfetamina14, remifentanil15, ale nigdy nie została zastosowana do zwierząt wyszkolonych w heroinie. Model ten został wykorzystany do badania nawrotów wywołanych przez priming14 i sygnały związane z narkotykami16, ale nie został włączony do procedury nawrotu wywołanej stresem. Opisana tutaj procedura jest stosowana w celu wykazania ostrego nawrotu do heroiny wywołanego deprywacją pokarmową po nałożonej karze abstynencji u samców szczurów.

<table><tbody><tr><td>Anafen do wstrzykiwań 100 mg / ml fiolka / 50 ml</td><td>MERIAL Canada, Inc.</td><td>1938126</td><td>lek przeciwzapalny</td></tr><tr><td>Ramię równowagi</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H29-01</td><td></td></tr><tr><td>Kaniule (22 G, 5 stron)</td><td>Tworzywa sztuczne Jedna</td> płytka przyłączeniowa <td>C313G-5up</td><td></td></tr><tr><td>i Linc</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H03-04</td><td></td></tr><tr><td>Pompa infuzyjna o stałej prędkości (3,3 obr./min)</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>A73-01-3.3</td><td></td></tr><tr><td>GE Marine Silicon</td><td>GE</td><td>SE-1134</td><td></td></tr><tr><td>Graficzna notacja stanu 3</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>GS3</td><td></td></tr><tr><td>Software Habitest universal Linc</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H02-08</td><td></td></tr><tr><td>Heroina HCl</td><td>National Institute for Drug Abuse, Research Triangle Park, NC, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dom light-Rat</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H11-01R</td><td></td></tr><tr><td>Izofluoran USP 99,9% fiolka/250 ml</td><td>Fresenius Kabi Canada Ltd</td><td>2237518</td><td></td></tr><tr><td>Krętliki do płynów, plastik, 22 g</td><td>Lomir Biomedical, Inc.</td>Klatka testowa <td>RSP1</td><td></td></tr><tr><td>Rat</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H10-11R-TC</td><td>Komory kondycjonowania instrumentalnego</td></tr><tr><td>Wysuwana dźwignia-Rat</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H23-17RA Rurki</td><td></td></tr><tr><td>silastyczne (ID 0,02, OD 0,037)</td><td>Fisher Scientific (Kanada)</td><td>1118915A</td><td></td></tr><tr><td>Pojedyncza jasna wskazówka-Rat</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H11-03R</td><td></td></tr><tr><td>Dźwięk Skrzynki tłumiące</td><td>Concordia University</td><td>Domowa</td><td></td></tr><tr><td>podłoga ze stali nierdzewnej</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H10-11R-TC-SF</td><td></td></tr><tr><td>Kontroler systemu 2</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>SYS CTRL 2</td><td></td></tr><tr><td>Podstawa zasilania systemu</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H01-01</td><td></td></tr><tr><td>Moduł toniczny 2,9 KHz</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H12-02R-2.9</td><td></td></tr><tr><td>Rurka Tygon (ID 0.02, OD 0.060)</td><td>VWR</td><td>63018-044</td><td></td></tr></tbody></table>

procedura badania nawrotów heroiny wywołanych stresem poszukiwanie abstynencji nałożonej karą

A Procedure to Study Stress-Induced Relapse of Heroin Seeking after Punishment-Imposed Abstinence

