Name: Metodyka badania środków kontrolnych i insektycydów przeciwko omacnicy kawowej Hypothenemus hampei (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-23T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Poznaj metodę oceny toksyczności insektycydów wobec omacnicy kawowej Hypothenemus hampei przy użyciu zielonych owoców kawy. Protokół umożliwia badanie śmiertelności, odstraszalności i zdolności rozrodczych szkodnika w realistycznych warunkach.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy wyrażają swoje podziękowania dla Narodowej Federacji Plantatorów Kawy Kolumbii, asystentów Departamentu Entomologii (Diana Marcela Giraldo, Gloria Patricia Naranjo), Stacji Doświadczalnej Naranjal i Jhona Félixa Trejosa.

UWAGA: Niniejszy protokół przedstawia różne metody identyfikacji odmiennych efektów w obrębie CBB w warunkach laboratoryjnych.
1. Zbiór owoców
<ol>
	<li>Wcześnie rano zbierz owoce kawowca (GFs) o wieku rozwojowym około 120-150 dni po kwitnieniu z drzew na plantacji kawy.</li>
</ol>
2. Dezynfekcja owoców20
<ol>
	<li>Przenieś do laboratorium około 300 owoców grejpfruta (GF). Wybierz zdrowe owoce o jednolitym rozmiarze i usuń szypułki.</li>
	<li>Zanurz owoce GF w roztworze mydła (2 mL płynnego detergentu do naczyń w 998 mL wody z kranu), a następnie pocieraj je, aby je umyć. Następnie opłucz owoce wodą, wymieniając wodę trzy razy.</li>
	<li>Zanurz owoce GF w 0,5% roztworze podchlorynu sodu (100 mL w 900 mL wody z kranu) i mieszaj w inkubatorze wytrząsowym przy 110 rpm przez 15 min. Następnie opłucz owoce GF wodą, mieszając w inkubatorze wytrząsowym i wymieniając wodę trzy razy, co 10 min.</li>
	<li>Osusz owoce GF sterylnymi ręcznikami papierowymi.</li>
	<li>Umieść owoce GF w tackach (33 cm x 25 cm x 2 cm) i naświetlaj je przez 15 min, rozmieszczając owoce GF w odległości 55 cm od źródła UV w poziomej komorze z laminarnym przepływem powietrza wyposażonej w lampę UV.</li>
	<li>W ciągu tych 15 min, co 5 min, przesuwaj owoce GF, aby zapewnić naświetlenie całego owocu.</li>
</ol>
3. Dezynfekcja owadów21
<ol>
	<li>Do przeprowadzenia bioassayów należy użyć nowo wyklutych (tego samego dnia) owadów CBB.</li>
	<li>Owady CBB zanurzyć w 0,5% roztworze podchlorynu sodu, powoli mieszając je pędzlem przez 10 min.</li>
	<li>Owady CBB przefiltrować przez muślinową tkaninę i trzykrotnie przemyć sterylną wodą destylowaną.</li>
	<li>Nadmiar wody usunąć za pomocą sterylnych ręczników papierowych.</li>
</ol>
4. Ocena produktu o działaniu ochronnym na owoce (preinfestacja) (Rycina 1)
<ol>
	<li>Użyj grupy owoców guawy (GF) na jedną jednostkę eksperymentalną. Zazwyczaj na jednostkę eksperymentalną wykorzystuje się grupę 30 GF.</li>
	<li>Umieść GF w plastikowych pudełkach (jednostka eksperymentalna).</li>
	<li>Zastosuj produkt testowy w różnych stężeniach do oceny. Aplikację przeprowadź za pomocą przenośnego opryskiwacza. W tym przypadku testowano emulsję alkaloidową w stężeniu 5% i 6%.</li>
	<li>W ramach grupy kontrolnej opryskaj grupę GF wodą.</li>
	<li>Wykorzystaj co najmniej trzy powtórzenia (jednostka eksperymentalna) na jedną próbę, opryskując je jedna po drugiej.</li>
	<li>W komorze sterylnej wprowadź dwa dorosłe osobniki CBB na każde GF (łącznie do plastikowych pudełek wprowadzono 60 osobników CBB). Po 30 min przykryj pudełka.</li>
	<li>Pozostaw plastikowe pudełka z zainfekowanymi GF w pomieszczeniu lub inkubatorze w kontrolowanych warunkach (ciemność, 25 ± 2 °C oraz wilgotność względna 71% ± 5%).</li>
	<li>Po 1, 7, 15 i 21 dniach policz liczbę owoców zaatakowanych przez szkodnika oraz liczbę żywych i martwych owadów poza owocami w każdym pudełku.</li>
	<li>W 20. dniu po infekcji dokonaj sekcji każdego GF pod stereomikroskopem przy powiększeniu 10x.</li>
	<li>Policz liczbę zdrowych nasion lub nasion uszkodzonych przez owady w każdym owocu.</li>
	<li>Policz zaobserwowane różne stadia biologiczne CBB22 oraz policz liczbę martwych owadów w każdym nasionie, aby określić śmiertelność owadów na jednostkę eksperymentalną.</li>
</ol>
5. Ocena efektu działania produktu po infestacji CBB (poinfestacyjna) (Rysunek 3)
<ol>
	<li>Stosować grupy po 200 owoców na jedną próbę.</li>
	<li>W komorze z laminarnym przepływem powietrza wypuścić dorosłe osobniki CBB (w stosunku 2:1 dorosłych CBB do GFs) na uprzednio zdezynfekowane GFs, pozwalając na przebieg infestacji przez 3 h w temperaturze 21 °C.</li>
	<li>Zbadać GFs. Po 3 h większość powinna być zainfestowana, z odwłokami CBB wciąż wystawionymi na zewnątrz (pozycja A20), jak pokazano na Rysunku 2.</li>
