Name: Nadwrażliwość kontaktowa jako mysi model alergicznego kontaktowego zapalenia skóry (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 25 s
Description: Poznaj metodę badania nadwrażliwości kontaktowej u myszy jako modelu alergicznego zapalenia skóry. Technika obejmuje golenie skóry, aplikację haptenów i pomiar obrzęku ucha.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie było wspierane przez subwencję SUBZ. A020.22.060 Uniwersytetu Medycznego we Wrocławiu oraz dzięki grantom Ministerstwa Nauki i Szkolnictwa Wyższego N N401 545940 do MS i IP2012 0443 72 do MMS.

<ol><li>Nosbaum, A., Vocanson, M., Rozieres, A., Hennino, A., Nicolas, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+and+irritant+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Allergic and irritant contact dermatitis.</a> European Journal of Dermatology. 19 (4), 325-332 (2009).</li>
<li>Hertl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predominance+of+epidermal+CD8%2B+T+lymphocytes+in+bullous+cutaneous+reactions+caused+by+beta-lactam+antibiotics%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Predominance of epidermal CD8+ T lymphocytes in bullous cutaneous reactions caused by beta-lactam antibiotics.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 101 (6), 794-799 (1993).</li>
<li>Martin, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+lymphocyte-mediated+immune+responses+to+chemical+haptens+and+metal+ions%3A+implications+for+allergic+and+autoimmune+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">T lymphocyte-mediated immune responses to chemical haptens and metal ions: implications for allergic and autoimmune disease.</a> International Archives of Allergy and Immunology. 134 (3), 186-198 (2004).</li>
<li>Takeyoshi, M., Iida, K., Suzuki, K., Yamazaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+sensitization+potency+of+isoeugenol+and+its+dimers+evaluated+by+a+non-radioisotopic+modification+of+the+local+lymph+node+assay+and+guinea+pig+maximization+test%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Skin sensitization potency of isoeugenol and its dimers evaluated by a non-radioisotopic modification of the local lymph node assay and guinea pig maximization test.</a> Journal of Applied Toxicology. 28 (4), 530-534 (2008).</li>
<li>Nakamura, K., Aizawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+genetic+control+of+picryl+chloride+contact+hypersensitivity+reaction+in+inbred+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Studies on the genetic control of picryl chloride contact hypersensitivity reaction in inbred rats.</a> Transplantation Proceedings. 13 (2), 1400-1403 (1981).</li>
<li>Asherson, G. L., Ptak, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contact+and+delayed+hypersensitivity+in+the+mouse.+I.+Active+sensitization+and+passive+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Contact and delayed hypersensitivity in the mouse. I. Active sensitization and passive transfer.</a> Immunology. 15 (3), 405-416 (1968).</li>
<li>Honda, T., Egawa, G., Grabbe, S., Kabashima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+immune+events+in+the+murine+contact+hypersensitivity+model%3A+toward+the+understanding+of+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Update of immune events in the murine contact hypersensitivity model: toward the understanding of allergic contact dermatitis.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 133 (2), 303-315 (2013).</li>
<li>Kaplan, D. H., Jenison, M. C., Saeland, S., Shlomchik, W. D., Shlomchik, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+langerhans+cell-deficient+mice+develop+enhanced+contact+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Epidermal langerhans cell-deficient mice develop enhanced contact hypersensitivity.</a> Immunity. 23 (6), 611-620 (2005).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Langerin+expressing+cells+promote+skin+immune+responses+under+defined+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Langerin expressing cells promote skin immune responses under defined conditions.</a> Journal of Immunology. 180 (7), 4722-4727 (2008).</li>
<li>Wang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+Th1+and+CD8%2B+type+1+cytotoxic+T+cells+both+play+a+crucial+role+in+the+full+development+of+contact+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">CD4+ Th1 and CD8+ type 1 cytotoxic T cells both play a crucial role in the full development of contact hypersensitivity.</a> Journal of Immunology. 165 (12), 6783-6790 (2000).</li>
<li>Mori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutaneous+hypersensitivities+to+hapten+are+controlled+by+IFN-gamma-upregulated+keratinocyte+Th1+chemokines+and+IFN-gamma-downregulated+langerhans+cell+Th2+chemokines%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Cutaneous hypersensitivities to hapten are controlled by IFN-gamma-upregulated keratinocyte Th1 chemokines and IFN-gamma-downregulated langerhans cell Th2 chemokines.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 128 (7), 1719-1727 (2008).</li>
<li>Peszkowski, M. J., Warfvinge, G., Larsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+and+irritant+contact+responses+to+DNFB+in+BN+and+LEW+rat+strains+with+different+TH1%2FTH2+profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Dermato-Venereologica%22%5BJournal%5D)">Allergic and irritant contact responses to DNFB in BN and LEW rat strains with different TH1/TH2 profiles.</a> Acta Dermato-Venereologica. 74 (5), 371-374 (1994).</li>
<li>Henningsen, S. J., Mickell, J., Zachariae, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+kinins+in+dinitrochlorobenzene+contact+dermatitis+of+guinea-pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Allergologica%22%5BJournal%5D)">Plasma kinins in dinitrochlorobenzene contact dermatitis of guinea-pigs.</a> Acta Allergologica. 25 (5), 327-331 (1970).</li>
<li>Maibach, H. I., Maguire, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elicitation+of+delayed+hypersensitivity+%28DNCB+contact+dermatitis%29+in+markedly+panleukopenic+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Elicitation of delayed hypersensitivity (DNCB contact dermatitis) in markedly panleukopenic guinea pigs.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 41, 123-127 (1963).</li>
<li>Martel, B. C., Lovato, P., Bäumer, W., Olivry, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+animal+models+of+atopic+dermatitis+for+preclinical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22The+Yale+Journal+of+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Translational animal models of atopic dermatitis for preclinical studies.</a> The Yale Journal of Biology and Medicine. 90 (3), 389-402 (2017).</li>
<li>Jin, H., He, R., Oyoshi, M., Geha, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Animal models of atopic dermatitis.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 129 (1), 31-40 (2009).</li>
<li>Li, Y. Z., Lu, X. Y., Jiang, W., Li, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+effect+of+qingpeng+ointment+in+atopic+dermatitis-like+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory effect of qingpeng ointment in atopic dermatitis-like murine model.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 2013, 907016(2013).</li>
<li>Hoggatt, J., Hoggatt, A. F., Tate, T. A., Fortman, J., Pelus, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bleeding+the+laboratory+mouse%3A+Not+all+methods+are+equal%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Hematology%22%5BJournal%5D)">Bleeding the laboratory mouse: Not all methods are equal.</a> Experimental Hematology. 44 (2), 132-137 (2016).</li>
<li>Bedoya, S. K., Wilson, T. D., Collins, E. L., Lau, K., Larkin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+th17+differentiation+of+na%C3%AFve+CD4+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and th17 differentiation of naïve CD4 T lymphocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (79), e50765(2013).</li>
