Name: Mysi model uszkodzenia otrzewnej wywołanego glukonianem chlorheksydyny (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 25 s
Description: Poznaj prosty model dializy otrzewnowej u myszy wywołujący zwłóknienie za pomocą glukonianu chlorheksydyny. Ta metoda umożliwia badanie zmian fizjologicznych i patologicznych podczas terapii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Serdecznie dziękujemy Shin-Han Tsengowi za krytyczną dyskusję i częściowe przeprowadzenie badania. Badanie to było wspierane przez EDAHP110003 i NCKUEDA110002 z Fundacji Badawczej Szpitala E-DA oraz Narodowego Uniwersytetu Cheng Kung na Tajwanie.

Wszystkie eksperymenty z użyciem myszy zostały zatwierdzone przez Laboratory Animal Center of the E-DA Hospital/ I-Shou University i były prowadzone zgodnie z wytycznymi „Guide for the Care and Use of Laboratory Animals” (NRC, USA 2011). W niniejszym badaniu wykorzystano samce myszy C57BL/6 w wieku 7-8 tygodni.
1. Przygotowanie odczynników
<ol>
	<li>Przygotować drażniący środek chemiczny poprzez rozcieńczenie 0,1% glukonianu chlorheksydyny (CG, patrz Tabela materiałów) w 15% etanolu.</li>
</ol>
2. Postępowanie z zwierzętami
<ol>
	<li>Wyznaczyć trzy myszy do grupy kontrolnej. Wykonywać iniekcje dosytronikowe (i.p.) 1 mL/kg 0,9% soli fizjologicznej (NS) co drugi dzień przez 3 tygodnie, łącznie dziewięć razy.</li>
	<li>Wyznaczyć trzy myszy do grupy z włóknieniem otrzewnej. Wywołać włóknienie otrzewnej za pomocą glukonianu chlorheksydyny (CG), podając dożylnie (i.p.) 0,1% CG w 15% etanolu (krok 1.1) w dawce 12,5 µL/g masy ciała. Zabieg powtarzać co drugi dzień przez 3 tygodnie, łącznie dziewięć razy.</li>
</ol>
3. Testy funkcji otrzewnej (zmodyfikowany test równowagi otrzewnej)
<ol>
	<li>Przygotować roztwór do dializy zawierający 4,25% glukozy. Pobrać 0,5 mL próbki dializatu za pomocą strzykawki, a następnie sprawdzić stężenie glukozy w próbce dializatu. 
	UWAGA: Stężenie glukozy jest wyznaczane metodą heksokinazy/G6PD. Próbki dializatu poddano analizie L-type Glu 2 przy użyciu analizatora biochemicznego (patrz Tabela materiałów). Jest to początkowe stężenie glukozy w dializacie.</li>
	<li>Zznieczulić myszy poprzez domięśniowy zastrzyk z Zoletil i ksylazyną (przygotowanymi w stosunku objętościowym 1:2, patrz Tabela materiałów) w dawce 20 µL/20 g masy ciała. Dodatkowo zastosować maść weterynaryjną na oczy, aby zapobiec ich wysuszeniu podczas znieczulenia.</li>
	<li>Wykonać instylację dootrzewnową (i.p.) roztworu do dializy (2 mL/20 g masy ciała).</li>
	<li>Po 30 min ocenić i zweryfikować głębokość znieczulenia poprzez brak odruchu na uszczypnięcie palca. Następnie wykonać pionowe nacięcie w linii środkowej brzucha (poniżej wyrostka mieczowatego), otworzyć jamę brzuszną myszy i pobrać płyn z jamy otrzewnej za pomocą strzykawki (zdefiniowany jako „objętość 1”). Następnie zważyć czystą i suchą watę, włożyć ją do jamy brzusznej myszy w celu wchłonięcia pozostałego płynu otrzewnowego, a na koniec ponownie zważyć watę. 
	UWAGA: Przyrost masy waty odpowiada masie pozostałego płynu otrzewnowego. Następnie przeliczyć ją na uzyskaną objętość (gęstość: 1 g/cm3; zdefiniowana jako „objętość 2”). Końcowa objętość dializatu to objętość 1 plus objętość 2.</li>
	<li>Użyć 0,5 mL próbki dializatu (końcowy dializat) do pomiaru stężenia glukozy. Jest to końcowe stężenie glukozy w dializacie.</li>
	<li>Obliczyć netto ultrafiltrację, korzystając ze wzoru15: 
	<img alt="Schemat równania stosunku objętości dializy, pokazujący zmianę objętości w układzie dializy dla analizy stężeń." src="/files/ftp_upload/63903/63903eq01.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Równanie 1"></li>
	<li>Obliczyć przepuszczalność otrzewnej, korzystając z następującego wzoru15: 
	<img alt="Wzór na zmianę stężenia glukozy w dializie; równanie dla różnicy stężeń i objętości." src="/files/ftp_upload/63903/63903eq02.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Równanie 2"></li>
</ol>
4. Przygotowanie tkanek mięśni ściany brzusznej oraz wątroby i analiza histologiczna
<ol>
	<li>Uśmierć myszy poprzez punkcję serca (flebotomię)3,16.</li>
	<li>Wykonaj nacięcie ściany brzusznej (1 cm x 1 cm) oraz całkowitą hepatektomię. Utkanki ściany brzusznej i wątroby myszy utrwalaj przez noc w 10% neutralnej buforowanej formalinie.</li>
	<li>Przygotuj skrawki parafiny o grubości 3 µm z mięśni ściany brzusznej i wątroby, a następnie przeprowadź analizę histologiczną zgodnie z uprzednio opublikowanym raportem17.</li>
	<li>Oceń otrzewną ścienną ściany brzusznej oraz otrzewną trzewną powierzchni wątroby myszy, wykorzystując morfometrię18.</li>
	<li>Przeprowadź analizy statystyczne przy użyciu oprogramowania do statystyki i tworzenia wykresów (patrz Tabela materiałów). Wszystkie dane przedstaw jako średnią ± SD i przeanalizuj pod kątem istotności statystycznej za pomocą testu t19. Wartości z P &lt; 0,05 zdefiniuj jako wyniki istotne.</li>
</ol>