	<li>Wybrać 46 zainfestowanych GFs (pozycja A) i umieścić je w plastikowych statywach z 96 studzienkami (jednostka eksperymentalna). Owoce powinny pozostać w tej pozycji, aby preparat można było rozpylić bezpośrednio na CBB perforujące owoc.</li>
	<li>Rozpylić preparat co najmniej trzy razy (trzy statywy) na próbę, jeden po drugim, przykrywając statywy po 30 min.</li>
	<li>Pozostawić statywy z zainfestowanymi GFs w pomieszczeniu lub inkubatorze w kontrolowanych warunkach (ciemność, 25 ± 2 °C oraz wilgotność względna 71% ± 5%).</li>
	<li>Po 20 dniach przeprowadzić sekcję GFs pod stereomikroskopem przy powiększeniu 10x.</li>
	<li>Policzyć liczbę zdrowych nasion lub nasion uszkodzonych przez owady w każdym owocu.</li>
	<li>Policzyć poszczególne stadia biologiczne CBB22 oraz liczbę martwych owadów w każdym nasionie, aby określić śmiertelność owadów na jednostkę eksperymentalną.</li>
</ol>
6. Ocena produktu o działaniu odstraszającym na CBB
<ol>
	<li>Należy wykonać kroki 4.1-4.6 opisane dla oceny produktu o działaniu ochronnym na owoce.</li>
	<li>Po wypuszczeniu dorosłych osobników CBB do plastikowych pojemników, należy policzyć liczbę osobników CBB, które odleciały z pojemników oraz liczbę osobników, które zaatakowały GFs. Następnie należy wykonać kroki 4.7-4.11.</li>
	<li>Należy wykonać kroki 5.1-5.5 opisane dla oceny produktu po infestacji CBB.</li>
	<li>Po opryskaniu owadów w pozycji A każdym z preparatów, należy policzyć liczbę osobników CBB, które opuściły GF i/lub odleciały z GF. Następnie należy wykonać kroki 5.6-5.9.</li>
</ol>
7. Analiza statystyczna
UWAGA: Zmiennymi odpowiedzią są procentowe wskaźniki śmiertelności w czasie oraz procent zdrowych, niezainfekowanych nasion kawy.
<ol>
	<li>Oblicz średnią oraz odchylenie standardowe dla każdej zmiennej odpowiedzi dla każdej grupy badawczej.</li>
	<li>Przeprowadź analizę wariancji dla każdej zmiennej odpowiedzi, stosując model dla całkowicie losowego planu doświadczalnego. 
	UWAGA: Aby porównać grupy badawcze z kontrolą absolutną (kontrolą wodną), wykonuje się test porównawczy Dunnetta na poziomie istotności 5%.</li>
	<li>W przypadku stwierdzenia istotnych różnic między grupami badawczymi a kontrolą absolutną, zastosuj test najmniejszej istotnej różnicy (LSD) na poziomie 5% w celu porównania grup badawczych między sobą.</li>
	<li>Oceń moc testu; jeśli przekracza ona 85%, założenia o normalności rozkładu i jednorodności wariancji są spełnione.</li>
</ol>
<img alt="Oprysk insektycydami, infestacja CBB, inkubacja w 25°C, sekcja owoców, schemat liczenia populacji." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63694/63694fig01.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1: Procedura oceny wpływu insektycydów stosowanych przed infestacją na CBB. Etapy oceny wpływu insektycydów stosowanych przed infestacją na Hypothenemus hampei (CBB) z wykorzystaniem zielonych owoców (GFs). (A) Wybór owoców. (B) Oprysk owoców kawowca insektycydami. (C) Infestacja owoców kawowca przez CBB w stosunku 2:1 CBB na GF. (D) Zainfekowane owoce. (E) Inkubacja owoców w kontrolowanych warunkach. (F) Sekcja owoców. (G) Liczenie populacji CBB wewnątrz nasion. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63694/63694fig01large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Zielony układ doświadczalny z rzędami małych owoców oliwki na uchwycie polimerowym do potencjalnej analizy." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63694/63694fig02.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Proces infekcji owoców kawowca przez CBB. Zainfekowane owoce zawierają dorosłe osobniki CBB z częściowo odsłoniętymi odwłokami (pozycja A). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63694/63694fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Schemat procesu infestacji przez skórka kawowca, ilustrujący etapy od wyboru owoców do zliczenia populacji CBB." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63694/63694fig03.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3: Procedura oceny efektów zastosowania insektycydów po infestacji CBB. Kroki oceny efektów zastosowania insektycydów po infestacji CBB z wykorzystaniem GF. (A) Wybór owoców. (B) Infestacja owoców przez CBB w stosunku 2:1 CBB na GF. (C) Wybór owoców zainfektowanych. (D) Oprysk owoców insektycydem. (E) Inkubacja owoców. (F) Sekcja owoców. (G) Zliczanie populacji CBB. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63694/63694fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>

