Name: Pomiar zależnej od śródbłonka wazorelaksacji w aorcie piersiowej myszy za pomocą tensometrycznej miografii komory o małej objętości (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Poznaj technikę miografii tensometrycznej do oceny funkcji śródbłonka w aorcie myszy. Ta metoda umożliwia precyzyjne pomiary wazorelaksacji zależnej od śródbłonka i jest niezawodna w badaniach biologii naczyniowej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez fundusze z National Institutes of Health (R15HL145646) i Midwestern University College of Graduate Studies.

<ol><li>Wenceslau, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+measurement+of+vascular+function+and+structure+in+isolated+arteries+and+veins%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the measurement of vascular function and structure in isolated arteries and veins.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 321 (1), 77-111 (2021).</li>
<li>Deanfield, J. E., Halcox, J. P., Rabelink, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+function+and+dysfunction%3A+Testing+and+clinical+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial function and dysfunction: Testing and clinical relevance.</a> Circulation. 115 (10), 1285-1295 (2007).</li>
<li>Lerman, A., Zeiher, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+function%3A+Cardiac+events%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial function: Cardiac events.</a> Circulation. 111 (3), 363-368 (2005).</li>
<li>Rajendran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+endothelium+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">The vascular endothelium and human diseases.</a> International Journal of Biological Sciences. 9 (10), 1057-1069 (2013).</li>
<li>Galley, H. F., Webster, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Physiology of the endothelium.</a> British Journal of Anaesthesia. 93 (1), 105-113 (2004).</li>
<li>Orita, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+evaluation+of+phosphate%2C+bicarbonate%2C+and+Hepes+buffered+storage+solutions+on+hypothermic+injury+to+immature+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Drugs+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">In vitro evaluation of phosphate, bicarbonate, and Hepes buffered storage solutions on hypothermic injury to immature myocytes.</a> Cardiovascular Drugs and Therapy. 8 (6), 851-859 (1994).</li>
<li>Liu, Y. H., Bian, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bicarbonate-dependent+effect+of+hydrogen+sulfide+on+vascular+contractility+in+rat+aortic+rings%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Bicarbonate-dependent effect of hydrogen sulfide on vascular contractility in rat aortic rings.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 299 (4), 866-872 (2010).</li>
<li>Griffiths, K., Madhani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+wire+myography+to+investigate+vascular+tone+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%3A+Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">The use of wire myography to investigate vascular tone and function.</a> Methods in Molecular Biology: Atherosclerosis. 2419, 361-367 (2022).</li>
<li>Pfeiffer, S., Leopold, E., Schmidt, K., Brunner, F., Mayer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+nitric+oxide+synthesis+by+NG-nitro-L-arginine+methyl+ester+%28L-NAME%29%3A+Requirement+for+bioactivation+to+the+free+acid%2C+NG-nitro-L-arginine%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of nitric oxide synthesis by NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME): Requirement for bioactivation to the free acid, NG-nitro-L-arginine.</a> British Journal of Pharmacology. 118 (6), 1433-1440 (1996).</li>
<li>Bacon, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+dysfunction+in+systemic+vasculitis%3A+New+developments+and+therapeutic+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell dysfunction in systemic vasculitis: New developments and therapeutic prospects.</a> Current Opinion in Rheumatology. 17 (1), 49-55 (2005).</li>
<li>Gallo, G., Volpe, M., Savoia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+dysfunction+in+hypertension%3A+Current+concepts+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Endothelial dysfunction in hypertension: Current concepts and clinical implications.</a> Frontiers in Medicine. 8, 798958(2021).</li>
<li>Mikolajczyk, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+important+role+of+endothelium+and+extracellular+vesicles+in+the+cellular+mechanism+of+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">The important role of endothelium and extracellular vesicles in the cellular mechanism of aortic aneurysm formation.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (23), 13157(2021).</li>
<li>Vallance, P., Hingorani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+nitric+oxide+in+humans+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Endothelial nitric oxide in humans in health and disease.</a> International Journal of Experimental Pathology. 80 (6), 291-303 (1999).</li>
<li>Tousoulis, D., Kampoli, A. M., Tentolouris, C., Papageorgiou, N., Stefanadis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+nitric+oxide+on+endothelial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Vascular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The role of nitric oxide on endothelial function.</a> Current Vascular Pharmacology. 10 (1), 4-18 (2012).</li>
<li>Gibson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+aerobic+exercise+blocks+elastin+fiber+fragmentation+and+aortic+dilatation+in+a+mouse+model+of+Marfan+syndrome+associated+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mild aerobic exercise blocks elastin fiber fragmentation and aortic dilatation in a mouse model of Marfan syndrome associated aortic aneurysm.</a> Journal of Applied Physiology. 123 (1), 147-160 (2017).</li>
<li>Xiao, X., Ping, N. N., Li, S., Cao, L., Cao, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimal+initial+tension+for+rat+basilar+artery+in+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">An optimal initial tension for rat basilar artery in wire myography.</a> Microvascular Research. 97, 156-158 (2015).</li>
<li>Chung, A. W., Yang, H. H., Yeung, K. A., van Breemen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+and+pharmacological+approaches+to+investigate+the+pathogenesis+of+Marfan+syndrome+in+the+abdominal+aorta%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Mechanical and pharmacological approaches to investigate the pathogenesis of Marfan syndrome in the abdominal aorta.</a> Journal of Vascular Research. 45 (4), 314-322 (2008).</li>
<li>Zhong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+impairs+soluble+guanylyl+cyclase+function+in+mouse+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Age impairs soluble guanylyl cyclase function in mouse mesenteric arteries.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (21), 11412(2021).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Dziedzina biologii naczyniowej w dużym stopniu opiera się na narzędziach, które pomagają naukowcom ocenić funkcjonalną i strukturalną integralność ściany naczynia krwionośnego. Wymaga również zwrócenia szczególnej uwagi na bezpośrednie i pośrednie interakcje między trzema warstwami naczyń krwionośnych: błoną wewnętrzną, środkową i przydanką. Spośród tych trzech warstw błona wewnętrzna jest utworzona przez monowarstwę komórek śródbłonka i pełni bardzo ważną funkcję w regulacji zdrowia naczyń krwionośnych i hemostazy.
...

