Name: Źródło i droga zanieczyszczenia alkaloidami pirolizydyny w próbkach herbaty (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: Poznaj metodę wykrywania alkaloidów pirolizydynowych w herbacie i glebie. Technika adsorpcyjna zapewnia lepszą efektywność i niższe koszty niż ekstrakcja SPE.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Przyrodniczą Chin (32102244), Narodowy Projekt Oceny Jakości i Bezpieczeństwa Produktów Rolnych (GJFP2021001), Naturalną Fundację Naukową Prowincji Anhui (19252002) oraz USDA (HAW05020H).

Na potrzeby niniejszego badania zebrano następujące gatunki chwastów: Ludwigia prostrata Roxb., Murdannia triquetra (Wall. ex C. B. Clarke) Bruckn., Ageratum conyzoides L., Chenopodium ambrosioides, Trachelospermum jasminoide (L.) Lem., Ageratum conyzoides L., Emilia sonchifolia (L.) DC, Ageratum conyzoides L. i Crassocephalum crepidioides (Benth.) S. Moore'a. Świeże liście herbaty zostały wybrane z różnych drzew herbacianych Longjing 43#, a próbki suszonej herbaty były dostępną na rynku herbatą przetworzoną zgodnie z procesem produkcji zielonej herbaty (patrz Tabela materiałów).
1. Pobieranie próbek
<ol>
	<li>Zbierz 40 prawdziwych próbek.
	<ol>
		<li>Zbierz losowo 10 chwastów, 10 gleb i 10 świeżych liści herbaty z wielu ogrodów herbacianych. 
		UWAGA: Na potrzeby niniejszego badania pobrano próbki gleby z głębokości 20 cm w ilości próbki 200 g.</li>
		<li>Losowo zbierz 10 suszonych produktów herbacianych (250 g) z supermarketu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zbierz próbki chwastów, gleby i świeżych liści herbaty, aby zbadać źródło zanieczyszczenia PA w herbacie.
	<ol>
		<li>Ustaw pięć punktów pobierania próbek w tym samym ogrodzie herbacianym, z trzema powtórzeniami w każdym punkcie.</li>
		<li>Zbieraj próbki chwastów Ageratum conyzoides L. o najwyższej zawartości PA powszechnie występującej w ogrodach herbacianych. 
		UWAGA: Ilość próbki w niniejszym badaniu wynosiła 250 g.</li>
		<li>Zbierz próbki gleby. 
		UWAGA: Próbki gleby stanowiły glebę ryzosferyczną A. conyzoides na głębokości 20 cm i ilości próbki 200 g.</li>
		<li>Zbierz świeże liście herbaty z różnych części krzewów herbacianych, w tym jednego pąka z dwoma liśćmi, jednego pąka z trzema liśćmi, jednego pąka z czterema liśćmi i dojrzałych liści. 
		UWAGA: Ilość próbki wynosiła 250 g.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Przykładowe traktowanie
<ol>
	<li>Próbki należy poddać wstępnej obróbce, wykonując poniższe czynności.
	<ol>
		<li>Zmielić wysuszone próbki herbaty i gleby za pomocą młynka, sproszkowane próbki przepuścić przez sito o oczkach 200 i przechowywać w temperaturze -20 °C. 
		UWAGA: Suszona herbata była dostępnym na rynku produktem herbacianym (patrz Tabela materiałów), więc była bezpośrednio rozdrabniana i przesiewana do przechowywania. Próbki gleby (200 g) umieszczono w przewiewnym miejscu w ciemności do wyschnięcia na powietrzu przez około tydzień.</li>
		<li>Homogenizować chwasty i świeże liście herbaty za pomocą homogenizatora i przechowywać je w temperaturze -20 °C.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wykonaj próbną obróbkę suszonych produktów herbacianych, świeżych liści herbaty i chwastów.
	<ol>
		<li>Zważyć 1,00 g każdej próbki (suszone produkty herbaciane, świeże liście herbaty i chwasty) i umieścić ją w probówkach wirówkowych o pojemności 50 ml.</li>
		<li>Dodać 10 ml roztworu kwasu siarkowego o stężeniu 0,1 mol/l i wirować przez 2 minuty w celu ekstrakcji do fazy stałej (przy użyciu wkładu SPE, patrz tabela materiałów) i 1 minutę w celu oczyszczenia adsorbentu. Przeprowadzić ekstrakcję ultradźwiękową23 przez 15 minut, a następnie odwirować przez 10 minut z prędkością 9 390 x g w temperaturze pokojowej. 