<ol><li>Han, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+outcome+of+CAPD%3A+twenty-five+years%27+experience+in+a+single+Korean+center%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Improving outcome of CAPD: twenty-five years' experience in a single Korean center.</a> Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).</li>
<li>Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Issues+affecting+the+longevity+of+the+continuous+peritoneal+dialysis+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International+Supplements%22%5BJournal%5D)">Issues affecting the longevity of the continuous peritoneal dialysis therapy.</a> Kidney International Supplements. 62, 105-107 (1997).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+D+can+ameliorate+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+and+functional+deterioration+through+the+inhibition+of+epithelial-to-mesenchymal+transition+of+mesothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Vitamin D can ameliorate chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis and functional deterioration through the inhibition of epithelial-to-mesenchymal transition of mesothelial cells.</a> BioMed Research International. 2015, 595030(2015).</li>
<li>Nakamoto, H., Kawaguchi, Y., Suzuki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+technique+survival+on+peritoneal+dialysis+better+in+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Is technique survival on peritoneal dialysis better in Japan.</a> Peritoneal Dialysis International. 26 (2), 136-143 (2006).</li>
<li>Schaefer, F., Klaus, G., Muller-Wiefel, D. E., Mehls, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+practice+of+peritoneal+dialysis+in+children%3A+results+of+a+longitudinal+survey.+Mid+European+Pediatric+Peritoneal+Dialysis+Study+Group+%28MEPPS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Current practice of peritoneal dialysis in children: results of a longitudinal survey. Mid European Pediatric Peritoneal Dialysis Study Group (MEPPS).</a> Peritoneal Dialysis International. 19, Suppl 2 445-449 (1999).</li>
<li>Woodrow, G., Turney, J. H., Brownjohn, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+failure+in+peritoneal+dialysis+and+its+impact+on+patient+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Technique failure in peritoneal dialysis and its impact on patient survival.</a> Peritoneal Dialysis International. 17 (4), 360-364 (1997).</li>
<li>Schmidt, D. W., Flessner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+encapsulating+peritoneal+sclerosis%3A+basic+and+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of encapsulating peritoneal sclerosis: basic and translational research.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, Suppl 5 10-15 (2008).</li>
<li>Augustine, T., Brown, P. W., Davies, S. D., Summers, A. M., Wilkie, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulating+peritoneal+sclerosis%3A+clinical+significance+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron+Clinical+Practice%22%5BJournal%5D)">Encapsulating peritoneal sclerosis: clinical significance and implications.</a> Nephron Clinical Practice. 111 (2), 149-154 (2009).</li>
<li>Di Paolo, N., Nicolai, G. A., Garosi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+peritoneum%3A+from+histological+studies+to+mesothelial+transplant+through+animal+experimentation%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">The peritoneum: from histological studies to mesothelial transplant through animal experimentation.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, Suppl 5 5-9 (2008).</li>
<li>Fusshoeller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histomorphological+and+functional+changes+of+the+peritoneal+membrane+during+long-term+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Histomorphological and functional changes of the peritoneal membrane during long-term peritoneal dialysis.</a> Pediatric Nephrology. 23 (1), 19-25 (2008).</li>
<li>Goffin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+membrane+structural+and+functional+changes+during+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Dialysis%22%5BJournal%5D)">Peritoneal membrane structural and functional changes during peritoneal dialysis.</a> Seminars in Dialysis. 21 (3), 258-265 (2008).</li>
<li>Ito, T., Yorioka, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+damage+by+peritoneal+dialysis+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Peritoneal damage by peritoneal dialysis solutions.</a> Clinical and Experimental Nephrology. 12 (4), 243-249 (2008).</li>
<li>Io, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SAHA+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">SAHA suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Peritoneal Dialysis International. 35 (3), 246-258 (2015).</li>