<li>Vlab, A. Hemocytometer - Counting of Cells. Amrita University. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.youtube.com/watch?v=MKS0KM3lr90">https://www.youtube.com/watch?v=MKS0KM3lr90</a> (2011).</li>
<li>Majewska-Szczepanik, M., Strzepa, A., Marcińska, K., Wen, L., Szczepanik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicutaneous+immunization+with+TNP-Ig+and+Zymosan+induces+TCR%CE%B1%CE%B2%2B+CD4%2B+contrasuppressor+cells+that+reverse+skin-induced+suppression+via+IL-17A%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Epicutaneous immunization with TNP-Ig and Zymosan induces TCRαβ+ CD4+ contrasuppressor cells that reverse skin-induced suppression via IL-17A.</a> International Archives of Allergy and Immunology. 164 (2), 122-136 (2014).</li>
<li>Majewska-Szczepanik, M., Zemelka-Wiącek, M., Ptak, W., Wen, L., Szczepanik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicutaneous+immunization+with+DNP-BSA+induces+CD4%2B+CD25%2B+Treg+cells+that+inhibit+Tc1-mediated+CS%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Epicutaneous immunization with DNP-BSA induces CD4+ CD25+ Treg cells that inhibit Tc1-mediated CS.</a> Immunology and Cell Biology. 90 (8), 784-795 (2012).</li>
<li>Directive 2010/63 / EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes. Official Journal of the European Union. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2010:276:0033:0079:En:PDF">https://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2010:276:0033:0079:En:PDF</a> (2010).</li>
<li>Colvin, R. B., Dvorak, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+clotting+system+in+cell-mediated+hypersensitivity.+II.+Kinetics+of+fibrinogen%2Ffibrin+accumulation+and+vascular+permeability+changes+in+tuberculin+and+cutaneous+basophil+hypersensitivity+reactions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Role of the clotting system in cell-mediated hypersensitivity. II. Kinetics of fibrinogen/fibrin accumulation and vascular permeability changes in tuberculin and cutaneous basophil hypersensitivity reactions.</a> Journal of Immunology. 114, 377-387 (1975).</li>
<li>Szczepanik, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+contact+sensitivity+in+non-obese+diabetic+%28NOD%29+mice+by+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Regulation of contact sensitivity in non-obese diabetic (NOD) mice by innate immunity.</a> Contact Dermatitis. 79 (4), 197-207 (2018).</li>
<li>Askenase, P. W., Majewska-Szczepanik, M., Kerfoot, S., Szczepanik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Participation+of+iNKT+cells+in+the+early+and+late+components+of+Tc1-mediated+DNFB+contact+sensitivity%3A+Cooperative+role+of+%CE%B3%CE%B4-T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Participation of iNKT cells in the early and late components of Tc1-mediated DNFB contact sensitivity: Cooperative role of γδ-T cells.</a> Scandinavian Journal of Immunology. 73 (5), 465-477 (2011).</li>
<li>Zemelka-Wiącek, M., Majewska-Szczepanik, M., Ptak, W., Szczepanik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicutaneous+immunization+with+protein+antigen+induces+antigen-non-specific+suppression+of+CD8+T+cell+mediated+contact+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Reports%22%5BJournal%5D)">Epicutaneous immunization with protein antigen induces antigen-non-specific suppression of CD8 T cell mediated contact sensitivity.</a> Pharmacological Reports. 64 (6), 1485-1496 (2012).</li>
<li>Van Loveren, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+micrometers+and+calipers+to+measure+various+components+of+delayed-type+hypersensitivity+ear+swelling+reactions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Use of micrometers and calipers to measure various components of delayed-type hypersensitivity ear swelling reactions in mice.</a> Journal of Immunological Methods. 67 (2), 311-319 (1984).</li>
<li>Tsuji, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cell-dependent+T+cell+responses%3A+IgM+antibodies+are+required+to+elicit+contact+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">B cell-dependent T cell responses: IgM antibodies are required to elicit contact sensitivity.</a> The Journal of Experimental Medicine. 196 (10), 1277-1290 (2002).</li>
<li>Campos, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutaneous+immunization+rapidly+activates+liver+invariant+Valpha14+NKT+cells+stimulating+B-1+B+cells+to+initiate+T+cell+recruitment+for+elicitation+of+contact+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cutaneous immunization rapidly activates liver invariant Valpha14 NKT cells stimulating B-1 B cells to initiate T cell recruitment for elicitation of contact sensitivity.</a> The Journal of Experimental Medicine. 198 (12), 1785-1796 (2003).</li>
<li>Rühl-Muth, A. C., Maler, M. D., Esser, P. R., Martin, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+of+a+fat-enriched+diet+causes+the+loss+of+resistance+to+contact+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Feeding of a fat-enriched diet causes the loss of resistance to contact hypersensitivity.</a> Contact Dermatitis. 85 (4), 398-406 (2021).</li>
<li>Bour, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((histocompatibility+complex+class+I-restricted+CD8%2B+T+cells+and+class+II-restricted+CD4%2B+T+cells%2C+respectively%2C+mediate+and+regulate+contact+sensitivity+to+dinitrofluorobenzene%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">histocompatibility complex class I-restricted CD8+ T cells and class II-restricted CD4+ T cells, respectively, mediate and regulate contact sensitivity to dinitrofluorobenzene.</a> European Journal of Immunology. 25 (11), 3006-3010 (1995).</li>
<li>Majewska-Szczepanik, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity+aggravates+contact+hypersensitivity+reaction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Obesity aggravates contact hypersensitivity reaction in mice.</a> Contact Dermatitis. 87 (1), 28-39 (2022).</li>
<li>Katagiri, K., Arakawa, S., Kurahashi, R., Hatano, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+contact+hypersensitivity+in+diet-induced+obese+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dermatological+Science%22%5BJournal%5D)">Impaired contact hypersensitivity in diet-induced obese mice.</a> Journal of Dermatological Science. 46 (2), 117-126 (2007).</li>
<li>Bouloc, A., Cavani, A., Katz, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contact+hypersensitivity+in+MHC+class+II-deficient+mice+depends+on+CD8+T+lymphocytes+primed+by+immunostimulating+Langerhans+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Contact hypersensitivity in MHC class II-deficient mice depends on CD8 T lymphocytes primed by immunostimulating Langerhans cells.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 111 (1), 44-49 (1998).</li>
<li>Martin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+immunization+indicates+that+CD8%2B+T+cells+are+the+dominant+effector+cells+in+trinitrophenyl-specific+contact+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Peptide immunization indicates that CD8+ T cells are the dominant effector cells in trinitrophenyl-specific contact hypersensitivity.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 115 (2), 260-266 (2000).</li>
<li>Vennegaard, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicutaneous+exposure+to+nickel+induces+nickel+allergy+in+mice+via+a+MyD88-dependent+and+interleukin-1-dependent+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Epicutaneous exposure to nickel induces nickel allergy in mice via a MyD88-dependent and interleukin-1-dependent pathway.</a> Contact Dermatitis. 71 (4), 224-232 (2014).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