Przez ostatnie kilka dekad, system miografii w małej komorze był używany do pomiaru reaktywności różnych warstw ścian naczyń krwionośnych w odpowiedzi na różne czynniki farmakologiczne i neuroprzekaźniki w warunkach ex vivo, w czasie rzeczywistym. Reaktywność naczyniowa jest głównym składnikiem zdrowego, funkcjonalnego naczynia krwionośnego i ma kluczowe znaczenie dla regulacji przepływu krwi i perfuzji w naczyniach obwodowych i mózgowych1. W obrębie ściany naczynia krwionośnego interakcja między warstwami śródbłonka i mięśni gładkich jest głównym wyznacznikiem napięcia naczyniowego, na które stale wpływają również zmiany strukturalne w warstwie tkanki łącznej otaczającej ścianę naczynia krwionośnego (przydanka).
Warstwa śródbłonka kontroluje ruch naczyń krwionośnych poprzez uwalnianie kilku czynników rozszerzających naczynia krwionośne, w tym tlenku azotu (NO), prostacykliny (PGI2) i czynnika hiperpolaryzacyjnego pochodzącego ze śródbłonka (EDHF), lub poprzez wytwarzanie środków zwężających naczynia krwionośne, takich jak endotelina-1 (ET-1) i tromboksan (TXA2)2,3,4. Wśród tych czynników, NO został szeroko przebadany, a jego ważne role regulacyjne w innych krytycznych funkcjach komórkowych, takich jak zapalenie, migracja, przeżycie i proliferacja, były często cytowane w literaturze naukowej2,5.
W dziedzinie biologii naczyniowej, miografia komorowa dostarczyła fizjologom naczyniowym i farmakologom cennego i niezawodnego narzędzia do pomiaru funkcji śródbłonka w ściśle kontrolowanym systemie półfizjologicznym1. Obecnie naukowcy mają do dyspozycji dwa różne systemy miograficzne: miografia tensometryczna (izometryczna) drutowa (lub szpilkowa) i miografia ciśnieniowa. W systemie miografii drucianej naczynie krwionośne jest rozciągnięte między dwoma drutami lub szpilkami, co pozwala na izometryczny pomiar rozwoju siły lub napięcia w ścianie naczynia krwionośnego, podczas gdy miografia ciśnieniowa jest preferowaną platformą do pomiarów reaktywności naczyniowej w małych tętnicach oporowych, gdzie zmiany ciśnienia krwi są uważane za główny bodziec do zmian napięcia naczyniowego i wazomotorii. Istnieje ogólna zgoda co do tego, że w przypadku małych tętnic oporowych, takich jak tętnice krezkowe i mózgowe, miografia ciśnieniowa tworzy stan bliższy stanom fizjologicznym w ludzkim ciele. Miograf małokomorowy może być stosowany do naczyń o bardzo małych średnicach (200-500 μm) do znacznie większych naczyń, takich jak aorta.
Podczas gdy miograf przewodowy jest potężnym systemem do rejestrowania napięcia naczyń krwionośnych w warunkach izometrycznych, miograf ciśnieniowy jest bardziej odpowiednim systemem do pomiaru zmian średnicy naczynia w odpowiedzi na zmiany warunków izobarycznych. Zmiany średnicy naczynia w odpowiedzi na zmiany ciśnienia lub przepływu są znacznie większe w małej tętnicy mięśniowej (tętniczce) w porównaniu z dużymi tętnicami elastycznymi, takimi jak aorta. Z tych powodów miograf ciśnieniowy jest uważany za lepsze narzędzie dla małych naczyń krwionośnych o znacznej aktywności naczyniowej1. Jedną z innych praktycznych zalet wielokomorowej miografii tensometrycznej w małej objętości jest to, że można dostrzec udział różnych mechanizmów w reaktywności naczyniowej, badając wiele (do czterech) segmentów tej samej tętnicy i od tego samego zwierzęcia w celu zmniejszenia zmienności i uzyskania solidnych i rozstrzygających danych. Jest również stosunkowo łatwy w konfiguracji i konserwacji technicznej. Naczynia o prawie każdej wielkości można badać za pomocą miografu drucianego. Jest to bardziej opłacalne rozwiązanie do oceny funkcji naczyń krwionośnych i stanowi dobrą alternatywę dla miografii ciśnieniowej w eksperymentach, w których długość wypreparowanego naczynia jest zbyt krótka dla protokołu miografu ciśnieniowego.
Ten raport zawiera szczegółowy protokół oceny funkcji śródbłonka w izolowanym pierścieniu aorty piersiowej myszy za pomocą kołków montażowych w technice miografii tensometrycznej w komorze o małej objętości przy użyciu wielokomorowego systemu miograficznego DMT-620 (DMT-USA). Protokół ten wykorzystuje 6-miesięcznego samca myszy C57BL6 o średniej wadze od 25 do 35 g. Na szczęście protokół ten może być stosowany do różnych rodzajów zwierząt i wagi, biorąc pod uwagę szeroki zakres typów i średnic naczyń, do których można go stosować.