		UWAGA: Moc oscylatora ultradźwiękowego wynosiła 290 W, częstotliwość oscylacji wynosiła 35 kHz, a temperatura była ustawiona na 30 °C.</li>
		<li>Przenieść supernatant do probówki wirówkowej o pojemności 50 ml z zakraplaczem z plastikową końcówką.</li>
		<li>Wykonaj powyższe kroki, aby powtórzyć ekstrakcję raz. Połączyć oba supernatanty.
		<ol>
			<li>Aktywować wkłady SPE za pomocą 5 ml metanolu i 5 ml wody dejonizowanej. Dodać 10 ml supernatantu do wstępnie aktywowanego wkładu i przeprowadzić czyszczenie próbki.</li>
			<li>Po tym, jak poziom roztworu próbki osiągnie górną warstwę wkładów, wymyj anality 5 ml 1% roztworu kwasu mrówkowego, a następnie 5 ml metanolu. Wyrzucić eluat.</li>
			<li>Eluować za pomocą 5 ml metanolu (zawierającego 0,5% wody amoniakalnej), przefiltrować eluat przez filtr membranowy 0,22 μm i przeanalizować za pomocą UPLC-MS/MS (patrz tabela materiałów).</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Przeprowadzić oczyszczanie próbki za pomocą adsorbentów.
		<ol>
			<li>Pobrać 2 ml supernatantu (krok 2.2.4) do probówki wirówkowej o pojemności 10 ml wypełnionej adsorbentami GCB:PSA:C18 (10 mg:20 mg:15 mg, patrz tabela materiałów), wirować przez 1 minutę i wirować przy 9,390 x g przez 8 minut w temperaturze pokojowej.</li>
			<li>Przepuścić 1 ml supernatantu przez filtr membranowy 0,22 μm przed analizą za pomocą UPLC-MS/MS.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przeprowadzić obróbkę próbek gleby.
	<ol>
		<li>Zważyć próbkę gleby o masie 1,00 g. Umieść go w probówce wirówkowej o pojemności 50 ml i dodaj 0,1 ml roztworu cytrynianu trisodowego o stężeniu 0,1 mol/l (patrz tabela materiałów), aby dostosować wartość pH gleby do 6,0.</li>
		<li>Odstawić na 2 minuty, a następnie dodać 10 ml roztworu metanolu kwasu siarkowego o stężeniu 0,1 mol/l, wirować przez 2 minuty i wstrząsać przez 30 minut, a następnie przeprowadzić ekstrakcję ultradźwiękową przez 30 minut.</li>
		<li>Odwirować przy 9,390 x g przez 10 minut i przenieść supernatant do probówki wirówkowej o pojemności 50 ml z zakraplaczem z plastikową końcówką.</li>
		<li>Postępuj zgodnie z powyższymi krokami, aby powtórzyć ekstrakcję i dwukrotnie połączyć supernatant. 
