Name: Model oparzeń szczurów do badania oparzeń termicznych skóry o pełnej grubości i infekcji (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-23T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: Poznaj model oparzeń szczurów do badania infekcji bakteryjnych i oceny nowych terapii miejscowych. Metoda umożliwia analizę gojenia ran oraz dynamiki zakażenia w tkankach.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy dziękują Wydziałowi Medycyny Porównawczej Uniwersytetu Północnej Karoliny za zapewnienie i opiekę nad zwierzętami. Dziękujemy Lauren Ralph i Mii Evangeliście z Pathology Services Core za fachową pomoc techniczną w zakresie histopatologii/patologii cyfrowej, w tym sekcji tkanek i obrazowania. Badania te zostały wsparte grantem badawczym z Departamentu Obrony (numer nagrody W81XWH-20-1-0500, GR i TV).

Wszystkie procedury zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) Uniwersytetu Północnej Karoliny i zostały przeprowadzone zgodnie z ustalonymi wytycznymi. Do eksperymentów wykorzystano samce i samice szczurów Sprague Dawley (250-300 g) w wieku 7-9 tygodni. Wszystkie zwierzęta były trzymane w cyklu 12 h: 12 h jasno-ciemnym ze swobodnym dostępem do pożywienia i wody ad libitum. Zawsze współpracuj z lekarzem weterynarii w instytucji w celu ustalenia planu przeciwdziałania bólowi przed rozpoczęciem badania. 
1. Przygotowanie szczurów do leczenia oparzeń
<ol>
	<li>Przygotuj zwierzęta na oparzenia na 24 godziny przed oparzeniem.</li>
	<li>Znieczulać szczura 5% izofluranem w 100% tlenu w komorze indukcyjnej przez 5 minut (szybkość przepływu: 2 l/min), aż oddech ulegnie spowolnieniu.</li>
	<li>Gdy szczur jest głęboko znieczulony (nie reaguje na szczypanie palców u nóg na wszystkich kończynach), przenieś szczura na poduszkę grzewczą w pozycji leżącej i zmniejsz poziom izofluranu do 1,5% tlenu w celu utrzymania przez stożek nosowy.</li>
	<li>Aby zapobiec wysuszeniu rogówki po znieczuleniu i w trakcie zabiegu, nałóż lubrykant do oczu na rogówki obu oczu za pomocą aplikatora z bawełnianą końcówką.</li>
	<li>Ogol obszar grzbietowy szczura za pomocą elektrycznej maszynki do strzyżenia (patrz Tabela Materiałów) i usuń jak najwięcej włosów w dużym prostokącie od łopatek do podstawy ogona (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2A).</li>
	<li>Oczyść ogolony obszar chusteczką nasączoną solą fizjologiczną, aby wytrzeć luźne włosy. Nałóż balsam do depilacji na ogolony obszar za pomocą aplikatora z bawełnianą końcówką i pozostaw na ~3 min. 
	UWAGA: Stosowanie wspomnianego balsamu do depilacji przez ponad 3 minuty wywoła czerwone wysypki na skórze.</li>
	<li>Dwukrotnie przetrzyj obszar wilgotną gąbką z gazy, aby usunąć balsam i zapobiec podrażnieniu skóry.</li>
	<li>Wyłącz izofluran, usuń stożek nosowy i umieść szczura w klatce regeneracyjnej. 
	UWAGA: Umieść poduszkę grzewczą w klatce odzyskiwania.</li>
	<li>Przenieś odzyskane zwierzę do czystej klatki w celu przeprowadzenia procedury oparzenia następnego dnia (może minąć ~10-15 minut, zanim szczur dojdzie do siebie po znieczuleniu).</li>
</ol>
2. Wywoływanie oparzeń u szczurów
<ol>
	<li>W dniu spalenia należy ustawić temperaturę łaźni wodnej na 97 °C i umieścić wszystkie cztery pręty miedziane (każdy po 420 g; <silna klasa="xfig">Rysunek 1) w łaźni wodnej 1 godzinę przed eksperymentem oparzenia, aby pręty równomiernie się rozgrzały. 
	UWAGA: Pręty muszą być zanurzone w wodzie. Przed eksperymentem sprawdź dokładność cyfrowego wyświetlacza temperatury za pomocą termometru.</li>
	<li>Znieczulić szczura, jak wspomniano w sekcji 1.</li>
	<li>Gdy szczur przestanie reagować na szczypanie palców u nóg wszystkich kończyn, umieść go na poduszce grzewczej w pozycji leżącej z 1,5% izofluranem w tlenie w celu konserwacji (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2A).</li>
	Wstrzyknąć morfinę (20 mg/kg masy ciała) drogą dootrzewnową (i.p.) w celu leczenia bólu6.<li></li>
	<li>Sprawdź temperaturę wody w łaźni wodnej. Ustaw minutnik i załóż rękawice żaroodporne.</li>
	<li>Wyjmij jeden rozgrzany pręt miedziany z łaźni wodnej i dotykaj nim grzbietu szczura przez 7 sekund, aby wywołać oparzenie. 
	UWAGA: Zachowaj minimalną odległość (10-15 cm) między łaźnią wodną a zwierzęciem, aby zminimalizować straty ciepła i nie wywieraj nacisku na pręty podczas wywoływania oparzenia (tj. kontakt musi być utrzymywany grawitacyjnie).</li>
	<li>Zastosuj cztery oparzenia, używając jednego pręta na miejsce oparzenia, jedno po drugim, aby uzyskać około 20% oparzenia w pełnym kontakcie TBSA (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2B).</li>
	<li>Po oparzeniu należy reanimować zwierzę poprzez wstrzyknięcie roztworu Ringera z mleczanami (0,1 ml/g masy ciała). 
	UWAGA: Do reanimacji szczurów użyj roztworu dzwonka z mleczanami o dostosowanej temperaturze ciała.</li>
	<li>Wyłącz izofluran, usuń stożek nosowy i umieść szczura na macie grzewczej w celu odzyskania sprawności.</li>
</ol>
3. Przygotowanie inokulum bakteryjnego i zakażenie
<ol>
	<li>Zamrożoną próbkę Pseudomonas aeruginosa PAO1 i Staphylococcus aureus ATCC25923 umieścić na płytkach Müller Hinton Agar (MHA) na 2 dni przed eksperymentem oparzenia.</li>
	<li>Następnego dnia wybierz pojedynczą kolonię wyhodowanych bakterii z płytki i za pomocą pętli do zaszczepiania lekko zeskrob ją z płytki. Następnie umieścić go w probówce hodowlanej, aby zaszczepić 10 ml bulionu Muller Hinton (MHB) i hodować przez noc w temperaturze 37 °C w wytrząsarce inkubatora.</li>
	<li>W dniu oparzenia i zakażenia odwirować kulturę o masie 4 000 × g przez 5 minut. Umyć osad zwykłą solą fizjologiczną (0,9% roztwór NaCl).</li>
	<li>Zawiesić osad bakteryjny w soli fizjologicznej i rozcieńczyć do 0,1 OD600 nm (gęstość optyczna przy 600 nm). Rozcieńczyć inokulum bakteryjne, pobierając 200 μl tej zawiesiny bakteryjnej i mieszając ją z 800 μl soli fizjologicznej, aby uzyskać pożądane inokulum bakteryjne 2 × 107 jtk/ml.</li>
	<li>Wstrzyknąć 50 μl inokulum P. aeruginosa lub S. aureus przygotowanego w poprzednim etapie (dawka zakażenia 1 ×10 6 CFU) znieczulonemu szczurowi 15 minut po oparzeniu, używając igły 29 G podskórnie jak najbliżej rany oparzeniowej.</li>
	<li>Po zakażeniu rany po oparzeniu umieść szczura na poduszce grzewczej w celu rekonwalescencji. Gdy zwierzę wyzdrowieje (~15-20 min), umieść je w czystej klatce. 
	UWAGA: Po oparzeniu trzymaj jednego szczura w klatce. Użyj mokrych granulek żywności, aby ułatwić żucie i umieść je na podłodze klatki, aby mieć łatwy dostęp.</li>
	<li>Napełnij butelki z wodą w klatce wodą z dodatkiem morfiny (0,4 mg/ml) w celu leczenia bólu. 
	UWAGA: Morfina doustna odzwierciedla sytuację kliniczną u pacjentów z oparzeniami u ludzi. W badaniu tym wykorzystano doustną morfinę, aby utrzymać te eksperymenty porównywalne z pacjentami z oparzeniami u ludzi, po wielokrotnych konsultacjach z personelem weterynaryjnym. Dzienniki picia i wagi były prowadzone przez cały czas trwania eksperymentu. Używaj tego samego systemu pojenia podczas wszystkich zabiegów. Inne leki przeciwbólowe, takie jak buprenorfina, mogą być podawane podskórnie/dootrzewnowo zgodnie z wytycznymi instytucji zajmujących się opieką nad zwierzętami. </li>
	<li>Wypełnij listę kontrolną monitorowania i uważnie monitoruj zwierzęta pod kątem stresu lub choroby przez cały czas trwania eksperymentu.</li>
</ol>
4. Ocena urazu spowodowanego oparzeniem
<ol>