<table><tbody><tr><td>Acetylocholina</td><td>SigmaAldrich</td><td>A6625-100G</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SigmaAldrich</td><td>C4901-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Gaz karbonowy</td><td></td><td></td> Nożyczki preparacyjne Matheson H103847 <td></td></tr><tr><td></td><td>FST</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>DMT 620 Wielokomorowy system</td><td></td><td></td><td></td> miograficzny DMT DMT 620</tr><tr><td>Kleszcze Dumont</td><td>FST</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>SigmaAldrich</td><td>E5134-10G</td><td></td></tr><tr><td>Glukoza</td><td>SigmaAldrich</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>SigmaAldrich</td><td>H7006-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>P9541-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5655-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Instrumenty</td><td></td><td>LabChart ADI</td><td>Oprogramowanie do akwizycji danych</td></tr><tr><td>Źródło światła</td><td>Volpi</td><td>14363</td><td></td></tr><tr><td>L-Name</td><td>Fischer Scientific</td><td>50-200-7725</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>SigmaAldrich</td><td>M2643-500G</td><td></td></tr> Mikroskop <tr><td></td><td>stereoskopowy</td><td>Leica</td><td>S6D</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5886-5KG</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>System kąpieli organowej</td><td>DMT</td><td>720MO</td><td></td></tr><tr><td>Fenylefryna</td><td>SigmaAldrich</td><td>P6126-10G</td><td></td></tr><tr><td>Pompa</td><td>Welch</td><td>2546B-01</td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie</td><td>ADI Instrumenty</td><td>LabChart 8.1.20</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki sprężynowe</td><td>FST</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Zestaw</td><td>Usługi mikroskopii elektronowej</td><td>24236-10</td> zestaw <td>elastomerów silikonowych</td></tr><tr><td>Regulator zbiornika</td><td>Fischer Scientific</td><td>10575147</td><td></td></tr><tr><td>System kąpieli wodnej</td><td>Fischer Scientific</td><td>15-462-10</td><td></td></tr></tbody></table>