		UWAGA: Metoda oczyszczania była taka sama jak w kroku 2.2.5.1 i kroku 2.2.5.2.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Analiza instrumentalna
<ol>
	<li>Wykryj 15 PA w próbkach suszonej herbaty, świeżych liściach herbaty, chwastach i glebie (próbki z kroku 2) za pomocą dostępnego na rynku systemu UPLC-MS/MS (2,1 mm x 100 mm, 1,8 μm) (patrz tabela materiałów).</li>
	<li>Ustawić temperaturę kolumny na 40 °C, natężenie przepływu na 0,250 ml/min, a objętość wtrysku na 3 μl.</li>
	<li>Ustaw fazę ruchomą A: metanol (zawierający 0,1% kwasu mrówkowego + 1 mmol/l mrówczanu amonu) i fazę ruchomą B: woda (zawierająca 0,1% kwasu mrówkowego + 1 mmol/l mrówczanu amonu).</li>
	<li>Ustaw procedurę elucji gradientowej: 10% A od 0,0 min do 0,25 min, 10%-30% A od 0,25 min do 6,0 min, 30%-40% A od 6,0 min do 9,0 min, 40%-98% A od 9,0 min do 9,01 min, która była utrzymywana przez 1,9 min i 98%-100% A od 11,0 min do 11,1 min, która była utrzymywana przez 2,9 min.</li>
	<li>Ustaw parametry spektrometru masowego: tryb jonizacji, źródło jonów dodatnich w elektrorozpylaniu (ESI+); ciśnienie rozpylacza, 7,0 bar; napięcie kapilarne, 4,0 kV; przepływ wsteczny w otworze stożkowym, 150 l/h; przepływ rozpuszczalnika, 800 l/h; temperatura rozpuszczalnika, 400 °C; przepływ gazu uderzeniowego, 0,25 mL/min.</li>
</ol>

<ol><li>Schramm, S., Kohler, N., Rozhon, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyrrolizidine+alkaloids%3A+Biosynthesis%2C+biological+activities+and+occurrence+in+crop+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Pyrrolizidine alkaloids: Biosynthesis, biological activities and occurrence in crop plants.</a> Molecules. 24 (3), 498(2019).</li>
<li>EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scientific+opinion+on+pyrrolizidine+alkaloids+in+food+and+feed%5BTitle%5D)+AND+%22EFSA+Journal%22%5BJournal%5D)">Scientific opinion on pyrrolizidine alkaloids in food and feed.</a> EFSA Journal. 9 (11), 134(2011).</li>
<li>Ma, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+and+regulation+of+hepatotoxic+pyrrolizidine+alkaloids+in+food%3A+A+critical+review+of+recent+research%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Chemical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Determination and regulation of hepatotoxic pyrrolizidine alkaloids in food: A critical review of recent research.</a> Food and Chemical Toxicology. 119, 50-60 (2018).</li>
<li>Keuth, O., Humpf, H. U., Fürst, P. Pyrrolizidine Alkaloids: Analytical Challenges. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKeuth%2C+O+%22Encyclopedia+of+Food+Chemistry%22">Encyclopedia of Food Chemistry</a>. Melton, L., Shahidi, F., Varelis, P. 1, Elsevier. 348-355 (2019).</li>
<li>Huang, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyrrolizidine+alkaloids+and+its+source+analysis+in+tea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+Safety+%26+Quality%22%5BJournal%5D)">Pyrrolizidine alkaloids and its source analysis in tea.</a> Journal of Food Safety & Quality. 9 (2), 229-236 (2018).</li>
<li>Liang, A. H., Ye, Z. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+situation+of+the+toxicity+researches+on+Senecio%5BTitle%5D)+AND+%22China+Journal+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">General situation of the toxicity researches on Senecio.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 31 (2), 93-97 (2006).</li>
<li>Li, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+study+of+pyrrolizidine+alkaloid-induced+hepatic+sinusoidal+obstruction+syndrome+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Research+in+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Proteomic study of pyrrolizidine alkaloid-induced hepatic sinusoidal obstruction syndrome in rats.</a> Chemical Research in Toxicology. 28 (9), 1715-1727 (2015).</li>
<li>Jia, Z. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catalytic+enantioselective+synthesis+of+a+pyrrolizidine-alkaloid-inspired+compound+collection+with+antiplasmodial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Organic+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Catalytic enantioselective synthesis of a pyrrolizidine-alkaloid-inspired compound collection with antiplasmodial activity.</a> The Journal of Organic Chemistry. 83, 7033-7041 (2018).</li>