	<li>Oceń morfologicznie oparzenie skóry pod względem koloru i marginesu bezpośrednio po oparzeniu.</li>
	<li>Zabarwić poparzoną skórę hematoksyliną i eozyną (H&E), aby uwidocznić strukturę rany po oparzeniu i szczelinę nabłonkową15 (patrz krok 5.6 w celu przetworzenia próbki).</li>
</ol>
5. Przetwarzanie końcowe próbek szczurów i liczenie bakterii
<ol>
	<li>Poddaj szczura eutanazji po 24, 48 i 72 godzinach od oparzenia z przedawkowaniem znieczulenia.</li>
	<li>Pobrać próbki krwi od szczurów przez nakłucie serca i zebrać je w mini probówce.
	<ol>
		<li>Przeanalizuj pełną morfologię krwi z próbek krwi, aby określić wpływ indukcji oparzeń na układ odpornościowy gospodarza.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zbierz skórę, tkankę podskórną, mięśnie, płuca i śledzionę w czasie eutanazji. 
	UWAGA: Zachowaj jedną część (~1 cm × 1 cm; o wadze ~200-300 mg) skóry do barwienia H&E, a drugą część do liczenia bakterii.</li>
	<li>Zebrać tkanki do probówki zbiorczej o pojemności 10 ml i umieścić je w zwykłej soli fizjologicznej na lodzie w celu zliczenia bakterii.</li>
	<li>Znormalizować masę tkanki za pomocą soli fizjologicznej i homogenizować próbki za pomocą homogenizatora tkankowego (patrz Tabela materiałów).
	<ol>
		<li>Seryjnie rozcieńczyć homogenaty tkankowe w roztworze soli fizjologicznej.</li>
		<li>Płytka 100 μl nierozcieńczonego homogenatu i wszystkie rozcieńczenia każdej próbki tkanki na płytkach agarowych z cetrymidem dla próbek pobranych od szczurów zakażonych P. aeruginosa. 
		UWAGA: Używaj płytek agarowych z mannitolem do posiewu próbek pobranych od szczurów zakażonych S. aureus.</li>
		<li>Inkubować płytki w temperaturze 37 °C w inkubatorze przez 16-18 godzin.</li>
		<li>Następnego dnia policz kolonie bakteryjne na płytkach, pomnóż przez współczynnik rozcieńczenia, aby uzyskać liczbę CFU/ml, i znormalizuj z masą tkanki, aby obliczyć tkankę CFU/g.</li>
		<li>Zastosuj oprogramowanie do analizy danych, aby wykreślić liczbę bakterii w różnych narządach w różnych punktach czasowych pobierania próbek.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wykonaj barwienie H&E poparzonej skóry, aby uwidocznić strukturę rany i szczelinę nabłonkową.
	<ol>
		<li>Za pomocą nożyczek i kleszczyków zębatych odetnij plaster skóry o wymiarach 1 cm x 1 cm od miejsca oparzenia i zanurz go w utrwalaczu (10% neutralna buforowana formalina, NBF) na 48 godzin w temperaturze pokojowej. 
		UWAGA: Zakręć pojemnikiem, aby upewnić się, że wszystkie tkanki są całkowicie zanurzone w utrwalacza, przy czym objętość utrwalacza jest 30 razy większa od objętości tkanki.</li>
		<li>Odwodnić tkankę skórną 70% (v/v) etanolem przez 72 godziny w temperaturze pokojowej.</li>
		<li>Przetworzone odwodnione próbki w blokach parafinowych, aby pociąć sekcje i zabarwić za pomocą H&E15.</li>
		<li>Cyfrowo zobrazuj poplamione szkiełka w skanerze do slajdów (patrz tabela materiałów) za pomocą obiektywu 40x.</li>
		<li>Przeanalizuj zeskanowany obraz za pomocą oprogramowania (patrz Plik uzupełniający 1 w celu przetworzenia obrazu do analizy; patrz Tabela materiałów).</li>
		<li>Zbadaj wszystkie pola barwionego odcinka skóry, aby ocenić stan naskórka, skóry właściwej, tkanki podskórnej i mięśni szkieletowych.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Peck, M., Molnar, J., Swart, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+global+plan+for+burn+prevention+and+care%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+the+World+Health+Organization%22%5BJournal%5D)">A global plan for burn prevention and care.</a> Bulletin of the World Health Organization. 87, 802-803 (2009).</li>
<li>American Burn Association. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burn+incidence+and+treatment+in+the+United+States%3A+2011+fact+sheet%5BTitle%5D)+AND+%22Chicago%3A+American+Burn+Association%22%5BJournal%5D)">Burn incidence and treatment in the United States: 2011 fact sheet.</a> Chicago: American Burn Association. , (2011).</li>
<li>Miller, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((National+burn+repository+2007+report%3A+a+synopsis+of+the+2007+call+for+data%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Burn+Care+%26+Research%22%5BJournal%5D)">National burn repository 2007 report: a synopsis of the 2007 call for data.</a> Journal of Burn Care & Research. 29 (6), 862-870 (2008).</li>
<li>Kruger, E., Kowal, S., Bilir, S. P., Han, E., Foster, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+patient+characteristics+and+number+of+procedures+as+well+as+length+of+stay+for+patients+surviving+severe+burn+injuries%3A+analysis+of+the+American+Burn+Association+National+Burn+Repository%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Burn+Care+%26+Research%22%5BJournal%5D)">Relationship between patient characteristics and number of procedures as well as length of stay for patients surviving severe burn injuries: analysis of the American Burn Association National Burn Repository.</a> Journal of Burn Care & Research. 41 (5), 1037-1044 (2020).</li>
<li>American Burn Association. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burn+incidence+and+treatment+in+the+United+States%3A+2016.+Burn+Incidence+Fact+Sheet%5BTitle%5D)+AND+%22Chicago%3A+American+Burn+Association%22%5BJournal%5D)">Burn incidence and treatment in the United States: 2016. Burn Incidence Fact Sheet.</a> Chicago: American Burn Association. , (2016).</li>
<li>Willis, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+extracellular+vesicles+released+after+severe+burn+injury+modulate+macrophage+phenotype+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Plasma extracellular vesicles released after severe burn injury modulate macrophage phenotype and function.</a> Journal of Leukocyte Biology. 111 (1), 33-49 (2022).</li>
<li>Kartchner, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-hit+wonder%3A+late+after+burn+injury%2C+granulocytes+can+clear+one+bacterial+infection+but+cannot+control+a+subsequent+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%22%5BJournal%5D)">One-hit wonder: late after burn injury, granulocytes can clear one bacterial infection but cannot control a subsequent infection.</a> Burns. 45 (3), 627-640 (2019).</li>
<li>Abdullahi, A., Amini-Nik, S., Jeschke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+burn+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Animal models in burn research.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 71 (17), 3241-3255 (2014).</li>
<li>Cai, E. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+consistent+burn+wounds%3A+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Creation of consistent burn wounds: a rat model.</a> Archives of Plastic Surgery. 41 (4), 317(2014).</li>
<li>Pessolato, A. G. T., dos Santos Martins, D., Ambrósio, C. E., Mançanares, C. A. F., de Carvalho, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis+and+amnion+reepithelialise+second-degree+burns+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%22%5BJournal%5D)">Propolis and amnion reepithelialise second-degree burns in rats.</a> Burns. 37 (7), 1192-1201 (2011).</li>
<li>Gurung, S., Škalko-Basnet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+properties+of+Carica+papaya+latex%3A+in+vivo+evaluation+in+mice+burn+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Wound healing properties of Carica papaya latex: in vivo evaluation in mice burn model.</a> Journal of Ethnopharmacology. 121 (2), 338-341 (2009).</li>