pomiar zależnej od śródbłonka wazorelaksacji w aorcie piersiowej myszy za pomocą tensometrycznej miografii komory o małej objętości

Measurement of Endothelium-Dependent Vasorelaxation in the Mouse Thoracic Aorta Using Tensometric Small Volume Chamber Myography

Miografia tensometryczna w małej komorze objętościowej jest powszechnie stosowaną techniką do oceny kurczliwości naczyń krwionośnych małych i dużych naczyń krwionośnych u zwierząt laboratoryjnych i małych tętnic wyizolowanych z tkanek ludzkich. Technika ta pozwala naukowcom utrzymywać izolowane naczynia krwionośne w ściśle kontrolowanym i znormalizowanym (prawie fizjologicznym) otoczeniu, z możliwością dostosowania się do różnych czynników środowiskowych, jednocześnie rzucając wyzwanie izolowanym naczyniom za pomocą różnych środków farmakologicznych, które mogą indukować zwężenie lub rozszerzenie naczyń krwionośnych. Komora miografu stanowi również platformę do pomiaru reaktywności naczyń krwionośnych w odpowiedzi na różne hormony, inhibitory i agonistów, które mogą wpływać na funkcję mięśni gładkich i warstw śródbłonka oddzielnie lub jednocześnie. Ściana naczynia krwionośnego jest złożoną strukturą składającą się z trzech różnych warstw: błony wewnętrznej (warstwy śródbłonka), mediów (mięśni gładkich i włókien elastyny) oraz przydanki (kolagen i inna tkanka łączna). Aby uzyskać jasne zrozumienie właściwości funkcjonalnych każdej warstwy, kluczowe znaczenie ma dostęp do eksperymentalnej platformy i systemu, które pozwoliłyby na podejście kombinowane do badania wszystkich trzech warstw jednocześnie. Takie podejście wymaga dostępu do stanu półfizjologicznego, który naśladowałby środowisko in vivo w warunkach ex vivo. Miografia tensometryczna w komorze o małej objętości zapewniła idealne środowisko do oceny wpływu sygnałów środowiskowych, zmiennych eksperymentalnych lub farmakologicznych agonistów i antagonistów na właściwości naczyniowe. Przez wiele lat naukowcy wykorzystywali technikę miografu tensometrycznego do pomiaru funkcji śródbłonka i kurczliwości mięśni gładkich w odpowiedzi na różne czynniki. W tym raporcie do pomiaru funkcji śródbłonka w izolowanej aorcie myszy zastosowano tensometryczny system miograficzny o małej objętości komory. Niniejszy raport koncentruje się na tym, w jaki sposób miografia tensometryczna w komorze o małej objętości może być wykorzystana do oceny integralności funkcjonalnej śródbłonka w małych odcinkach dużej tętnicy, takiej jak aorta piersiowa.

Opisany tutaj protokół tensometrycznej miografii w małej komorze jest standardową metodą pomiaru reaktywności naczyniowej w tętnicach małych i dużych i pozwala na jednoczesne pomiary reaktywności naczyniowej w maksymalnie czterech segmentach naczyń krwionośnych pochodzących od tego samego małego laboratoryjnego zwierzęcia doświadczalnego. W niniejszym raporcie wykorzystujemy ten system konkretnie do pomiaru funkcji śródbłonka w izolowanej aorcie myszy (Rysunek 1). W tym protokole izolowane s...