CHS jest indukowany przez hapteny, które wiążą się z antygenami białkowymi w skórze, tworząc neoantygeny. CHS odbywa się za pośrednictwem miejscowej zewnątrznaczyniowej rekrutacji krążących komórek T efektorowych CHS specyficznych dla antygenu, co powoduje obrzęk badanej tkanki, osiągający szczyt 24 godziny po ekspozycji wtórnej skóry na ten sam hapten6. Obrzęk tkanki jest spowodowany głównie naciekaniem leukocytów i zależnym od leukocytów odkładaniem fibryny24. Zm...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/t/64329">Contact Hypersensitivity as a Murine Model of Allergic Contact Dermatitis</a>. The Protocol and Representative Results sections were updated.
Step 3.2.1 of the Protocol has been updated from:
On day "4", prepare 0.4% hapten: TNCB in an acetone-ethanol mixture (ratio 1:1). Prepare the solution just before use in a glass vial and protect it from light by covering the vial with aluminum foil.
to:
On day "4", prepare 0.4% hapten: TNCB in an acetone: olive oil mixture (ratio 1:1). Prepare the solution just before use in a glass vial and protect it from light by covering the vial with aluminum foil.
Figure 1 of the Representative Results has been updated from:
<img alt="Mouse ear thickness measurement experiment diagram; TNCB-induced dermatitis comparison." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64329/64329fig01.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1: Induction of CHS. Sensitization, challenge, and ear measurement. Abbreviations: CHS = contact hypersensitivity reaction; TNCB = 2,4,6-trinitrochlorobenzene. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64329/64329fig01large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>
to:
<img alt="Mice sensitization process; diagram of control/test groups, TNCB application, ear thickness measurement." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64329/64329fig1v2.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1: Induction of CHS. Sensitization, challenge, and ear measurement. Abbreviations: CHS = contact hypersensitivity reaction; TNCB = 2,4,6-trinitrochlorobenzene. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64329/64329fig1v2large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>
Figure 2 of the Representative Results has been updated from:
<img alt="CHS induction in mice using TNCB, diagram showing sensitization, i.v. cell transfer, ear measurement." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64329/64329fig02.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 2"> 
Figure 2: Adoptive transfer of the CHS-effector cells. Abbreviations: ALNs =axillary and inguinal lymph nodes; CHS = contact hypersensitivity reaction; i.v. = intravenously; SPLs = spleens; TNCB = 2,4,6-trinitrochlorobenzene. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64329/64329fig02large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>
to:
<img alt="Mouse sensitization and TNCB application diagram; CHS study setup with control and test groups." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64329/64329fig2v2.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 2"> 
Figure 2: Adoptive transfer of the CHS-effector cells. Abbreviations: ALNs =axillary and inguinal lymph nodes; CHS = contact hypersensitivity reaction; i.v. = intravenously; SPLs = spleens; TNCB = 2,4,6-trinitrochlorobenzene. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64329/64329fig2v2large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64329">Contact Hypersensitivity as a Murine Model of Allergic Contact Dermatitis</a>. The Protocol&#160;and Representative Results sections were updated.

Erratum: Contact Hypersensitivity as a Murine Model of Allergic Contact Dermatitis

Alergiczne kontaktowe zapalenie skóry (ACD) jest powszechną chorobą zapalną skóry w krajach uprzemysłowionych, spowodowaną reakcją nadwrażliwości typu IV, wynikającą z ekspozycji na chemikalia o niskiej masie cząsteczkowej zwane haptenami. Substancje powodujące uczulenie kontaktowe u ludzi obejmują jony metali ciężkich (chrom, nikiel, żelazo, kobalt), terpentynę, substancje zapachowe, barwniki i konserwanty obecne w kosmetykach (np. p-fenylenodiamina), niektóre leki (np. neomycyna, benzokaina), antybiotyki β-laktamowe (np. penicylina), chemikalia wytwarzane przez rośliny (pentadekacatechol, substancja obecna w trującym bluszczu), a także hydrochinon stosowany w przemyśle fotograficznym1,2. Czynniki etiologiczne ACD są bardzo wysokie, ponieważ w samym przemyśle stosuje się ponad 100 000 substancji chemicznych, a każdego roku syntetyzuje się 2 000 nowych. Do tej pory zidentyfikowano ponad 3700 cząsteczek, które mogą być haptenami/alergenami kontaktowymi3. Reakcja nadwrażliwości kontaktowej (CHS) jest eksperymentalnym modelem ACD, który może być badany na myszach, świnkach morskich i szczurach i może być wywołany przez miejscowe stosowanie na skórę reaktywnych haptenów chemicznych rozpuszczonych w rozpuszczalnikach organicznych4,5,6. Badanie to ma na celu opisanie obiektywnej metody laboratoryjnej, która może pomóc w badaniu reakcji CHS u myszy, którą można zmierzyć i określić ilościowo za pomocą różnych testów.
CHS składa się z faz uwrażliwiania (indukcji) i efektora (wyzwania). W modelach zwierzęcych hapteny najpierw wiążą się kowalencyjnie z białkami w organizmie, tworząc neoantygeny. W fazie uczulenia aktywowane keratynocyty sprzyjają migracji i dojrzewaniu komórek dendrytycznych skóry (sDC) poprzez wytwarzanie cytokin prozapalnych-czynnika martwicy nowotworu α (TNF-α) i interleukiny 1β (IL-1β)7. Naskórkowe komórki Langerhansa (LC) prezentują antygeny podczas fazy indukcji CHS i efektora8. LC wystawione na działanie haptenów podczas uczulenia sprzyjają indukcji zarówno komórek regulatorowych, jak i efektorowych9. Coraz więcej dowodów z kilku badań sugeruje, że w odpowiedziach CHS mogą pośredniczyć komórki Th1 CD4 + MHC klasy II, lokalnie uwalniające interferon-γ (IFN-γ) w celu wykorzystania charakterystycznego nacieku zapalnego, limfocyty Tc1 CD8 + MHC klasy I, które mogą również uwalniać IFN-γ, ale głównie pośredniczą w cytotoksycznym uszkodzeniu keratynocytów, a teraz także komórki Th17 wytwarzające interleukinę 17 (IL-17)10, 11.
Kilka różnych modeli CHS wykorzystujących różne gatunki12,13,14 i hapteny zostały opracowane (szczegółowe porównanie różnych haptenów, rozpuszczalników i czasu aplikacji podsumowano w Tabeli 1). Mysz, często używany gatunek laboratoryjny, ma kilka zalet w badaniu CHS. Wśród myszy występuje więcej szczepów, nokautów (KO) i zwierząt transgenicznych w porównaniu z innymi gatunkami, co czyni je bardzo atrakcyjnym animalem15. Ponadto model CHS wymaga wielu zwierząt, a myszy są tutaj bardziej ekonomiczne. Modele zwierzęce nie naśladują ACD we wszystkich aspektach; W szczególności wykazują strupy i złuszczanie, co nie jest powszechne u ludzi16,17. Cechy choroby przewlekłej są trudne do odtworzenia, głównie dlatego, że opisany model nie zakłada stosowania haptenu przez długi okres czasu. Jednak tutaj potwierdzono, że wiele istotnych aspektów ACD jest reprodukowanych. Wykazano również, że podobnie jak u ludzi, cechy te są związane z miejscowymi reakcjami alergicznymi. Wybór haptenu, jego rozpuszczalnika i jego zastosowania przedstawione w tym protokole były podyktowane faktem, że wyniki zostały potwierdzone licznymi testami in vitro oraz że był on testowany i modyfikowany w laboratorium przez wiele lat, aż do ustalenia obecnej wersji. Modele mysie pozwalają na analizę podzbiorów komórek lub cytokin, które są zaangażowane w rozwój ACD i są niezbędne do przedklinicznej oceny nowych metod leczenia.

