Name: Indukcja stanu zapalnego powierzchni oka i gromadzenie zajętych tkanek (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-04T13:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Poznaj metodę indukcji stanu zapalnego powierzchni oka i zbierania zmienionych tkanek w mysim modelu dysfunkcji gruczołów Meiboma. Technika umożliwia badanie odpowiedzi immunologicznej i ocenę terapii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była częściowo wspierana przez Niemiecką Fundację Badawczą (DFG) 2886 PANDORA Project-No.B3; SCHA 2040/1-1; MU 4240/2-1; CRC1181(C03); TRR241(B04), H2020-FETOPEN-2018-2020 Project 861878, oraz przez Volkswagen-Stiftung (Grant 97744) na rzecz MH.

Wszystkie procedury z udziałem zwierząt zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi instytucjonalnymi dotyczącymi dobrostanu zwierząt i zatwierdzone przez komisję ds. dobrostanu zwierząt Uniwersytetu Friedrich-Alexander-Erlangen-Norymberga (FAU) (numer zezwolenia: 55.2.2-2532-2-1217). Do niniejszego badania wykorzystano samice myszy C57Bl/6 w wieku 7-9 tygodni. Myszy pozyskano ze źródeł komercyjnych (patrz tabela materiałów) i trzymano w określonych warunkach wolnych od patogenów z 12-godzinnymi cyklami dnia i nocy.
1. Indukcja mysiego zapalenia powierzchni oka
<ol>
	<li>Wykonaj przygotowanie immunogenowe do immunizacji.
	<ol>
		<li>Przygotować immunogen świeżo w dniu immunizacji, mieszając albuminę jaja kurzego (OVA, 50 mg/ml) i toksynę krztuścową (100 μg/ml) w soli fizjologicznej i adiuwantowym wodorotlenku glinu (40 mg/ml) (patrz tabela materiałów) w proporcji 1:1. 
		UWAGA: Otwórz, rozpuść i przygotuj immunogenowo toksynę krztuśca w laminarnej komorze bezpieczeństwa. Nosić odzież ochronną i unikać kontaktu ze skórą.</li>
		<li>Mieszaninę immunogenu i adiuwantu inkubować w temperaturze pokojowej przez 30 minut i załadować 100 μl do strzykawki o pojemności 1 ml.</li>
		<li>Wykonaj dootrzewnowe wstrzyknięcie roztworu immunogenu u myszy nieznieczulonej.
		<ol>
			<li>Chwyć miękko mysz za ogon, chwytając siatkę klatki. Przytrzymaj mocno skórę pleców i szyi między kciukiem a palcem wskazującym, a ogon i kończyny dolne między palcem serdecznym a małym przymocuj do dłoni.</li>
			<li>Trzymaj nieruchomą mysz głową w dół.</li>
			<li>Wstrzyknąć 100 μl przygotowanego roztworu immunogenowego w prawy lub lewy kwadrant dolnej części jamy brzusznej.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wykonać prowokację powierzchni oka 2 tygodnie po szczepieniu.
	<ol>
		<li>Znieczulić mysz izofluranem (2,5%).</li>
		<li>Nałóż 5 μl OVA (50 mg/ml) lub soli fizjologicznej (0,9% NaCl) na oko na oba oczy i poczekaj, aż kropla zostanie wchłonięta przez oko. Trwa to ~5 min.</li>
		<li>Powtarzaj procedurę 1x dziennie przez 7 dni. 
		UWAGA: W ten sam sposób można zastosować miejscowe podawanie leków.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Zbiór wysięków z oczu
<ol>
	<li>Odzyskaj wysięki z oczu powstałe podczas fazy prowokacji, nakładając 50 μl sterylnego soli fizjologicznej na oko natychmiast po prowokacji.</li>
	<li>Aby uzyskać zawiesinę jednokomórkową, pobraną wydzielinę z oka należy potraktować rekombinowaną MNazą (2 x 106 żel U/ml, patrz tabela materiałów) zawierającą kofaktor wapń (5 mM) w temperaturze 37 °C przez 20 minut.</li>
	<li>Wirować przy 400 x g przez 7 minut w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Wyizolować supernatant i zmierzyć cytokiny i chemokiny za pomocą multipleksowanego testu ELISA zgodnie z instrukcjami producenta (patrz tabela materiałów). 
	UWAGA: Otrzymany supernatant może być używany do analizy białek, a osad do testów funkcjonalnych, takich jak immunofenotypowanie, fagocytoza, degranulacja i ekspresja genów.</li>
</ol>
3. Wycięcie tkanek powierzchni oka
<ol>
	<li>Dokładnie rozetnij powieki i gałkę oczną, wykonując poniższe czynności.
	<ol>
		<li>Poddaj mysz eutanazji przez uduszenie CO2 i zwichnięcie szyjki macicy.</li>
		<li>Umieść mysz na równej powierzchni.</li>
		<li>Zdezynfekuj okolice oczodołu za pomocą wacika nasączonego 70% etanolem.</li>
		<li>Wykonaj nacięcie między uchem a zatoką zadoczodołową i wzdłuż powierzchni powyżej kości płaskonabłonkowej pionowo, przedłużając nacięcie poziomo poniżej dolnej powieki wzdłuż kości szczęki i powyżej górnej powieki wzdłuż kości czołowej. W ten sposób powstaje nacięcie wokół oka (<silna klasa="xfig">Rysunek 1).</li>
		<li>Ostrożnie przytrzymaj wypreparowaną tkankę wokół oka za pomocą zakrzywionych kleszczy i wyciągnij tkankę i gałkę oczną.</li>
		<li>Umieścić wycięte narządy w sterylnym PBS.</li>
		<li>Przyciąć nadmiar tkanki mięśniowej twarzy wokół wyciętych górnych powiek za pomocą skalpela i pod mikroskopem stereoskopowym.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zbierz spojówkę, wykonując poniższe czynności.
	<ol>
		<li>Umieść górną powiekę na suchej szalce Petriego pod mikroskopem stereoskopowym.</li>
		<li>Za pomocą cienkiej pęsety i skalpela bardzo delikatnie oderwij białawo-śluzową warstwę z wewnętrznej powierzchni powieki.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Następnie wypreparuj rogówkę, wykonując poniższe czynności.
	<ol>
		<li>Umieść gałkę oczną na nowej suchej szalce Petriego na wierzchu suchego lodu na 3 minuty.</li>
		<li>Umieść szalkę Petriego na powierzchni ławki w stabilnej pozycji.</li>
		<li>Wykonaj małe nacięcie na granicy rogówki obok rąbka za pomocą cienkich, ostrych nożyczek.</li>
		<li>Przedłuż nacięcie skalpelem wokół gałki ocznej, oddzielając twardówkę od rogówki.</li>
		<li>Usuń resztki tęczówki i soczewki z tylnej strony rogówki, obficie spłukując roztworem soli fizjologicznej.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Dokumentacja niedrożności gruczołu Meiboma (MG)
<ol>
	<li>Aby ocenić MG i jego otwory, umieść wycięte powieki w pozycji pionowej pod mikroskopem stereoskopowym (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 2).</li>
	<li>Rób zdjęcia z białym światłem epi-illumination zgodnie z czasem naświetlania aparatu i ustawieniami ISO. 
	UWAGA: Analiza morfometryczna tych obrazów zapewnia wiarygodną kwantyfikację rozmiaru czopu na wylocie gruczołów. Kwantyfikację można przeprowadzić, obrysowując za pomocą różdżki zatyczki do oczu i wykonując polecenie "Analizuj cząstki" w oprogramowaniu Image J (patrz Tabela materiałów).</li>
</ol>
5. Przezświetlenie powiek (morfologia gruczołów Meiboma)
<ol>
	<li>Aby ocenić obszar MG, umieść wycięte powieki w pozycji poziomej i włącz podświetlenie mikroskopu stereoskopowego wyposażonego w kamerę na podczerwień (<silna klasa="xfig">Rysunek 3).</li>
	<li>Rób zdjęcia, dostosowując czas ekspozycji zgodnie z ISO. aparatu (patrz tabela materiałów)
	UWAGA: Obrazowanie w podczerwieni tych prześwietlonych powiek pod mikroskopem stereoskopowym może pomóc w pomiarze kształtu i rozmiaru każdej acini. Analiza morfometryczna tych obrazów zapewnia wiarygodną kwantyfikację wielkości i liczby MG. Kwantyfikację można przeprowadzić, obrysowując MG za pomocą narzędzia różdżki i wykonując polecenie "Analizuj cząstki" w oprogramowaniu Image J.</li>
</ol>

