Separation of Immune Cell Subpopulations in Peripheral Blood Samples from Children with Infectious Mononucleosis

Linlin Zhang; Mengjia Liu; Meng Zhang; Junhong Ai; Jiao Tian; Ran Wang; Zhengde Xie

doi:10.3791/64212

Oddzielenie subpopulacji komórek odpornościowych w próbkach krwi obwodowej od dzieci z mononukleo...

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Separation of Immune Cell Subpopulations in Peripheral Blood Samples from Children with Infectious Mononucleosis

Oddzielenie subpopulacji komórek odpornościowych w próbkach krwi obwodowej od dzieci z mononukleozą zakaźną

Full Text

2,932 Views

08:44 min

September 7, 2022

DOI: 10.3791/64212-v

Linlin Zhang^1,2, Mengjia Liu^1,2, Meng Zhang^1,2, Junhong Ai^1,2, Jiao Tian^1,2, Ran Wang^1,2, Zhengde Xie^1,2

¹Beijing Key Laboratory of Pediatric Respiratory Infectious Diseases, Key Laboratory of Major Diseases in Children, Ministry of Education, National Clinical Research Center for Respiratory Diseases, Laboratory of Infection and Virology, Beijing Pediatric Research Institute, Beijing Children's Hospital,Capital Medical University, National Center for Children's Health, ²Research Unit of Critical Infection in Children, 2019RU016,Chinese Academy of Medical Sciences

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Opisujemy metodę łączącą kulki immunomagnetyczne i sortowanie komórek aktywowane fluorescencją w celu izolowania i analizowania zdefiniowanych subpopulacji komórek odpornościowych komórek jednojądrzastych krwi obwodowej (monocyty, limfocyty T CD4⁺, limfocyty T CD8⁺, limfocyty B i komórki NK). Za pomocą tej metody można oczyścić i przeanalizować komórki znakowane magnetycznie i fluorescencyjnie.

Metoda ta umożliwi scharakteryzowanie różnych komórek odpornościowych w tych samych stanach chorobowych osób z IM, co poszerzy naszą wiedzę na temat mechanizmu zakażenia EBV. Zabieg zademonstruje Linlin Zhang, lekarz z naszego laboratorium. Na początek weź PBMC wyizolowane wcześniej w 1,5-mililitrowej probówce do mikrowirówki i wiruj ją w temperaturze 300 G przez 10 minut w temperaturze pokojowej.

Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić komórki w 80 mikrolitrach przygotowanego buforu. Następnie dodać 20 mikrolitrów mikrogranulek CD 14 do zawiesiny komórek, dobrze wymieszać pipetując i inkubować probówkę przez 15 minut na lodzie. Następnie umyć PBMC za pomocą jednego mililitra buforu i odwirować przy 300 G przez 10 minut w temperaturze pokojowej.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos