Name: Doustne skojarzone leczenie przeciwretrowirusowe u humanizowanych myszy zakażonych wirusem HIV-1 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Poznaj metodę doustnego podawania skojarzonej terapii antyretrowirusowej w humanizowanych myszach zakażonych HIV-1. Technika ta skutecznie hamuje replikację RNA wirusa, zmniejszając stres zwierząt w porównaniu do zastrzyków.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Chcielibyśmy podziękować doktorom Romas Geleziunas i Jeffowi Murry'emu oraz ludziom z Gilead za dostarczenie leków antyretrowirusowych użytych w tym badaniu. Ta praca została sfinansowana przez NCI 1R01CA239261-01 (dla Kitchen), NIH Grants P30AI28697 (UCLA CFAR Virology Core, Gene and Cell Therapy Core oraz Humanized Mouse Core), U19AI149504 (PIs: Kitchen & Chen), CIRM DISC2-10748, NIDA R01DA-52841 (do Zhen), NIAID R2120200174 (PIs: Xie & Zhen), IRACDA K12 GM106996 (Carrillo). Praca ta była również wspierana przez UCLA AIDS Institute, James B. Pendleton Charitable Trust i McCarthy Family Foundation.

Zanonimizowana ludzka tkanka płodowa została pozyskana komercyjnie. Badania na zwierzętach przeprowadzono zgodnie z protokołami zatwierdzonymi przez Uniwersytet Kalifornijski w Los Angeles i Komitet Badań nad Zwierzętami (ARC) (UCLA) zgodnie ze wszystkimi wytycznymi federalnymi, stanowymi i lokalnymi. W szczególności wszystkie eksperymenty zostały przeprowadzone zgodnie z zaleceniami i wytycznymi dotyczącymi trzymania i opieki nad zwierzętami laboratoryjnymi National Institutes of Health (NIH) oraz Association for the Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AALAC) International na mocy protokołu UCLA ARC o numerze 2010-038-02B. Wszystkie operacje przeprowadzono w znieczuleniu ketaminą (100 mg/kg)/ksylazyną (5 mg/kg) i izofluranem (2-3% obj.) i dołożono wszelkich starań, aby zminimalizować ból i dyskomfort zwierząt.
1. Humanizowane myszy zakażone wirusem HIV-1
UWAGA: Humanizowane myszy zostały skonstruowane zgodnie z wcześniejszym opisem w30,31,49. Protokół jest pokrótce opisany poniżej.
<ol>
	<li>Oczyść hematopoetyczne komórki progenitorowe CD34+ z ludzkiej wątroby płodu za pomocą mikrogranulek anty-CD34 zgodnie z protokołem producenta.</li>
	<li>Przed zabiegiem znieczulić 6-8-tygodniowe myszy NOD/SCID/IL2Rγ−/− (NSG) i poddać je subletalnemu napromienianiu (2,7 Gy).</li>
	<li>Wszczepić grasicę, pochodzącą od tego samego dawcy co wątroba płodu, pod torebkę nerkową wraz z wątrobą.</li>
	<li>Po implantacji wstrzyknij myszom dożylnie od 0,5 miliona do miliona komórek CD34 +.</li>
	<li>Po 8-10 tygodniach zbierz 100 μl krwi myszy przez krwawienie zadoczodołowe50 do probówek mikrowirówek zawierających 5 μl EDTA i wiruj przy 350 x g przez 3 min.</li>
	<li>Przechowywać osocze w temperaturze -80 °C w celu monitorowania wiremii po zakażeniu myszy wirusem HIV-1. Dodaj 2 ml 83% roztworu NH4C i inkubuj przez 5 minut w temperaturze pokojowej w celu lizy czerwonych krwinek.</li>
	<li>Dodaj 10 ml RPMI z 10% płodową surowicą bydlęcą (FBS), aby zatrzymać lizę. Wirować z prędkością 300 x g przez 5 min.</li>
	<li>Aspirowany supernatant. Wybarwić komórki panelem przeciwciał (patrz tabela materiałów) i przeanalizować za pomocą cytometrii przepływowej w celu sprawdzenia wszczepienia ludzkich komórek odpornościowych.</li>
	<li>Zakażone myszy wykazujące ponad 50% krążących komórek CD45 + poprzez wstrzyknięcie żyły zaoczodołowej 51,52 z co najmniej 200 ng p24 szczepu HIV-1 (tj. NFNSXSL930,53,54) za pomocą strzykawki insulinowej. Pobieraj krew co dwa tygodnie do analizy cytometrii przepływowej i pomiaru wiremii.</li>