<ol><li>Gilbard, J. P., Rossi, S. R., Heyda, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tear+film+and+ocular+surface+changes+after+closure+of+the+meibomian+gland+orifices+in+the+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Tear film and ocular surface changes after closure of the meibomian gland orifices in the rabbit.</a> Ophthalmology. 96 (8), 1180-1186 (1989).</li>
<li>Mishima, S., Maurice, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oily+layer+of+the+tear+film+and+evaporation+from+the+corneal+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The oily layer of the tear film and evaporation from the corneal surface.</a> Experimental Eye Research. 1, 39-45 (1961).</li>
<li>Gipson, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ocular+surface%3A+The+challenge+to+enable+and+protect+vision%3A+The+Friedenwald+lecture%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The ocular surface: The challenge to enable and protect vision: The Friedenwald lecture.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (10), 4391-4398 (2007).</li>
<li>Hahn, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggregated+neutrophil+extracellular+traps+resolve+inflammation+by+proteolysis+of+cytokines+and+chemokines+and+protection+from+antiproteases%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Aggregated neutrophil extracellular traps resolve inflammation by proteolysis of cytokines and chemokines and protection from antiproteases.</a> The FASEB Journal. 33 (1), 1401-1414 (2019).</li>
<li>Leppkes, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+occlusion+by+neutrophil+extracellular+traps+in+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Vascular occlusion by neutrophil extracellular traps in COVID-19.</a> EBioMedicine. 58, 102925(2020).</li>
<li>Munoz, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+initiate+gallstone+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps initiate gallstone formation.</a> Immunity. 51 (3), 443-450 (2019).</li>
<li>Schapher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+promote+the+development+and+growth+of+human+salivary+stones%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps promote the development and growth of human salivary stones.</a> Cells. 9 (9), 2139(2020).</li>
<li>Mahajan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frontline+science%3A+Aggregated+neutrophil+extracellular+traps+prevent+inflammation+on+the+neutrophil-rich+ocular+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Frontline science: Aggregated neutrophil extracellular traps prevent inflammation on the neutrophil-rich ocular surface.</a> Journal of Leukocyte Biology. 105 (6), 1087-1098 (2019).</li>
<li>DEWS Definition and Classification Subcommittee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+definition+and+classification+of+dry+eye+disease%3A+Report+of+the+Definition+and+Classification+Subcommittee+of+the+International+Dry+Eye+Workshop%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">The definition and classification of dry eye disease: Report of the Definition and Classification Subcommittee of the International Dry Eye Workshop.</a> The Ocular Surface. 5 (2), 75-92 (2007).</li>
<li>Nichols, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+workshop+on+meibomian+gland+dysfunction%3A+Executive+summary%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The international workshop on meibomian gland dysfunction: Executive summary.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1922-1929 (2011).</li>
<li>Mahajan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggregated+neutrophil+extracellular+traps+occlude+Meibomian+glands+during+ocular+surface+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">Aggregated neutrophil extracellular traps occlude Meibomian glands during ocular surface inflammation.</a> The Ocular Surface. 20, 1-12 (2021).</li>
<li>Jester, B. E., Nien, C. J., Winkler, M., Brown, D. J., Jester, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volumetric+reconstruction+of+the+mouse+meibomian+gland+using+high-resolution+nonlinear+optical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Volumetric reconstruction of the mouse meibomian gland using high-resolution nonlinear optical imaging.</a> The Anatomical Record. 294 (2), 185-192 (2011).</li>
<li>Nien, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+the+meibomian+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in the meibomian gland.</a> Experimental Eye Research. 89 (6), 1021-1027 (2009).</li>
<li>Parfitt, G. J., Xie, Y., Geyfman, M., Brown, D. J., Jester, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+ductal+hyper-keratinization+in+mouse+age-related+meibomian+gland+dysfunction+%28ARMGD%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aging%22%5BJournal%5D)">Absence of ductal hyper-keratinization in mouse age-related meibomian gland dysfunction (ARMGD).</a> Aging. 5 (11), 825-834 (2013).</li>
<li>Lambert, R. W., Smith, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+blepharoconjunctivitis+complicating+13-cis-retinoic+acid+%28isotretinoin%29+therapy+in+a+laboratory+model%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of blepharoconjunctivitis complicating 13-cis-retinoic acid (isotretinoin) therapy in a laboratory model.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 29 (10), 1559-1564 (1988).</li>
<li>Jester, J. V., Nicolaides, N., Kiss-Palvolgyi, I., Smith, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meibomian+gland+dysfunction.+II.+The+role+of+keratinization+in+a+rabbit+model+of+MGD%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Meibomian gland dysfunction. II. The role of keratinization in a rabbit model of MGD.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 30 (5), 936-945 (1989).</li>
<li>Jester, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+biomicroscopy+and+photography+of+meibomian+glands+in+a+rabbit+model+of+meibomian+gland+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">In vivo biomicroscopy and photography of meibomian glands in a rabbit model of meibomian gland dysfunction.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 22 (5), 660-667 (1982).</li>
<li>Lambert, R., Smith, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperkeratinization+in+a+rabbit+model+of+meibomian+gland+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Hyperkeratinization in a rabbit model of meibomian gland dysfunction.</a> American Journal of Ophthalmology. 105 (6), 703-705 (1988).</li>
<li>Knop, E., Knop, N., Millar, T., Obata, H., Sullivan, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+workshop+on+meibomian+gland+dysfunction%3A+Report+of+the+subcommittee+on+anatomy%2C+physiology%2C+and+pathophysiology+of+the+meibomian+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The international workshop on meibomian gland dysfunction: Report of the subcommittee on anatomy, physiology, and pathophysiology of the meibomian gland.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1938-1978 (2011).</li>
<li>Huang, W., Tourmouzis, K., Perry, H., Honkanen, R. A., Rigas, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+dry+eye+disease%3A+Useful%2C+varied+and+evolving+%28Review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic+Medicine%22%5BJournal%5D)">Animal models of dry eye disease: Useful, varied and evolving (Review).</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 22 (6), 1394(2021).</li>