Procedura abstynencji nałożonej przez karę modeluje narzuconą przez siebie abstynencję, którą ludzie inicjują z powodu negatywnych konsekwencji związanych z zażywaniem narkotyków. Model ten został wdrożony w eksperymentach z wykorzystaniem różnych rodzajów substancji nadużywających, takich jak metamfetamina, kokaina i alkohol. Nie wykazano jednak abstynencji spowodowanej karą u zwierząt tresowanych heroiną. Co więcej, ostry stres jest kluczowym czynnikiem wyzwalającym nawroty u ludzi i modeli zwierzęcych. Wcześniej wykazano, że ostra deprywacja żywności silnie skłaniała do powrotu do gaszącej kokainy i heroiny. Opisana tutaj procedura może być wykorzystana do oceny wpływu narażenia na ostry stres na poszukiwanie heroiny po nałożonej karze abstynencji. W sumie 8 szczurom wszczepiono przewlekle cewniki dożylne (dożylne) i przeszkolono w samodzielnym podawaniu heroiny (0,1 mg/kg/infuzję) przez 18 dni w ramach schematu łańcuchowego. Wypełnienie linku do wyszukiwania dawało dostęp do dźwigni poboru, która była połączona z wlewem heroiny. Dźwignia wyszukiwania została zaprogramowana ze zmiennym harmonogramem zbrojenia 60 (VI60), a dźwignia pobierania została zaprogramowana ze schematem zbrojenia o stałym przełożeniu 1 (FR1). Po przeszkoleniu w zakresie samodzielnego podawania, na 30% wykonanych ogniw wyszukiwania zastosowano łagodny wstrząs stopą zamiast przedłużenia dźwigni zabierania. Intensywność wstrząsów stóp wzrosła o 0,1 mA na codzienną sesję z 0,2 mA do 1,0 mA. Testy na obecność heroiny wykonywano po 24 godzinach deprywacji pokarmowej (FD) lub stanie sytości. Szczury w stanie ostrej deprywacji pokarmowej znacznie zwiększyły poszukiwanie heroiny po nałożonej karze abstynencji.

Samce szczurów wykazały wzrost liczby naciśnięć dźwigni poszukiwania wraz ze wzrostem harmonogramu wzmocnień w dniach treningowych, a także niezawodną, stałą liczbę infuzji heroiny w ciągu dni treningowych (Rysunek 1). Podczas kary szczury zmniejszyły liczbę naciśnięć dźwigni poszukiwania oraz infuzji wraz ze wzrostem intensywności wstrząsów stóp w ciągu 8 dni karania (Rysunek 2). Warunki deprywacji pokarmowej znacząco zwiększyły poszukiwanie heroiny po wymuszon...

Opisana jest procedura, która wykazuje silny ostry nawrót do heroiny spowodowany brakiem jedzenia po nałożonej karze abstynencji. Model abstynencji narzuconej karą został z powodzeniem wdrożony przy użyciu harmonogramu łańcucha poszukiwania i zażywania do samodzielnego podawania heroiny. Testy na obecność heroiny są następnie wykonywane po 24 godzinach stresu związanego z deprywacją pokarmową.

Procedura badania nawrotów heroiny wywołanych stresem Poszukiwanie abstynencji nałożonej karą

The punishment-imposed abstinence procedure models the self-imposed abstinence that humans initiate due to the adverse consequences associated with ...

