Name: Sondowanie mechaniki zespołu miozyny w wiązkach filamentów aktynowych za pomocą pęsety optycznej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 53 s
Description: Poznaj metodę pomiaru siły generowanej przez zespoły miozyny w wiązkach filamentów aktynowych za pomocą pęsety optycznej. Technika umożliwia precyzyjne badanie dynamiki białek motorowych w kontekście hierarchicznych struktur cytoszkieletowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca jest częściowo wspierana przez University of Mississippi Graduate Student Council Research Fellowship (OA), University of Mississippi Sally McDonnell-Barksdale Honors College (JCW, JER), Mississippi Space Grant Consortium w ramach grantu numer NNX15AH78H (JCW, DNR) oraz American Heart Association w ramach grantu numer 848586 (DNR).

Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów.

Przeprowadzono badanie in vitro z użyciem pęsety optycznej w połączeniu z obrazowaniem fluorescencyjnym w celu zbadania dynamiki zespołów miozyny oddziałujących z filamentami aktyny. Wiązki aktyna-miozyna-aktyna zostały złożone przy użyciu miozyny mięśniowej II, aktyny rodaminy na dole wiązki i na powierzchni szkiełka nakrywkowego oraz znakowanych 488, biotynylowanych włókien aktyny na górze wiązki. Białko aktynowe z mięśnia królika polimeryzowano i stabilizowano przy użyciu ogólnych aktynowych (GAB) i polimeryz...

Białka motoryczne są niezbędne do życia, przekształcając energię chemiczną w pracę mechaniczną1,2,3. Silniki miozyny oddziałują z filamentami aktyny, podejmując kroki wzdłuż włókien podobnych do toru, a dynamika sieci aktyna-miozyna przeprowadza skurcz mięśni, ruchliwość komórek, pierścień kurczliwy podczas cytokinezy i ruch ładunku wewnątrz komórki, wśród innych istotnych zadań3,4,5,6,7,8. Ponieważ miozyny odgrywają tak wiele istotnych ról, awaria funkcjonalności sieci miozyna-aktyna może prowadzić do rozwoju choroby, takiej jak mutacje w łańcuchu ciężkim miozyny, które powodują nadkurczliwość serca w kardiomiopatii przerostowej (HCM)9,10,11,12,13,14. W skurczu mięśni poszczególne silniki miozyny współpracują ze sobą, pracując jako zespół, aby zapewnić wymaganą energię mechaniczną, która przeprowadza względne przesuwanie AFs4,15,16,17,18. Silniki miozyny tworzą mostki krzyżowe między AF i wykorzystują zmiany konformacyjne wynikające z cyklu mechanochemicznego, aby wspólnie poruszać się w kierunku kolczastego końca wyrównanych włókien17,18,19,20,21.
Rozwój ilościowych testów ruchliwości in vitro na poziomie SM przy użyciu technik takich jak pułapkowanie optyczne ułatwił zebranie bezprecedensowych szczegółów na temat funkcjonowania poszczególnych silników miozynowych, w tym pomiar generowania siły SM i wielkości kroków22,23,24,25,26,27,28,29,30. Finer i in. opracowali optyczny test pułapkowania "z trzema koralikami" lub "hantlami", aby zbadać mechanikę generowania siły w pojedynczych silnikach miozyny II23,31. Ponieważ miozyna mięśniowa II działa w zespołach w celu zarażenia migotania przedsionków, ale nie jest procesowa na poziomie SM, orientacja testu pułapkowania optycznego musiała zostać zmieniona z klasycznego podejścia kulkowego związanego z silnikiem32. Aby utworzyć test hantli, użyto dwóch pułapek optycznych do utrzymania AF nad silnikiem miozyny związanym z koralikiem przymocowanym do szkiełka nakrywkowego, a siłę wyjściową przez pojedynczy silnik mierzono poprzez ruchy AF w obrębie trap23.
Jednak siły SM i użycie orientacji testu pojedynczego silnika/pojedynczego włókna nie dają pełnego obrazu generowania siły na poziomie systemu, ponieważ wiele białek motorycznych, w tym miozyna II, nie działa w izolacji i często nie funkcjonuje jako suma swoich części15,16,17,32,33,34,35,36. Bardziej złożone struktury, które zawierają więcej niż jeden silnik oddziałujący z więcej niż jednym włóknem, są niezbędne do lepszego zrozumienia synergii sieci włókien miozyny i aktyny15,32. Orientacja testu hantli została wykorzystana do zbadania generowania siły małego zespołu poprzez przymocowanie wielu miozyn do koralika lub użycie włókna o grubości miozyny przymocowanego do powierzchni i umożliwienie silnikom interakcji z zawieszonym AF4,23,34,37,38,39,Lokal mieszkalny 40.
Inne testy małych zespołów obejmują test ślizgania włókien in vitro, w którym silniki miozyny są powlekane na powierzchni szkiełka nakrywkowego, a koralik związany z AF jest używany do sondowania siły generowanej przez zespół silników4,35,36,38,39,40,41,42,43. W obu tych przypadkach miozyny są związane ze sztywną powierzchnią – koralikiem lub szkiełkiem nakrywkowym – i wykorzystują jeden AF. W takich przypadkach silniki nie są w stanie swobodnie się poruszać ani komunikować ze sobą, a sztywno związane miozyny nie odzwierciedlają zgodnego, hierarchicznego środowiska, w którym silniki współpracowałyby ze sobą w sarcomere32. Wcześniejsze badania sugerowały, że miozyna II może wyczuwać swoje otoczenie i odpowiednio dostosowywać się do zmieniających się warunków lepkosprężystych lub koncentracji motorycznej poprzez zmianę cech, takich jak generowanie siły i współczynnik obciążenia41,44,45. W związku z tym istnieje potrzeba opracowania testu pułapkowania optycznego, który wspiera i rejestruje komunikację motoryczną i zgodność systemu, aby namalować bardziej realistyczny obraz mechanistycznych podstaw generowania siły zespołu miozyny II.
Tutaj opracowaliśmy metodę łączenia hierarchicznej struktury in vitro z pułapką optyczną poprzez tworzenie wiązek lub kanapek składających się z wielu silników miozyny oddziałujących między dwoma filamentami aktyny. Ta modułowa geometria testu ma możliwość bezpośredniego badania, w jaki sposób czynniki molekularne i środowiskowe wpływają na wytwarzanie siły miozyny zespołowej. Co więcej, badanie mechanizmów generowania siły za pomocą tych zespołów aktyna-miozyna może potencjalnie pomóc w modelowaniu i zrozumieniu, w jaki sposób zadania komórkowe na dużą skalę, takie jak skurcz mięśni, rozprzestrzeniają się z poziomu molekularnego9,10,13.