<li>Reyes, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+cause+obstruction+of+eyelid+sebaceous+glands+in+inflammatory+eye+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Neutrophils cause obstruction of eyelid sebaceous glands in inflammatory eye disease in mice.</a> Science Translational Medicine. 10 (451), (2018).</li>
<li>Knop, E., Korb, D. R., Blackie, C. A., Knop, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lid+margin+is+an+underestimated+structure+for+preservation+of+ocular+surface+health+and+development+of+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Developments+in+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">The lid margin is an underestimated structure for preservation of ocular surface health and development of dry eye disease.</a> Developments in Ophthalmology. 45, 108-122 (2010).</li>
<li>Knop, N., Knop, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meibomian+glands.+Part+I%3A+anatomy%2C+embryology+and+histology+of+the+Meibomian+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologe%22%5BJournal%5D)">Meibomian glands. Part I: anatomy, embryology and histology of the Meibomian glands.</a> Ophthalmologe. 106 (10), 872-883 (2009).</li>
<li>Nien, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+age+and+dysfunction+on+human+meibomian+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Effects of age and dysfunction on human meibomian glands.</a> Archives of Ophthalmology. 129 (4), 462-469 (2011).</li>
<li>Lio, C. T., Dhanda, S. K., Bose, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cluster+analysis+of+dry+eye+disease+models+based+on+immune+cell+parameters+-+New+insight+into+therapeutic+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cluster analysis of dry eye disease models based on immune cell parameters - New insight into therapeutic perspective.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1930(2020).</li>
<li>Nguyen, D. D., Luo, L. J., Lai, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermogels+containing+sulfated+hyaluronan+as+novel+topical+therapeutics+for+treatment+of+ocular+surface+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Materials+Today+Bio%22%5BJournal%5D)">Thermogels containing sulfated hyaluronan as novel topical therapeutics for treatment of ocular surface inflammation.</a> Materials Today Bio. 13, 100183(2022).</li>
<li>Lin, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alleviation+of+dry+eye+syndrome+with+one+dose+of+antioxidant%2C+anti-inflammatory%2C+and+mucoadhesive+lysine-carbonized+nanogels%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Alleviation of dry eye syndrome with one dose of antioxidant, anti-inflammatory, and mucoadhesive lysine-carbonized nanogels.</a> Acta Biomaterialia. 141, 140-150 (2022).</li>
<li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+beta+epithelial+sodium+channel+function+in+meibomian+glands+produces+pseudohypoaldosteronism+1-like+ocular+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Loss of beta epithelial sodium channel function in meibomian glands produces pseudohypoaldosteronism 1-like ocular disease in mice.</a> American Journal of Pathology. 188 (1), 95-110 (2018).</li>
<li>Mauris, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+CD147+results+in+impaired+epithelial+cell+differentiation+and+malformation+of+the+meibomian+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">Loss of CD147 results in impaired epithelial cell differentiation and malformation of the meibomian gland.</a> Cell Death & Disease. 6 (4), 1726(2015).</li>
<li>Ibrahim, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+induced+age+dependent+meibomian+gland+dysfunction+in+Cu%2C+Zn-superoxide+dismutase-1+%28Sod1%29+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress induced age dependent meibomian gland dysfunction in Cu, Zn-superoxide dismutase-1 (Sod1) knockout mice.</a> PloS One. 9 (7), 99328(2014).</li>
<li>McMahon, A., Lu, H., Butovich, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+ELOVL4+in+the+mouse+meibomian+gland+and+sebocyte+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">A role for ELOVL4 in the mouse meibomian gland and sebocyte cell biology.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 55 (5), 2832-2840 (2014).</li>
<li>Miyake, H., Oda, T., Katsuta, O., Seno, M., Nakamura, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meibomian+gland+dysfunction+model+in+hairless+mice+fed+a+special+diet+with+limited+lipid+content%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Meibomian gland dysfunction model in hairless mice fed a special diet with limited lipid content.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 57 (7), 3268-3275 (2016).</li>
<li>Schaumberg, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+workshop+on+meibomian+gland+dysfunction%3A+Report+of+the+subcommittee+on+the+epidemiology+of%2C+and+associated+risk+factors+for%2C+MGD%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The international workshop on meibomian gland dysfunction: Report of the subcommittee on the epidemiology of, and associated risk factors for, MGD.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1994-2005 (2011).</li>
<li>Lee, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+tear+cytokines+and+clinical+correlations+in+Sjogren+syndrome+dry+eye+patients+and+non-Sjogren+syndrome+dry+eye+patients%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Analysis of tear cytokines and clinical correlations in Sjogren syndrome dry eye patients and non-Sjogren syndrome dry eye patients.</a> American Journal of Ophthalmology. 156 (2), 247-253 (2013).</li>
<li>Nakae, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-specific+T+cell+sensitization+is+impaired+in+IL-17-deficient+mice%2C+causing+suppression+of+allergic+cellular+and+humoral+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Antigen-specific T cell sensitization is impaired in IL-17-deficient mice, causing suppression of allergic cellular and humoral responses.</a> Immunity. 17 (3), 375-387 (2002).</li>
<li>von Vietinghoff, S., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-17A+controls+IL-17F+production+and+maintains+blood+neutrophil+counts+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">IL-17A controls IL-17F production and maintains blood neutrophil counts in mice.</a> Journal of Immunology. 183 (2), 865-873 (2009).</li>
<li>Langrish, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-23+drives+a+pathogenic+T+cell+population+that+induces+autoimmune+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">IL-23 drives a pathogenic T cell population that induces autoimmune inflammation.</a> Journal of Experimental Medicine. 201 (2), 233-240 (2005).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-IL-23+therapy+inhibits+multiple+inflammatory+pathways+and+ameliorates+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Anti-IL-23 therapy inhibits multiple inflammatory pathways and ameliorates autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Clinical Investigation. 116 (5), 1317-1326 (2006).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