<ol><li>Mendesil, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semiochemicals+used+in+host+location+by+the+coffee+berry+borer%2C+Hypothenemus+hampei%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">Semiochemicals used in host location by the coffee berry borer, Hypothenemus hampei.</a> Journal of Chemical Ecology. 35 (8), 944-950 (2009).</li>
<li>Jaramillo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coffee+berry+borer+joins+bark+beetles+in+coffee+klatch%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Coffee berry borer joins bark beetles in coffee klatch.</a> PLoS ONE. 8 (9), 74277(2013).</li>
<li>Giraldo-Jaramillo, M., Garcia, A. G., Parra, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology%2C+thermal+requirements%2C+and+estimation+of+the+number+of+generations+of+Hypothenemus+hampei+%28Ferrari%2C+1867%29+%28Coleoptera%3A+Curculionidae%29+in+the+state+of+S%C3%A3o+Paulo%2C+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Economic+Entomology%22%5BJournal%5D)">Biology, thermal requirements, and estimation of the number of generations of Hypothenemus hampei (Ferrari, 1867) (Coleoptera: Curculionidae) in the state of São Paulo, Brazil.</a> Journal of Economic Entomology. 111 (5), 2192-2200 (2018).</li>
<li>Benavides, P., Góngora, C., Bustillo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IPM+Program+to+Control+Coffee+Berry+Borer+Hypothenemus+hampei%2C+with+Emphasis+on+Highly+Pathogenic+Mixed+Strains+of+Beauveria+bassiana%2C+to+Overcome+Insecticide+Resistance+in+Colombia%5BTitle%5D)+AND+%22IntechOpen%22%5BJournal%5D)">IPM Program to Control Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei, with Emphasis on Highly Pathogenic Mixed Strains of Beauveria bassiana, to Overcome Insecticide Resistance in Colombia.</a> IntechOpen. , (2012).</li>
<li>Martínez, C. P., Echeverri, C., Florez, J. C., Gaitan, A. L., Góngora, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+production+of+two+chitinolytic+proteins+with+an+inhibiting+effect+on+the+insect+coffee+berry+borer%2C+Hypothenemus+hampei+%28Ferrari%29+%28Coleoptera%3A+Curculionidae%29+and+the+fungus+Hemileia+vastatrix+the+most+limiting+pests+of+coffee+crops%5BTitle%5D)+AND+%22AMB+Express%22%5BJournal%5D)">In vitro production of two chitinolytic proteins with an inhibiting effect on the insect coffee berry borer, Hypothenemus hampei (Ferrari) (Coleoptera: Curculionidae) and the fungus Hemileia vastatrix the most limiting pests of coffee crops.</a> AMB Express. 2, 1-11 (2012).</li>
<li>Padilla, B. E., Acuña, Z., Velásquez, C. S., Rubio, G. J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitors+of+%5Balpha%5D-amylases+from+the+coffee+berry+borer+Hypothenemus+hampei+in+different+plant+species%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+Colombiana+de+Entomolog%C3%ADa%22%5BJournal%5D)">Inhibitors of [alpha]-amylases from the coffee berry borer Hypothenemus hampei in different plant species.</a> Revista Colombiana de Entomología. 32 (2), 125-130 (2006).</li>
<li>Alvarez, J. H., Cortina, H. A., Villegas, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+evaluate+antibiosis+to+Hypothenemus+hampei+Ferrari+in+coffee+under+controlled+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Cenicaf%C3%A9%22%5BJournal%5D)">Methods to evaluate antibiosis to Hypothenemus hampei Ferrari in coffee under controlled conditions.</a> Cenicafé. 52 (3), 205-214 (2001).</li>
<li>Arcila, A., Duarte, A. F., Villalba, D. A., Benavides, P. New Product in the Integrated Management of the Coffee Berry Borer in Colombia. National Coffee Research Center (Cenicafé). , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://biblioteca.cenicafe.org/handle/10778/477">https://biblioteca.cenicafe.org/handle/10778/477</a> (2014).</li>
<li>Jaramillo, J., Montoya, E., Benavides, P., Góngora, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beauveria+bassiana+and+Metarhizium+anisopliae+for+the+control+of+coffee+brocade+in+fruits+on+the+ground%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+Colombiana+de+Entomolog%C3%ADa%22%5BJournal%5D)">Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae for the control of coffee brocade in fruits on the ground.</a> Revista Colombiana de Entomología. 41, 95-104 (2015).</li>
<li>Bastidas, A., Velásquez, E., Benavides, P., Bustillo, A., Orozco, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+preformulated+Beauveria+bassiana+%28B%C3%A1lsam%29+Vuillemin%2C+for+the+control+of+the+coffee+berry+borer%5BTitle%5D)+AND+%22Agronomia%22%5BJournal%5D)">Evaluation of preformulated Beauveria bassiana (Bálsam) Vuillemin, for the control of the coffee berry borer.</a> Agronomia. 17, 44-61 (2009).</li>
<li>Villalba-Gault, D., Bustillo, A., Chaves Cordoba, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+insecticides+for+the+control+of+the+coffee+berry+borer+in+Colombia%5BTitle%5D)+AND+%22Cenicafe%22%5BJournal%5D)">Evaluation of insecticides for the control of the coffee berry borer in Colombia.</a> Cenicafe. 46, 152-163 (1995).</li>
<li>Bustillo, A. E., Orozco, J., Benavides, P., Portilla, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+production+and+use+of+parasitoids+for+the+control+of+the+coffee+berry+borer+in+Colombia%5BTitle%5D)+AND+%22Cenicafe%22%5BJournal%5D)">Mass production and use of parasitoids for the control of the coffee berry borer in Colombia.</a> Cenicafe. 47 (4), 215-230 (1996).</li>
<li>Celestino, F. N., Pratissoli, D., Machado, L. C., Santos Junior, H. J. G. D., Mardgan, L., Ribeiro, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+breeding+techniques+of+the+coffee+berry+borer+%5BHypothenemus+hampei+%28Ferrari%29%5BTitle%5D)+AND+%22Coffee+Science%22%5BJournal%5D)">Adaptation of breeding techniques of the coffee berry borer [Hypothenemus hampei (Ferrari).</a> Coffee Science. 11 (2), 161-168 (2016).</li>