<table><tbody><tr><td>Białko aktyny (biotyna): mięśnie szkieletowe</td><td>Cytoszkielet</td><td>AB07-A</td><td>Biotynylowane białko aktynowe</td></tr><tr><td>Białko aktynowe, mięśnie szkieletowe królika</td><td>Cytoszkielet</td><td>AKL99-A</td><td>Białko aktynowe</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Phalloidin</td><td>Invitrogen</td><td>A12379</td><td>Stabilizator aktyny i barwnik Alexa Fluor 488</td></tr><tr><td>ATP</td><td>Fisher scientific</td><td>BP413-25</td><td>Wymagane dla aktyny montaż i ruchliwość miozyny</td></tr><tr><td>Beta-D-glukoza</td><td>Fisher</td><td>MP218069110</td><td>naukowy Część systemu oczyszczania tlenu stosowany w celu zmniejszenia fotowybielania podczas obrazowania fluorescencyjnego</td></tr><tr><td>Blotting Grade Blocker (kazeina)</td><td>Biorad</td><td>1706404</td><td>Służy do blokowania powierzchni przed niespecyficznym wiązaniem</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Fisher scientific</td><td>C79500</td><td>Chlorek wapnia, zapewnia niezbędną kontrolę nad dynamiką sieci miozyny aktynowej</td></tr><tr><td>Katalaza</td><td>Fisher</td><td>ICN10040280</td><td>naukowy Część systemu oczyszczania tlenu stosowana w celu zmniejszenia fotowybielania podczas obrazowania fluorescencyjnego</td></tr><tr><td>Szkiełka nakrywkowe</td><td>Fisher scientific</td><td>12544C</td><td>Służy do produkcji komórek przepływowych</td></tr><tr><td>DTT</td><td>Fisher scientific</td><td>AC327190010</td><td>Służy do przygotowania</td></tr> <tr><td>buforuEtanol</td><td>Fisher scientific</td><td>A4094</td><td>Regent używany do czyszczenia szkiełek nakrywkowych</td></tr><tr><td>Oksydaza glukozowa</td><td>Fisher scientific</td><td>34-538-610KU</td><td>Część systemu oczyszczania tlenu stosowana w celu zmniejszenia fotowybielania podczas obrazowania fluorescencyjnego</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher scientific</td><td>P217-500</td><td>Służy do przygotowania buforu</td></tr><tr><td>KOH</td><td>Fisher scientific</td><td>P250-1</td><td>Służy do wytrawiania szkiełek nakrywkowych i regulacji bufor pH</td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Fisher scientific</td><td>M33-500</td><td>Służy do przygotowania buforu</td></tr><tr><td>Szkiełka mikroskopowe</td><td>Fisher scientific</td><td>12-544-2</td><td>Służy do wytwarzania komórek przepływowych</td></tr><tr><td>Białko miozyny II: mięśnie szkieletowe królika</td><td>Cytoszkielet</td><td>MY02</td><td>Białko motoryczne miozyny o pełnej długości wyizolowane z mięśni szkieletowych królika</td></tr><tr><td>Nanotracker2</td><td>Bruker/JPK</td><td>NT2</td><td>Przyrząd do pułapkowania optycznego</td></tr><tr><td>Poly-l-lizyna</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8920</td><td>Urządzenia do adhezji włókien aktynowych do szklanej powierzchni szkiełka nakrywkowego</td></tr><tr><td>Rodamina Falloidyna</td><td>Cytoszkielet</td><td>PHDR1</td><td>Stabilizator aktyny i barwienie fluorescencyjne rodaminy</td></tr><tr><td>Koraliki streptawidyny, 1 i mu; m</td><td>Spherotech</td><td>SVP-10-5</td><td>Uchwyt optyczny</td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Fisher scientific</td><td>PR H5121</td><td>Służy do przygotowania bufora</td></tr></tbody></table>