Oleista wydzielina gruczołów Meiboma ma ogromne znaczenie dla zdrowego oka22. Jednak niedrożność tych gruczołów łojowych przez zagregowane zewnątrzkomórkowe pułapki neutrofili (aggNET), które ustawiają się jako równoległe pasma znajdujące się na płytkach stępu obu powiek, może zakłócić film łzowy23. Zakłócenie to powoduje dysfunkcję gruczołu Meiboma (MGD)1 i przyspieszone parowanie łez oraz warunkujeuszkodzenie powierzchni oka...

Każde mrugnięcie okiem uzupełnia gładki film łzowy rozrzucony po rogówce. Nabłonek powierzchni oka ułatwia rozprowadzenie i prawidłową orientację filmu łzowego na powierzchni oka. Mucyny są dostarczane przez komórki nabłonka rogówki i spojówki, aby pomóc w ustawieniu wodnej części filmu łzowego pochodzącej z gruczołów łzowych na powierzchni oczu. Na koniec MG wydziela lipidy, które tworzą warstwę pokrywającą, która zapobiega parowaniu wodnej części filmu łzowego1,2,3. W ten sposób skoordynowane funkcje wszystkich narządów oka chronią powierzchnię oka przed inwazją patogenów lub urazów oraz zapewniają krystalicznie czyste widzenie bez bólu i dyskomfortu.
Na zdrowej powierzchni oka, wydzielina z oka lub reum oka wymiata kurz, martwe komórki nabłonkowe, bakterie, śluz i komórki odpornościowe. Zagregowane pułapki zewnątrzkomórkowe neutrofili (aggNET) tworzą siatkową matrycę złożoną z chromatyny zewnątrzkomórkowej i włączają te składniki do reum oka. AggNET rozwiązują stan zapalny poprzez proteolityczną degradację prozapalnych cytokin i chemokin4. Jednak, gdy stają się dysfunkcyjne, te nieprawidłowe sieci aggNET napędzają patogenezę chorób, takich jak niedrożność naczyń krwionośnych w COVID-195, kamienie żółciowe6 i kamica sjalioza7. Podobnie, aggNET na powierzchni oka odgrywają rolę ochronną i przyczyniają się do rozwiązywania stanu zapalnego na wysoce odsłoniętej powierzchni8. Nadmierna formacja lub brak aggNET na powierzchni oka może pogorszyć stabilność filmu łzowego i/lub spowodować rany rogówki, bliznowacenie spojówek i zespół suchego oka. Na przykład, niedrożność MG jest główną przyczyną zespołu suchego oka9. Wiadomo również, że AggNET zatykają przepływ wydzielania lipidów z przewodów MG i powodują dysfunkcję gruczołów Meiboma (MGD). Przekrwienie otworów MG przez aggNET powoduje brak płynu tłuszczowego otaczającego powierzchnię oka i wstecznie zatłoczony płyn, co skutkuje dysfunkcją funkcji gruczołu i uszkodzeniem zraziny. Ta dysfunkcja może powodować parowanie filmu łzowego, zwłóknienie brzegów powiek, zapalenie oka i szkodliwe uszkodzenie MG10,11.
Na przestrzeni lat opracowano kilka modeli zwierzęcych, które imitują patologiczny proces MGD u ludzi. Na przykład myszy C57BL/6 w wieku 1 roku pomogły w badaniu związanego z wiekiem wpływu na zespół suchego oka (DED) i MGD, odzwierciedlając patologię choroby oczu u pacjentów w wieku 50 lat i starszych12,13,14. Co więcej, króliki są odpowiednimi modelami do badania skutków interwencji farmakologicznych. W związku z tym donoszono o indukowaniu MGD u królików poprzez miejscowe podawanie epinefryny lub ogólnoustrojowe wprowadzenie kwasu 13-cis-retinowego (izotretynoiny)15,16,17,18,19.
Chociaż te modele zwierzęce były odpowiednie do określenia różnych czynników przyczyniających się do patofizjologii MGD, ich wykorzystanie było ograniczone. Na przykład mysi model MGD związany z wiekiem był idealny do rozszyfrowywania elementów tylko u osób starszych, a zatem króliki wydawały się być najbardziej odpowiednim modelem zwierzęcym do badania chorób powierzchni oka, ponieważ umożliwiają badanie wielu mechanizmów patofizjologicznych. Jednak ze względu na brak kompleksowych narzędzi analitycznych do wykrywania białek na powierzchni oka oraz fakt, że wiele części genomu królika nie jest opatrzonych adnotacjami, są one ograniczone do badań20,21.
Ponadto, te modele zwierzęce używane do badania patogenezy zespołu suchego oka nie dostarczyły wystarczających szczegółów do analizy immunologicznego ramienia zaburzenia, które wywołuje stan zapalny powierzchni oka. W związku z tym mysi model MGD opracowany przez Reyesa i wsp. wykazał związek między alergiczną chorobą oczu u myszy a MGD u ludzi i podkreślił etiologię immunologiczną odpowiedzialną za obturacyjną MGD21. Model ten kojarzy alergiczną chorobę oczu z odpowiedzią TH17, która rekrutuje neutrofile do spojówki i powieki, powodując MGD i przewlekłe zapalenie oka21. Indukcja MGD i zapalenia oka w tym mysim modelu jest cennym narzędziem do badania zdarzeń poprzedzających rozwój miejscowego stanu zapalnego napędzanego przez trwającą odpowiedź immunologiczną21. Obecny protokół opisuje stan zapalny powierzchni oka, któremu towarzyszy obturacyjne MGD. W tej metodzie myszy są immunizowane, a po 2 tygodniach prowokowane na powierzchni oka immunogenem przez 7 dni. Ponadto opisano etapy izolacji wysięku z oka i związanych z nim narządów ocznych podczas ostrego zapalenia oraz rozwarstwienia rogówki, spojówki i powiek.