<li>Domínguez, L., Parzanese, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultraviolet+light+in+food+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Argentine+Foods%22%5BJournal%5D)">Ultraviolet light in food preservation.</a> Argentine Foods. 52 (2), 70-76 (2012).</li>
<li>Jaramillo, J., Chabi-Olaye, A., Poehling, H. M., Kamonjo, C., Borgemeister, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+improved+laboratory+production+technique+for+the+coffee+berry+borer+Hypothenemus+hampei%2C+using+fresh+coffee+berries%5BTitle%5D)+AND+%22Entomologia+Experimentalis+et+Applicata%22%5BJournal%5D)">Development of an improved laboratory production technique for the coffee berry borer Hypothenemus hampei, using fresh coffee berries.</a> Entomologia Experimentalis et Applicata. 130 (3), 275-281 (2009).</li>
<li>Pérez, J., Infante, F., Vega, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+coffee+berry+borer+%28Coleoptera%3A+Scolytidae%29+have+mutualistic+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+Entomological+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Does the coffee berry borer (Coleoptera: Scolytidae) have mutualistic fungi.</a> Annals of the Entomological Society of America. 98 (4), 483-490 (2005).</li>
<li>Benavides, P., Gil, P., Góngora, C., Arcila, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+pest+management.+Cenicafe.+Manual+of+the+Colombian+coffee+grower%3A+Research+and+technology+for+the+sustainability+of+coffee+growing%5BTitle%5D)+AND+%22Manizales%3A+FNC%3A+Cenicaf%C3%A9%22%5BJournal%5D)">Integrated pest management. Cenicafe. Manual of the Colombian coffee grower: Research and technology for the sustainability of coffee growing.</a> Manizales: FNC: Cenicafé. 3, 179-214 (2013).</li>
<li>Bustillo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+the+coffee+berry+borer%2C+Hypothenemus+hampei+%28Coleoptera%3A+Curculionidae%3A+Scolytinae%29%2C+in+Colombia%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+Colombiana+de+Entomolog%C3%ADa%22%5BJournal%5D)">A review of the coffee berry borer, Hypothenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae: Scolytinae), in Colombia.</a> Revista Colombiana de Entomología. 32 (2), 101-116 (2006).</li>
<li>Arcila, A., Benavides, P., Mejia, J. New Chemical Control Alternative for the Integrated Management of the Coffee Berry Borer. National Coffee Research Center (Cenicafé). , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://biblioteca.cenicafe.org/handle/10778/557">https://biblioteca.cenicafe.org/handle/10778/557</a> (2015).</li>
<li>Tapias, L., Martinez, C., Benavides, P., Gongora, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+method+to+evaluate+the+effect+of+insecticides+on+the+coffee+berry+borer%5BTitle%5D)+AND+%22Cenicaf%C3%A9%22%5BJournal%5D)">Laboratory method to evaluate the effect of insecticides on the coffee berry borer.</a> Cenicafé. 68 (2), 76-89 (2017).</li>
<li>Bustillo, A. E., Marín, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+reactivate+the+virulence+of+Beauveria+bassiana+to+control+the+coffee+berry+borer%5BTitle%5D)+AND+%22Manejo+Integrado+de+Plagas%22%5BJournal%5D)">How to reactivate the virulence of Beauveria bassiana to control the coffee berry borer.</a> Manejo Integrado de Plagas. 63, (2002).</li>
<li>Constantino, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((morphological+and+genetic+aspects+of+Hypothenemus+obscurus+and+Hypothenemus+hampei+%28Coleoptera%3A+Curculionidae%3A+Scolytinae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+Colombiana+de+Entomolog%C3%ADa%22%5BJournal%5D)">morphological and genetic aspects of Hypothenemus obscurus and Hypothenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae: Scolytinae).</a> Revista Colombiana de Entomología. 37 (2), 173-182 (2011).</li>
<li>Estrela, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+action+of+sodium+hypochlorite%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Dental+Journal%22%5BJournal%5D)">Mechanism of action of sodium hypochlorite.</a> Brazilian Dental Journal. 13 (2), 113-117 (2002).</li>
<li>Diffey, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solar+ultraviolet+radiation+effects+on+biological+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Physics+in+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Solar ultraviolet radiation effects on biological systems.</a> Physics in Medicine and Biology. 36 (3), 299-328 (1991).</li>
<li>BIOCAFE. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html">http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html</a> (2022).</li>
<li>Bustillo, A. E., et al. Integrated Management of the Coffee Berry Borer: Hypothenemus hampei Ferrari in Colombia. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://biblioteca.cenicafe.org/hangle/10778/848">https://biblioteca.cenicafe.org/hangle/10778/848</a> (1998).</li>
<li>Portilla, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+an+artificial+diet+for+the+rearing+of+Hypothenemus+hampei%5BTitle%5D)+AND+%22Cenicaf%C3%A9%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of an artificial diet for the rearing of Hypothenemus hampei.</a> Cenicafé. 50, 24-38 (1999).</li>
<li>Portilla, R. M., Streett, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+techniques+for+automated+mass+production+of+Hypothenemus+hampei+on+the+modified+Cenibroca+artificial+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Cenicaf%C3%A9%22%5BJournal%5D)">New techniques for automated mass production of Hypothenemus hampei on the modified Cenibroca artificial diet.</a> Cenicafé. 57, 37-50 (2006).</li>
</ol>