Jest to pierwszy przypadek, w którym nawrót do heroiny wywołany stresem występuje po narzuconej karze abstynencji. Metody te mogą pomóc nam zrozumieć mechanizm neuronalny leżący u podstaw nawrotów wywołanych stresem u ludzi po dobrowolnej abstynencji. Stosując abstynencję w postaci deprywacji jedzenia i kar narzucanych abstynencji, coraz bardziej naśladujemy kondycję ludzką i nadajemy ekologiczną wartość zwierzęcym modelom nawrotu.Zacznij od ustawienia komór kondycjonowania instrumentalnego zgodnie z opisem w manuskrypcie. Po powrocie do zdrowia po operacji należy przyzwyczaić szczura w komorze treningowej na 24 godziny przed rozpoczęciem protokołu bez mocowania szczura do metalowej sprężyny. Umieść szczura trzymanego w komorach operacyjnych przez cały czas trwania eksperymentu.Następnie przymocuj złącze 5up do rurki Tygon i metalowej sprężyny. Rozpocznij sesję treningową na początku ciemnej fazy odwróconego cyklu światła. Do samodzielnego podawania heroiny dźwignia poboru powinna być dostępna w stałym stosunku jeden lub FR.Zaprogramuj każdą próbę tak, aby rozpoczynała się od włożenia dźwigni zabierania i włączenia światła w domu. Gdy szczur naciśnie dźwignię take jeden raz, cofnij dźwignię take, włącz lampkę cue nad dźwignią i włącz sygnał dźwiękowy na 20-sekundowy okres przekroczenia limitu czasu. Wyłącz światło w domu i zezwól na podanie 0,13 mililitra naparu heroiny w dawce 0,1 miligrama na kilogram.Następnie zaprogramuj 30-sekundowy interwał międzypróbny, w którym nie są wyświetlane żadne sygnały, światło w domu jest wyłączane, a dźwignia jest cofana. Na następną próbę włóż dźwignię take i włącz światło w domu. W przypadku samodzielnego administrowania z łańcuchem wyszukiwania w ramach FR jeden, zaprogramuj system szkolenia operacyjnego tak, aby wkładał tylko dźwignię wyszukiwania i włączał światło w domu, aby sygnalizować rozpoczęcie sesji z dźwignią pobierania w stanie wsuniętym.Gdy szczur naciśnie jeden raz dźwignię wyszukiwania, program cofa dźwignię wyszukiwania i wkłada dźwignię pobierania. Jedno naciśnięcie dźwigni take cofa dźwignię take i inicjuje procedurę włączenia lampki cue oraz 30-sekundowego interwału między próbami, jak pokazano wcześniej. Po przerwie między próbami zaprogramuj system szkolenia operacyjnego tak, aby włożył dźwignię wyszukiwania i włączył światło w domu, aby zasygnalizować początek następnej próby.Następnie zaprogramuj wszystkie kroki do samodzielnego administrowania za pomocą łańcucha wyszukiwania pod stałym współczynnikiem jeden, jak pokazano wcześniej, wprowadzając zmienny interwał pięciu przez trzy dni jako nowy harmonogram wzmacniania dźwigni wyszukiwania. Skonfiguruj oprogramowanie tak, aby pierwsze naciśnięcie dźwigni wyszukiwania powodowało aktywację pięciu harmonogramów o zmiennym interwale czasowym. Zezwól oprogramowaniu na losowy wybór czasu interwału z listy 0,1, pięciu i 10 sekund, co daje średni interwał pięciosekundowy.Po upływie wybranego interwału pierwsze naciśnięcie dźwigni wyszukiwania powoduje cofnięcie dźwigni wyszukiwania i wysunięcie dźwigni zabierania. Po wykonaniu kroków dla dźwigni take i po zakończeniu próby, trenuj szczura przez pięć dni zgodnie ze zmiennym harmonogramem interwału 30 dla linku wyszukiwania. Aby to zrobić, pozwól oprogramowaniu