<li>Eloy, R., Cornillac, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+of+burns+in+rats+treated+with+a+new+amino+acid+copolymer+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%22%5BJournal%5D)">Wound healing of burns in rats treated with a new amino acid copolymer membrane.</a> Burns. 18 (5), 405-411 (1992).</li>
<li>Upadhyay, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+healing+efficacy+of+Sea+buckthorn+%28Hippophae+rhamnoides+L.%29+seed+oil+on+burn+wounds+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Chemical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Safety and healing efficacy of Sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) seed oil on burn wounds in rats.</a> Food and Chemical Toxicology. 47 (6), 1146-1153 (2009).</li>
<li>El-Kased, R. F., Amer, R. I., Attia, D., Elmazar, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey-based+hydrogel%3A+In+vitro+and+comparative+In+vivo+evaluation+for+burn+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Honey-based hydrogel: In vitro and comparative In vivo evaluation for burn wound healing.</a> Scientific Reports. 7 (1), 1-11 (2017).</li>
<li>Fan, G. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severe+burn+injury+in+a+swine+model+for+clinical+dressing+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Severe burn injury in a swine model for clinical dressing assessment.</a> Journal of Visualized Experiments. (141), e57942(2018).</li>
<li>Davenport, L., Dobson, G., Letson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+for+standardising+and+treating+thermal+injury+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">A new model for standardising and treating thermal injury in the rat.</a> MethodsX. 6, 2021-2027 (2019).</li>
<li>Kaufman, T., Lusthaus, S., Sagher, U., Wexler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+partial+skin+thickness+burns%3A+a+reproducible+animal+model+to+study+burn+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%22%5BJournal%5D)">Deep partial skin thickness burns: a reproducible animal model to study burn wound healing.</a> Burns. 16 (1), 13-16 (1990).</li>
<li>Casal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+supply+to+the+integument+of+the+abdomen+of+the+rat%3A+a+surgical+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery+Global+Open%22%5BJournal%5D)">Blood supply to the integument of the abdomen of the rat: a surgical perspective.</a> Plastic and Reconstructive Surgery Global Open. 5 (9), (2017).</li>
<li>Casal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+free+tissue+transfer%3A+the+rat+epigastric+free+flap%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A model of free tissue transfer: the rat epigastric free flap.</a> Journal of Visualized Experiments. (119), e55281(2017).</li>
<li>Naldaiz-Gastesi, N., Bahri, O. A., Lopez de Munain, A., McCullagh, K. J., Izeta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+panniculus+carnosus+muscle%3A+an+evolutionary+enigma+at+the+intersection+of+distinct+research+fields%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">The panniculus carnosus muscle: an evolutionary enigma at the intersection of distinct research fields.</a> Journal of Anatomy. 233 (3), 275-288 (2018).</li>
<li>Weber, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+trauma+in+rats%3A+similarities+to+humans+and+potential+pitfalls+to+consider%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Modeling trauma in rats: similarities to humans and potential pitfalls to consider.</a> Journal of Translational Medicine. 17 (1), 1-19 (2019).</li>
<li>Nguyen, J. Q. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+frequency+domain+imaging+of+burn+wounds+in+a+preclinical+model+of+graded+burn+severity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Spatial frequency domain imaging of burn wounds in a preclinical model of graded burn severity.</a> Journal of Biomedical Optics. 18 (6), 066010(2013).</li>
<li>Sobral, C., Gragnani, A., Morgan, J., Ferreira, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+proliferation+of+Pseudomonas+aeruginosa+by+KGF+in+an+experimental+burn+model+using+human+cultured+keratinocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%22%5BJournal%5D)">Inhibition of proliferation of Pseudomonas aeruginosa by KGF in an experimental burn model using human cultured keratinocytes.</a> Burns. 33 (5), 613-620 (2007).</li>
<li>Olivera, F., Bevilacqua, L., Anaruma, C., Boldrini Sde, C., Liberti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+changes+in+distant+muscle+fibers+following+thermal+injury+i+n+Wistar+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cirurgica+Brasileira%22%5BJournal%5D)">Morphological changes in distant muscle fibers following thermal injury i n Wistar rats.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 25, 525-528 (2010).</li>
<li>Davies, J. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavies%2C+JW+%22Physiological+Responses+to+Burning+Injury%22">Physiological Responses to Burning Injury</a>. , Academic Press. (1982).</li>
<li>Neely, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flagellin+treatment+prevents+increased+susceptibility+to+systemic+bacterial+infection+after+injury+by+inhibiting+anti-inflammatory+IL-10%2B+IL-12-neutrophil+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Flagellin treatment prevents increased susceptibility to systemic bacterial infection after injury by inhibiting anti-inflammatory IL-10+ IL-12-neutrophil polarization.</a> PloS One. 9 (1), e85623(2014).</li>
<li>Dunn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+detection+of+blood+nitric+oxide+reveals+a+burn-dependent+decrease+of+nitric+oxide+in+response+to+Pseudomonas+aeruginosa+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%22%5BJournal%5D)">Direct detection of blood nitric oxide reveals a burn-dependent decrease of nitric oxide in response to Pseudomonas aeruginosa infection.</a> Burns. 42 (7), 1522-1527 (2016).</li>
<li>Gouma, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+procedure+for+estimation+of+total+body+surface+area+and+determination+of+a+new+value+of+Meeh%27s+constant+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">A simple procedure for estimation of total body surface area and determination of a new value of Meeh's constant in rats.</a> Laboratory Animals. 46 (1), 40-45 (2012).</li>
<li>Dawson, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+surface-area%2Fbody-weight+relationship+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">The surface-area/body-weight relationship in mice.</a> Australian Journal of Biological Sciences. 20 (3), 687-690 (1967).</li>
<li>Moins-Teisserenc, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severe+altered+immune+status+after+burn+injury+is+associated+with+bacterial+infection+and+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Severe altered immune status after burn injury is associated with bacterial infection and septic shock.</a> Frontiers in Immunology. 12, 529(2021).</li>
<li>Robins, E. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppression+of+the+burned+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Nursing+Clinics%22%5BJournal%5D)">Immunosuppression of the burned patient.</a> Critical Care Nursing Clinics. 1 (4), 767-774 (1989).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