Żaden z autorów nie ma do zadeklarowania konfliktu interesów.

W tym protokole dezynfekcja owoców i owadów jest krytycznym krokiem. Kiedy owoce z pola są używane w laboratorium, często wykazują wysokie zanieczyszczenie i odwodnienie, ponieważ mikroorganizmy i roztocza są obecne w naskórku 7,15,16. Dlatego używanie owoców lub owadów, które nie są dezynfekowane, spowoduje śmierć owadów z powodu zanieczyszczenia wywołanego przez mikroorganizmy, takie jak bakterie lub grzyby, zakłócając w ten s...

Omacnica kawowa (CBB), Hypothenemus hampei, została po raz pierwszy wykryta w 1988 roku w Kolumbii i od tego czasu stała się najważniejszym gatunkiem szkodnika upraw kawy. Samice CBB opuszczają owoc narodzinowy już zapłodniony, szukając nowych owoców, kierując się lotnymi substancjami chemicznymi, które emitują1,2. Pełny cykl jest realizowany w ciągu 23 dni3 w temperaturze 25 °C. Cykl rozpoczyna się od penetracji nasion przez samicę założycielską i złożenia jaj w bielmie owocu. Zamknięte larwy zjadają nasiona. Jeśli owoce zostaną wycięte w tym momencie, będzie można obserwować zarówno samicę założycielkę, jak i jej potomstwo. Po 14 dniach larwy stają się poczwarkami - na ogół stadium poczwarki trwa 5 dni. W fazie dorosłej samice kopulują ze swoim rodzeństwem, a nowo zapłodnione samice odlatują od uszkodzonych owoców w poszukiwaniu nowych owoców kawy, aby rozpocząć nowy cykl4.
Zarówno proces penetracji, jak i wynik żerowania larw uszkadzają ziarna kawy, obniżając jakość napoju kawowego i znacznie zmniejszając dochody; więcej niż 5% porażenia na plantacjach kawy jest ogólnie uważane za próg ekonomiczny.
Kontrola CBB opiera się na strategii zintegrowanej ochrony przed szkodnikami (IPM), obejmującej kontrolę kulturową i praktyki agronomiczne, naturalne czynniki biologiczne oraz stosowanie chemicznych środków owadobójczych, co wymaga warunków bezpieczeństwa i terminowego stosowania4.
Aby ocenić nowe insektycydy do kontroli CBB, potrzebne są tanie metodologie, które pozwalają na uzyskanie szybkich wyników. Obecnie stosowane są zarówno procedury laboratoryjne, jak i terenowe, w tym sztuczne diety zawierające kawę, w których zawarte są insektycydy5,6, lub rozpylanie insektycydów na suchy pergamin coffee7,8,9. Ponadto opisano eksperymenty przeprowadzone w terenie z użyciem gałęzi kawowca pokrytych rękawami entomologicznymi10,11; Metody te wymagają jednak intensywnego nakładu pracy i długich okresów oceny.
Warunek przypominający naturalne warunki polowe, który jest również szybki i tani, to użycie zielonych lub dojrzałych owoców kawy. Jednak owoce te muszą być przechowywane w warunkach odpowiednich do rozwoju CBB, unikając zmian i zanieczyszczeń mikroorganizmami, aby zachować ich jakość i właściwości. W tym celu zastosowano różne środki dezynfekujące, a także procedury związane z ciepłem i promieniowaniem7,9,12,13,14,15,16.
Dodatkowo, metody oceny insektycydów w stosunku do CBB wymagają symulacji dorosłych samic latających w poszukiwaniu owoców lub penetrujących te owoce17,18. W tym celu na polu przeprowadzono sztuczne inwazje owoców8,11,19, chociaż proces ten jest pracochłonny i zależy od warunków środowiskowych.
Tutaj opisujemy ustandaryzowaną metodologię oceny produktów, które mogą mieć różny wpływ na CBB w kontrolowanych warunkach środowiskowych, które przypominają warunki terenowe.

<table><tbody><tr><td>Zlewka z dziobkiem, niska forma 500 mL</td><td>BRAND PP</td><td></td><td></td></tr> BR87826 <tr><td>Shaker stołowy</td><td>New Brunswick Scientific Innova 4000 Inkubator Shaker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mydło w płynie do mycia naczyń-AXION</td><td>Colgate-Palmolive</td><td>AXION</td><td></td></tr><tr><td>Hood; Pozioma stacja przepływu laminarnego</td><td>Terra Universal</td><td></td><td>&nbsp; Stal malowana proszkowo, 1930 mm szer. x 1118 mm gł. x 1619 mm wys., 120 V (https://www.terrauniversal.com/hood-horizontal-laminar-flow-station-9620-64a.html)</td></tr><tr><td>Owady CBB</td><td>BIOCAFE</td><td></td><td>(http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html).</td></tr><tr><td>Ręczniki papierowe Multi Fold White</td><td>Familia</td><td>73551</td><td></td></tr><tr><td>Preval Agregat natryskowy</td><td>&nbsp; Preval Merck</td><td>Z365556-1KT</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/CO/es/product/sigma/z365556?gclid=Cj0KCQiAweaNBhDEARIsAJ 5hwbfZOy1TWGj6huatFtRQt AzOyHe5-oBiKnOUK2T1exuuk WwJLdvxkvsaAjoYEALw_wcB</td></tr><tr><td>Regały odwracalne 96-well</td><td>heathrow HEA2345A</td><td></td><td>https://www.heathrowscientific.com/reversible-racks-96-well-i-hea2345a</td></tr><tr><td>Ostrza skalpela N 11</td><td>Merck</td><td>S2771-100EA</td><td></td></tr><tr><td>Uchwyty skalpela N3</td><td>Merck</td><td>S2896-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Podchlorek sodu</td><td>Firma</td><td>Clorox</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop stereoskopowy</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 508</td><td>https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/stereo-zoom-microscopes/stemi-508.html</td></tr></tbody></table>

metodyka badania środków kontrolnych i insektycydów przeciwko omacnicy kawowej hypothenemus hampei