<table><tbody><tr><td>70% etanolu</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>65350-M</td><td>do dezynfekcji powierzchni</td></tr><tr><td>96-dołkowe płytki płaskodenne, polipropylen</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Kremsmunster, Austria</td><td>655101</td><td>do pomiaru MPO i niebieskiego Evansa - płytki powinny być wykonane z polipropylenu, który ma mniejszą zdolność wiązania, aby białka lub DNA nie wiązały</td></tr><tr><td>Aceton (odczynnik ACS, &ge; 99,5%)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>179124</td><td></td></tr><tr><td>Folia aluminiowa</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>Z185140</td><td></td></tr><tr><td>Waga analityczna</td><td>Sartorius Weighing Technology GmbH, Getynga, Niemcy</td><td>PRACTUM224-1s, 29105177</td><td></td></tr><tr><td>Automatyczny procesor tkanek</td><td>MediMeas Instruments, Sarsehri, Haryana, Indie</td><td>MTP-E-212</td><td>automatycznie przygotuj próbki tkanek poprzez utrwalanie, odwadnianie, oczyszczanie i infiltrację ich parafiną</td></tr><tr><td>BD Vacutainer SST II Advance (tubka z żelem do otrzymywania surowicy)</td><td>Becton Dickinson (BD), Franklin Lakes, NJ, USA</td><td>Zestaw</td><td></td>366882</tr><tr><td>kwasu bicynchoninowego do oznaczania białek</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>BCA1-1KT</td><td></td></tr><tr><td>Biotyna Szczur Anty-Mysia IgG1</td><td>Becton Dickinson (BD Biosciences), Franklin Lakes, NJ, USA</td><td>553441</td><td></td></tr><tr><td>BSA (albumina surowicy bydlęcej)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td> Testy i analiza białek <td>A9418</td><td>, 2 mg/ml</td></tr><tr><td>Sitko komórkowe, wielkość porów 70 i mu; m</td><td>BIOLOGIX, Chiny</td><td>15-1070</td><td>nadaje się do probówek 50 ml</td></tr><tr><td>Szkiełko nakrywkowe</td><td>VWR, Radnor, Pensylwania, Stany Zjednoczone</td><td>631-1583</td><td>24 mm, ale możliwe jest użycie innego rozmiaru</td></tr><tr><td>Pojemność pipet jednorazowych: 5 mL, 10 mL, 25 ml</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>Z740301, Z740302, Z740303</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dulbecco&prime; s sól fizjologiczna buforowana fosforanami)</td><td>ThermoFisher Scientific,&nbsp; Waltham, Massachusetts, Stany Zjednoczone</td><td>14190144</td><td>bez wapnia, bez magnezu, hodowla komórek ssaków</td></tr><tr><td>DPX Uchwyt DPX do histologii</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>6522</td><td>podłoża montażowe do H-E, mogą być używane inne np. balsam kanadyjski</td></tr><tr><td>Pęseta Dumont 5 - prosta</td><td>Animalab, Poznań, Polska</td><td>11251-10FST</td><td>Narzędzia chirurgiczne do zabiegów na myszach (powinny być sterylizowane)</td></tr><tr><td>Pęseta Dumont 7 - wygięta</td><td>Animalab, Poznań, Polska</td><td>11272-50FST</td><td>Narzędzia chirurgiczne do zabiegów na myszach (powinny być sterylizowane)</td></tr><tr><td>Roztwór eozyny Y, alkohol</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>HT110116</td><td></td></tr><tr><td>Probówki Eppendorf Safe-Lock 1,5 ml</td><td>Eppenforf, Niemcy</td><td>3,01,20,086</td><td>polipropylen</td></tr><tr><td>Probówki Eppendorf Safe-Lock, 2,0 ml</td><td>Eppenforf, Niemcy</td><td>3,01,20,094</td><td>polipropylen, okrągłe dno (kulki homogenizacyjne mogą się łatwo poruszać)</td></tr><tr><td>Etanol 100% (alkohol bezwodny)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>1.07017</td><td></td></tr><tr><td>Etanol 96%</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>1.59010</td><td></td></tr><tr><td>Evans blue</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>FBS (płodowa surowica bydlęca)</td><td>ThermoFisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA</td><td></td><td></td>A3160802</tr><tr><td>Roztwór formaliny, buforowany obojętnie, 10%</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Formamid 99,5% (GC)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>F7503</td><td></td></tr><tr><td>Zamrażarka -20 &deg; C</td><td>Bosch, Niemcy</td><td>GSN54AW30</td><td></td></tr><tr><td>Lodówka +4 &deg; C / zamrażarka -20 &deg; C</td><td>Bosch, Niemcy</td><td>KGV36V10</td><td>hodowla komórkowa ssaków, kwalifikacja, Brazylia, 10 x 50 ml</td></tr><tr><td>Szklane szkiełka mikroskopowe, SuperFrost Plus</td><td>VWR, Radnor, Pensylwania, Stany Zjednoczone</td><td>631-0108, 631-0446, 631-0447, 631-0448, 631-0449</td><td>Szkiełka, które eliminują potrzebę nakładania materiałów klejących lub powłok białkowych, aby zapobiec utracie jakichkolwiek skrawków tkanek podczas barwienia.</td></tr><tr><td>Pad graficzny Pryzmat</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td>v. 9.4.0</td><td></td></tr><tr><td>Mydło szare</td><td>Pollena Ostrzesz&oacute; w, Producent Chemii Gospodarczej Sp. z o.o. , Sp. K., Polska</td><td>Biały jelen mydło w kostce</td><td>szare Mydło w Kostce Naturalne Hipoalergiczne. Ogólnie dostępny produkt</td></tr><tr><td>H2SO4 (kwas siarkowy) 1 mol/l (1 M)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>1.60313</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór hematoksyliny Harris</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td> Zalecany jest hemocytometr <td>HHS16</td><td></td></tr><tr><td></td><td>VWR, Avantor, USA</td><td>612-5719</td><td>zalecana</td></tr> <tr><td>jest ręczna komora liczącaBromek heksadecylotrimetyloamoniowy</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>H5882</td><td></td></tr><tr><td>Homogenizator</td><td>QIAGEN Hilden, Niemcy</td><td>Homogenizator Tissue Lyser LT, SN 23.1001/05234</td> z <td>kulkami ze stali nierdzewnej (średnica 5 mm) do probówek wirówkowych 2 ml</td></tr><tr><td>Peroksydaza chrzanowa streptawidyna (streptawidyna HRP)</td><td>Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA, USA</td><td>SA-5004-1</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór nadtlenku wodoru (H202)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator Heracell 150i</td><td>Thermo Electron LED Gmbh, Niemcy</td><td>41071068</td><td>37 oC w atmosferze 5 % CO2 oraz 65 0C do deparafinowania skrawków do histologii</td></tr><tr><td>Ketamina 100 mg/ml, roztwór do wstrzykiwań</td><td>Biowet Puławy Sp. z o.o., Puławy, Polska</td><td>kat.