</ol>
2. Przygotowanie leków ART
<ol>
	<li>Zważ poszczególne leki; na przykład, aby przygotować 10 kubków na żywność z cART, użyj sterylnych skrobaków do komórek, aby odważyć 250 mg FTC (emtrycytabiny), 375 mg TDF i 500 mg RAL lub ELV do pojedynczych sterylnych probówek wirówkowych o pojemności 15 ml w komorze bezpieczeństwa biologicznego.</li>
	<li>Dodaj 1 ml DMSO do probówki FTC 250 mg (końcowe stężenie 250 mg / ml), dodaj 1,5 ml DMSO do probówki 375 mg TDF (końcowe stężenie 250 mg / ml) i dodaj 1 ml DMSO do 500 mg RAL lub probówki ELV (końcowe stężenie 500 mg / ml). Mieszać lub pipetować mieszaninę leku aż do całkowitego rozpuszczenia i uzyskania klarownego roztworu.</li>
	<li>Użyj hydrofilowego filtra membranowego PVDF o wielkości porów 0,22 μM, aby sterylizować roztwory za pomocą sterylnej strzykawki. Poszczególne roztwory leków można przechowywać w temperaturze -20 °C przez 12 tygodni.</li>
	<li>Gotowy do użycia roztwór świeżo rozmrozić po jednej porcji każdego roztworu leku w temperaturze 37 °C, aż roztwór stanie się klarowny. Dobrze wymieszać za pomocą pipety.</li>
	<li>Połącz leki i dobrze wymieszaj, aby utworzyć mieszankę główną: 1 ml FTC w DMSO, 1,5 ml TDF w DMSO i 1 ml ELV lub RAL w DMSO. 
	UWAGA: Z tej ilości wyjdzie 10 kubków na żywność.</li>
	<li>Dodaj 350 μl roztworu cART master mix do jednej filiżanki, aby przygotować jedną filiżankę DietGel Boost cART.</li>
	<li>Dodać 0,75 ml trimetoprimu-sulfametoksazolu (0,48 mg/ml stężenia końcowego) do filiżanki.</li>
	<li>Dokładnie wymieszać za pomocą sterylnych końcówek do pipet o pojemności 1 ml.</li>
	<li>W razie potrzeby przechylić pojemnik na żywność zawierającą cART z oryginalnego kubka za pomocą mikroszpatułki na szalkę Petriego o średnicy 60 mm. Zważ karmę na wadze, aby obliczyć ilość kubka z jedzeniem zawierającego cART dla każdej klatki w zależności od liczby myszy.</li>
</ol>
3. Podawanie leków ART myszom zakażonym wirusem HIV-1
<ol>
	<li>Wyjmij zwykłą karmę z klatki i zastąp ją kubkiem na żywność zawierającym cART. 
	UWAGA: Średnio mysz zjada do 5 g jedzenia dziennie. Około jednego kubka z jedzeniem można podawać pięciu myszom przez 2 dni.</li>
	<li>Odświeżaj jedzenie cART trzy razy w tygodniu.</li>
	<li>Zważ zużyte kubki, aby monitorować spożycie. Waż myszy co tydzień, aby potwierdzić spożycie.</li>
</ol>
4. Monitorowanie wiremii za pomocą PCR w czasie rzeczywistym
<ol>
	<li>Oceń ludzkie komórki odpornościowe (poziomy limfocytów T CD4 i CD8) i replikację HIV-1 u myszy BLT co 2 tygodnie przez krwawienie zaoczodołowe. Zbierz osocze, postępując zgodnie z instrukcjami w krokach 1.5-1.8.</li>
	<li>Monitoruj miano wirusa w osoczu myszy zakażonych wirusem HIV-1 przed i podczas doustnego podawania cART przez 8 tygodni. Wyodrębnij wirusowe RNA osocza z osocza za pomocą zestawu do ekstrakcji wirusowego RNA i określ go ilościowo za pomocą PCR w czasie rzeczywistym przy użyciu starterów i sond (patrz Tabela materiałów), jak opisano wcześniej27,30,31. Stosuj następujący protokół cykliczny: 48 °C (15 min), 95 °C (10 min), a następnie cyklicznie 95 °C (15 s), 60 °C (1 min) przez 45 cykli.</li>
</ol>
5. Oceń proporcje CD4/CD8 za pomocą cytometrii przepływowej
<ol>
	<li>Przygotować zawiesiny jednokomórkowe z krwi obwodowej z krwawień dwutygodniowych, wykonując czynności 1.5-1.8.</li>
	<li>Wybarwić komórki markerami powierzchniowymi i przeanalizować za pomocą cytometrii przepływowej. Użyj następujących przeciwciał markera powierzchniowego27,30,43,49 w cytometrii przepływowej: CD45 (klon HI30), CD8 (klon SK1), CD3 (klon OKT3), CD4 (klon RPA-T4)27,30,42,49.</li>
</ol>