<li>Yoh, K., Ojima, M., Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th2-biased+GATA-3+transgenic+mice+developed+severe+experimental+peritoneal+fibrosis+compared+with+Th1-biased+T-bet+and+Th17-biased+RORgammat+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Animals%22%5BJournal%5D)">Th2-biased GATA-3 transgenic mice developed severe experimental peritoneal fibrosis compared with Th1-biased T-bet and Th17-biased RORgammat transgenic mice.</a> Experimental Animals. 64 (4), 353-362 (2015).</li>
<li>Karl, Z. J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+Equilibration+Test%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Peritoneal Equilibration Test.</a> Peritoneal Dialysis International. 7 (3), 138-148 (1987).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+implication+of+vitamin+D+nanomedicine+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">The clinical implication of vitamin D nanomedicine for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 14, 9665-9675 (2019).</li>
<li>Goldner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+the+masson+trichrome+technique+for+routine+laboratory+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Modification of the masson trichrome technique for routine laboratory purposes.</a> The American Journal of Pathology. 14 (2), 237-243 (1938).</li>
<li>Cheng, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+application+of+magnetite+nanoparticle-mediated+vitamin+D3+delivery+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Novel application of magnetite nanoparticle-mediated vitamin D3 delivery for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 16, 2137-2146 (2021).</li>
<li>Ross, A., Willson, V. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoss%2C+A+%22Basic+and+Advanced+Statistical+Tests%3A+Writing+Results+Sections+and+Creating+Tables+and+Figures%22">Basic and Advanced Statistical Tests: Writing Results Sections and Creating Tables and Figures</a>. , SensePublishers. 13-16 (2017).</li>
<li>Suga, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventive+effect+of+pirfenidone+against+experimental+sclerosing+peritonitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Preventive effect of pirfenidone against experimental sclerosing peritonitis in rats.</a> Experimental and Toxicologic Pathology. 47 (4), 287-291 (1995).</li>
<li>Ishii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+sclerosing+encapsulating+peritonitis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">An experimental sclerosing encapsulating peritonitis model in mice.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 16 (6), 1262-1266 (2001).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligonucleotides+against+collagen-binding+stress+protein+HSP47+suppress+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Antisense oligonucleotides against collagen-binding stress protein HSP47 suppress peritoneal fibrosis in rats.</a> Kidney International. 64 (3), 887-896 (2003).</li>
<li>Mishima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+expression+of+heat+shock+protein+47+in+rat+model+of+peritoneal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Enhanced expression of heat shock protein 47 in rat model of peritoneal fibrosis.</a> Peritoneal Dialysis International. 23 (1), 14-22 (2003).</li>
<li>Kushiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+liposome-encapsulated+clodronate+on+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Effects of liposome-encapsulated clodronate on chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis in rats.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 26 (10), 3143-3154 (2011).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+lymphocyte+infiltration+in+the+progression+of+mouse+peritoneal+fibrosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Renal+Failure%22%5BJournal%5D)">Involvement of lymphocyte infiltration in the progression of mouse peritoneal fibrosis model.</a> Renal Failure. 34 (6), 760-766 (2012).</li>
<li>Lua, I., Li, Y., Pappoe, L. S., Asahina, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofibroblastic+conversion+and+regeneration+of+mesothelial+cells+in+peritoneal+and+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Myofibroblastic conversion and regeneration of mesothelial cells in peritoneal and liver fibrosis.</a> The American Journal of Pathology. 185 (12), 3258-3273 (2015).</li>
<li>Kitamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigallocatechin+gallate+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Chemico-Biological+Interactions%22%5BJournal%5D)">Epigallocatechin gallate suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Chemico-Biological Interactions. 195 (1), 95-104 (2012).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