# niedostępny</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4 (diwodorofosforan potasu) 99,995% bezwodnej masy</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>1.05108</td><td></td></tr><tr><td>Wirówka laboratoryjna</td><td>Heraeus Megafuge 1.0R, Thermo Scientific, Niemcy</td><td>B00013899</td><td>prędkość do 300 x g, z chłodzeniem do 4 0C</td></tr><tr><td>Wirówka laboratoryjna</td><td>Heraeus Fresco 21, Thermo Scientific, Niemcy</td><td>75002425</td><td>prędkość do 3 000 x g, z chłodzeniem do 4 0C</td></tr><tr><td>Maska (FFP2)</td><td>VWR, Radnor, Pensylwania, Stany Zjednoczone</td><td>111-0917</td><td>do pracy z dichlorowodorkiem orto-dianizyny</td></tr><tr><td>Myszy</td><td>Jednostka Hodowli Katedry Nauk Biomedycznych, Wydział Nauk o Zdrowiu, Collegium Medicum Uniwersytetu Jagiellońskiego, Kraków, Polska</td><td>CBA/J, C57BL/6</td><td></td></tr><tr><td>Mikrometr</td><td>Mitutoyo, Tokio, Japonia</td><td>193-111</td><td>cyfr Mikrometr zewnętrzny, Ogranicznik zapadkowy, Zakres 0-25mm, Podziałka 0,001mm, Dokładność +/- 0,002mm, https://shop.mitutoyo.pl/web/mitutoyo/pl_PL/all/all/Mikrometr%20analogowy%20/PR/193-111/index.xhtml&nbsp;&nbsp;</td></tr><tr><td>mikropłytka, 96 dołków, mikrolon, wysokie wiązanie (do testu ELISA)</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Kremsmünster, Austria</td><td>655061</td><td>z powierzchniami wiążącymi maxi-sorp dla wiarygodnych i powtarzalnych wyników w testach kolorowych</td></tr><tr><td>Mikroskop z obiektywami</td><td>Leica Microsystems CMS GmbH, Niemcy</td><td>DM1000, 294011-082007</td><td>Badanie histologiczne przedstawione w pracy wykonano w systemie obrazowania ThermoFisher Scientific EVOS M5000, z obiektywami: FL 20X LWDPH, 0,40NA/3,1WD i FL 40X LWDPH 0,65NA/1,79WD</td></tr><tr><td>Mieloperoksydaza z ludzkich leukocytów (wzorzec MPO)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>M6908</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4 x 7 H2O (fosforan sodu dwuzasadowy siedmiowodny)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>S9390</td><td></td></tr><tr><td>Oliwa z oliwek</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>75343</td><td>czysta, naturalna</td></tr><tr><td>mysz OptEIA IFN-&gamma; Zestaw ELISA</td><td>Becton Dickinson (BD Biosciences), Franklin Lakes, NJ, USA</td><td>555138</td><td></td></tr><tr><td>Dichlorowodorek orto-dianizyny</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>D3252</td><td></td></tr><tr><td>Wosk parafinowy</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>76242</td><td>koraliki, woskowate stałe</td></tr><tr><td>PBS (sól fizjologiczna buforowana fosforanami)</td><td>ThermoFisher Scientific,&nbsp; Waltham, Massachusetts, Stany Zjednoczone</td><td>20012027</td><td>pH 7,2, ph-metr do hodowli komórek ssaków</td></tr><tr><td></td><td>Elmetron, Polska</td><td>CP-401</td><td></td></tr><tr><td>Pipety, zmienna objętość z końcówkami</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>EP3123000900-1EA</td><td>3-pak, opcja 1, 0,5-10 uL/10-100 uL/100-1000 uL, zawiera epT.I.P.S.</td></tr><tr><td>Żyletka</td><td>VWR, Radnor, Pensylwania, Stany Zjednoczone</td><td>PERS94-0462</td><td>Ostrza skrobaków i nóż, jednokrawędziowe, aluminiowy grzbiet, 100 ostrzy w pudełku, pakowane pojedynczo</td></tr><tr><td>Mikrotom obrotowy</td><td>MRC Laboratory-Instruments, Essex, CM20 2HU UK</td><td>HIS-202A</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki - proste, ostre / ostre</td><td>Animalab, Poznań, Polska</td><td>14060-10FST</td><td>Narzędzia chirurgiczne do zabiegów na myszach (powinny być sterylizowane)</td></tr><tr><td>Zakrętka (otwarta góra)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>27056</td><td>polipropylenowa zaślepka z otworem, do użytku z 22&nbsp; fiolka ml z gwintem 20-400</td></tr><tr><td>Spektrofotometr</td><td>BioTek Instruments, USA</td><td>201446</td><td>uniwersalny spektrofotometr do mikropłytek: &lambda; zakres: 200 - 999 nm, zakres pomiaru absorbancji: 0,000 - 4,000 Abs</td></tr><tr><td>Naczynie do barwienia 20 szkiełek ze stojakiem</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>S6141</td><td>np. 20 naczyń do barwienia szkiełek w komplecie z pokrywkami, stojakiem na suwaki i uchwytem</td></tr><tr><td>Sterylny jednorazowy dziurkacz do biopsji 6mm</td><td>Integra LifeSciences, Princeton, NJ, Stany Zjednoczone</td><td>33-36</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki chirurgiczne</td><td>Animalab, Poznań, Polska</td><td>52138-46</td><td>Narzędzia chirurgiczne do zabiegów na myszach (powinny być sterylizowane)</td></tr><tr><td>Kasety do przetwarzania tkanek</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>Z672122</td><td>kasety do przetwarzania/zatapiania tkanek z pokrywką</td></tr><tr><td>Zestaw odczynników do substratów TMB</td><td>Becton Dickinson (BD Biosciences), Franklin Lakes, NJ, USA</td><td>555214</td><td></td></tr><tr><td>TNCB (2,4,6-trinitrochlorobenzen)</td><td>Tokyo Chemical Industry CO., LTD, Japonia</td><td>C0307</td><td></td></tr><tr><td>TNP-BSA (albumina surowicy bydlęcej sprzężona z 2,4,6-trinitrofenylem)</td><td>Biosearch Technologies LGC, Petaluma, CA, USA</td><td>T-5050</td><td></td></tr><tr><td>T-PER (odczynnik do ekstracji białek tkankowych)</td><td>ThermoFisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA</td><td>78510</td><td></td></tr><tr><td>Probówki 15 mL sterylne</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>CLS430055 (Corning)</td><td>polipropylen, stożkowe dno</td></tr><tr><td>Probówki 50 mL, sterylne</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>CLS430290 (Corning)</td><td>polipropylen, stożkowe dno</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Fiolki, zakręcana górka, przezroczyste szkło (tylko fiolka) 22 mL</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>27173</td><td>do przygotowania haptenu, przykręcany tak, aby nie parował</td></tr><tr><td>Kąpiel wodna</td><td>AJL Electronic, Polska</td><td>LW102</td><td></td></tr><tr><td>Dozownik wosku (parafiny)</td><td>VWR, Radnor, Pensylwania, Stany Zjednoczone</td><td>114-8737</td><td></td></tr><tr><td>Ksylazyna (ksylapan, ksylapan, 20 mg/ml) roztwór do wstrzykiwań</td><td>Vetoquinol Biowet Sp. z o.o., Gorzów Wielkopolski, Polska</td><td>kat.# niedostępny</td><td></td></tr><tr><td>Ksylen (stopień histologiczny)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy</td><td>534056</td><td></td></tr></tbody></table>