Niniejszy protokół opisuje koncepcje i techniczne zastosowanie techniki miografu tensometrycznego z wykorzystaniem wielokomorowego systemu miograficznego w eksperymentalnej ocenie ex vivo funkcji śródbłonka aorty myszy.

Pomiar zależnej od śródbłonka wazorelaksacji w aorcie piersiowej myszy za pomocą tensometrycznej miografii komory o małej objętości

Small volume chamber tensometric myography is a commonly used technique to evaluate the vascular contractility of small and large blood vessels in ...

Demonstrujemy miografię izometryczną lub tensometryczną jako złoty standard protokołu pomiaru reaktywności małych naczyń krwionośnych lub dużych przewodów krwionośnych w dobrze kontrolowanych warunkach fizjologicznych. Pomiary są wysoce powtarzalne i wiarygodne. Technika ta jest bardzo cenna, ponieważ umożliwia naukowcom badanie różnych warstw naczyń krwionośnych oddzielnie lub jednoczesne badanie interakcji między różnymi warstwami ściany naczynia krwionośnego.Procedurę zademonstruje Robert Folk, specjalista z laboratorium badawczego z mojego laboratorium. Zacznij od włączenia łaźni wodnej i ustawienia jej na 37 stopni Celsjusza. Umieścić dwie odpowiednio oznaczone zlewki w łaźni wodnej, jedną z 600 mililitrami roztworu HEPES-PSS i drugą ze 150 mililitrami roztworu o wysokiej zawartości potasu.Napowietrzać zlewkę zawierającą 300 mililitrów roztworu HEPES-PSS gazem karbogenicznym przez co najmniej 10 minut. Dodaj 30 mililitrów napowietrzonego roztworu HEPES-PSS do 50-mililitrowej probówki wirówkowej, odpowiednio oznacz i umieść na lodzie. Pozostały napowietrzony roztwór HEPES-PSS należy przechowywać na lodzie do użycia podczas procesu rozwarstwiania aorty.Włącz czterokomorowy miograf na 5 mililitrów roztworu HEPES-PSS do każdej komory miografu i ustaw temperaturę na 37 stopni Celsjusza. Pozostaw roztwór w każdej komorze do napowietrzenia przez 30 minut i sprawdź, czy komory osiągnęły pożądane 37 stopni Celsjusza. Włącz sprzęt do zbierania danych z myografu i komputer.Przenieś klatkę piersiową wyciętą od myszy poddanych eutanazji na przezroczystą szalkę Petriego pokrytą elastomerem silikonowym, wypełnioną lodowatym napowietrzonym buforem HEPES-PSS i przypnij ją po obu stronach. Pod mikroskopem delikatnie odetnij i usuń serce i przyczepioną aortę z klatki piersiowej i przenieś do czystego naczynia pokrytego elastomerem silikonowym, a następnie delikatnie usuń tłuszczową tkankę łączną i zakrzepłą krew z aorty. Za pomocą ostrych małych nożyczek wypreparuj i odizoluj całą aortę, zaczynając od obszaru łuku do dołu aorty zstępującej.Przetnij wyciętą aortę na cztery segmenty po 2 milimetry każdy. Użyj mini-linijki w naczyniu jako odniesienia. W komorach zawierających już 5 mililitrów podgrzanego i napowietrzonego buforu HEPES-PSS ostrożnie wsuń każdy z 2-milimetrowych segmentów aorty na dwa kołki montażowe za pomocą kleszczy.Umieszczając komorę z powrotem w jednostce miografu, powoli rozsuń szpilki, obracając mikrometr w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara, aby segment aorty nie zsunął się z kołków. Zwróć każdą komorę miografu do urządzenia i rozpocznij napowietrzanie komór w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 20 minut. Opróżnij komory i dodaj 5 mililitrów świeżego, ciepłego, napowietrzonego roztworu HEPES-PSS do każdej komory.W razie potrzeby ponownie dostosuj pomiary siły, aby odczytać optymalne napięcie 6 miliniutonów. Odpocznij tkankę przez kolejne 15 do 20 minut. Otwórz oprogramowanie do akwizycji danych.Zmień numery śledzenia z 50 na 1 i 500 na 1 i naciśnij Start. Przed rozpoczęciem nowego eksperymentu należy dodać odpowiednią etykietę na oprogramowaniu do pozyskiwania danych. Opróżnij komory jeszcze raz przed dodaniem 5 mililitrów roztworu o wysokiej zawartości potasu do każdej komory.Ponownie opróżnij komory, gdy tylko reakcja skurczowa na roztwór o wysokiej zawartości potasu osiągnie plateau w celu wytworzenia siły. Trzykrotnie umyć chusteczkę roztworem HEPES-PSS. Dodaj 5 mililitrów roztworu o wysokiej zawartości potasu do każdej komory.Opróżnij komory, gdy tylko reakcja skurczowa na roztwór o wysokiej zawartości potasu osiągnie plateau w celu wytworzenia siły i przemyj tkankę trzykrotnie HEPES-PSS, a następnie odpocznij tkankę przez 15 do 20 minut. Wstępnie naskurczyć segmenty aorty środkiem zwężającym naczynia krwionośne PE w dawce poniżej maksymalnej. Pozwól, aby krzywa skurczu wywołana przez PE osiągnęła plateau