<table><tbody><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wodorotlenek glinu</td><td>Imject ałun Adiuwant</td><td>77161</td><td>40 mg / ml < silny> Stężenie końcowe< / mocny>: in vivo: 1 mg / 100 &mikro; Myszy L</td></tr><tr><td>C57Bl/6, w wieku 7&ndash; 9 tygodni</td><td>Charles River Laboratories&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wapń</td><td>Carl roth</td><td>CN93.1</td><td>1 M <mocny>Stężenie końcowe</mocny>: 5 mM</td></tr><tr><td>Kleszczyki zakrzywione</td><td>FST firmy Dumont SZWAJCARIA</td><td>5/45 11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Cienkie, ostre nożyczki</td><td>FST Stal nierdzewna, Niemcy</td><td>15001-08</td><td></td></tr><tr><td>Szafa bezpieczeństwa laminarnego</td><td>Herasafe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aparat makrofotograficzny</td>Aparat makrofotograficzny <td>Canon</td><td>EOS6D</td><td></td></tr><tr><td>(bez filtra podczerwieni)</td><td>Nikon</td><td>D5300</td><td></td></tr><tr><td>Mnase</td><td>New England biolabs</td><td>M0247S</td><td>2 x 106 żel U/mL Zestaw</td></tr><tr><td>do oznaczania przepływu wielu analitów (niestandardowy panel 13-plex)</td> <td>Biolegend</td><td>CLPX-200421AM-UERLAN</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0,9% (sól fizjologiczna)</td><td>B.Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Albumina jaja kurzego (OVA)</td><td>Endofit, Invivogen</td><td>9006-59-1</td><td>10 mg/200 &mikro; L w soli</td></tr><tr><td>fizjologicznej Toksyna krztuśca&nbsp;</td><td>ThermoFisher Naukowy&nbsp;</td><td>PHZ1174</td><td>50 & mikro; g/ 500 i mikro; L w roztworze soli fizjologicznej <silny>Stężenie końcowe</mocny>: in vivo: 100 &mikro; g/ 100 i mikro; L</td></tr><tr><td>Petridish</td><td>Greiner bio-one</td><td>628160</td><td></td></tr><tr><td>Skalpel</td><td>Feather jednorazowy skalpel</td><td>nr 21&nbsp;</td><td>Stężenie końcowe: in vivo:&nbsp; 300 ng/ 100 &mikro; L</td></tr><tr><td>Mikroskop stereoskopowy</td><td>Zeiss</td><td>Stemi508</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka (mycie rogówki/tęczówki)</td><td>BD Microlane</td><td>27 G x 3/4 - Nr.20 0,4 x 19 mm</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka (i.pimmunizacja)</td><td>BD Microlane</td><td>24 G1"-Nr 17, 055* 25 mm</td><td></td></tr></tbody></table>