W tym badaniu mysi model PD jest prezentowany przez wstrzyknięcie i.p. CG, a wyniki wykazały zwłóknienie otrzewnej i pogorszenie funkcjonalne w tym modelu, który naśladował stan pacjenta z PD.
W protokole znajduje się kilka krytycznych kroków. Po pierwsze, w celu wykonania iniekcji dożylnej CG lub NS, skóra ściany brzucha myszy musi zostać podniesiona za pomocą kleszczy, aby zapobiec uszkodzeniu narządów wewnątrzotrzewnowych wywołanym nakłuciem. Po drugie, podczas pobierania otrzewnej ściany j...

Dializa otrzewnowa (PD) jest rodzajem terapii nerkozastępczej. Jednak PD ma problemy, których nie można rozwiązać. Na przykład, długotrwałe leczenie PD może spowodować uszkodzenie otrzewnej, ostatecznie prowadząc do niepowodzenia ultrafiltracji i wycofania leczenia1,2,3,4,5,6. Zwłóknienie otrzewnej jest jednym z najpoważniejszych powikłań7,8. Zwłóknienie otrzewnej charakteryzuje się odkładaniem się i gromadzeniem macierzy zewnątrzkomórkowej w śródmiąższu oraz neoangiogenezą i waskulopatią otrzewnej9,10.
Głównymi przyczynami tych zmian otrzewnowej są nawracające zapalenie otrzewnej i brak biokompatybilności dializatu, którymi są hiperosmotyczność, wysoki poziom glukozy, niskie pH i akumulacja produktów degradacji glukozy11,12. Dlatego odpowiednie modele eksperymentalne na zwierzętach mogą pomóc naukowcom lepiej badać fizjologiczne i patologiczne zmiany otrzewnej podczas terapii PD. W związku z tym opracowanie zwierzęcego modelu choroby Parkinsona jest ważne dla poprawy technologii choroby Parkinsona i skuteczności dializy oraz wydłużenia przeżycia pacjentów. Badanie to miało na celu wygenerowanie mysiego modelu PD poprzez dootrzewnowe (i.p.) wstrzyknięcie glukonianu chlorheksydyny (CG), jak opisano wcześniej13,14. Ten model myszy PD jest prosty, łatwy w użyciu i wykonalny w porównaniu z innymi modelami zwierzęcymi PD.