sondowanie mechaniki zespołu miozyny w wiązkach filamentów aktynowych za pomocą pęsety optycznej

Probing Myosin Ensemble Mechanics in Actin Filament Bundles Using Optical Tweezers

Miozyny to białka motoryczne, które hydrolizują ATP, aby podążać wzdłuż ścieżek filamentu aktynowego (AF) i są niezbędne w procesach komórkowych, takich jak ruchliwość i skurcze mięśni. Aby zrozumieć mechanizmy generowania siły, miozyna II została przebadana zarówno na poziomie pojedynczej cząsteczki (SM), jak i jako zespoły silników in vitro przy użyciu metod biofizycznych, takich jak pułapkowanie optyczne.
Te badania wykazały, że zachowanie generujące siłę miozyny może się znacznie różnić, gdy przechodzi się z poziomu pojedynczej cząsteczki w układzie trzech koralików do grup silników współpracujących ze sobą na sztywnej powierzchni koralików lub szkiełek nakrywkowych w układzie ślizgowym. Jednak te konstrukcje testowe nie pozwalają na ocenę dynamiki grupowej miozyny w lepkosprężystej hierarchii strukturalnej, tak jak w komórce. Opracowaliśmy metodę wykorzystującą pęsetę optyczną do zbadania mechaniki generowania siły przez zespoły miozyny oddziałujące z wieloma włóknami aktyny.
Te pakiety aktomiozyny ułatwiają badanie w hierarchicznym i zgodnym środowisku, które rejestruje komunikację motoryczną i moc wyjściową zespołu. Konfigurowalny charakter testu pozwala na zmianę warunków eksperymentalnych w celu zrozumienia, w jaki sposób modyfikacje zespołu miozyny, wiązki włókien aktynowych lub otaczającego środowiska skutkują różnymi mocami wyjściowymi.

Komory przepływowe zawierające systemy pęczków akto-miozynowych mają standardową konstrukcję, składającą się z szkiełka przedmiotowego i trawionej lamelki, rozdzielonych kanałem wykonanym z dwustronnej taśmy klejącej (Rycina 1). Układ analityczny jest następnie budowany od lamelki w górę poprzez etapowe wprowadzanie składników, zgodnie z opisem w protokole. Końcowy układ składa się z matrycowych filamentów aktyny znakowanych rodaminą; pożądanego stężenia miozyny (dla reprezentatywnych wynikó...