<li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+evidence+of+pyrrolizidine+alkaloid+N-oxide-induced+hepatic+sinusoidal+obstruction+syndrome+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Toxicology%22%5BJournal%5D)">First evidence of pyrrolizidine alkaloid N-oxide-induced hepatic sinusoidal obstruction syndrome in humans.</a> Archives of Toxicology. 91 (12), 3913-3925 (2017).</li>
<li>Chen, Z., Huo, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+veno-occlusive+disease+associated+with+toxicity+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+herbal+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Netherlands+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Hepatic veno-occlusive disease associated with toxicity of pyrrolizidine alkaloids in herbal preparations.</a> Netherlands Journal of Medicine. 68 (6), 252-260 (2010).</li>
<li>Mattocks, A. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMattocks%2C+AR+%22Chemistry+and+Toxicology+of+Pyrrolizidine+Alkaloid%22">Chemistry and Toxicology of Pyrrolizidine Alkaloid</a>. , Academic Press. London, UK. (1986).</li>
<li>Picron, J. F., Herman, M., Van Hoeck, E., Goscinny, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analytical+strategies+for+the+determination+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+plant+based+food+and+examination+of+the+transfer+rate+during+the+infusion+process%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Analytical strategies for the determination of pyrrolizidine alkaloids in plant based food and examination of the transfer rate during the infusion process.</a> Food Chemistry. 266, 514-523 (2018).</li>
<li>Kowalczyk, E., Kwiatek, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+sum+parameter+method+for+the+determination+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+teas%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Additives+%26+Contaminants%3A+Part+A%22%5BJournal%5D)">Application of the sum parameter method for the determination of pyrrolizidine alkaloids in teas.</a> Food Additives & Contaminants: Part A. 37 (4), 622-633 (2020).</li>
<li>EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risks+for+human+health+related+to+the+presence+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+honey%2C+tea%2C+herbal+infusions+and+food+supplements%5BTitle%5D)+AND+%22EFSA+Journal%22%5BJournal%5D)">Risks for human health related to the presence of pyrrolizidine alkaloids in honey, tea, herbal infusions and food supplements.</a> EFSA Journal. 15 (7), 04908(2017).</li>
<li>Han, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyrrolizidine+alkaloids+in+tea%3A+A+review+of+analytical+methods%2C+contamination+levels+and+health+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Science%22%5BJournal%5D)">Pyrrolizidine alkaloids in tea: A review of analytical methods, contamination levels and health risk.</a> Food Science. 42 (17), 255-266 (2021).</li>
<li>Nowak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecific+transfer+of+pyrrolizidine+alkaloids%3A+An+unconsidered+source+of+contaminations+of+phytopharmaceuticals+and+plant+derived+commodities%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Interspecific transfer of pyrrolizidine alkaloids: An unconsidered source of contaminations of phytopharmaceuticals and plant derived commodities.</a> Food Chemistry. 213, 163-168 (2016).</li>
<li>Selmar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+pyrrolizidine+alkaloids+between+living+plants%3A+A+disregarded+source+of+contaminations%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">Transfer of pyrrolizidine alkaloids between living plants: A disregarded source of contaminations.</a> Environmental Pollution. 248, 456-461 (2019).</li>
<li>Izcara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miniaturized+and+modified+QuEChERS+method+with+mesostructured+silica+as+clean-up+sorbent+for+pyrrolizidine+alkaloids+determination+in+aromatic+herbs%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Miniaturized and modified QuEChERS method with mesostructured silica as clean-up sorbent for pyrrolizidine alkaloids determination in aromatic herbs.</a> Food Chemistry. 380, 132189(2022).</li>
<li>Izcara, S., Casado, N., Morante-Zarcero, S., Sierra, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+miniaturized+QuEChERS+method+combined+with+ultrahigh+liquid+chromatography+coupled+to+tandem+mass+spectrometry+for+the+analysis+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+oregano+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Foods%22%5BJournal%5D)">A miniaturized QuEChERS method combined with ultrahigh liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry for the analysis of pyrrolizidine alkaloids in oregano samples.</a> Foods. 9 (9), 1319(2020).</li>