<table><tbody><tr><td>0,9% sól fizjologiczna</td><td>normalna Y F Chemical Corp., Nowe Tajpej,</td><td></td> Tajwan-10<td></td></tr><tr><td>% neutralna buforowana formalina</td><td>Taiwan Burnett International Co., Ltd., Tajpej, Tajwan</td><td>00002A</td><td></td></tr><tr><td>Automatyczny analizator biochemiczny</td><td>Hitachi Ltd., Tokio, Japonia</td><td>Labospect Series 008</td><td>do oznaczania stężenia glukozy</td></tr><tr><td>Roztwór diglukonianu chlorheksydyny, 20% w H2O</td><td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td><td>C9394</td><td>rozcieńczony do 0,1% z 15% etanolem do wstrzykiwań</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA</td><td>BAKR8006-05</td><td>rozcieńczony do 15% solą fizjologiczną dla stężenia roboczego</td></tr><tr><td>Glukoza (Dianeal)</td><td>Baxter International, Inc., IL, USA</td><td>FNB9896</td><td>Komercyjny roztwór do dializy (4,25%)</td></tr><tr><td>Oprogramowanie GraphPad Prism 8.0</td><td>, Inc., CA, amerykański</td><td></td><td></td></tr><tr><td>test Glu 2 typu L</td><td>FUJIFILM Wako, Japonia</td><td>461-32403</td><td></td></tr><tr><td>Ksylazyna 20</td><td>Juily Pharmaceutical Co., Ltd., Nowe Tajpej,</td> <td>Tajwan-Zoletil</td><td></td></tr> <tr><td>50</td><td>Virbac Laboratories, Carros, Francja</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

mysi model uszkodzenia otrzewnej wywołanego glukonianem chlorheksydyny

A Mice Model of Chlorhexidine Gluconate-Induced Peritoneal Damage

Zwłóknienie otrzewnej jest ważnym powikłaniem dializy otrzewnowej (PD). Aby zbadać i rozwiązać ten problem, wymagany jest odpowiedni zwierzęcy model PD. Niniejszy protokół ustanawia model zwłóknienia otrzewnej indukowany glukonianem chlorheksydyny (CG), który naśladuje stan pacjenta z chorobą Parkinsona. Zwłóknienie otrzewnej wywołano przez dootrzewnowe wstrzyknięcie 0,1% CG w 15% etanolu przez 3 tygodnie (podawane co drugi dzień), w sumie dziewięć razy u samców myszy C57BL / 6. Następnie w 22 dobie przeprowadzono testy czynnościowe otrzewnej. Po uśmierceniu myszy pobrano otrzewną ciemieniową ściany brzucha i otrzewną trzewną wątroby. Były grubsze i bardziej zwłókniałe, gdy analizowano je pod mikroskopem po barwieniu trichromem Massona. Szybkość ultrafiltracji zmniejszyła się, a transport masy glukozy wskazywał na wywołany przez CG wzrost przepuszczalności otrzewnej. Opracowany w ten sposób model choroby Parkinsona może znaleźć zastosowanie w ulepszaniu technologii choroby Parkinsona, skuteczności dializy i przedłużaniu przeżycia pacjentów.

W Rycina 1A,Bścienna otrzewna ścian brzusznej była wyraźnie grubsza i bardziej zwłókniała w barwieniu trichromem Massona17co wskazuje, że w grupie eksponowanej na CG włóknienie otrzewnej jest bardziej nasilone niż w kontrolnej grupie z solą fizjologiczną (NS). W Rycina 2A,Bbrzuszna okładzina treścienna powierzchni wątroby była również wyraźnie grubsza i bardziej zwłókniała, co dowodzi, że w grupie ekspono...

Obecny protokół ustanawia mysi model dializ otrzewnowych (PD) wywołanego glukonianem chlorheksydyny (CG) zwłóknienia otrzewnej. Obecny model jest prosty i łatwy w użyciu w porównaniu z innymi modelami zwierzęcymi PD.

Mysi model uszkodzenia otrzewnej wywołanego glukonianem chlorheksydyny

Peritoneal fibrosis is an important complication of peritoneal dialysis (PD). To investigate and address this problem, an appropriate animal model of PD ...