Przedstawiono kilka modeli oparzeń w celu zbadania patofizjologii oparzeń 8,12,16,17. W niniejszym badaniu wykorzystaliśmy model szczurzy w celu opracowania prostego i powtarzalnego protokołu wywoływania oparzenia o pełnej grubości, a następnie infekcji bakteryjnej, aby symulować zakażony uraz oparzenia u pacjentów. Wybór szczura jako modelu zwierzęcego do naśladowania warunków ludzkich opiera ...

Urazy oparzeniowe należą do najbardziej niszczycielskich form urazów, a śmiertelność sięga 12% nawet w specjalistycznych centrach leczenia oparzeń1,2,3. Według niedawno opublikowanych raportów, ~486 000 pacjentów z oparzeniami wymaga opieki medycznej rocznie w Stanach Zjednoczonych, z prawie 3 500 zgonami1,2,3,4,5,6. Oparzenie stanowi poważne wyzwanie dla układu odpornościowego pacjenta i tworzy znaczną otwartą ranę, która goi się powoli, pozostawiając ich podatnych na kolonizację skórną, płucną i ogólnoustrojową przez szpitalne, oportunistyczne bakterie. Rozregulowanie immunologiczne w połączeniu z infekcją bakteryjną wiąże się ze zwiększoną zachorowalnością i śmiertelnością u pacjentów z oparzeniami7.
Model oparzeń i infekcji zwierząt jest niezbędny do badania patogenezy infekcji bakteryjnych po uszkodzeniu skóry i tłumieniu immunologicznym związanym z oparzeniami. Takie modele umożliwiają projektowanie i ocenę nowych metod leczenia zakażeń bakteryjnych u pacjentów z oparzeniami. Szczury i ludzie mają podobne cechy fizjologiczne i patologiczne skóry, które zostały wcześniej udokumentowane8. Ponadto szczury są mniejsze, dzięki czemu są łatwiejsze w obsłudze, tańsze oraz łatwiejsze do zdobycia i utrzymania niż większe modele zwierzęce.
Te cechy sprawiają, że szczury są idealnym modelowym zwierzęciem do badania oparzeń i infekcji9. Niestety, technika indukcji spalania jest niespójna i często minimalnie opisana10,11,12,13,14. Niniejszy protokół ma na celu opracowanie prostej, opłacalnej i powtarzalnej procedury tworzenia spójnego oparzenia o pełnej grubości w modelu szczurzym, który symuluje scenariusz kliniczny i może być wykorzystany do oceny supresji immunologicznej i infekcji bakteryjnej.