<li>Van Wyk, B. E., Stander, M. A., Long, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senecio+angustifolius+as+the+major+source+of+pyrrolizidine+alkaloid+contamination+of+rooibos+tea+%28Aspalathus+linearis%29%5BTitle%5D)+AND+%22South+African+Journal+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Senecio angustifolius as the major source of pyrrolizidine alkaloid contamination of rooibos tea (Aspalathus linearis).</a> South African Journal of Botany. 110, 124-131 (2017).</li>
<li>Johnson, A. E., Molyneux, R. J., Merrill, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemistry+of+toxic+range+plants.+Variation+in+pyrrolizidine+alkaloid+content+of+Senecio%2C+Amsinckia%2C+and+Crotalaria+species%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Chemistry of toxic range plants. Variation in pyrrolizidine alkaloid content of Senecio, Amsinckia, and Crotalaria species.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 33 (1), 50-55 (1985).</li>
<li>Vrieling, K., de Vos, H., van Wijk, C. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+the+concentrations+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+Senecio+jacobaea%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of the concentrations of pyrrolizidine alkaloids in Senecio jacobaea.</a> Phytochemistry. 32 (5), 1141-1144 (1993).</li>
<li>Han, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development%2C+optimization%2C+validation+and+application+of+ultra+high+performance+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry+for+the+analysis+of+pyrrolizidine+alkaloids+and+pyrrolizidine+alkaloid+N-oxides+in+teas+and+weeds%5BTitle%5D)+AND+%22Food+control%22%5BJournal%5D)">Development, optimization, validation and application of ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry for the analysis of pyrrolizidine alkaloids and pyrrolizidine alkaloid N-oxides in teas and weeds.</a> Food control. 132, 108518(2022).</li>
<li>Bodi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+tea%2C+herbal+drugs+and+honey%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Additives+%26+Contaminants%3A+Part+A%22%5BJournal%5D)">Determination of pyrrolizidine alkaloids in tea, herbal drugs and honey.</a> Food Additives & Contaminants: Part A. 31 (11), 1886-1895 (2014).</li>
<li>European Union Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Commission+Regulation+%28EU%29+2020%2F2040+of+11+December+2020+amending+Regulation+%28EC%29+No+1881%2F2006+as+regards+maximum+levels+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+certain+foodstuffs%5BTitle%5D)+AND+%22Official+Journal+of+the+European+Union%22%5BJournal%5D)">Commission Regulation (EU) 2020/2040 of 11 December 2020 amending Regulation (EC) No 1881/2006 as regards maximum levels of pyrrolizidine alkaloids in certain foodstuffs.</a> Official Journal of the European Union. 14 (12), 1-4 (2020).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Niniejsza praca miała na celu opracowanie skutecznej, czułej metody badania dróg i źródeł zanieczyszczeń PA w próbkach herbaty, a także rozmieszczenia PA w różnych częściach roślin herbacianych. Jednak w tym badaniu tylko 15 PA udało się rozdzielić na kolumnie chromatograficznej, co jest bardzo małą liczbą w porównaniu z dużą liczbą alkaloidów w gatunkach roślin 3,4. Było to związane nie tylko z właściwościami pakowania samej kolumny, ale także ze złożoną matrycą...

Jako metabolity wtórne, alkaloidy pirolizydynowe (PA) chronią rośliny przed roślinożercami, owadami i patogenami1,2. Do tej pory na całym świecie znaleziono ponad 660 PA i PA-N-tlenków (PANO) o różnej strukturze3,4. Rośliny wytwarzające PA występują głównie w rodzinach Asteraceae, Boraginaceae, Fabaceae i Apocynaceae5,6. PA łatwo utleniają się do niestabilnych alkaloidów dehydropirolizydynowych, które mają silną elektrofilowość i mogą atakować nukleofile, takie jak DNA i białka, powodując martwicę komórek wątroby, niedrożność żył, marskość wątroby, wodobrzusze i inne objawy7,8. Głównym narządem docelowym toksyczności PA jest wątroba. PA mogą również powodować toksyczne działanie na płuca, nerki i inne narządy oraz toksyczność mutagenną, rakotwórczą i rozwojową9,10.