Ustalenie modelu zwierzęcego dializy otrzewnowej, PD, jest bardzo ważne. Mamy nadzieję, że może to ulepszyć technologię i skuteczność terapii PD i ostatecznie poprawić przeżywalność pacjenta. Ten mysi model dializy otrzewnowej jest prosty, łatwy w użyciu i widoczny w porównaniu z innymi modelami zwierzęcymi do dializy otrzewnowej.Odpowiedni model zwierzęcy do dializy otrzewnowej może pomóc naukowcom w badaniu zmian otrzewnowych, fizjologicznych i patologicznych podczas terapii PD. Procedurę zademonstruje Fang-Ling Liao, asystent naukowy z mojego laboratorium. Na początek przygotuj chemiczny środek drażniący, rozcieńczając 0,1% glukonianu chlorheksydyny w 15% etanolu.Następnie przydziel trzy myszy jako grupę kontrolną i wstrzykuj jeden mililitr na kilogram 0,9% normalnej soli fizjologicznej dootrzewnowo co drugi dzień przez trzy tygodnie, w sumie dziewięć razy. Następnie przypisz trzy myszy do grupy zwłóknienia otrzewnej i wywołaj zwłóknienie otrzewnej, podając dootrzewnowe wstrzyknięcie 0,1% roztworu glukonianu chlorheksydyny przygotowanego wcześniej w dawce 12,5 mikrolitra na kilogram masy ciała. Do badań czynnościowych otrzewnej należy przygotować roztwór do dializy zawierający 4,25% glukozy.Następnie za pomocą strzykawki pobierz 0,5 mililitra próbki dializatu. Przygotuj wstrzyknięcie zoletilu i ksylazyny i znieczul myszy, podając wstrzyknięcie domięśniowe. Wykonać dootrzewnową instalację roztworu do dializy w dawce dwóch mililitrów na 20 gramów masy ciała.Wykonaj małe nacięcie w linii środkowej brzucha i zbierz główny płyn dootrzewnowy za pomocą strzykawki. Po 30 minutach wykonaj pionowe nacięcie w linii środkowej brzucha poniżej wyrostka mieczykowatego i otwórz brzuch myszy, aby zebrać pozostały płyn dootrzewnowy za pomocą strzykawki. Następnie zmierz wagę czystego i suchego wacika.Włóż bawełnę do jamy brzusznej myszy, aby wchłonąć pozostały płyn dootrzewnowy, a następnie go usuń. Ponownie zmierz wagę bawełny. Barwienie trichromem Massona wykazało, że otrzewna ciemieniowa ściany brzucha w grupie narażonej na glukonian chlorheksydyny była znacznie grubsza i zwłóknieniowa niż w grupie kontrolnej.Otrzewna trzewna powierzchni wątroby była również znacznie grubsza i zwłóknieniowa w grupie narażonej na glukonian chlorheksydyny niż w grupie kontrolnej z solą fizjologiczną, co wskazuje, że zwłóknienie otrzewnej jest cięższe w grupie narażonej na glukonian chlorheksydyny. Grupa narażona na glukonian chlorheksydyny wykazała zmniejszoną szybkość ultrafiltracji i zwiększony transport masy glukozy, co wskazuje, że przepuszczalność otrzewnej wzrasta u myszy narażonych na glukonian chlorheksydyny Podczas wykonywania zabiegu wstrzyknięcia dootrzewnowego użyj kleszczy i wybierz skórę brzucha myszy, aby zapobiec uszkodzeniu narządów dootrzewnowych wywołanym nakłuciem.

a-mice-model-of-chlorhexidine-gluconate-induced-peritoneal-damage

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Źródło: de Vries, C. R., et.al. Model opóźnionej inokulacji przewlekłej infekcji rany Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Exp. (2020)Ten film pokazuje opóźnione szczepienie luminescencyjnego Pseudomonas aeruginosa u myszy noszącej dwie pełnogrube rany grzbietowe pokryte przezroczystym opatrunkiem foliowym. Ułatwia to powstawanie biofilmu i powstawanie przewlekłych infekcji. Regularne monitorowanie bioluminescencji umożliwia ilościowe określenie obciążenia bakteriami oraz śledzenie postępu infekcji...

Opracowywanie mysiego modelu przewlekłej infekcji skóry Pseudomonas aeruginosa 

Tutaj opisujemy nowy model myszy z cukrzycą, wykorzystujący bezwłose myszy do nieinwazyjnego monitorowania w czasie rzeczywistym infekcji ran biofilmu bioluminescencyjnych Pseudomonas aeruginosa. Metodę tę można zaadaptować do oceny infekcji innymi gatunkami bakterii i mikroorganizmami modyfikowanymi genetycznie, w tym biofilmami wielogatunkowymi, oraz do testowania skuteczności strategii zwalczania biofilmu.