losowo wybrać czas z listy 15, 30 i 45 sekund przez średnio 30 sekund.Następnie trenuj szczury przez trzy dni w zmiennych odstępach czasu 60, co pozwala oprogramowaniu losowo wybrać czas z listy 45, 60 i 75 sekund. W przypadku abstynencji nałożonej karą należy przeprowadzać sesje karne przez osiem dni pod regularnym nadzorem, aby zagwarantować, że szczury nie wykazują oznak nienormalnego bólu lub żadnych problemów zdrowotnych. Rozpocznij sesje karne od włożenia dźwigni wyszukiwania i włączenia światła w domu.Zaprogramuj system szkolenia operacyjnego tak, aby po zakończeniu linku wyszukiwania w zmiennym interwale 60, dźwignia wyszukiwania cofała się, światło w domu było wyłączane, a szczur był poddawany łagodnemu wstrząsowi stopy na 30% ukończonych linków wyszukiwania zamiast wkładania dźwigni pobierania. Dźwignia take rozciąga się na pozostałe 70% zakończonych linków wyszukiwania, tak jak w przypadku regularnej próby samodzielnego podawania. Po zaprogramowaniu siedmiominutowego interwału międzypróbnego ustaw intensywność wstrząsu stopy na 0,2 miliampera i zwiększaj o 0,1 miliampera na dzień kary, aż do 1,0 miliampera.Gdy szczur naciśnie dźwignię pobierania, powtórz ustalony stosunek o jeden krok, aby cofnąć dźwignię, podać wlew heroiny i przedstawić wskazówki, po których następuje siedmiominutowa przerwa między próbami. Po ostatnim dniu nałożonej karą abstynencji należy wyjąć z komór pojemniki na żywność dla szczurów, które przechodzą test nawrotu wywołany deprywacją pokarmową, i zachować pojemniki na żywność dla grupy nasyconej. Zapewnij nieograniczony dostęp do wody w obu grupach i czuwaj nad zdrowiem zwierząt.Po 24 godzinach pozbawienia pokarmu należy przystąpić do trzygodzinnego testu na poszukiwanie heroiny wywołanego deprywacją pokarmową w zmiennym schemacie 60 interwałów z siedmiominutową interwencją bez podawania wstrząsu lub wlewów heroiny. Po sesji zwróć pojemniki na żywność szczurom pozbawionym pokarmu. Następnego dnia wyjmij pojemniki na żywność z komór szczurów, które były nasycone podczas pierwszego testu nawrotu.Pozwól szczurom, które wcześniej były pozbawione pożywienia, nieograniczony dostęp do pożywienia przed i w trakcie badania. Po 24-godzinnym pozbawieniu jedzenia wykonaj trzygodzinny test na obecność heroiny, jak pokazano wcześniej. W badaniu samce szczurów wykazały wzrost liczby naciśnięć dźwigni wyszukiwania wraz ze wzrostem harmonogramu wzmacniania.W ciągu dni treningowych zaobserwowano wiarygodną, stałą liczbę wlewów heroiny. Podczas kary szczury zmniejszyły liczbę naciśnięć dźwigni i infuzji wraz ze wzrostem intensywności wstrząsu stopy w ciągu ośmiu dni kary. W teście poszukiwania heroiny stan deprywacji pokarmowej znacznie zwiększył poszukiwanie heroiny po nałożonej karze abstynencji i nie zaobserwowano statystycznie istotnego wpływu na czas ani na poszukiwanie narkotyków w czasie w różnych warunkach żywienia. Ważne jest, aby poświęcić czas na szkolenie zwierząt w zakresie uczenia się podstawowego łańcucha poszukiwania i zażywania w ramach FR jeden.Bez tego kroku zwierzęta nie będą w stanie posunąć się naprzód w eksperymentach. Po wdrożeniu modelu możemy teraz zaprojektować eksperymenty, które przyjrzą się neurobiologii nawrotów wywołanych stresem po dobrowolnej abstynencji.