dla rozwoju napięcia.Dodać plateau rozwoju napięcia do PE przy 5 mikrolitrach rosnących dawek roboczych roztworów podstawowych acetylocholiny w odstępach 3-minutowych, aby ustalić końcowe stężenia acetylocholiny od 50 pikomolarnych do 10 mikromolowych w komorze miografu, jak opisano w manuskrypcie tekstowym. Po zakończeniu eksperymentu z odpowiedzią na dawkę opróżnić komory, trzykrotnie przemyć odcinki aorty ciepłym i napowietrzonym roztworem HEPES-PSS i odpocząć tkankom przez 30 minut. Po odpoczynku segmentów aorty przez 30 minut, opróżnij komory i dodaj świeży, ciepły roztwór o wysokiej zawartości potasu do każdej komory, a następnie opróżnij komory i umyj tkankę roztworem HEPES-PSS, gdy reakcja skurczowa na roztwór o wysokiej zawartości potasu osiągnie plateau F, jak pokazano wcześniej.Wstępnie inkubować segmenty aorty za pomocą L-NAME, dodając 10 mikrolitrów przygotowanego 100-milimolowego roztworu roboczego w celu oceny udziału produkcji tlenku azotu w obserwowanej wazorelaksacji wywołanej acetylocholiną. Nie usuwając nazwy L, dodaj submaksymalną dawkę PE do komory, aby wywołać skurcz aorty. Poczekaj, aż krzywa skurczu wywołana przez PE osiągnie plateau w celu rozwoju napięcia, a następnie dodaj acetylocholinę do komory miografu, aby osiągnąć końcowe stężenie 500 nanomolowych.Poczekaj kilka minut, aby zarejestrować wszelkie możliwe zmiany w rozwoju siły, aż utworzony plateau się ustabilizuje. Opróżnij komory i trzykrotnie umyj chusteczkę ciepłym, napowietrzonym roztworem HEPES-PSS. Umieść komorę miografu pod mikroskopem i delikatnie przełóż mały drut przez światło aorty.Delikatnie przesuwaj drut przez prześwit przez krótki czas. Przetnij aortę na 2-milimetrowe pierścienie aortalne i zamontuj te pierścienie na komorze miografu. Ustaw optymalne napięcie na 6 miliniutonów i pozwól tkance odpocząć przez 30 minut w napowietrzonym ciepłym buforze HEPES-PSS, a następnie opróżnij komory i dodaj 5 mililitrów świeżego, ciepłego, napowietrzonego roztworu HEPES-PSS do każdej komory.Wyzeruj siłę dla wszystkich komór miografu i powoli obracaj mikrometr w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara, aby zwiększyć odległość między szpilkami, aż zarejestrowana siła osiągnie pożądane optymalne napięcie dla aorty myszy. Uciskaj tkankę przez kolejne 15 do 20 minut przy optymalnym naprężeniu, a następnie ponownie opróżnij komory przed dodaniem 5 mililitrów roztworu o wysokiej zawartości potasu do każdej komory. Ponownie opróżnij komory i przemyj tkankę roztworem HEPES-PSS trzykrotnie, gdy reakcja skurczowa na roztwór jonów o wysokiej zawartości potasu osiągnie plateau.Odpocznij tkankę przez 15 do 20 minut, a następnie wstępnie skurcz segmenty aorty za pomocą PE, środka zwężającego naczynia krwionośne. Gdy siła wywołana przez PE osiągnie plateau, dodaj submaksymalne stężenie acetylocholiny do komory miografu, aby osiągnąć końcowe stężenie 500 nanomolowców. Odczekaj 3 minuty, aby upewnić się, że zarejestrowany plateau dla rozwoju siły wywołanej przez PE nie zmienia się przed zakończeniem eksperymentu.Integralność i żywotność każdego odizolowanego naczynia oceniano poprzez rejestrowanie generowania siły skurczowej. Szczyt zarejestrowanej siły został później wykorzystany do normalizacji generowania siły dla tego samego segmentu w odpowiedzi na agonistów. Pomiary wazorelaksacji za pośrednictwem śródbłonka przedstawiały skurcz za pośrednictwem mięśni gładkich i wytwarzanie siły.Gdy skurcz wywołany przez PE osiągnął plateau, zwiększanie dawek acetylocholiny osiągało maksymalne wazorelaksację w izolowanym segmencie. Inhibitor tlenku azotu L-NAME całkowicie zablokował wywołane acetylocholiną wazorelaksację w wcześniej skurczonej aorcie, co wskazuje, że acetylocholina indukuje wazorelaksację aorty poprzez zwiększenie produkcji tlenku azotu. Co więcej, usunięcie warstwy śródbłonka z segmentów aorty również zablokowało wazorelaksację wywołaną acetylocholiną, podkreślając rolę śródbłonka w relaksacji naczyń krwionośnych.Upewnij się, że jesteś delikatny podczas przenoszenia, czyszczenia i preparowania naczynia krwionośnego. Bardzo ważne jest, aby dodawać farmakologiczne agonistów i inhibitory ostrożnie, aby nie naruszyć pierścieni naczyń krwionośnych zamontowanych w komorach miografu. Informacje te mogą pomóc w projektowaniu eksperymentów w celu zbadania potencjalnych podejść terapeutycznych w celu rozwiązania problemu dysfunkcji określonych warstw naczyń krwionośnych.