<table><tbody><tr><td>Strzykawka 1 ml</td><td>BD, USA</td><td>309597</td><td>Służy do wstrzykiwania środka przeciwbólowego</td></tr><tr><td>1,7 ml Microtube</td><td>Olympus, USA</td><td>24-282</td><td>Służy do przenoszenia morfiny</td></tr><tr><td>10% NBF</td><td>VWR, USA</td><td>16004-115</td><td>Służy do mocowania kawałka skóry do barwienia</td></tr><tr><td>30 ml strzykawki</td><td>BD, USA</td><td>302832</td><td>Służy do wstrzykiwania roztworu mleczanu Ringera</td></tr><tr><td>70% alkohol etylowy</td><td>Fischer Naukowy, USA</td><td>BP28184</td><td></td></tr><tr><td>Patologia cyfrowa Aperio AT2&nbsp; Skaner slajdów z oprogramowaniem ImageScope</td><td>Aperio, Technologies Inc., Vista, CA, USA</td><td>n/a</td><td>Skanowanie H & E preparaty i analiza</td></tr><tr><td>Płytki agarowe z cetrymidem</td><td>BD, USA</td><td>285420</td><td>Płytki z selektywnymi podłożami do wzrostu Pseudomonas aeruginosa</td></tr><tr><td>Pręty miedziane</td><td>nie dotyczy</td> nie <td>dotyczy</td><td>Służy do wywoływania oparzeń</td></tr><tr><td>Aplikatory z bawełnianą końcówką</td><td>OMEGA Zaopatrzenie chirurgiczne, USA</td><td>4225-IMC</td><td>Służy do nakładania maści do oczu</td></tr><tr><td>Golarka elektryczna</td><td>Oster, USA</td><td>Golden A5</td><td>Służy do usuwania włosów po stronie grzbietowej</td></tr><tr><td>Lubrykant do oczu</td><td>Dechra, Wielka Brytania</td><td>n/a</td><td>Środek zwilżający oczy zapewniający długotrwały komfort i zapobiegający wysuszeniu oczu</td></tr><tr><td>Puchowe wypełnione podkładki</td><td>Medline, USA</td><td>MSC281225</td><td>Stosowany w procedurze oparzeń</td></tr><tr><td>Kleszcz</td><td>FST</td><td>11027-12</td><td>Służy do przytrzymywania kawałka skóry</td></tr><tr><td>Gąbki z gazy</td><td>Oasis, USA</td><td>PK412</td><td>Służy do czyszczenia nałożonego kremu naair od strony grzbietowej&nbsp;</td></tr><tr><td>Rękawice żaroodporne</td><td>nie dotyczy</td><td></td><td>Służy do przytrzymywania rozgrzanych prętów miedzianych</td></tr><tr><td>Analizator hematologiczny</td><td>Laboratoria IDEXX, USA</td> Komora indukcyjna <td>ProCyte Dx</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Kent Scientific, USA</td><td>vetFlo-0730</td><td>Służy do znieczulania zwierząt</td></tr><tr><td>Strzykawka insulinowa</td><td>BD, USA</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Pivetal, USA</td><td>NDC46066-755-04</td><td>Służy do znieczulania szczurów w celu wywołania utraty przytomności</td></tr><tr><td>Parownik izofluranu</td><td>n/a</td> nie <td>dotyczy</td><td></td></tr><tr><td>mleczanowego roztworu ringera</td><td>icumedical, USA</td><td>NDC0990-7953-09</td><td>Służy do resuscytacji szczurów</td></tr><tr><td>Rozsiewacz w kształcie litery L</td><td>Fischer Scientific, USA</td><td>14-665-230</td><td></td></tr><tr><td>Mannitol Agar</td><td>BD, USA</td><td>211407</td><td>Selektywne płytki do pożywek Staphylococcus aureus growth</td></tr><tr><td>Probówki Minicollect (K2EDTA)</td><td>greiner bio-one, USA</td><td>450480</td><td>Służy do pobierania krwi</td></tr><tr><td>Morfina</td><td>Mallinckrodt, Wielka Brytania</td><td>NDC0406-8003-30</td><td>Ta analgezja była stosowana w celu wywołania niezdolności do odczuwania bólu po oparzeniu</td></tr><tr><td>Muller Hinton Bulion</td><td>BD, USA</td><td>275730</td><td></td></tr><tr><td>Muller Hinton II Agar</td><td>BD, Stany Zjednoczone</td><td>211438</td><td></td></tr><tr><td>Emulsja do depilacji Nair</td><td>Nair, USA</td><td>n/a</td><td>Służy do usuwania resztek włosów po stronie grzbietowej</td></tr><tr><td>Igła 23 G</td><td>BD, USA</td> 305193 <td></td><td>Służy do wstrzykiwania roztworu Ringera mleczanowego</td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna Sól fizjologiczna</td><td></td><td></td> Spektrofotometr <td></td></tr><tr><td></td><td>ThermoScientific, USA</td><td>Genesys 30</td><td></td></tr><tr><td>Szczury Sprague-Dawley, samiec i samica</td><td>Charles River Labs</td><td>n/a</td> w <td>wieku 7-9 tygodni do indukcji oparzeń</td></tr><tr><td>Nożyczki chirurgiczne</td><td>FST</td><td>14501-14</td><td>Służy do wycinania pożądanego kawałka skóry</td></tr><tr><td>Probówki do pobierania tkanek</td><td>Globe Scientific</td><td>220101236</td><td></td></tr><tr><td>Homogenizator tkanek</td><td>Kinematica, Inc, USA</td><td>POLYTRON PT2100</td><td>Służy do homogenizacji próbek tkanek</td></tr><tr><td>Łaźnia wodna</td><td>Fischer Scientific, USA</td><td>n/a</td><td>Służy do wywoływania oparzeń</td></tr><tr><td>Obciążona poduszka grzewcza</td><td>Comfytemp, USA</td><td>n/a</td><td>Stosowany podczas zabiegu w celu utrzymania ciepła ciała szczura</td></tr></tbody></table>