a-procedure-to-study-stress-induced-relapse-heroin-seeking-after

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Modele zwierzęce nawrotów, znane jako procedury reinstalacji, są szeroko wykorzystywane do badania roli stresu w nawrotach poszukiwania narkotyków. W niniejszym opracowaniu przedstawiamy metodę indukowania reinstalacji poszukiwania kokainy u szczurów laboratoryjnych poprzez krótkotrwałą ekspozycję na łagodne, przerywane wstrząsy elektryczne stóp.

Procedura badania reinstatmentu poszukiwania kokainy indukowanego wstrząsem stopy u szczurów laboratoryjnych

Reagowanie na sygnały powiązane z pokarmem lub lekiem nasila się w czasie okresu abstynencji, co może wiązać się ze zwiększoną podatnością na zachowania nawrotowe. W niniejszym materiale szczegółowo opisujemy procedurę oceny tej „inkubacji głodu” (ang. incubation of craving) u szczurów, które podawały sobie samodzielnie sacharozę.

Ogólna metoda oceny inkubacji głodu sacharozy u szczurów

Opisana jest procedura, która pozwala na demonstrację solidnego wspomagania poszukiwania narkotyków u szczurów z ograniczeniami żywieniowymi. Po szkoleniu w zakresie samodzielnego podawania heroiny, szczury przechodzą przez okres abstynencji w środowisku wolnym od narkotyków, podczas którego są łagodnie ograniczane w jedzeniu. Poszukiwanie narkotyków jest następnie testowane w środowisku związanym z narkotykami.

Procedura mająca na celu zbadanie wpływu długotrwałego ograniczenia pokarmowego na poszukiwanie heroiny u szczurów abstynentów

Reaktywność wskazówek jest rozumiana jako wrażliwość na sygnały związane z doświadczeniami związanymi z zażywaniem narkotyków, które przyczyniają się do głodu i nawrotów u abstynentów. Reaktywność sygnału jest modelowana u szczurów poprzez pomiar orientacji uwagi na sygnały związane z narkotykami, co skutkuje zachowaniem podejścia apetytywnego w teście reaktywności sygnału po samodzielnym podaniu i wymuszonej abstynencji.

Protokół pomiaru reaktywności sygnałów w szczurzym modelu zaburzeń związanych z używaniem kokainy

Ten protokół opisuje Preferencję Miejsca Warunkowego (CPP) jako model nawrotu. Procedura ta pozwala na pomiar nawrotu u zwierząt laboratoryjnych, biorąc pod uwagę wpływ sygnałów środowiskowych związanych z narkotykami, takich jak głód i nawrót u osób uzależnionych od abstynencji, jest obecnie przedmiotem programów leczenia uzależnień.

Przywrócenie poszukiwania narkotyków u myszy przy użyciu paradygmatu warunkowej preferencji miejsca

Tutaj opisany jest protokół preferencji miejsca uwarunkowanego morfiną (CPP) do pomiaru inkubacji głodu u szczurów.

Protokół warunkowej preferencji miejsca do pomiaru inkubacji łaknienia u szczurów

Ten model konfliktu jest używany do pomiaru upośledzenia kontroli hamującej po ekspozycji na uzależniające narkotyki, lub inne czynniki, które mogą wpływać na kontrolę hamowania. Bodźce seksualne i przeszkoda awersyjna są prezentowane jednocześnie, dlatego samce szczurów muszą pokonać przeszkodę, aby zbliżyć się do nagrody seksualnej.

Konfliktowy model zachowań związanych z poszukiwaniem nagrody u samców szczurów

Skala Neurobehawioralna dla Noworodków z Oddziałów Intensywnej Terapii (NICU Network Neurobehavioral Scale, NNNS) została opracowana jako narzędzie oceny niemowląt z grupy ryzyka. Celem niniejszego artykułu jest opisanie skali NNNS, przedstawienie w materiałach wideo przykładów procedur NNNS oraz omówienie sposobów wykorzystania tego badania.

Ocena i ewaluacja noworodka wysokiego ryzyka: Skala Neurobehawioralna NICU Network

Opisano procedurę badania zdolności kontekstu środowiskowego związanego z alkoholem do wywoływania u szczurów wznowienia zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu.

Procedura obserwacji wywołanego kontekstem odnowienia zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu uwarunkowanych przez Pawłowa u szczurów

Tutaj opisano metody rozwoju mysiego modelu podchronicznego i łagodnego stresu związanego z porażką społeczną i wykorzystano je do zbadania patogennych cech depresji, w tym objawów podobnych do hiperfagii i polidypsji po wzroście masy ciała.

Mysi model podchronicznego i łagodnego stresu porażki społecznej w celu zrozumienia deficytów behawioralnych i fizjologicznych wywołanych stresem

Poznaj procedurę badania nawrotów heroiny wywołanych stresem po abstynencji nałożonej karą u szczurów. Metoda wykorzystuje warunkowanie operantowe i głodzenie, aby lepiej zrozumieć neuronalne mechanizmy uzależnienia.

Procedura badania nawrotów heroiny wywołanych stresem Poszukiwanie abstynencji nałożonej karą

Przeglądaj więcej filmów