Źródło i droga zanieczyszczenia alkaloidami pirolizydyny w próbkach herbaty

Opracowanie metody wykrywania 15 alkaloidów pirolizydynowych w chwastach, glebie, świeżych liściach herbaty i próbce suchej herbaty może zapewnić wsparcie techniczne w badaniu źródła zanieczyszczenia alkaloidami pirolizydyny w herbacie. W porównaniu z ekstrakcją do fazy stałej, metoda adsorbentowa dla próbki gleby może zaoszczędzić czas, obniżyć koszty i zapewnić lepszy odzysk do analizy alkaloidów pirolizydynowych. Aby rozpocząć ekstrakcję na podgrzanych suszonych produktach herbacianych, świeżych liściach herbaty lub chwastach, zważ jeden gram próbki w 50-mililitrowej probówce wirówkowej i dodaj do probówki 10 mililitrów 0,1 mola na litr roztworu kwasu siarkowego.

Następnie wiruj próbkę przez dwie minuty, jeśli ma być analizowana za pomocą ekstrakcji do fazy stałej, podczas gdy przez jedną minutę, jeśli to samo ma być analizowane za pomocą czyszczenia adsorbentu. Następnie poddaje próbkę ekstrakcji ultradźwiękowej przez 15 minut, a następnie odwirowuje w temperaturze 9,390 G przez 10 minut w temperaturze pokojowej. Następnie za pomocą zakraplacza z plastikową końcówką przenieś roztwór supernatantu do 50-mililitrowej probówki wirówkowej.

Po dwukrotnym wykonaniu ekstrakcji połączyć supernatanty w probówce. Aby rozpocząć ekstrakcję na przygotowanej glebie, zważ jeden gram próbki w 50-mililitrowej probówce wirówkowej. Dodaj 0,1 mililitra 0,1 mola na litr roztworu cytrynianu trisodowego, aby dostosować pH gleby do 6,0 i odstawić próbkę na dwie minuty.

Następnie dodaj 10 mililitrów 0,1 mola na litr roztworu metanolu kwasu siarkowego do probówki i wiruj próbkę przez dwie minuty, a następnie wstrząsaj przez 30 minut. Następnie wykonuj ekstrakcję ultradźwiękową przez 30 minut, jak pokazano wcześniej. Następnie odwirować próbkę o sile 9,390 G przez 10 minut.

I za pomocą zakraplacza z plastikową końcówką przenieś supernatant do 50-mililitrowej probówki wirówkowej. Po dwukrotnym wykonaniu ekstrakcji połączyć supernatanty. Aktywuj ekstrakcję do fazy stałej lub wkład SPE pięcioma mililitrami metanolu, a następnie pięcioma mililitrami wody dejonizowanej.

Po aktywacji dodać 10 mililitrów supernatantu z ekstrakcji próbki do wstępnie aktywowanego wkładu. Po tym, jak poziom roztworu próbki dotrze do górnej warstwy wkładów, wymyj matrycę próbki pięcioma mililitrami 1% roztworu kwasu mrówkowego, a następnie pięcioma mililitrami metanolu i wyrzuć eluenty. Następnie eluuj anality pięcioma mililitrami metanolu zawierającego 0,5% wody amoniakalnej.

Przefiltruj eluent przez filtr membranowy o grubości 0,22 mikrona w celu analizy za pomocą UPLC-MS/MS. Aby przeprowadzić oczyszczanie próbki za pomocą adsorbentu, należy przygotować 10-mililitrową probówkę wirówkową z adsorbentem naruszającym GCB, PSA i C18 w stosunku od 10 do 20 do 15 miligramów. Następnie dodać dwa mililitry supernatantu otrzymanego po poddaniu próbki obróbce.

Następnie należy wirować mieszaninę próbki i adsorbentu przez jedną minutę i odwirować przy 9,390 G przez osiem minut w temperaturze pokojowej. Przefiltrować jeden mililitr powstałego supernatantu przez filtr membranowy o średnicy 0,22 mikrona do fiolki z próbką przed analizą za pomocą UPLC-MS/MS. W badaniu uzyskano wyższy procent odzysku 15 alkaloidów pirolizydynowych ze świeżych liści herbaty, suszonych próbek herbaty i chwastów przy użyciu techniki oczyszczania adsorbentowego w porównaniu z metodą wkładu SPE.

Odzysk alkaloidów w glebie przy użyciu oczyszczania adsorpcyjnego wynosił od 79 do 111%W świeżych liściach herbaty zebranych z pięciu miejsc pobierania próbek wykryto wyższą zawartość N-tlenku pośredniej niż senecjoniny. Senecioniny nie wykryto w dojrzałych liściach z pierwszego i drugiego miejsca pobierania próbek. Spośród 11 alkaloidów pirolizydynowych w glebie wykryto tylko N-tlenek pośredni, podczas gdy senecjonina i N-tlenek pośredni wykryto w różnych częściach roślin herbaty.

Dodatkowo stwierdzono, że zawartość N-tlenku pośredniego w jednym pąku z dwoma liśćmi jest najwyższa. Próbując tego najpierw, najważniejszą rzeczą jest dodanie 0,1 mililitra 0,1 mola na litr roztworu cytrynianu trisodowego, aby dostosować pH gleby do 6,0. Metoda ta może być stosowana do analizy alkaloidów w innych roślinach jadalnych, a także zapewnia naturalną technikę badania źródła alkaloidów w nich.