Przejdźmy na jasną stronę mocy: monitorowanie in vivo zakażeń biofilmem Pseudomonas aeruginosa w ranach przewlekłych w modelu myszy bezwłosej z cukrzycą

Ten artykuł pokazuje metodę chirurgicznego umieszczania u myszy cewnika dootrzewnowego podłączonego do portu dostępowego, który znajduje się z tyłu zwierzęcia. Ponadto wyjaśnia procedurę nefrektomii 5/6, aby przypominała stan mocznicowy pacjentów z chorobą Parkinsona.

Techniki chirurgiczne zakładania cewnika i nefrektomii 5/6 w mysich modelach dializy otrzewnowej

Z tym artykułem związana jest aktualizacja. Kliknij tutaj, aby zobaczyć aktualizację. Przewlekłe rany powstają z ostrych ran na mysim modelu cukrzycowym poprzez wywołanie wysokiego poziomu stresu oksydacyjnego po pełnej grubości rany skórnej. Rana jest leczona inhibitorami katalazy i peroksydazy glutationowej, co powoduje upośledzenie gojenia i rozwoju biofilmu przez bakterie obecne w mikrobiomie skóry.

Protokół tworzenia przewlekłych ran u myszy z cukrzycą

Tutaj prezentujemy protokół miejscowego wywoływania wierzchołkowego zapalenia przyzębia u myszy. Pokazujemy, jak wywiercić otwór w zębie myszy i odsłonić jego miazgę, aby wywołać miejscowy stan zapalny. Przedstawiono również metody analityczne mające na celu zbadanie charakteru tego zapalenia, takie jak mikrotomografia komputerowa i histologia.

Wywoływanie wierzchołkowego zapalenia przyzębia u myszy

Obecny protokół opisuje ustandaryzowaną metodę chirurgiczną dla modelu AAA wywołanego elastazą poprzez bezpośrednie zastosowanie elastazy do przydanki podnerkowej aorty brzusznej u myszy.

Mysi model tętniaka aorty brzusznej indukowany przez okołonaczyniowe zastosowanie elastazy

Ten artykuł opisuje modyfikacje procedury wszczepienia cewnika do dializy otrzewnowej w modelu mysim, aby uniknąć poważnych problemów technicznych obserwowanych przy konwencjonalnych technikach.

Podejście do implantacji wstecznej w celu umieszczenia cewnika do dializy otrzewnowej u myszy

To badanie przedstawia dwie kluczowe techniki eksperymentalne: budowę mysiego modelu rany do oceny zamknięcia rany oraz przygotowanie zawiesin jednokomórkowych z mysiej skóry w celu zachowania żywotności komórek.

Modele ran u myszy i przygotowanie zawiesin pojedynczych komórek

Ten manuskrypt przedstawia protokół tworzenia mysiego modelu tętniaka aorty brzusznej myszy przy użyciu chlorku wapnia i elastazy, łącząc zalety poprzednich metod modelowania. Model ten można wykorzystać do badania mechanizmów patofizjologicznych leżących u podstaw tętniaków aorty brzusznej.

Mysi model tętniaka aorty brzusznej za pomocą okołoprzybytkowego nacieku chlorku wapnia i elastazy

Dootrzewnowe podawanie leków jest bezpiecznym i skutecznym nieinwazyjnym sposobem na wywołanie uszkodzenia trzustki. W badaniu tym porównano pięć różnych protokołów wstrzyknięć dootrzewnowych na myszach w celu wywołania różnego stopnia uszkodzenia trzustki i ustanowiono model ciężkiego uszkodzenia trzustki w celu zbadania zmian patologicznych i strategii leczenia ciężkiego ostrego zapalenia trzustki (SAP).

Przygotowanie mysiego modelu ciężkiego ostrego zapalenia trzustki za pomocą kombinacji ceruleiny i lipopolisacharydu we wstrzyknięciu dootrzewnowym

Poznaj prosty model dializy otrzewnowej u myszy wywołujący zwłóknienie za pomocą glukonianu chlorheksydyny. Ta metoda umożliwia badanie zmian fizjologicznych i patologicznych podczas terapii.

Mysi model uszkodzenia otrzewnej wywołanego glukonianem chlorheksydyny

Przeglądaj więcej filmów