W wielu krajach odnotowano przypadki zatrucia ludzi i zwierząt spowodowane spożyciem tradycyjnych ziół, suplementów lub herbat zawierających PA lub pośrednim zanieczyszczeniem żywności, takiej jak mleko, miód lub mięso (toksyczne po spożyciu pastwisk zawierających PA)11,12,13. Ustalenia Europejskiego Urzędu ds. Bezpieczeństwa Żywności (EFSA) wskazują, że substancje takie jak herbata (ziołowa) są ważnym źródłem narażenia ludzi na PAs/PANOs14. Próbki herbaty nie wytwarzają PA, podczas gdy rośliny wytwarzające PA są powszechnie spotykane w ogrodach herbacianych (np. Emilia sonchifolia, Senecio angulatus i Ageratum conyzoides)15. Wcześniej podejrzewano, że herbata może być zanieczyszczona PA z zakładów produkujących herbatę podczas zbioru i przetwarzania. Jednak PA wykryto również w niektórych ręcznie zbieranych liściach herbaty (tj. bez roślin wytwarzających PA), co sugeruje, że muszą istnieć inne drogi lub źródła zanieczyszczenia16. Przeprowadzono eksperyment z jednoczesną uprawą roślin szmacianki (Senecio jacobaea) z melisą (Melissa officinalis), miętą pieprzową (Mentha piperita), pietruszką (Petroselinum crispum), rumiankiem (Matricaria recutita) i nasturcją (Tropaeolum majus), a wyniki wykazały, że PA wykryto we wszystkich tych roślinach17. Sprawdzono, że PA są rzeczywiście przenoszone i wymieniane między żywymi roślinami za pośrednictwem soil18,19. Van Wyk et al.20 stwierdzili, że herbata rooibos (Aspalathus linearis) była poważnie zanieczyszczona w miejscach bogatych w chwasty i zawierała PA tego samego typu i proporcji. Jednak w herbacie rooibos w miejscach wolnych od chwastów nie wykryto żadnych PA.
Obecnie, ultra-wysokowydajna tandemowa chromatografia cieczowa (UPLC-MS/MS) o wysokiej selektywności i czułości jest szeroko stosowana w jakościowej i ilościowej analizie PA w produktach rolnych i żywności21,22. Metoda obróbki próbki zwykle składa się z ekstrakcji do fazy stałej (SPE) lub oczyszczania złożonych ekstraktów matryc spożywczych za pomocą QuEChERS (Quick Easy Cheap Effective Rugged Safe), które mogą uzyskać najwyższą możliwą czułość12,19. Jednak nadal brakuje solidnych metod analitycznych pozwalających na wykrywanie i kwantyfikację PA w złożonych matrycach, takich jak gleba, chwasty i świeże liście herbaty.
To badanie przeanalizowało 15 PA w próbkach suszonej herbaty, świeżych liściach herbaty, chwastach i próbkach gleby ryzosferycznej chwastów za pomocą UPLC-MS/MS w połączeniu z metodą oczyszczania adsorbentu. Ponadto pobrano 15 sparowanych próbek gleby ryzosferycznej chwastów i chwastów oraz 60 świeżych próbek liści herbaty z pięciu miejsc pobierania próbek w ogrodzie herbacianym Jinzhai w prowincji Anhui w Chinach i przeanalizowano je pod kątem 15 PA. Wyniki te mogą dostarczyć metody badania i pewnych informacji na temat źródła i drogi PA (zanieczyszczenia) w próbkach herbaty, aby zapewnić jakość i bezpieczeństwo herbaty.

<table><tbody><tr><td>Acetonitryl (99,9%)</td><td>Tedia Company,Inc.</td><td>21115197</td><td>Nr CAS: 75-05-8</td></tr><tr><td>Amoniak (25% -28%)</td> <td>Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td>181210</td><td>Nr CAS: 1336-21-6</td></tr><tr><td>Mrówczan amonu (97,0%)</td><td>Anpel Laboratory Technoiogies (szanghaj)</td><td>G0860050</td><td>Nr CAS: 540-69-2</td></tr><tr><td>Węgiel-GCB</td><td>CNW</td><td>B7760030</td><td>120-400 MESH, 10g. w pudełku&nbsp;</td></tr><tr><td>Wirówka Z 36 HK</td><td>HERMLE</td><td>Z36HK</td><td>30000&nbsp; obr./min (min:10 obr./min), Wymiary (szer. x wys. x gł.):&nbsp; 71,5 cm&razy; 42 cm i razy; 51 cm</td></tr><tr><td>Dostępny