measurement-endothelium-dependent-vasorelaxation-mouse-thoracic-aorta

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Opisano zautomatyzowaną metodę miografii do pomiarów siły w izolowanych tętnicach krezkowych. Wykorzystuje ona urządzenie Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A do określania reakcji na fenylefrynę oraz wapń zewnątrzkomórkowy. Metoda ta pozwala na spójne określanie odpowiedzi izometrycznych na agonistów w małych naczyniach o średnicach od 60 do 300 μm, niezależnie od siebie.

Badania skurczu i rozkurczu tętnicy krezkowej z wykorzystaniem zautomatyzowanej miografii drucianej

W miografii ciśnieniowej, nienaruszony mały fragment naczynia jest montowany na dwóch małych kaniulach i podbudowywany do odpowiedniego ciśnienia świetlnego. Tutaj opisujemy metodę pomiaru odpowiedzi wazorelaksacyjnej myszy tętnic krezkowych 3. rzędu u myszy c57 i sGCα1-/- myszy za pomocą miografii ciśnieniowej.

Ocena funkcji tętnicy oporowej myszy za pomocą miografii ciśnieniowej

Miografia ciśnieniowa służy do oceny wazoaktywności małych tętnic, które rozwijają trwałe zwężenie pod wpływem ciśnienia. Manuskrypt ten zawiera szczegółowy protokół oceny w izolowanych odcinkach małych tętnic krezkowych u szczurów, wazoaktywności i wpływu ciśnienia śródświetlnego na średnicę naczyń krwionośnych.

Ocena odpowiedzi miogennej i wazoaktywności w opornych tętnicach krezkowych za pomocą miografii ciśnieniowej

Dysfunkcja śródbłonka jest związana z licznymi stanami chorobowymi i jest predyktorem niekorzystnych zdarzeń sercowo-naczyniowych u ludzi. Rozszerzenie naczyń krwionośnych za pośrednictwem przepływu (FMD) jest nieinwazyjną metodą ultrasonograficzną służącą do oceny funkcji śródbłonka. Wybory metodologiczne i doświadczenie operatora mogą mieć wpływ na wyniki. Omówiono tu systematyczne podejście do pryszczycy w badaniach na ludziach.