SK jest założycielem CDR3 Inc. Pozostali autorzy deklarują, że badanie zostało przeprowadzone przy braku jakichkolwiek powiązań handlowych lub finansowych, które mogłyby być interpretowane jako potencjalny konflikt interesów.

Opracowano tutaj doustną metodę podawania cART dla humanizowanych myszy zakażonych wirusem HIV-1 poprzez połączenie trzech leków antyretrowirusowych w pokarmie o wysokiej zawartości składników odżywczych. W porównaniu z podawaniem w codziennych zastrzykach, podawanie doustne jest łatwiejsze w użyciu, ogranicza częstotliwość podawania, ogranicza obchodzenie się ze zwierzętami, minimalizuje stres i poprawia bezpieczeństwo55. Do tej pory tylko kilka badań na humanizowanych myszach 24,37,41 wykorzysty...

Oczekiwana długość życia osób zakażonych wirusem HIV znacznie się poprawiła dzięki skojarzonemu leczeniu antyretrowirusowemu (cART)1,2. cART skutecznie zmniejsza replikację HIV-1 i zwiększa liczbę limfocytów T CD4+ do normalnego poziomu u większości uczestników przewlekle zakażonych wirusem HIV-13, co skutkuje poprawą ogólnego stanu zdrowia i radykalnym zmniejszeniem postępu choroby4. Jednak utajony rezerwuar HIV-1 powstaje nawet wtedy, gdy ART jest inicjowany podczas ostrej infekcji5,6,7. Rezerwuary utrzymują się przez lata podczas ART i szybkiego odbicia wirusa po przerwaniu ART jest dobrze udokumentowane8,9. Osoby żyjące z wirusem HIV na ART są również predysponowane do większego ryzyka chorób współistniejących, takich jak choroby układu krążenia, nowotwory i zaburzenia neurologiczne10,11,12. Dlatego potrzebne jest funkcjonalne lekarstwo na HIV. Modele zwierzęce do wykrywania zakażenia wirusem HIV-1 oferują oczywiste korzyści w opracowywaniu i walidacji nowych strategii leczenia HIV13,14,15. Humanizowane myszy, jako mały model zwierzęcy, mogą zapewnić wieloliniową rekonstytucję ludzkich komórek odpornościowych w różnych tkankach, co pozwala na dokładne badanie zakażenia wirusem HIV16,17,18,19. Wśród modeli humanizowanych, humanizowany model szpiku kostnego, wątroby i grasicy (BLT) z powodzeniem podsumowuje przewlekłe zakażenie HIV-1, a także funkcjonalne odpowiedzi immunologiczne człowieka na zakażenie HIV-120,21,22,23,24. Dlatego humanizowany model myszy BLT jest szeroko stosowany do badania różnych aspektów w dziedzinie badań nad HIV. Humanizowane myszy BLT są nie tylko dobrze ugruntowanymi modelami rekapitulacji uporczywego zakażenia HIV-1 i patogenezy, ale także narzędziami konsekwentnymi do oceny strategii interwencyjnych opartych na terapii komórkowej. Obecni autorzy i inni wykazali, że humanizowany model myszy BLT podsumowuje uporczywe zakażenie HIV-1 i patogenezę25,26,27 i dostarcza narzędzi do oceny strategii interwencji opartych na terapii komórkowej 28,29,30,31,32,33.