indukcja stanu zapalnego powierzchni oka i gromadzenie zajętych tkanek

Induction of Ocular Surface Inflammation and Collection of Involved Tissues

Choroby powierzchni oka obejmują szereg zaburzeń, które zaburzają funkcje i struktury rogówki, spojówki i związanej z nią sieci gruczołów na powierzchni oka. Gruczoły Meiboma (MG) wydzielają lipidy, które tworzą warstwę pokrywającą, która zapobiega parowaniu wodnej części filmu łzowego. Neutrofile i zewnątrzkomórkowe pułapki DNA zasiedlają MG i powierzchnię oka w mysim modelu alergicznej choroby oczu. Zagregowane pułapki zewnątrzkomórkowe neutrofili (aggNET) tworzą siatkową matrycę złożoną z chromatyny zewnątrzkomórkowej, która zamyka ujścia MG i warunkuje dysfunkcję MG. W tym miejscu przedstawiono metodę wywoływania stanu zapalnego powierzchni oka i dysfunkcji MG. Szczegółowo opisano procedury pobierania narządów związanych z powierzchnią oka, takich jak rogówka, spojówka i powieki. Korzystając z ustalonych technik przetwarzania każdego narządu, przedstawiono również główne cechy morfologiczne i histopatologiczne dysfunkcji MG. Wysięki z gałki ocznej dają możliwość oceny stanu zapalnego powierzchni oka. Procedury te umożliwiają badanie miejscowych i ogólnoustrojowych interwencji przeciwzapalnych na poziomie przedklinicznym.

Niniejszy protokół opisuje kolejne kroki służące do stworzenia mysiego modelu zapalenia powierzchni oka. Celem protokołów jest pokazanie, jak miejscowo aplikować preparaty terapeutyczne, pobierać wysięki z oka oraz wycinać powiązane organy pomocnicze, takie jak zdrowe i zapalone powieki (Rysunek 2), rogówka oraz spojówki. Należy zachować szczególną ostrożność podczas preparowania górnych powiek w celu izolacji spojówki, która musi być przechowywana w 1x PBS podczas preparowania rogówki. Zapo...

Zapalenie powierzchni oka uszkadza tkanki powierzchni oka i zagraża funkcjom życiowym oka. Niniejszy protokół opisuje metodę wywoływania zapalenia oka i zbierania uszkodzonych tkanek w mysim modelu dysfunkcji gruczołów Meiboma (MGD).

Indukcja stanu zapalnego powierzchni oka i gromadzenie zajętych tkanek

Ocular surface diseases include a range of disorders that disturb the functions and structures of the cornea, conjunctiva, and the associated ocular ...