Przedstawiono i omówiono tworzenie wiązek aktomiozyny in vitro oraz pomiar siły generowania zespołu miozyny za pomocą pęsety optycznej.

Sondowanie mechaniki zespołu miozyny w wiązkach filamentów aktynowych za pomocą pęsety optycznej

Myosins are motor proteins that hydrolyze ATP to step along actin filament (AF) tracks and are essential in cellular processes such as motility and muscle ...

Badanie zachowania aktyny przy użyciu tego protokołu jest istotne, ponieważ pozwala użytkownikowi badać dynamikę zespołu białek motorycznych przy użyciu precyzji pułapkowania optycznego. Główną zaletą tej techniki jest możliwość pomiaru mechaniki miozyny w hierarchii strukturalnej aktyny, w przeciwieństwie do tradycyjnej orientacji pojedynczego włókna z jednym silnikiem stosowanej w wielu eksperymentach z pułapkami optycznymi. Kolejną zaletą tego protokołu jest jego modułowy charakter, który pozwala użytkownikowi dostosować test do wybranego przez siebie hierarchicznego systemu cytoszkieletu.Na początek przyłóż dwa kawałki dwustronnej taśmy klejącej do środka szkiełka mikroskopowego w odległości od trzech do czterech milimetrów od siebie. Następnie oderwij lub odetnij nadmiar taśmy, która zwisa z krawędzi zjeżdżalni. Następnie dodaj szkiełko nakrywkowe pokryte PLL na wierzchu taśmy prostopadłej do długiej osi szkiełka mikroskopowego, aby utworzyć kanał.Używając małej rurki do ściśnięcia szkiełka nakrywkowego na taśmie i mikroskopie, przesuń dokładnie, aż taśma stanie się przezroczysta, upewniając się, że w taśmie nie ma pęcherzyków, ponieważ może to spowodować wyciek z kanału przepływowego. Dodać 15 mikrolitrów rozcieńczonej aktyny rodaminy do komory przepływowej PLL i przepuścić nadmiar roztworu przez komórkę przepływową, ale nie dopuścić do wyschnięcia kanału przepływowego. Następnie inkubuj przez 10 minut w komorze wilgotnościowej.Następnie należy przygotować jeden miligram na mililitr roztworu kazeiny w buforze do polimeryzacji aktyny i dodać 15 mikrolitrów roztworu, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu kolejnych składników. Następnie inkubuj przez pięć minut w komorze wilgotnościowej. Następnie dodaj pożądane stężenie miozyny do przygotowanej biotynylowanej aktyny i zawiesiny perełek i delikatnie wymieszaj końcówką pipety.Następnie natychmiast dodać 15 mikrolitrów zawiesiny wraz z pożądanym stężeniem miozyny do komory przepływowej i inkubować przez 20 minut. Następnie uszczelnij otwarte końce komory przepływowej lakierem do paznokci, aby zapobiec parowaniu podczas eksperymentów z obrazowaniem i pułapką optyczną. Gdy system będzie gotowy, włącz laser za pomocą przycisku zasilania lasera w lewym dolnym rogu ekranu na 50 miliwatów i pozwól mu ustabilizować się przez 30 minut.Sekwencyjnie klikaj przyciski oświetlenia, kamery, celu i ruchu sceny w oprogramowaniu, aby wyświetlić te okna do przeglądania i manipulowania podczas eksperymentu. Włącz oświetlenie mikroskopu, klikając przycisk On/Off i ustawiając go na maksymalną moc, klikając i przeciągając pasek maksymalnie w prawo. Otwórz obszar próbki i wyjmij uchwyt próbki ze stolika mikroskopu.Następnie dodaj celę przepływową i zabezpiecz ją metalowymi uchwytami na próbki, upewniając się, że szkiełko nakrywkowe znajduje się na dnie. Następnie dodaj 30 