Ocena ultrasonograficzna zależnego od śródbłonka rozszerzenia naczyń krwionośnych tętnicy ramiennej za pośrednictwem przepływu w badaniach klinicznych

Opisujemy technikę pomiaru sztywności aorty na podstawie jej relacji ciśnienie-średnica in vivo u myszy. Średnica aorty jest rejestrowana za pomocą ultradźwięków, a ciśnienie w aortze jest mierzone inwazyjnie za pomocą półprzewodnikowego cewnika ciśnieniowego. Ciśnienie krwi zmienia się stopniowo i mierzy się uzyskaną średnicę.

Pomiar sztywności aorty wstępującej in vivo u myszy za pomocą ultradźwięków

Systemy videomikroskopii służą do badania funkcjonalnych właściwości izolowanych tętniczek tkanki tłuszczowej w odpowiedzi na bodźce fizjologiczne i farmakologiczne. Technika ta może być stosowana do badania fenotypów mikronaczyniowych w różnych domenach tkanki tłuszczowej u otyłych ludzi.

Ocena funkcji mikrokrążenia tkanki tłuszczowej człowieka za pomocą wideomikroskopii

Ten manuskrypt opisuje protokoły mikroskopii wideo in vitro do oceny funkcji naczyniowej w tętnicach oporowych mózgu szczurów. W manuskrypcie opisano również techniki oceny gęstości mikronaczyń za pomocą znakowanej fluorescencyjnie lektyny i perfuzji tkanek za pomocą laserowej przepływometrii dopplerowskiej.

Ocena mechanizmów kontroli naczyniowej z wykorzystaniem wideomikroskopii izolowanych tętnic opornych szczurów

Technika wirekowego miografu jest używana do badania funkcji mięśni gładkich naczyń krwionośnych i badania przesiewowego nowych leków. Przedstawiamy szczegółowy protokół pomiaru izometrycznej kurczliwości tętnicy krezkowej myszy oraz badań przesiewowych nowych środków zwiotczających mięśnie gładkie naczyń krwionośnych.

Izometryczny pomiar kurczliwości tętnicy krezkowej myszy za pomocą miografii drutowej

Trening o wysokiej intensywności w niedotlenieniu to protokół, który, jak udowodniono, wywołuje adaptacje naczyniowe, potencjalnie korzystne u niektórych pacjentów i poprawia zdolność sportowców do powtarzalnego sprintu. Tutaj testujemy wykonalność szkolenia myszy przy użyciu tego protokołu i identyfikujemy te adaptacje naczyniowe za pomocą oceny funkcji naczyń krwionośnych ex vivo.

Supramaksymalna intensywność ćwiczeń hipoksyjnych i ocena funkcji naczyń krwionośnych u myszy

Protokół opisuje użycie miografii drucianej do oceny przezściennego napięcia izometrycznego tętnic krezkowych wyizolowanych od myszy, ze szczególnym uwzględnieniem modulacji przez czynniki uwalniane z komórek śródbłonka i okołonaczyniowej tkanki tłuszczowej.

Ocena reakcji na napięcie naczyniowe przy użyciu izolowanych tętnic krezkowych z naciskiem na modulację przez okołonaczyniowe tkanki tłuszczowe

Poznaj technikę miografii tensometrycznej do oceny funkcji śródbłonka w aorcie myszy. Ta metoda umożliwia precyzyjne pomiary wazorelaksacji zależnej od śródbłonka i jest niezawodna w badaniach biologii naczyniowej.

Pomiar zależnej od śródbłonka wazorelaksacji w aorcie piersiowej myszy za pomocą tensometrycznej miografii komory o małej objętości (Wideo) | JoVE Journal

Pomiar zależnej od śródbłonka wazorelaksacji w aorcie piersiowej myszy za pomocą tensometrycznej miografii komory o małej objętości

Przeglądaj więcej filmów