cART schematy składające się z kombinacji leków antyretrowirusowych, które są przyjmowane codziennie, hamują replikację HIV-1 do tego stopnia, że wiremia u osób skutecznie leczonych pozostaje niewykrywalna przez długi czas34. Wyniki leczenia humanizowanych myszy zakażonych wirusem HIV za pomocą klinicznie istotnych schematów cART przypominają te obserwowane u osób zakażonych wirusem HIV-1 leczonych ART22: Poziomy HIV-1 są tłumione poniżej granic wykrywalności, a przerwanie cART powoduje odbicie replikacji HIV z utajonego rezerwuaru35. Podskórne (SC)27,36,37 lub dootrzewnowe (IP)37,38,39 iniekcja jest powszechnie stosowaną drogą leczenia cART u humanizowanych myszy. Jednak intensywne codzienne wstrzykiwanie wywołuje stres u zwierząt poprzez fizyczne ograniczenie40. Jest to również pracochłonne i potencjalnie niebezpieczne dla badaczy ze względu na zwiększone narażenie na wirusa HIV podczas używania ostrych narzędzi. Podawanie doustne jest idealne do naśladowania wchłaniania, dystrybucji i wydalania leków cART, które są przyjmowane przez osoby zakażone wirusem HIV-1. Podawanie doustne zazwyczaj wiąże się z dostosowanymi i często pracochłonnymi procedurami umieszczania leków antyretrowirusowych w wysterylizowanym (koniecznym ze względu na niedobór odporności myszy) jedzeniu24,37,41 lub water42,43,44,45,46, które mogą, ale nie muszą, być chemicznie kompatybilne z wieloma lekami antyretrowirusowymi lub powodować coś, czego myszy nie byłyby skłonne do jedzenia lub picia (co wpłynęłoby na dawkę i poziom leku w organizmie). Zaproponowana tu nowatorska metoda doustnego podawania cART przewyższa wcześniejsze próby podania ze względu na kompatybilność z różnymi rodzajami leków antyretrowirusowych, bezpieczeństwo oraz łatwość przygotowania i podawania oraz zmniejszenie stresu i niepokoju zwierząt wynikających z codziennego wstrzykiwania.
Fumaran dizoproksylu tenofowiru (TDF), Elvitegravir (ELV) i Raltegravir (RAL) są lekami słabo rozpuszczalnymi w wodzie. Co ciekawe, zwiększoną biodostępność TDF obserwuje się w przypadku tłustych pokarmów, co sugeruje, że konkurencyjne hamowanie lipaz przez tłuste pokarmy może zapewnić pewną ochronę dla TDF47. Dlatego kubki DietGel Boost zostały wybrane tak, aby zastąpić zwykłą karmę dla gryzoni jako metodę dostarczania w oparciu o ich niewielką zawartość tłuszczu (20,3 g na 100 g) w porównaniu ze zwykłą karmą dla gryzoni (10 g na 100 g) i typową dietą wysokotłuszczową dla myszy (40-60 g na 100 g)48. Całkowita waga jednej filiżanki to 75 g; W ten sposób każda filiżanka będzie zawierała ilość pokarmu, a tym samym leku, wystarczającą dla pięciu myszy w ciągu 3 dni.