nadwrażliwość kontaktowa jako mysi model alergicznego kontaktowego zapalenia skóry

Contact Hypersensitivity as a Murine Model of Allergic Contact Dermatitis

Nadwrażliwość kontaktowa (CHS) to eksperymentalny model alergicznego kontaktowego zapalenia skóry (ACD), który można badać na myszach. Badanie to ma na celu przedstawienie obiektywnej metody laboratoryjnej, która może pomóc w badaniu reakcji CHS u myszy, którą można zmierzyć i określić ilościowo za pomocą różnych testów. Aby wywołać CHS, w dniu "0" myszy uczulono na wcześniej ogolone miejsce poprzez malowanie skóry brzucha haptenem 2,4,6-trinitrochlorobenzenem (TNCB) w mieszaninie acetonu i etanolu, podczas gdy myszy z kontrolą ujemną uczulono pozorowanym roztworem samego nośnika-acetonu-etanolu. W dniu "4" wyjściową grubość ucha mierzono mikrometrem przed wywołaniem CHS (prowokacji) poprzez malowanie obu uszu rozcieńczonym TNCB zarówno w grupie testowej, jak i kontrolnej. Po 24 godzinach opuchliznę ucha mierzono mikrometrem. CHS jest przykładem odpowiedzi immunologicznej za pośrednictwem limfocytów T, która powoduje obrzęk tkanki objętej stanem zapalnym, osiągając szczyt 24 godziny po prowokacji skórnej tym samym haptenem. Wzrost obrzęku ucha korelował ze zwiększoną masą ucha, aktywnością mieloperoksydazy (MPO), stężeniem cytokin prozapalnych w ekstraktach z uszu, zwiększonym pogrubieniem obrzękowej skóry właściwej w badaniu histologicznym i przepuszczalnością naczyń usznych. Stwierdzono również wzrost stężenia przeciwciał IgG1 specyficznych dla TNP w surowicach grupy testowej w porównaniu z myszami kontrolnymi. Dodatkowo CHS może być z powodzeniem przenoszony za pomocą komórek efektorowych CHS uzyskanych od dawców uprzednio uczulonych TNCB. Komórki efektorowe CHS podawano dożylnie naiwnym myszom-biorcom, które następnie prowokowano tym samym rozcieńczonym haptenem. Obrzęk ucha zmierzono mikrometrem 24 godziny później.

W celu indukcji CHS zwierzęta uodporniono via poprzez malowanie skóry (brzucha) 150 µL 5% TNCB lub poddano pozornej sensybilizacji samym nośnikiem. W dniu "4" odpowiedzi w postaci obrzęku obu uszu indukowano poprzez malowanie kontaktowe (wyzwalanie) z użyciem 10 µL 0,4% TNCB zarówno u myszy uprzednio uodpornionych kontaktowo TNCB (grupa badawcza), jak i u myszy z grupy kontrolnej (pozornie uodpornione). Przedstawione dane pokazują, że u myszy uodpornionych TNCB i poddanych wyzwaniu 4 dni później wystąpił znaczni...