mikrolitrów wody RO do środka dolnego obiektywu i ponownie włóż stolik na próbkę. Następnie podnieś dolny obiektyw za pomocą L2 na pilocie zdalnego sterowania, aż kropla wody dotknie szkiełka nakrywkowego.Następnie opuść górny obiektyw, aż zostanie osiągnięta około połowa odległości do komory przepływowej za pomocą R2 na pilocie zdalnego sterowania. Następnie dodaj 170 mikrolitrów wody RO do górnej części komory przepływowej bezpośrednio pod górnym obiektywem i opuść górną soczewkę, aż zerwie napięcie powierzchniowe wody i utworzy menisk. Następnie przesuń stolik mikroskopu za pomocą strzałek na pilocie zdalnego sterowania, aż dojdziesz do krawędzi taśmy przylegającej do kanału przepływowego, a następnie zamknij drzwiczki próbki.Korzystając z okna celu na ekranie, przesuń krawędź taśmy i skup się, podnosząc dolny obiektyw o nazwie Laser Objective, klikając górną strzałkę, a górny obiektyw, klikając dolną strzałkę za pomocą elementów sterujących na ekranie. Znajdź pływający koralik i zapułap go, klikając przycisk migawki pułapki, który otworzy migawkę i pozwoli laserowi pułapkującemu uderzyć w próbkę. Następnie kliknij kursor pułapki na ekranie i przeciągnij go, aby przesunąć lokalizację lasera pułapkowego.Po uwięzieniu skalibruj koralik, klikając przycisk kalibracji. Następnie kliknij Ustawienia i wpisz średnicę koralika i temperaturę stolika znajdującego się w lewym dolnym rogu okna oprogramowania. Następnie kliknij na Pułapka 1, a następnie na X Signal i wykonaj dopasowanie częstotliwości narożnika, klikając Uruchom.Następnie kliknij i przeciągnij w oknie, aby zoptymalizować dopasowanie funkcji. Następnie kliknij Użyj tego dla wartości czułości i sztywności, a następnie zaakceptuj wartości. Następnie zamknij okno.Znajdź wiązkę aktomiozyny, wyszukując kulki związane z AF na powierzchni szkiełka nakrywkowego i szukając obu fluorescencyjnych AF zlokalizowanych jednocześnie. Włącz źródło białego światła i użyj odpowiedniej kostki filtra, aby zobrazować każdy filament aktyny, obracając wieżyczkę. Po weryfikacji złap koralik przymocowany do górnego filamentu wiązki, klikając przycisk migawki pułapki.Następnie zapisz dane, klikając przycisk oscyloskopu za pomocą elementów sterujących na ekranie. Aby wyświetlić pomiary bez rejestrowania danych, kliknij Start, a następnie kliknij Autozapis, aby zapisać wszystkie dane. Aby rejestrować pomiary, kliknij Rozpocznij nagrywanie i wybierz, które dane mają być wizualizowane w czasie rzeczywistym, wybierając z menu rozwijanego X Signal lub Y Signal.Ślad siły mięśni szkieletowych generujących siłę w ramach skonstruowanej hierarchii strukturalnej aktyny in vitro wykazuje stały wzrost siły, aż do osiągnięcia plateau w ciągu dwóch do pięciu minut. Jednak obserwuje się również, że niektóre wiązki aktomiozyny, które nie generują żadnej siły wypadkowej, a ślady siły pojawiają się jako szum linii podstawowej lub nie wykazują znacznego wzrostu siły netto w ciągu 90 sekund z powodu niskiego stężenia silnika lub niekorzystnej równoległej orientacji włókien. Opracowanie tego protokołu utoruje drogę do budowy bardziej złożonych testów cytoszkieletu in vitro, które dodatkowo pomogą w modelowaniu zadań komórkowych na dużą skalę, takich jak podział komórek i skurcz mięśni od dołu do góry.