<table><tbody><tr><td>Szalka Petriego 60 mm</td><td>Thermo Scientific Nunc</td><td>150288</td><td>Do porcjowania ART food</td></tr><tr><td>APC anty-ludzkie przeciwciało CD8</td><td>Biolegend</td><td>344722</td><td>Do cytometrii przepływowej</td></tr><tr><td>BD LSRFortessa</td><td>BD biosciences</td><td></td><td>Do zbierania danych o przepływie</td></tr><tr><td>Mikrokulki CD34</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-046-702</td><td>Do generacji myszy NSG-BLT</td></tr><tr><td>Probówki wirówkowe</td><td>Falcon</td><td>14-432-22</td><td>Do rozpuszczania ART</td></tr><tr><td>DietGel Boost</td><td>ClearH2O</td><td>72-04-5022</td><td>Do wytwarzania żywności ART</td></tr><tr><td>Elvitegravir</td><td>Gilead</td><td></td><td>Podarowany przez Gilead</td></tr><tr><td>Emtrycytabina</td><td>Gilead</td><td></td><td>Podarowany przez Gilead</td></tr><tr><td>FITC anty-ludzkie przeciwciało CD3</td><td>Biolegend</td><td>317306</td><td>Do cytometrii przepływowej</td></tr><tr><td>Oprogramowanie</td><td>Flowjo FlowJo</td><td></td><td>Do analizy danych cytometrii przepływowej</td></tr><tr><td>starter do przodu HIV-1: 5&prime;-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>Dostosowane</td><td>do wiremii Sonda RT-PCR</td></tr><tr><td>HIV-1: 5&prime;-[6-FAM]CCCACCAACAGGCGGCCT TAACTG [Tamra-Q]-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>Dostosowany</td><td>do wiremii RT-PCR</td></tr><tr><td>HIV-1 odwrócony starter: 5&prime;-GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>Dostosowany</td><td>do wiremii RT-PCR</td></tr><tr><td>Ludzka tkanka płodowa</td><td>Advanced Bioscience Resources, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Myszy, szczep NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>5557</td><td>Do konstruowania humanizowanych myszy</td></tr><tr><td>Pacific Blue anty-human CD45</td><td>Biolegend</td><td>304022</td><td>Do cytometrii</td></tr><tr><td>przepływowej PerCP anty-ludzkie przeciwciało CD4</td><td>Biolegend</td><td>300528</td><td>Do cytometrii</td></tr><tr><td>przepływowej QIAamp Zestawy wirusowego RNA</td><td>Qiagen</td><td>&nbsp; 52904</td><td>Do pomiaru wiremii</td></tr><tr><td>Raltegravir</td><td>Merck</td><td></td><td>Gifted from Merck</td></tr><tr><td>Sterylne skrobaki</td><td>komórkowe Thermo Scientific</td><td>179693</td><td>Do porcjowania żywności ART</td></tr><tr><td>TaqMan RNA-To-Ct 1-Step Kit</td><td>Applied Biosystems</td><td>4392653</td><td>Do wykrywania wiremii w osoczu</td></tr><tr><td>Fumaran dizoproksylu Tenofowiru</td><td>Gilead</td><td></td><td>Podarowany przez Gilead</td></tr><tr><td>Trimethoprim-Sulfamethoxazole</td><td>Pharmaceutical Associates</td><td>NDC 0121-0854-16</td><td>Do utrzymywania sterylności żywności ART. Każda łyżeczka o pojemności 5 ml zawiera 200 mg sulfametoksazolu, USP 40 mg trimetoprimu, USP NMT 0,5% alkoholu</td></tr></tbody></table>

doustne skojarzone leczenie przeciwretrowirusowe u humanizowanych myszy zakażonych wirusem hiv-1

Oral Combinational Antiretroviral Treatment in HIV-1 Infected Humanized Mice

Pandemia ludzkiego wirusa niedoboru odporności (HIV-1) nadal rozprzestrzenia się na całym świecie, a obecnie nie ma dostępnej szczepionki przeciwko HIV. Chociaż skojarzona terapia przeciwretrowirusowa (cART) odniosła sukces w hamowaniu replikacji wirusa, nie jest w stanie całkowicie wyeliminować rezerwuaru u osób zakażonych wirusem HIV. Bezpieczna i skuteczna strategia leczenia zakażenia wirusem HIV będzie wymagała wielotorowych metod, dlatego postępy w modelach zwierzęcych do wykrywania zakażenia HIV-1 mają kluczowe znaczenie dla rozwoju badań nad leczeniem HIV. Humanizowane myszy podsumowują kluczowe cechy zakażenia HIV-1. Humanizowany model myszy może być zainfekowany wirusem HIV-1, a replikacja wirusa może być kontrolowana za pomocą schematów cART. Co więcej, przerwanie cART powoduje szybkie odbicie wirusa u humanizowanych myszy. Jednak podawanie cART zwierzęciu może być nieskuteczne, trudne lub toksyczne, a wiele klinicznie istotnych schematów cART nie jest w stanie być optymalnie wykorzystanych. Oprócz tego, że jest potencjalnie niebezpieczne dla badaczy, podawanie cART poprzez powszechnie stosowaną intensywną codzienną procedurę wstrzykiwania wywołuje stres poprzez fizyczne przymus zwierzęcia. Nowatorska doustna metoda cART w leczeniu humanizowanych myszy zakażonych wirusem HIV-1 opisana w tym artykule spowodowała supresję wiremii poniżej poziomu wykrywalności, zwiększenie szybkości przywracania CD4 + i poprawę ogólnego stanu zdrowia u humanizowanych myszy zakażonych wirusem HIV-1.