Nadwrażliwość kontaktowa (CHS) to mysi eksperymentalny model alergicznego kontaktowego zapalenia skóry (ACD). CHS opiera się na uczuleniu na reaktywny hapten poprzez malowanie ogolonej skóry klatki piersiowej i brzucha, a następnie prowokację skóry ucha rozcieńczonym haptenem, powodując reakcję obrzęku, która jest oceniana na różne sposoby.

Nadwrażliwość kontaktowa jako mysi model alergicznego kontaktowego zapalenia skóry

Contact hypersensitivity (CHS) is an experimental model of allergic contact dermatitis (ACD) that can be studied in mice. This study aims to present an ...

Przedstawiona tu obiektywna metoda laboratoryjna może pomóc w badaniu reakcji nadwrażliwości kontaktowej u myszy, która naśladuje alergiczne kontaktowe zapalenie skóry u ludzi. Reakcję nadwrażliwości kontaktowej można zmierzyć nie tylko za pomocą obrzęku ucha, ale także za pomocą różnych testów laboratoryjnych, które pozwalają na badanie mechanizmów komórkowych biorących udział w tej reakcji. Model nadwrażliwości w bardziej kontaktowym kontakcie może testować różne czynniki środowiskowe i nowe substancje, aby pokazać, czy badane czynniki modulują odpowiedź immunologiczną zależną od limfocytów T, co można wykorzystać do wdrożenia nowych terapii.Zacznij od ogolenia skóry myszy żyletką i oznaczenia łapy. Sześć godzin przed indukcją nadwrażliwości kontaktowej lub CHS nałóż szare mydło z wodą i ogol dwucentymetrowy kwadratowy obszar na klatce piersiowej i brzuchu myszy. Tego samego dnia należy uczulić myszy, nakładając 150 mikrolitrów świeżo przygotowanego 5% haptenu na wcześniej ogolone miejsce.W myszy sterującej zastosuj tylko pojazd. Osusz miejsce haptenu przez 30 sekund przed umieszczeniem zwierzęcia z powrotem w klatce. Czwartego dnia zmierz grubość ucha znieczulonej myszy za pomocą mikrometru o godzinie zero przez obserwatora nieświadomego grup eksperymentalnych.Następnie nałóż 10 mikrolitrów świeżo przygotowanego 04%haptenu po obu stronach uszu w grupie testowej i kontrolnej i pozostaw do wyschnięcia na 30 sekund. W piątym dniu, 24 godziny po poprzedniej aplikacji 0,4% haptenu, powtórz pomiar grubości ucha dla pomiaru 24-godzinnego. 24 godziny po pomiarze grubości ucha, gdy mysz jest jeszcze w głębokim znieczuleniu, odetnij uszy jak najbliżej czaszki za pomocą nożyczek.Po dystalnej stronie uszu wykonaj stempel o średnicy sześciu milimetrów za pomocą stempla do biopsji. Zmierz masę każdej biopsji ucha na wadze analitycznej i wyraź ją w miligramach. W przypadku testu mieloperoksydazy lub MPO należy umieścić biopsje ucha w dwumililitrowej probówce wirówkowej z kulkami ze stali nierdzewnej i dodać 500 mikrolitrów przygotowanego buforu.Homogenizować biopsje przez 10 minut w homogenizatorze, a następnie schładzać próbkę przez 15 minut w temperaturze 4 stopni Celsjusza przed ponownym homogenizowaniem przez 10 minut. Wyjmij kulki po homogenizacji biopsji. Zamrozić homogenaty w temperaturze minus 20 stopni Celsjusza przez 30 minut.Rozmrozić i zwirować próbki, a następnie powtórzyć procedurę homogenizacji i zamrażania trzy razy. Po zakończeniu odwirować homogenat o sile 3 000 G przez 30 minut w temperaturze 4 stopni Celsjusza. Zebrać supernatant za pomocą pipety, aby zmierzyć aktywność MPO i wyrazić ją w jednostkach na jeden miligram białka.Aby wykonać test przepuszczalności naczyń krwionośnych, uczulij myszy w dniu zero, a w czwartym dniu bezpośrednio prowokuj, nakładając hapten na uszy, korzystając z wcześniej wspomnianej procedury. 23 godziny później wstrzyknij dożylnie 8,3 mikrolitra na gram masy ciała 1% niebieskiego barwnika Evansa w buforowanym fosforanem soli fizjologicznej Dulbecco lub DPBS znieczulonej myszy. Po godzinie ponownie znieczulij mysz, aby pobrać biopsję ucha, jak opisano wcześniej.Aby wyekstrahować barwnik z tkanki, inkubuj biopsje w probówkach zawierających jeden mililitr formamidu w temperaturze 37 stopni Celsjusza w atmosferze 5% dwutlenku węgla przez 18 godzin. Po pobraniu biopsji ucha, gdy mysz jest jeszcze w głębokim znieczuleniu, usuń gałkę oczną pęsetą. Delikatnie naciskaj na mysz i pobieraj krew z zatoki zadoczodołowej do probówki w celu pobrania surowicy.Odwróć probówkę sześć razy i odczekaj 30 minut, aż krew zacznie krzepnąć. Następnie odwirować probówkę o stężeniu 1 300 do 2 000 G przez 10 minut w temperaturze pokojowej. Uczulić myszy dawcy haptenem TNCB w dniu zero, stosując wcześniej wspomnianą procedurę Czwartego dnia, po dezynfekcji skóry, odizoluj pachowe i pachwinowe węzły chłonne lub ALN od znieczulonej myszy za pomocą kleszczy, a następnie wyizoluj śledzionę.Rozgnieć tkankę między oszronionymi końcami dwóch szkiełek mikroskopowych i przepuść zawiesinę komórek przez sitko do komórek o wielkości porów 70 mikrometrów. Następnie umyj komórki DPBS uzupełnionym 1% płodową surowicą bydlęcą i odwiruj je w temperaturze 300 G przez 10 minut w temperaturze czterech stopni Celsjusza. Zdekantować supernatant i ponownie zawiesić pozostałą osadkę komórkową w jednym do pięciu mililitrów DPBS.Przygotuj mieszaninę 1:1 ALN i śledziony, aby osiągnąć stężenie do 7,0 razy 10 do siódmych komórek w 200 mikrolitrach DBPS przed dożylnym wstrzyknięciem mieszaniny komórek efektorowych CHS znieczulonej myszy. Zmierz grubość ucha o godzinie zero i po 24 godzinach od wyzwania. Dane wykazały, że myszy uwrażliwione na TNCB i prowokowane w uszach cztery dni później rozwinęły znacznie zwiększony obrzęk uszu w porównaniu z myszami kontrolnymi uczulonymi pozorowanymi, a następnie podobnie uproszczonymi.Wzrost obrzęku ucha w grupie testowej skutkował zwiększoną masą ucha, aktywnością MPO, stężeniem interferonu gamma w ekstraktach z uszu, zmianami obrzęku skóry właściwej w badaniu histologicznym i przepuszczalnością naczyń usznych Przeciwciała IgG1 specyficzne dla TNP były podwyższone w surowicy badanych myszy w porównaniu ze zwierzętami kontrolnymi. Zwierzęta, które otrzymały komórki efektorowe CHS od dawców uprzednio uczulonych na TNCB, wykazywały znacznie zwiększony obrzęk uszu w porównaniu ze zwierzętami, które nie otrzymały komórek. Najbardziej krytycznym momentem jest wywołanie nadwrażliwości kontaktowej.Roztwór haptenu jest bardzo lotny i wrażliwy na światło, dlatego należy go szybko nałożyć na skórę zwierząt. Dodatkowe badania można wykonać na wyizolowanych komórkach efektorowych. Na przykład można założyć hodowle komórkowe w celu oceny zdolności do proliferacji w obecności antygenów.