w handlu produkt herbaciany</td><td>Lvming, Qingshan, Luyuchun, Changling, Huixing, Wuyunjian, Heshengchun</td><td>Herbata sypana</td><td>Zielona herbata</td></tr><tr><td>N-tlenek Europine (EuNO) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>323256</td><td>Nr CAS: 65582-53-8</td></tr><tr><td>Europine (UE) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>98222</td><td>Nr CAS: 570-19-4</td></tr><tr><td>Mrówczan (98,0%)</td><td>Aladyn</td><td>E2022005</td><td>Nr CAS: 64-18-6</td></tr><tr><td>HC-C18</td><td>CNW</td><td>D2110060</td><td>40-63 &mu; m, 100 g w opakowaniu</td></tr><tr><td>Heliotryna (He) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>906426</td><td>Nr CAS: 303-33-3</td></tr><tr><td>N-tlenek heliotryny (HeNO) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>22581</td><td>Nr CAS: 6209-65-0</td></tr><tr><td>Wirówka szybkoobrotowa TG16-WS</td><td>203158000 Maks</td><td></td><td>.: 16000 obr/min, 330 &; 390 &; 300 mm (L & razy; W i czasy; H), Pojemność: 6 i razy; 50 ml</td></tr><tr><td>kolumna HSS T3</td><td>Wody</td><td>186004976</td><td>ACQUITY UPLC HSS T3 (2,1 i razy; 100 mm 1,8 &mu; m)</td></tr> <tr><td>Intermedine (Im) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>114843</td><td>Nr CAS:10285-06-0</td></tr><tr><td>Pośredni N-tlenek (ImNO) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>340066</td><td>Nr CAS:95462-14-9</td></tr><tr><td>Jakobinka (Jb) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>132282048</td><td>Nr CAS:6870-67-3</td></tr><tr><td>N-tlenek jakobinów (JbNO) (98,0%)</td><td>ChemFaces</td><td>CFN00461</td><td>Nr CAS: 38710-25-7</td></tr><tr><td>Alkohol metylowy (99,9%)</td><td>Firma Tedia, Inc.</td><td>21115100</td><td>Nr CAS: 67-56-1</td></tr><tr><td>PSA</td><td>Agela</td><td>P19-00833</td><td>40-60 &mu; m, 60 & Aring; 100 g w opakowaniu</td></tr><tr><td>Retrorsine (Re) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>5281743</td><td>Nr CAS:480-54-6</td></tr><tr><td>N-tlenek retrorsyny (ReNO) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>5281734</td><td>Nr CAS:15503-86-3</td></tr><tr><td>Senecionina (Sc) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>5280906</td><td>Nr CAS:130-01-8</td></tr><tr><td>N-tlenek senecjoniny (ScNO) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>5380876</td><td>Nr CAS:13268-67-2</td></tr><tr><td>Seneciphylline N-tlenek (SpNO) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>6442619</td><td>Nr CAS:38710-26-8</td></tr><tr><td>Seneciphylline (Sp) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>5281750</td><td>Nr CAS:480-81-9</td></tr><tr><td>Senkirkine (Sk) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>5281752</td><td>Nr CAS:2318-18-5</td></tr><tr><td>SPE PCX</td><td>Agilent Technologies</td><td>12108206</td><td>Kation w trybie mieszanym, 6 ml</td></tr><tr><td>kwasu siarkowego (97%)</td><td>Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd. </td><td>1003019</td><td>Nr CAS: 7664-93-9</td></tr><tr><td>Cytrynian trisodowy</td><td>Sinpharm Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td>20121009</td><td>Nr CAS: 6132-04-3</td></tr><tr><td>Myjka ultradźwiękowa</td><td>Supmile</td><td>KQ-600B</td><td>Rozmiar szczeliny wewnętrznej: 500 & razy; 300 & razy; 150 mm; Pojemność: 22,5 l</td></tr><tr><td>UPLC-xevoTQMS</td><td>Waters</td><td>ZPLYY-003</td><td>Potrójny czterostopniowy prętowy analizator masy, Waters Alliance 2695/Waters ACQUITY UPLC System fazy ciekłej</td></tr><tr><td>Oscylator termostatu kąpieli wodnej</td><td>Instrument Guoyu</td><td>SHY-2AHS</td><td>Czasy oscylacji:&nbsp; 60-300 razy / min, Stały zakres temperatur: temperatura pokojowa do 100 & stopni; Z</td></tr></tbody></table>