Protokół ten kolejno opisuje etapy związane z indukcją zapalenia powierzchni oka i pobraniem powiązanych dotkniętych chorobą narządów zaangażowanych w dysfunkcję gruczołów Meiboma. Ten nowy model MGD umożliwia badanie wrodzonego immunologicznego aspektu choroby, w szczególności tworzenia zewnątrzkomórkowych pułapek neutrofili zamykających gruczoł Meiboma. Technika przedstawiona w protokole może zostać rozszerzona o wprowadzenie miejscowych interwencji terapeutycznych w fazie przedklinicznej.Co więcej, zbiór wysięków i narządów ocznych odzwierciedla skuteczność leczenia. Aby wykonać dootrzewnowe wstrzyknięcie roztworu immunogenu, przytrzymaj delikatnie za ogon siedmio- do dziewięciotygodniową czarną sześcioletnią samicę myszy C57 bez znieczulenia, chwytając siatkę klatki. Następnie mocno przytrzymaj skórę pleców i szyi między kciukiem a palcem wskazującym i przymocuj ogon i kończyny dolne między palcem serdecznym a małym do dłoni.Trzymając mysz nieruchomo głową w dół, wstrzyknij 100 mikrolitrów przygotowanego roztworu immunogenowego w prawy lub lewy kwadrant dolnej jamy brzusznej. Aby wykonać prowokację powierzchni oka po szczepieniu, nałóż pięć mikrolitrów albuminy jaja kurzego lub komórek jajowych lub soli fizjologicznej na oko znieczulonej myszy i odczekaj pięć minut, aż kropla zostanie wchłonięta przez oko. Następnie zbierz wysięk z oka, nakładając 50 mikrolitrów sterylnej soli fizjologicznej na oko natychmiast po prowokacji.W celu wycięcia tkanek powierzchni oka umieść mysz na równej powierzchni i zdezynfekuj obszar oczodołu wokół oka wacikiem o stężeniu 70% etanolu. Aby utworzyć nacięcie wokół oka, wykonaj nacięcie między uchem a zatoką zadoczodołową oraz wzdłuż powierzchni nad kością płaskonabłonkową pionowo, przedłużając nacięcie poziomo poniżej dolnej powieki wzdłuż kości szczęki i powyżej górnej powieki wzdłuż kości czołowej. Ostrożnie przytrzymaj wypreparowaną tkankę wokół oka za pomocą zakrzywionych kleszczy i wyciągnij tkankę i gałkę oczną.Umieścić wycięte narządy w sterylnym PBS. Następnie za pomocą skalpela pod mikroskopem stereoskopowym przyciąć nadmiar tkanki mięśniowej twarzy wokół wyciętych górnych powiek. Aby zebrać spojówkę, umieść górną powiekę na suchej szalce Petriego.Następnie za pomocą cienkiej pęsety i skalpela delikatnie zetrzyj białawą warstwę śluzu z wewnętrznej powierzchni powieki. Następnie, aby wypreparować rogówkę, umieść gałkę oczną na nowej suchej szalce Petriego na suchym lodzie. Po trzech minutach połóż naczynie na powierzchni ławki w stabilnej pozycji.Użyj cienkich, ostrych nożyczek, aby wykonać małe nacięcie na granicy rogówki obok rąbka. Kontynuuj nacięcie skalpelem wokół gałki ocznej, oddzielając twardówkę od rogówki. Następnie usuń resztki tęczówki i soczewek z tyłu rogówki, obficie spłukując roztworem soli fizjologicznej.Aby ocenić gruczoł Meiboma i jego otwory, umieść wycięte powieki w pozycji pionowej pod mikroskopem stereoskopowym. Następnie, zgodnie z czasem naświetlania aparatu i ustawieniami ISO, rób zdjęcia w świetle białym. Aby ocenić obszar gruczołu Meiboma, umieść wycięte powieki w pozycji poziomej i włącz podświetlenie mikroskopu stereoskopowego wyposażonego w kamerę na podczerwień.Rób zdjęcia, dostosowując czas ekspozycji zgodnie z czułością ISO aparatu. Myszy, którym podawano sól fizjologiczną, wykazywały zdrowe powierzchnie oczu z szeroko otwartymi oczami. Dla porównania, podanie komórek jajowych wywołuje ciężkie zapalenie powierzchni oka, wąskie otwarcie oczu i objawy chemozy.Wycięte powieki wykazywały duże okluzje zatykające ujścia gruczołu Meiboma i obrzęk, w przeciwieństwie do zdrowych powiek pokazujących małe zatyczki gruczołu wyściełającego powiekę. Dalsze badania transiluminacji gruczołu w podczerwieni ujawniają racemiczny wygląd acini gruczołu Meiboma. Powieki myszy z solą fizjologiczną wykazywały okrągłe acini.Dla porównania, podanie komórek jajowych spowodowało zniszczenie i utratę niektórych gruczołów z alergiczną chorobą oczu lub AED. Analiza histologiczna powiek wykazała rozszerzone gruczoły Meiboma w porównaniu z myszami, którym podawano tylko sól fizjologiczną. Inkubacja gałki ocznej na suchym lodzie pozwoliła na nacięcie rogówki obok rąbka i oddzielenie rogówki od twardówki.Badanie to ułatwiło pobranie rogówki. Ponadto podanie komórek jajowych spowodowało ciężkie zapalenie spojówki z przekrwieniem. Podwyższone poziomy chemokiny CXCL-1 ułatwiają wynaczynienie neutrofili, fagocytozę i degranulację, a interleukinę-6 pośredniczącą w odpowiedzi ostrej fazy i infiltracji neutrofili zaobserwowano w supernatantach myszy AED.Z drugiej strony, stężenie interleukiny-10 nie wykazało znaczących zmian zarówno u myszy naiwnych, jak i myszy z AED. Ten nowy model umożliwia opracowanie i ocenę skuteczności leków, które są ukierunkowane na wrodzone szlaki odpornościowe i jest bardzo pomocny w eksploracji danych dotyczących sposobu podawania środków przeciwzapalnych. Po odpowiednim pobraniu narządów, metody o wysokim stopniu multipleksu, takie jak sekwencjonowanie pojedynczych komórek i obrazowa cytometria masowa, są zgodne z tym protokołem.

induction-ocular-surface-inflammation-collection-involved

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Ten film demonstruje technikę wywoływania przewlekłej eksperymentalnej autoimmunologicznej choroby suchego oka u szczurów. Po wstrzyknięciu szczurowi emulsji antygenowo-adiuwantowej zawierającej autoantygeny i obce antygeny w określonych odstępach czasu, u uodpornionego szczura indukuje się przewlekłe zapalenie oka poprzez wstrzyknięcie tych samych antygenów do tkanek powierzchni oka.