contact-hypersensitivity-as-murine-model-allergic-contact

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Eksperymentalne modele mysie astmy alergicznej oferują nowe możliwości badania patogenezy choroby oraz opracowywania nowych terapii. Modele te są odpowiednie do pomiaru czynników kontrolujących alergiczną odpowiedź immunologiczną, zapalenie dróg oddechowych i patofizjologię płuc.

Mysi model astmy indukowanej alergenem

Ten film opisuje metodę pomiaru wrażliwości na promieniowanie UV w humanizowanym modelu myszy - modelu myszy, który naśladuje ludzką skórę. Określamy minimalną dawkę rumieniową (MED) promieniowania UV, które może powodować rumień lub obrzęk skóry. Metoda może pomóc w ustaleniu skuteczności leków stosowanych w celu zmniejszenia wrażliwości na promieniowanie UV.

Test minimalnej dawki rumieniowej: metoda pomiaru wrażliwości na promieniowanie UV w modelach mysich

Ten film demonstruje metodę wywoływania zapalenia powierzchni oka i dysfunkcji gruczołów Meiboma w modelu mysim. Stymulacja układu odpornościowego myszy za pomocą immunogenu, a następnie ponowna stymulacja tym samym immunogenem sprzyja zapaleniu powierzchni oka, które powoduje zatkanie wydzielania gruczołów Meiboma przez aggNET wytwarzane przez neutrofile i prowadzi do zespołu suchego oka.

Metoda wywoływania stanu zapalnego powierzchni oka w modelu mysim

Ten film demonstruje technikę in vivo oceny testowego antygenu poprzez wywoływanie stanu zapalnego skóry w modelu mysim. Antygen testowy - hapten w roztworze oleju / acetonu - jest miejscowo nakładany na skórę ucha myszy, a stan zapalny skóry ocenia się po odpowiednim czasie.

Technika oceny odpowiedzi immunologicznej na antygen poprzez wywoływanie stanu zapalnego skóry

Reakcje alergiczne, charakteryzujące się aktywacją komórek tucznych i bazofilów, są napędzane przez sieciowanie IgE i uwalnianie mediatorów prozapalnych. Ilościową ocenę reakcji alergicznych można uzyskać, stosując barwnik Evans Blue do monitorowania zmian przepuszczalności naczyń krwionośnych po prowokacji alergenem.

Pomiar miejscowej anafilaksji u myszy

Ten protokół opisuje enzymatyczne trawienie skóry myszy w pożywce bogatej w składniki odżywcze, a następnie separację gradientową w celu wyizolowania leukocytów.  Uzyskane w ten sposób ogniwa mogą być wykorzystywane do różnych zastosowań końcowych. Jest to skuteczna, ekonomiczna i ulepszona alternatywa dla maszyn do dysocjacji tkanek i ostrzejszych protokołów trawienia tkanek opartych na trypsynie i dyspazie.

Izolacja naciekających leukocytów ze skóry myszy za pomocą trawienia enzymatycznego i separacji gradientowej

Tutaj opisujemy metody wywoływania alergicznego kontaktowego zapalenia skóry w uszach myszy za pomocą 1-fluoro-2,4-dinitrobenzenu (DNFB) i jak ocenić nasilenie alergicznego kontaktowego zapalenia skóry.

Model ucha myszy do oceny alergicznego kontaktowego zapalenia skóry

Badanie pokazuje rolę skóry w modulacji odpowiedzi immunologicznych u myszy poprzez immunizację epikutanną (EC). Szczepienie EC antygenem białkowym może hamować odpowiedzi immunologiczne w przypadku nadwrażliwości kontaktowej lub odwracać supresję indukowaną przez skórę, gdy jest połączona z molekularnymi wzorcami związanymi z patogenem. Szczepienia EC wykazują obiecujące zastosowanie jako skuteczne, bezigłowe podejście do immunoterapii.

Model murinowy immunomodulacji indukowanej przez skórę

Opryszczkowe zapalenie skóry (DH) jest przewlekłym stanem zapalnym charakteryzującym się reakcją autoimmunologiczną między IgA a transglutaminazą epidermalną (eTG). DH rozwija się u niewielkiej części pacjentów z nadwrażliwością na gluten i/lub celiakią. Wyniki niniejszego badania wskazują, że DH może rozwijać się również u małpy z gatunku makaka rezusa z objawami idiopatycznego zapalenia skóry.

Rozpoznanie transglutaminazy epidermalnej przez przeciwciała IgA i przeciwciała przeciwko tkankowej transglutaminazie 2 w rzadkim przypadku zapalenia skóry u Rhesus

Podczas procesu infekcji kluczowym etapem jest adhezja patogenów do komórek gospodarza. W większości przypadków etap adhezji ten zachodzi w obecności stresu mechanicznego generowanego przez przepływającą ciecz. Opisujemy technikę, która wprowadza naprężenie ścinające jako istotny parametr w badaniu adhezji bakteryjnej.

Wprowadzenie naprężenia ścinającego w badaniach nad adhezją bakteryjną

Poznaj metodę badania nadwrażliwości kontaktowej u myszy jako modelu alergicznego zapalenia skóry. Technika obejmuje golenie skóry, aplikację haptenów i pomiar obrzęku ucha.

Nadwrażliwość kontaktowa jako mysi model alergicznego kontaktowego zapalenia skóry

Przeglądaj więcej filmów