Methodology to Test Control Agents and Insecticides Against the Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei

Przed zaleceniem środków owadobójczych do leczenia omacnicy kawowej (CBB) Hypothenemus hampei, warto wiedzieć, jaka jest śmiertelność i odstraszanie tych insektycydów wobec dorosłych owadów lub ich wpływ na wydajność reprodukcyjną. Jednak obecnie dostępne metody oceniają tylko śmiertelność osób dorosłych, ograniczając wybór nowych insektycydów o innym sposobie działania. W niniejszej pracy zbadano różne metody eksperymentalne w celu zidentyfikowania różnorodnego wpływu na CBB w warunkach laboratoryjnych. W tym celu zebrano zielone owoce kawy (GF) i zdezynfekowano je przez zanurzenie w roztworze podchlorynu sodu, a następnie naświetlanie światłem UV. Równolegle dorosłe osobniki CBB z kolonii zostały zdezynfekowane przez zanurzenie w roztworze podchlorynu sodu. Aby ocenić ochronę owoców (preinfestację), owoce umieszczono w plastikowych pudełkach i zastosowano środki owadobójcze. Następnie dorośli CBB zostali zwolnieni w tempie dwóch CBB na GF. GF pozostawiono w kontrolowanych warunkach, aby ocenić porażenie CBB i przeżycie po 1, 7, 15 i 21 dniach. Aby ocenić skuteczność insektycydów po inwazji CBB (po inwazji), dorosłe osobniki CBB zostały uwolnione do GF w stosunku 2:1 przez 3 godziny w temperaturze 21 °C. Poinekowane owoce przedstawiające dorosłe osobniki CBB z częściowo odsłoniętymi brzuchami wybrano i umieszczono w 96-dołkowych stojakach, a CBB wwiercające się w owoce poddano bezpośredniej obróbce. Po 20 dniach owoce zostały wypreparowane i zarejestrowano etapy biologiczne CBB wewnątrz każdego owocu. GF służyły jako substraty, które naśladują warunki naturalne do oceny toksycznych, chemicznych i biologicznych środków owadobójczych w stosunku do CBB.

Wyniki wykazały, że samice CBB rozpoznały owoce i, w zależności od charakterystyki powierzchni owocu oraz emitowanych zapachów, samice CBB zaczęły penetrować lub wgryzać się w owoce w ciągu 3 h w temperaturze 21 °C.
Wpływ insektycydu na CBB po aplikacji na owoce kawowca (procedura preinfestacji) po 24 h oraz w czasie przedstawiono na Rysunku 4. Dwa insektycydy (emulsja alkaloidowa w stężeniu 5% i 6%) spowodowały wysoką śmiertelność owadów w 20. dniu (Tabel...

Metoda wykorzystująca zielone owoce kawy (GFs) została opracowana w celu zbadania toksyczności insektycydów przeciwko omacnicy kawowej (CBB). Insektycydy lub substancje toksyczne stosowano do zdezynfekowanych GF przed lub po inwazji CBB. Oceniano śmiertelność owadów, odstraszalność i zdolność reprodukcyjną, a także inne parametry.

Metodyka badania środków kontrolnych i insektycydów przeciwko omacnicy kawowej Hypothenemus hampei

Prior to recommending insecticides to treat the coffee berry borer (CBB) Hypothenemus hampei, it is valuable to know the mortality and repellency of these ...