probing-myosin-ensemble-mechanics-actin-filament-bundles-using

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

Niniejszym przedstawiamy przewodnik krok po kroku, prezentujący przeznaczenie, zasadę działania oraz reprezentatywne wyniki uzyskiwane za pomocą nowatorskiego spektrometru siły grawitacyjnej.

Demonstracja zastosowań nowatorskiego spektrometru sił grawitacyjnych do rozciągania i pomiaru białek włóknistych

Przedstawiono tutaj procedurę ekspresji i oczyszczania miozyny 5a, po której następuje dyskusja na temat jej charakterystyki, przy użyciu testów opartych na mikroskopii fluorescencyjnej in vitro zarówno zespołowych, jak i pojedynczych, oraz jak te metody mogą być modyfikowane do charakterystyki niemięśniowej miozyny 2b.

Specyficzne dla miozyny adaptacje testów ruchliwości opartych na mikroskopii fluorescencyjnej in vitro

Prezentowany tutaj jest obszerny protokół do przeprowadzania ultraszybkich eksperymentów z zaciskiem siły na procesyjnych silnikach miozyny-5, który można łatwo rozszerzyć do badania innych klas silników procesowych. Protokół wyszczególnia wszystkie niezbędne kroki, od ustawienia aparatury doświadczalnej po przygotowanie próbki, gromadzenie danych i analizę.

Analiza właściwości mechanoenzymatycznych miozyn procesowych za pomocą ultraszybkiej spektroskopii siłowo-zaciskowej

Ten protokół przedstawia kompletny eksperymentalny przepływ pracy do badania interakcji RNA-białko za pomocą pęsety optycznej. Przedstawiono kilka możliwych konfiguracji eksperymentalnych, w tym połączenie pęsety optycznej z mikroskopią konfokalną.

Pęseta optyczna do badania interakcji RNA-białko w regulacji translacji

Tutaj prezentujemy protokół do badania wewnątrzkomórkowych właściwości mechanicznych izolowanych embrionalnych komórek zebrytanicznego danio pręgowanego w trójwymiarowym zamknięciu z bezpośrednim pomiarem siły przez pułapkę optyczną.

Bezpośrednie pomiary siły mechaniki subkomórkowej w zamknięciu za pomocą pęsety optycznej

Tutaj prezentujemy protokół odtwarzania wiązek mikrotubul in vitro i bezpośredniego ilościowego określania sił wywieranych w ich obrębie za pomocą jednoczesnego pułapkowania optycznego i mikroskopii fluorescencyjnej z całkowitym wewnętrznym odbiciem. Test ten pozwala na pomiar sił i przemieszczeń generowanych przez zespoły białek w aktywnych sieciach mikrotubul na poziomie nanoskali.

Bezpośredni pomiar sił w odtworzonych wiązkach aktywnych mikrotubul

Prezentujemy protokoły prostych testów mikroprzepływowych filamentów aktynowych, w połączeniu z mikroskopią fluorescencyjną, które pozwalają na dokładne monitorowanie poszczególnych filamentów aktynowych w czasie rzeczywistym, podczas sekwencyjnego wystawiania ich na działanie różnych roztworów białkowych.

Wykorzystanie mikrofluidyki i mikroskopii fluorescencyjnej do badania dynamiki składania pojedynczych filamentów i wiązek aktyny

Ten artykuł przedstawia protokoły do inżynierii i charakteryzowania przestrajalnych trójwymiarowych sieci kompozytowych współsplątanych filamentów aktynowych i mikrotubul. Kompozyty przechodzą aktywną restrukturyzację i ruch balistyczny, napędzany silnikami miozyny II i kinezyny, a także są dostrojone przez względne stężenia aktyny, mikrotubul, białek motorycznych i pasywnych środków sieciujących.

Rekonstrukcja i charakterystyka kompozytów aktynowo-mikrotubulowych o regulowanej dynamice i mechanice napędzanej silnikiem

W tej pracy zastosowano podejście do rekonstytucji in vitro do badania poroselastyczności żeli z aktomiozyną w kontrolowanych warunkach. Określa się ilościowo dynamikę żelu aktomiozyny i wbudowanego rozpuszczalnika, za pomocą której wykazano porosprężystość sieci. Omawiamy również wyzwania eksperymentalne, typowe pułapki i znaczenie dla mechaniki cytoszkieletu komórkowego.

Mechanika (poro-)elastycznych kurczliwych sieci aktomyozyny jako modelowy układ cytoszkieletu komórkowego

Tutaj prezentujemy metody przygotowania quasi-dwuwymiarowych (2D) splątanych, usieciowanych i ciekłokrystalicznych zespołów aktynowych z oczyszczonych białek.

Dostrajanie trybów kurczliwości i deformacji aktywnych zespołów na bazie aktyny in vitro: od dwuwymiarowych sieci aktywnych do kropli ciekłokrystalicznych

Poznaj metodę pomiaru siły generowanej przez zespoły miozyny w wiązkach filamentów aktynowych za pomocą pęsety optycznej. Technika umożliwia precyzyjne badanie dynamiki białek motorowych w kontekście hierarchicznych struktur cytoszkieletowych.

Sondowanie mechaniki zespołu miozyny w wiązkach filamentów aktynowych za pomocą pęsety optycznej

Przeglądaj więcej filmów