Zakładając, że przeciętna mysz o masie 25 g spożywa 4 g pokarmu dziennie, dzienna dawka leku podawana doustnie odpowiada 2,88 mg/kg TFV, 83 mg/kg FTC i 768 mg/kg RAL. Aby sprawdzić, czy zoptymalizowany schemat żywieniowy jest toksyczny i wpływa na ogólny stan zdrowia w porównaniu z codziennymi zastrzykami cART, monitorowano masę ciała myszy co tydzień przed i w trakcie podawania cART doustnie lub podskórnie. Przed podaniem cART nie stwierdzono istotnych różnic w masie ciała w poszczególnych grupach (...

Ten protokół opisuje nowatorską metodę dostarczania doustnych leków antyretrowirusowych, które skutecznie hamują replikację RNA HIV-1 u humanizowanych myszy.

Doustne skojarzone leczenie przeciwretrowirusowe u humanizowanych myszy zakażonych wirusem HIV-1

The human immunodeficiency virus (HIV-1) pandemic continues to spread unabated worldwide, and currently, there is no vaccine available against HIV. ...

Protokół ten opisuje nowatorską metodę dostarczania doustnych złożonych leków przeciwretrowirusowych (ART), która skutecznie hamuje replikację RNA HIV u humanizowanych myszy. Nowatorska metoda doustnego ART przewyższa wcześniejsze próby podania ze względu na bezpieczeństwo, łatwość przygotowania i podawania oraz zmniejszony stres zwierząt wynikający z codziennego wstrzykiwania. Proponowana metoda podawania doustnego w celu zahamowania replikacji RNA wirusa HIV u humanizowanych myszy będzie bardzo cenna dla przedklinicznych badań potwierdzających słuszność koncepcji w celu opracowania nowatorskich metod leczenia, które ściśle naśladują podawanie leku u osób przewlekle zakażonych wirusem HIV.Procedurę zademonstruje Valerie Rezak, kierownik laboratorium i technik z naszego laboratorium. Zacznij od zważenia poszczególnych leków. Przygotuj 10 kubków na żywność za pomocą cART za pomocą sterylnych skrobaków do komórek, aby odważyć 250 miligramów FTC, 375 miligramów TDF i 500 miligramów RAL lub ELV do indywidualnych, sterylnych 50-mililitrowych probówek wirówkowych w komorze bezpieczeństwa biologicznego.Dodaj DMSO do probówki FTC i TDF, aby uzyskać końcowe stężenie 250 miligramów na milili

oral-combinational-antiretroviral-treatment-hiv-1-infected-humanized

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

W niniejszym opracowaniu opisano generowanie i charakterystykę limfocytów T specyficznych dla nowotworu z wykorzystaniem myszy humanizowanych. Tkanka grasicy człowieka oraz genetycznie zmodyfikowane ludzkie komórki macierzyste krwi są przeszczepiane myszom z niedoborem odporności. Prowadzi to do rekonstrukcji zmodyfikowanego ludzkiego układu odpornościowego, co umożliwia badanie odpowiedzi immunologicznej przeciwnowotworowej in vivo.

Wykorzystanie humanizowanych myszy BLT jako modelu nowotworowego w genoterapii opartej na komórkach macierzystych

Ten film demonstruje test oceniający skuteczność doustnej terapii antyretrowirusowej (oral cART) w humanizowanym modelu myszy zakażonym ludzkim wirusem niedoboru odporności-1 (HIV-1). Kombinacja leków ukierunkowanych na HIV-1, w tym nukleozydowe inhibitory odwrotnej transkryptazy i inhibitory transferu nici integrazy, jest podawana wraz z suplementem diety i antybiotykami. Po spożyciu tej mieszaniny przez humanizowane myszy zakażone wirusem HIV-1, skuteczne tłumienie replikacji wirusa ocenia...

Doustna skojarzona terapia przeciwretrowirusowa w leczeniu zakażenia HIV-1 w humanizowanym modelu myszy

Wideo demonstruje technikę generowania humanizowanego modelu myszy z opartą na komórkach macierzystych odpornością przeciwko ludzkiemu wirusowi niedoboru odporności (HIV). Ludzka tkanka grasicy płodu i zmodyfikowane hematopoetyczne komórki macierzyste (HSC) są wszczepiane do torebki nerkowej myszy z poważnie obniżoną odpornością. HSC, które wyrażają chimeryczne receptory antygenowe (CAR) przeciwko wirusowi HIV, są mieszane w galaretowatej mieszaninie białek, która sprzyja ich kolokalizacji z...