W tej metodzie wykorzystuje się zielone owoce kawy do zbadania toksyczności insektycydów wobec omacnicy kawowej. Aplikację środka owadobójczego przeprowadza się przed lub po inwazji owadów w celu zbadania śmiertelności owadów, odstraszania i innych efektów. Stosowanie prawdziwej zielonej kawy ze składnikami odżywczymi odpowiednimi dla wzrostu owadów jest najwłaściwszym sposobem oceny toksyczności związków dla owadów w symulowanych warunkach naturalnych.Protokół pozwala na ocenę toksycznego działania chemicznych środków owadobójczych oraz wobec patogenów, takich jak grzyby lub substancje odstraszające. Ta infekcja owoców i owadów jest krytycznym krokiem, ponieważ niewłaściwa dezynfekcja może spowodować śmierć owadów z powodu zanieczyszczenia. Jakość owadów jest również ważna, ponieważ słabe owady będą przeceniać wyniki toksycznego produktu.Demonstracja wizualna pozwala na zidentyfikowanie odpowiedniego etapu owoców, procesu porażenia owadów, odpowiedniego momentu na rozprzestrzenienie się substancji toksycznej. I sposób na rozcinanie owoców. Procedurę zademonstruje Claudia Martinez, asystentka naukowa z laboratorium.Na początek zbierz owoce zielonej kawy wcześnie rano, których przybliżony wiek rozwojowy wynosi od 120 do 150 dni po kwitnieniu z plantacji kawy. Wybierz około 300 zdrowych owoców o jednakowej wielkości i wycofaj szypułki. Zanurz owoce zielonej kawy w 2% roztworze mydła i dokładnie oczyść, pocierając je.Następnie opłucz owoce trzykrotnie czystą wodą. Zanurz je w 0,5% roztworze podchlorynu sodu i umieść na wytrząsarce na 10 minut z prędkością 110 obrotów na minutę. Owoce opłucz trzykrotnie czystą wodą i osusz sterylnymi ręcznikami papierowymi.Naświetlić owoce, umieszczając je w odległości 55 centymetrów od źródła promieniowania UV na 15 minut, wewnątrz poziomej stacji przepływu laminarnego z włączoną funkcją promieniowania UV. Przesuwaj owoce co pięć minut, aby zapewnić prawidłowe napromieniowanie całego owocu. Aby skonfigurować testy biologiczne, zanurz świdry kawowe, które pojawiły się tego samego dnia, w 0,5% roztworze podchlorynu sodu i powoli mieszaj je szczotką przez 10 minut.Przefiltruj te owady przez muślinową szmatkę i umyj je trzykrotnie sterylną wodą destylowaną. Usuń nadmiar wody sterylnymi ręcznikami papierowymi. Przygotuj grupę 30 zielonych owoców kawy na jednostkę doświadczalną i umieść je w plastikowym pudełku.Zastosować różne stężenia badanego produktu do oceny za pomocą przenośnego opryskiwacza, tutaj użyto 5% i 6% emulsji alkaloidowych. Jako kontrolę spryskaj grupę zielonych owoców kawy wodą. Wykorzystaj co najmniej trzy jednostki eksperymentalne na zabieg, rozpylając jedną po drugiej.W sterylnym kapturze wypuść dwie dorosłe omacnice kawowe na zielony owoc kawy i przykryj pudełka po 30 minutach. Pozostaw plastikowe pudełka z porażonymi zielonymi owocami kawy w ciemności w pomieszczeniu lub inkubatorze, w kontrolowanych warunkach. Po 1, 7, 15 i 21 dniach policz liczbę owoców omacnicy oraz żywych i martwych owadów poza owocami w każdym pudełku.Po 20 dniach od inwazji przeanalizuj każdy owoc zielonej kawy pod mikroskopem stereoskopowym z 10-krotnym powiększeniem i policz liczbę zdrowych nasion lub nasion uszkodzonych przez owady w każdym owocu. Policz różne stadia biologiczne omacnicy kawowej. Obserwuj liczbę martwych owadów w każdym nasionie, aby określić śmiertelność owadów na jednostkę doświadczalną.W sterylnym kapturze wypuść dorosłe osobniki omacnicy kawowej na wcześniej zdezynfekowane zielone owoce kawy w stosunku dwa do jednego i pozwól inwazji postępować przez trzy godziny w temperaturze 21 stopni Celsjusza. Większość zielonych owoców kawy powinna zostać zaatakowana po trzech godzinach, gdy brzuch omacnicy kawowej jest nadal odsłonięty. Wybierz 46 porażonych owoców i umieść je w 96-dołkowym plastikowym stojaku, aby zabieg można było rozpylić bezpośrednio na omacnicę kawową, która perforuje owoce.Spryskaj trzy stojaki co najmniej trzy razy do zabiegu, jeden po drugim i przykryj stojaki po 30 minutach. Po 20 dniach przeanalizuj zielone owoce kawy pod mikroskopem stereoskopowym przy 10-krotnym powiększeniu i policz liczbę zdrowych nasion lub nasion uszkodzonych przez owady w każdym owocu. Policz różne stadia biologiczne omacnicy kawowej i liczbę martwych owadów w każdym nasionie, aby określić śmiertelność owadów na jednostkę doświadczalną.Postępuj zgodnie z początkowymi krokami, aby ocenić produkt o działaniu ochronnym na owoce i uwolnij dorosłe owoce zielonej kawy do plastikowych pudełek. Następnie policz liczbę świdrów kawowych, które odlatują od pudełek i liczbę, która atakuje zielone owoce kawy. Po inkubacji, w kontrolowanych warunkach, a następnie rozbiorze po 20 dniach od infestacji i policzeniu nasion i martwych owadów, należy postępować zgodnie z krokami opisanymi w celu oceny produktu, po inwazji omacnicy kawowej.Policz liczbę otworów jagód kawy, które wysunęły się z zielonych owoców kawy lub odleciały od owoców. Po spryskaniu każdym zabiegiem, postępuj zgodnie z etapami inkubacji w kontrolowanych warunkach, aby określić śmiertelność owadów na jednostkę doświadczalną. 5% i 6% insektycyd zastosowany na omacnicę kawową spowodował wysoką śmiertelność owadów w 20 dniu i wykazał znaczące różnice w porównaniu z kontrolą.Zaobserwowano, że zastosowanie drugiego środka owadobójczego spowodowało uzyskanie 94% zdrowych nasion, a pierwszego środka owadobójczego spowodowało uzyskanie 89% zdrowych nasion. 37% nasion nie zostało porażonych w grupie kontrolnej. W przypadku po porażeniu produkty wnikały w naskórek owada, powodując śmiertelność owadów.Najwyższa śmiertelność wystąpiła w przypadku drugiego środka owadobójczego. Działanie insektycydów znalazło odzwierciedlenie w odsetku zdrowych, niezakażonych nasion w 20 dniu oceny. Wewnątrz nasion kawy stwierdzono zmniejszoną populację owadów w porównaniu z populacją owadów spryskaną wodą.Połączone działanie entomopatogenu i repelentu skutkowało minimalnym uszkodzeniem nasion i maksymalną śmiertelnością owadów. Ta infekcja owoców i dezynfekcja owadów zapewniają sukces protokołu. Metodologia ta może być również wykorzystana do oceny tolerancji lub odporności owoców kawy na omacnicę kawowca.Negatywny wpływ można zaobserwować również w stosunku do populacji owadów w przypadku nasion kawy odpornych na owady. Metodologia ta może być stosowana nie tylko w entomologii do oceny insektycydów o różnych sposobach działania, ale także w hodowli roślin do oceny odmian tolerancyjnych i patologii roślin w celu zbadania interakcji między owocami a patogenami.

methodology-to-test-control-agents-insecticides-against-coffee-berry

Research

JoVE Journal

Environment

Środowisko

Niniejszy artykuł demonstruje i omawia techniki stosowane do badania wrażliwości na pestycydy oraz wykrywania oporności na pestycydy kontaktowe i systemiczne u szkodników z grupy stawonogów.