Technika wywoływania przewlekłego eksperymentalnego autoimmunologicznego zespołu suchego oka u szczurów

Ten film demonstruje metodę wywoływania zapalenia powierzchni oka i dysfunkcji gruczołów Meiboma w modelu mysim. Stymulacja układu odpornościowego myszy za pomocą immunogenu, a następnie ponowna stymulacja tym samym immunogenem sprzyja zapaleniu powierzchni oka, które powoduje zatkanie wydzielania gruczołów Meiboma przez aggNET wytwarzane przez neutrofile i prowadzi do zespołu suchego oka.

Metoda wywoływania stanu zapalnego powierzchni oka w modelu mysim

Źródło: Lani-Louzada, R.,  i wsp., Kauteryzacja pełnego koła rąbkowego splotu naczyniowego w przypadku chirurgicznie wywołanej jaskry u gryzoni. J. Vis. Exp. (2022)Ten film pokazuje indukcję i monitorowanie podwyższonego ciśnienia wewnątrzgałkowego (IOP) w modelu szczurzym. Proces ten polega na kauteryzacji rąbkowych naczyń krwionośnych, co skutkuje niedrożnością naczyń i podwyższonym ciśnieniem wewnątrzgałkowym. Szczur może następnie wyzdrowieć, a ciśnienie wewnątrzgałkowe jest regularnie...

 Indukcja podwyższonego ciśnienia wewnątrzgałkowego w modelu szczurzym

Zebraliśmy, wybarwiliśmy i zobrazowaliśmy komórki z spojówki wewnętrznej krawędzi powieki u ludzi. Charakteryzując morfologię komórek i aktywność metaboliczną, metoda ta może pogłębić naszą wiedzę na temat suchego oka i roli, jaką tarcie między powierzchniami oka może odgrywać w odczuwaniu dyskomfortu ocznego.

Cytologia wyciskowa obszaru wycieraczki pokrywy

Odsłonięta normalna powierzchnia oka składa się z rogówki i spojówki. Komórki nabłonkowe, komórki kubkowe i komórki odpornościowe są obecne w spojówce. W tym miejscu opisano nieinwazyjną technikę cytologii wyciskowej z wykorzystaniem urządzenia do cytologii wyciskowej i cytometrii przepływowej do analizy komórek odpornościowych w spojówce.

Nieinwazyjny sposób izolowania i fenotypowania komórek ze spojówki

Ten protokół opisuje metodę izolacji gałki ocznej myszy z powieką, powierzchnią oka, przednimi i tylnymi segmentami w względnie nienaruszonej pozycji.

Izolacja nienaruszonej gałki ocznej w celu uzyskania integralnej tkanki powierzchni oka do badania histologicznego i immunohistochemii

Urazy oczu na otwartej kuli mogą pozostać nieleczone przez wiele dni w scenariuszach związanych z obszarami wiejskimi lub wojskowymi, powodując ślepotę. Potrzebne są środki terapeutyczne, aby zminimalizować utratę wzroku. W tym miejscu szczegółowo opisujemy model uszkodzenia w kształcie otwartej kuli narządowej. Dzięki temu modelowi można właściwie ocenić potencjalne terapie stabilizujące te urazy.

Platforma hodowli narządów w przednim segmencie do śledzenia urazów na otwartej kuli i wyników terapeutycznych

Ten protokół opisuje kroki do wywołania Primed Mycobacterial Uveitis (PMU) u myszy. Ta metoda przedstawia kroki, które pomogą w wytworzeniu niezawodnego i solidnego zapalenia oka w systemie modelu mysiego. Korzystając z tego protokołu, wygenerowaliśmy oczy błony naczyniowej oka i nieobjęte stanem zapalnym inne oczy od pojedynczych zwierząt w celu dalszej oceny za pomocą testów immunologicznych, transkryptomicznych i proteomicznych.

Przygotowanie mykobakteryjnego zapalenia błony naczyniowej oka (PMU) jako model poinfekcyjnego zapalenia błony naczyniowej oka

OSTSS prowadzi do gromadzenia się mediatorów stanu zapalnego w filmie łzowym, powodując objawy takie jak epiforia i dyskomfort. W tym miejscu przedstawiamy przypadek, w którym terapeutyczne płukanie nosowo-łzowe co 2 miesiące rozwiązało epiforę i swędzenie, co sugeruje jego skuteczność jako interwencji terapeutycznej w przypadku OSTSS. Dodatkowo zgłaszamy subiektywną poprawę objawów u 3 dodatkowych pacjentów.

Płukanie nosowo-łzowe w leczeniu zespołu toksycznej zupy na powierzchni oka

W tym miejscu przedstawiamy protokół pobierania i przetwarzania biopsji spojówki w celu identyfikacji pemfigoidu błony śluzowej.

Technika biopsji spojówki i bezpośredniej immunofluorescencji w diagnostyce pemfigoidu błony śluzowej

Poznaj metodę indukcji stanu zapalnego powierzchni oka i zbierania zmienionych tkanek w mysim modelu dysfunkcji gruczołów Meiboma. Technika umożliwia badanie odpowiedzi immunologicznej i ocenę terapii.

Indukcja stanu zapalnego powierzchni oka i gromadzenie zajętych tkanek

Przeglądaj więcej filmów