model oparzeń szczurów do badania oparzeń termicznych skóry o pełnej grubości i infekcji

Rat Burn Model to Study Full-Thickness Cutaneous Thermal Burn and Infection

Metodologie indukcji oparzeń są niekonsekwentnie opisane w modelach szczurzych. Jednolity model rany oparzeniowej, który reprezentuje scenariusz kliniczny, jest niezbędny do przeprowadzenia powtarzalnych badań oparzeń. Obecny protokół opisuje prostą i powtarzalną metodę tworzenia oparzeń o pełnej grubości ~20% całkowitej powierzchni ciała (TBSA) u szczurów. W tym przypadku pręt miedziany o średnicy 22,89cm2 (5,4 cm) podgrzany w temperaturze 97 °C w kąpieli wodnej został nałożony na powierzchnię skóry szczura w celu wywołania oparzenia. Miedziany pręt o wysokiej przewodności cieplnej był w stanie rozproszyć ciepło głębiej w tkance skórnej, aby wywołać oparzenie o pełnej grubości. Analiza histologiczna wykazuje osłabienie naskórka z uszkodzeniem krzepliwym na całej grubości skóry właściwej i tkanki podskórnej. Ponadto model ten jest reprezentatywny dla sytuacji klinicznych obserwowanych u hospitalizowanych pacjentów z oparzeniami po oparzeniach, takich jak dysregulacja immunologiczna i infekcje bakteryjne. Model może podsumować ogólnoustrojową infekcję bakteryjną zarówno przez bakterie Gram-dodatnie, jak i Gram-ujemne. Podsumowując, w artykule przedstawiono łatwy do nauczenia się i solidny model oparzeń szczurów, który naśladuje sytuacje kliniczne, w tym dysregulację immunologiczną i infekcje bakteryjne, co jest bardzo przydatne w opracowywaniu nowych miejscowych antybiotyków stosowanych na rany oparzeniowe i infekcje.

Przedstawiony tutaj protokół jest wysoce powtarzalny i doprowadził do powstania oparzenia trzeciego stopnia o pełnej grubości skóry u szczurów. Rana oparzeniowa po indukcji oparzenia ma woskowato-biały kolor (Rycina 2B). Kolor rany oparzeniowej zmienił się z białego na brązowy w ciągu 72 h po oparzeniu (Rycina 2B-E).
Analiza histologiczna potwierdziła pełnowarstwowe oparzenie (głębokość &gt;2,61 mm w ...

Model naśladujący kliniczny scenariusz oparzeń i infekcji jest niezbędny do prowadzenia dalszych badań nad oparzeniami. Niniejszy protokół przedstawia prosty i powtarzalny model zakażenia oparzeniami szczurów, porównywalny do tego u ludzi. Ułatwia to badanie oparzeń i infekcji po oparzeniu w celu opracowania nowych miejscowych antybiotyków.

Model oparzeń szczurów do badania oparzeń termicznych skóry o pełnej grubości i infekcji

Burn induction methodologies are inconsistently described in rat models. A uniform burn wound model, which represents the clinical scenario, is necessary ...