Bioanalizy w monitorowaniu oporności na insektycydy

W tym filmie pokazujemy miejscowy test testowy w celu określenia toksyczności potencjalnego środka owadobójczego na dorosłe samice komarów. Wykorzystując antagonistę receptora dopaminy, który powoduje śmiertelne hamowanie neuroprzekaźnictwa u komarów, metoda ta opisuje sposób oceny toksycznego działania insektycydów po miejscowym stosowaniu.

Test do badań miejscowych: technika oceny potencjału owadobójczego antagonistów receptora dopaminy u dorosłych samic komarów poprzez zastosowanie miejscowe

Oceny insektycydów są często skierowane przeciwko dorosłym owadom, a nie niedojrzałym stadiom. W tym miejscu przedstawiamy protokół oceny insektycydów przeciwko jajom pluskiew z porównaniem do pierwszego stadium nimfalnego pluskwy. Protokoły te można dostosować do innych owadów w celu oceny skuteczności insektycydów w stadiach życia niebędących dorosłymi.

Metoda oceny skuteczności insektycydów przeciwko pluskwom, Cimex lectularius, jajom i pierwszym stadium rozwojowym

Tablice życia pozwalają na ilościowe określenie źródeł i wskaźników śmiertelności w populacjach owadów oraz przyczyniają się do zrozumienia, przewidywania i manipulowania dynamiką populacji w agroekosystemach. Przedstawiono metody prowadzenia i analizy kohortowych tablic trwania życia w terenie dla owadów z siedzącymi niedojrzałymi stadiami życia.

Metodyka opracowywania tablic życia owadów siedzących w terenie z wykorzystaniem mączlika (Bemisia tabaci) w układzie bawełnianym jako systemu modelowego

Kompleksowe monitorowanie dynamiki omacnicy kawowej i roślin żywicielskich jest niezbędne do agregowania danych na poziomie krajobrazu w celu poprawy zarządzania tym inwazyjnym szkodnikiem. W tym miejscu przedstawiamy protokół naukowego monitorowania przemieszczania się omacnicy kawowej, porażenia, śmiertelności, fenologii kawowca, pogody i zarządzania gospodarstwem za pomocą mobilnej aplikacji do elektronicznej rejestracji danych.

Protokół hawajski w sprawie naukowego monitorowania omacnicy kawowej: model dla agroekosystemów kawy na całym świecie

Protokoły są opisane do oceny toksyczności chemii dla niedojrzałych i dorosłych komarów do rozwoju jako nowe klasy larwobójców, adultycydów i endektocydów. Protokoły umożliwiają wysokoprzepustowe testowanie wielu substancji chemicznych przy dawce jednopunktowej, a następnie ocenę za pomocą testu dawka-odpowiedź w celu określenia toksyczności w kontakcie lub po spożyciu.

Protokoły badania toksyczności nowych środków owadobójczych dla komarów

Ta praca przedstawia protokół tworzenia kultury zawiesiny komórkowej pochodzącej z liści herbaty (Camellia sinensis L.), która może być wykorzystana do badania metabolizmu zewnętrznych związków, które mogą być pobierane przez całą roślinę, takich jak insektycydy.

Badanie metabolizmu sześciu ogólnoustrojowych insektycydów w nowo powstałej kulturze zawiesiny komórkowej pochodzącej z herbaty (Camellia Sinensis L.) Liście

Ten protokół opisuje obowiązkowy test żywieniowy w celu oceny potencjalnie toksycznego wpływu substancji fitochemicznej na larwy owadów z rzędu Lepidoptera. Jest to wysoce skalowalny test biologiczny owadów, łatwy do optymalizacji dawki subletalnej i śmiertelnej, działania odstraszającego i efektu fizjologicznego. Można to wykorzystać do badań przesiewowych przyjaznych dla środowiska środków owadobójczych.

Opracowanie systemu oznaczania żywienia do oceny owadobójczego wpływu fitochemikaliów na Helicoverpa armigera

Zwiększenie wykrywalności niedojrzałych muszek owocowych tefrytów na polu może w porę uruchomić działania mające na celu wyeliminowanie populacji tych niszczycielskich szkodników. Wykrywanie larw w późnym stadium rozwoju jest szybsze i dokładniejsze w przypadku rozdrabniania owoców żywiciela w torbie i przepuszczania miąższu przez szereg sit, niż podczas ręcznego cięcia i kontroli wzrokowej.

Przesiewanie miazgi owocowej w celu wykrycia niedojrzałych muszek owocowych Tephritid na polu

Tutaj prezentujemy protokół pozyskiwania entomopatogenicznych grzybów z omacnicy leśnej oraz zastępczy sposób oceny ich entomopatogenicznej aktywności za pomocą modelowego owada Coleoptera. Ta metoda jest skuteczna i wygodna w badaniu entomopatogenicznych zasobów grzybów ze szkodników owadzich drążących drewno w lasach naturalnych.

Izolacja, identyfikacja behawioralna i ocena chorobotwórczości grzybów entomopatogenicznych z omacnicy leśnej

Poznaj metodę oceny toksyczności insektycydów wobec omacnicy kawowej Hypothenemus hampei przy użyciu zielonych owoców kawy. Protokół umożliwia badanie śmiertelności, odstraszalności i zdolności rozrodczych szkodnika w realistycznych warunkach.

Metodyka badania środków kontrolnych i insektycydów przeciwko omacnicy kawowej Hypothenemus hampei

Przeglądaj więcej filmów