Budowa humanizowanego modelu myszy z inżynieryjną odpornością na HIV

Ten protokół opisuje metody konstruowania humanizowanego modelu myszy szpiku kostnego/wątroby/grasicy z opartą na komórkach macierzystych odpornością na zakażenie wirusem HIV.

Zmodyfikowana odporność na zakażenie wirusem HIV oparta na komórkach macierzystych w humanizowanym modelu myszy

Ten protokół zapewnia metodę tworzenia humanizowanych myszy (hu-NSG) poprzez dowątrobowe wstrzykiwanie ludzkich hematopoetycznych komórek macierzystych do kondycjonowanych promieniowaniem noworodków NSG. Mysz hu-NSG jest podatna na zakażenie wirusem HIV i skojarzoną terapię antyretrowirusową (cART) i służy jako odpowiedni model patofizjologiczny do badań replikacji i latencji HIV.

Humanizowany mysi modelNOD/SCID/IL2rγ null (hu-NSG) do badań replikacji i latencji HIV

Ten protokół zapewnia niezawodną metodę tworzenia humanizowanych myszy z ludzkim układem odpornościowym i komórkami wątroby. Podwójnie odtworzone myszy z niedoborem odporności uzyskane przez wstrzyknięcie dośledzionowe ludzkich hepatocytów i hematopoetycznych komórek macierzystych CD34 + są podatne na zakażenie ludzkim wirusem niedoboru odporności-1 i rekapitulują uszkodzenie wątroby, jak obserwowano u pacjentów zakażonych wirusem HIV.

Opracowanie podwójnego humanizowanego modelu myszy TK-NOG dla patogenezy wątroby związanej z HIV

Opisane tutaj są trzy eksperymentalne podejścia do badania dynamiki infekcji HIV u humanizowanych myszy. Pierwsza z nich pozwala na badanie przewlekłych zdarzeń infekcyjnych, podczas gdy dwie ostatnie pozwalają na badanie ostrych zdarzeń po pierwotnym zakażeniu lub reaktywacji wirusa.

Przewlekłe, ostre i reaktywowane zakażenie wirusem HIV w humanizowanych modelach myszy z niedoborem odporności

Opracowaliśmy protokół do generowania i oceny humanizowanego i ludzkiego modelu myszy NOG zakażonego wirusem niedoboru odporności na podstawie przeszczepu komórek macierzystych, dopochwowej ekspozycji na ludzkiego wirusa niedoboru odporności i kropelkowej cyfrowej kwantyfikacji RNA PCR.

Humanizowane myszy NOG do dopochwowej ekspozycji na HIV i leczenia zakażenia HIV

Tropizm HIV można wywnioskować z regionu V3 otoczki wirusa. Region V3 jest amplifikowany w trzech powtórzeniach metodą zagnieżdżonej RT-PCR, sekwencjonowany, a następnie interpretowany przy użyciu oprogramowania bioinformatycznego. Próbki zawierające jedną lub więcej sekwencji z niskimi wartościami g2P są klasyfikowane jako wirusy non-R5.

Genotypowe wnioskowanie o tropizmie HIV-1 z wykorzystaniem sekwencjonowania populacyjnego pętli V3

Testy cytotoksyczności służące do pomiaru odpowiedzi litycznej komórek natural killer na komórki zakażone HIV są ograniczone przez czystość komórek docelowych. Prezentujemy tutaj izolację wysoce oczyszczonej populacji zakażonych HIV-1 pierwotnych blastów limfocytów T, wykorzystując zdolność HIV-1 do down-modulacji CD4.

Przygotowanie i zastosowanie pierwotnych limfocytów T CD4+ zainfekowanych HIV-1 jako komórek docelowych w testach cytotoksyczności komórek NK

Poznaj metodę doustnego podawania skojarzonej terapii antyretrowirusowej w humanizowanych myszach zakażonych HIV-1. Technika ta skutecznie hamuje replikację RNA wirusa, zmniejszając stres zwierząt w porównaniu do zastrzyków.

Doustne skojarzone leczenie przeciwretrowirusowe u humanizowanych myszy zakażonych wirusem HIV-1

Przeglądaj więcej filmów