Ten model oparzeń jest w stanie podsumować sytuacje kliniczne obserwowane u hospitalizowanych pacjentów z oparzeniami po oparzeniach, takich jak dysregulacja immunologiczna i infekcje bakteryjne. Ta metoda wywoływania oparzeń u szczurów jest łatwa do nauczenia i może być wykorzystana do opracowania i oceny nowych leków tropikalnych na rany oparzeniowe i infekcje. Model ten można wykorzystać do oceny gojenia się ran, a także postępu infekcji bakteryjnej w miejscu oparzenia.Ta metoda indukcji oparzeń może być również stosowana w modelach mysich i innych modelach zwierzęcych do indukcji oparzeń oraz do badania infekcji bakteryjnej ran oparzeniowych. Rozpocznij przygotowanie znieczulonego szczura do oparzenia, przesuwając go po poduszce grzewczej w pozycji leżącej. Za pomocą aplikatora z bawełnianą końcówką nałóż lubrykant do oczu na oba oczy, aby zapobiec wysuszeniu rogówki.Ogol obszar grzbietowy szczura za pomocą elektrycznej maszynki do strzyżenia w dużym prostokącie od łopatek w dół do podstawy ogona. Zetrzyj luźne włoski z ogolonego obszaru za pomocą chusteczki nasączonej solą fizjologiczną. Nałóż balsam do depilacji na ogolony obszar za pomocą aplikatora z bawełnianą końcówką.Po trzech minutach dwukrotnie przetrzyj obszar wilgotną gąbką z gazy, aby usunąć balsam i zapobiec podrażnieniu skóry. Wyłączyć izofluran i usunąć stożek nosowy przed umieszczeniem szczura w klatce ratunkowej. W dniu eksperymentu z oparzeniami ustaw temperaturę łaźni wodnej na 97 stopni Celsjusza i na godzinę przed eksperymentem umieść 420 gramów czterech miedzianych prętów w łaźni wodnej.Gdy szczur nie reaguje na szczypanie palców u nóg wszystkich kończyn, połóż go na poduszce grzewczej w pozycji leżącej i wstrzyknij 20 miligramów morfiny na kilogram masy ciała przez dootrzewnowy lub korzeń IP, w celu leczenia bólu. Następnie sprawdź temperaturę łaźni wodnej. Ustaw minutnik i załóż rękawice żaroodporne.Weź jeden rozgrzany pręt miedziany z łaźni wodnej i dotykaj nim okolicy grzbietu przez siedem sekund. Natychmiast zastosuj kolejne trzy oparzenia jedno po drugim, używając jednego pręta na miejsce oparzenia i wytwórz około 20% całkowitego oparzenia powierzchniowego ciała. Po oparzeniu należy reanimować zwierzę, wstrzykując 0,1 mililitra na gram masy ciała roztworu Ringera z mleczanami drogą IP.Po zakończeniu wyłącz izofluran. Usuń stożek nosowy i umieść szczura na macie grzewczej. W dniu oparzenia i infekcji odwirować kulturę Pseudomonas aeruginosa lub Staphylococcus aureus oddzielnie w ilości 4 000 g przez 5 minut.Umyj osad zwykłą solą fizjologiczną przed rozcieńczeniem osadu solą fizjologiczną do 0,1 gęstości optycznej przy 600 nanometrach. Rozcieńczyć 200 mikrolitrów zawiesiny bakteryjnej 800 mikrolitrami soli fizjologicznej i uzyskać pożądane inokulum bakteryjne 2 na 10 do 7 jednostek tworzących kolonię lub CFU na mililitr. 15 minut po oparzeniu wstrzyknąć podskórnie 50 mikrolitrów rozcieńczonego inokulum bakterii w pobliżu obszaru oparzenia za pomocą igły o rozmiarze 29.Umieść szczura na poduszce grzewczej w celu odzyskania sprawności. Po 15 do 20 minutach przenieś odzyskane zwierzę do czystej klatki. Bezpośrednio po oparzeniu należy ocenić morfologicznie uraz skóry pod względem koloru i marginesu.Po eutanazji przeanalizuj pełną morfologię krwi, aby określić wpływ indukcji oparzeń na układ odpornościowy gospodarza. Zbierz tkankę uśpionego szczura do 10-mililitrowej probówki do pobrania. Homogenizować próbki za pomocą homogenizatora tkankowego i seryjnie rozcieńczać homogenaty tkankowe w roztworze soli fizjologicznej.Na płytkach z agarem z cetrymidu umieścić 100 mikrolitrów nierozcieńczonego homogenatu i wszystkie rozcieńczenia każdej próbki tkanki pobranej od szczurów zakażonych P.Aeruginosa. Po inkubacji płytek przez 16 do 18 godzin w temperaturze 37 stopni Celsjusza w inkubatorze, policz kolonie bakterii na płytkach. Pomnóż je przez współczynnik rozcieńczenia, aby uzyskać CFU na mililitr liczby i znormalizuj go z masą tkanki, aby obliczyć tkankę programu CFU.Ten wysoce powtarzalny protokół spowodował oparzenie trzeciego stopnia pełnej grubości u szczurów. Kolor oparzenia zmienił się z białego na brązowy w ciągu 24 godzin do 72 godzin po oparzeniu. W analizie histologicznej próbki skóry od poparzonych zwierząt wykazały uszkodzenia we wszystkich warstwach po 24, 48 i 72 godzinach po oparzeniu, podczas gdy skóra bez oparzeń wykazywała wyraźne rozróżnienie warstw naskórka, skóry właściwej i tkanki podskórnej.W poparzonych próbkach skóry zaobserwowano zniszczenie warstwy naskórka oraz uszkodzenie pełnej grubości skóry właściwej z podskórną tkanką tłuszczową i mięśniami szkieletowymi. W ciągu 24 godzin po spaleniu pełne oparzenie miało głębokość ponad 2,61 milimetra. W ocenie klirensu bakteryjnego zaobserwowano regenerację bakteryjną u wszystkich szczurów z oparzeniami.Podczas zakażenia P.aeruginosa PAO1 liczba bakterii odzyskanych 24 godziny po zakażeniu ze skóry poparzonego szczura była mniejsza niż początkowe inokulum 1 na 10 do 6. CFU. Jednak wzrosła 48 i 72 godziny po zakażeniu. W zakażeniu S. aureus ATC25923 zaobserwowano wzrost o 2 log 10 we wszystkich punktach czasowych skóry w porównaniu z początkowym inokulum, co sugeruje, że powstanie zakażenia S. aureus nastąpiło w wyniku aktywnej replikacji w tkankach.Tkanka podskórna i mięśnie wykazywały większe obciążenie bakteryjne niż płuca i śledziona. Dane wykazały, że u poparzonych szczurów rozwinęła się infekcja ogólnoustrojowa 24 godziny po inokulacji P.aeruginosa i 48 godzin po inokulacji S.aureus. Całkowicie usuń sierść z grzbietu szczura i utrzymuj temperaturę oraz czas indukcji spalania, jak wspomniano w protokole.Resztki włosów i różna temperatura prętów miedzianych mogą wpływać na jakość spalania. Model oparzeń szczurów może być badany w celu oceny nowych miejscowych metod leczenia zakażeń ran oparzeniowych oraz oceny różnych opatrunków na rany.

rat-burn-model-to-study-full-thickness-cutaneous-thermal-burn

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Źródło: Wang, Y. i in. In Vivo Badanie terapii przeciwdrobnoustrojowym niebieskim światłem w leczeniu wieloopornych infekcji oparzeń Acinetobacter baumannii z wykorzystaniem obrazowania bioluminescencji. J. Vis. Exp. (2017)Ten film pokazuje, jak zidentyfikować infekcję oparzeniową w modelu myszy, stosując podgrzany mosiężny blok, a następnie patogenne szczepienie bakteryjne. Bakterie kolonizują odsłoniętą macierz zewnątrzkomórkową i tworzą biofilm, umożliwiając badania in vivo interakcji...

Ustanowienie mysiego modelu zakażeń oparzeń patogennymi bakteriami

Dokładne naśladowanie sposobu leczenia oparzeń wymaga współgrania między obserwacją kliniczną a badaniami na modelach zwierzęcych. W tym badaniu ustalono model ciężkiego oparzenia u świń w celu oceny eksperymentalnego opatrunku w warunkach fizjologicznych i patofizjologicznych.

Ciężkie oparzenia w modelu trzody chlewnej do klinicznej oceny opatrunku

Celem tego badania było opracowanie mysiego modelu gojenia się ran po oparzeniach. Oparzenie termiczne wywołano na skórze grzbietowej myszy za pomocą podgrzanego mosiężnego szablonu. Spaloną tkankę oczyszczono i pokryto przeszczepem skóry pobranym z ogona genetycznie podobnej myszy dawcy.

Mysi model rany oparzeniowej zrekonstruowany za pomocą allogenicznego przeszczepu skóry

Przewlekłe rany, które są odporne na antybiotyki, stanowią poważne zagrożenie dla systemu opieki zdrowotnej. Infekcje biofilmem są uporczywe i wrogie i mogą powodować nieprawidłowe zamykanie się ran. Przedstawiamy klinicznie istotny model świń z przewlekłymi ranami pełnej grubości zakażonymi biofilmem. Model ten jest przydatny zarówno w badaniach mechanistycznych, jak i w testowaniu interwencji.

Świński model zakażenia biofilmem i niewidocznymi ranami

Ten protokół opisuje powtarzalny model ran oparzeniowych o dużej głębokości u miniświnek z Jukatanu.

Model oparzeń świń do badania procesu gojenia się ran po oparzeniach o wielu głębokościach

Przedstawiono uproszczony protokół do tworzenia modelu gojenia ran oparzeniowych u myszy za pomocą cyfrowego urządzenia grzewczego. Przypominające szachownicę miejsca eksperymentalne utworzone na skórze ułatwiają dalszą analizę funkcjonalną w teście gojenia się ran.

Szachownica gojącego rany po oparzeniach model myszy oparty na cyfrowym urządzeniu grzewczym

Optymalizacja eksperymentalnego modelu chomika w leiszmaniozie skórnej poprzez wstrzyknięcie promastigot Leishmania do skóry grzbietu. Podejście to jest przydatne podczas inokulacji, obserwacji, charakteryzacji zmian, stosowania leczenia oraz pobierania próbek klinicznych. Zachowane zostają zdolność poruszania się, poszukiwanie pokarmu i wody, zabawa oraz aktywności społeczne.

Leiszmanioza skóry na grzbietowej skórze chomików: użyteczny model do przesiewowych badań leków przeciwleiszmanialnych

Makrofagi pochodzące z monocytów są ważnymi komórkami wrodzonego układu odpornościowego. W tym miejscu opisujemy łatwy w użyciu model in vitro do generowania tych komórek. Korzystając z wirowania gradientowego, izolacji ujemnych kulek i określonych warunków hodowli komórek, można wygenerować makrofagi pochodzące z monocytów do badań fenotypowych i funkcjonalnych.

Model in vitro do badania heterogeniczności różnicowania i polaryzacji ludzkich makrofagów

Larwa woskowej Galleria mellonella została niedawno ustanowiona jako model in vivo do badania infekcji Legionella pneumophila. W tym miejscu demonstrujemy podstawowe techniki charakteryzujące patogenezę Legionelli w larwach, w tym inokulację, pomiar zjadliwości i replikacji bakterii, a także ekstrakcję i analizę zakażonych hemocytów.

Wykorzystanie Galleria mellonella jako organizmu modelowego do badania zakażenia Legionella pneumophila

Neisseria meningitidis to specyficzny dla człowieka patogen, który infekuje naczynia krwionośne. W tym protokole ludzkie mikronaczynia są wprowadzane do myszy poprzez przeszczepienie ludzkiej skóry myszom z obniżoną odpornością. Bakterie w dużym stopniu przylegają do ludzkich naczyń, prowadząc do uszkodzenia naczyń krwionośnych i rozwoju wysypki plamistej zwykle obserwowanej u ludzi.

Humanizowany model myszy do badania infekcji bakteryjnych ukierunkowanych na mikrokrążenie

Poznaj model oparzeń szczurów do badania infekcji bakteryjnych i oceny nowych terapii miejscowych. Metoda umożliwia analizę gojenia ran oraz dynamiki zakażenia w tkankach.

Model oparzeń szczurów do badania oparzeń termicznych skóry o pełnej grubości i infekcji

Przeglądaj więcej filmów