Źródło i droga zanieczyszczenia alkaloidami pirolizydyny w próbkach herbaty

Source and Route of Pyrrolizidine Alkaloid Contamination in Tea Samples

W próbkach herbaty znajdują się toksyczne alkaloidy pirolizydynowe (PA), które stanowią zagrożenie dla zdrowia ludzkiego. Jednak źródło i droga zanieczyszczenia PA w próbkach herbaty pozostały niejasne. W niniejszej pracy opracowano metodę adsorbacyjną w połączeniu z UPLC-MS/MS w celu oznaczenia 15 PA w glebie ryzosferycznej chwastów Ageratum conyzoides L., A. conyzoides, świeżych liściach herbaty i suszonych próbkach herbaty. Średnie odzyski wahały się od 78%-111%, ze względnymi odchyleniami standardowymi 0,33%-14,8%. Piętnaście par ryzosferycznych próbek gleby A. conyzoides i A. conyzoides oraz 60 świeżych próbek liści herbaty pobrano z ogrodu herbacianego Jinzhai w prowincji Anhui w Chinach i przeanalizowano je pod kątem 15 PA. Nie wszystkie 15 PA wykryto w świeżych liściach herbaty, z wyjątkiem N-tlenku intermediny (ImNO) i senecjoniny (Sn). Zawartość ImNO (34,7 μg/kg) była większa niż Sn (9,69 μg/kg). Ponadto zarówno ImNO, jak i Sn były skoncentrowane w młodych liściach krzewu herbacianego, podczas gdy ich zawartość była niższa w starych liściach. Wyniki wskazują, że PA w herbacie były przenoszone drogą chwastów wytwarzających PA - gleby - świeżych liści herbaty w ogrodach herbacianych.

Opracowano zoptymalizowaną metodę oczyszczania adsorpcyjnego i analizy 15 PA w próbkach suszonej herbaty, świeżych liści herbaty, chwastów oraz glebie, a następnie porównano ją z powszechnie stosowaną metodą oczyszczania z wykorzystaniem wkładów SPE. Wyniki wykazały, że odzyski 15 PA w próbkach suszonej herbaty, chwastów i świeżych liści herbaty przy użyciu wkładów SPE wyniosły 72%-120%, natomiast przy zastosowaniu oczyszczania adsorpcyjnego wyniosły one 78%-98% (Rysunek 1). Odzyski 15 PA w ...

Obecny protokół opisuje zanieczyszczenie alkaloidów pirolizydynowych (PA) w próbkach herbaty pochodzących z chwastów wytwarzających PA w ogrodach herbacianych.

Toxic pyrrolizidine alkaloids (PAs) are found in tea samples, which pose a threat to human health. However, the source and route of PA contamination in ...

Opracowanie metody wykrywania 15 alkaloidów pirolizydynowych w chwastach, glebie, świeżych liściach herbaty i próbce suchej herbaty może zapewnić wsparcie techniczne w badaniu źródła zanieczyszczenia alkaloidami pirolizydyny w herbacie. W porównaniu z ekstrakcją do fazy stałej, metoda adsorbentowa dla próbki gleby może zaoszczędzić czas, obniżyć koszty i zapewnić lepszy odzysk do analizy alkaloidów pirolizydynowych. Aby rozpocząć ekstrakcję na podgrzanych suszonych produktach herbacianych, świeżych liściach herbaty lub chwastach, zważ jeden gram próbki w 50-mililitrowej probówce wirówkowej i dodaj do probówki 10 mililitrów 0,1 mola na litr roztworu kwasu siarkowego.Następnie wiruj próbkę przez dwie minuty, jeśli ma być analizowana za pomocą ekstrakcji do fazy stałej, podczas gdy przez jedną minutę, jeśli to samo ma być analizowane za pomocą czyszczenia adsorbentu. Następnie poddaje próbkę ekstrakcji ultradźwiękowej przez 15 minut, a następnie odwirowuje w temperaturze 9,390 G przez 10 minut w temperaturze pokojowej. Następnie za pomocą zakraplacza z plastikową końcówką przenieś roztwór supernatantu do 50-mililitrowej probówki wirówkowej.Po dwukrotnym wykonaniu ekstrakcji połączyć supernatanty w probówce. Aby rozpocząć ekstrakcję na przygotowanej glebie, zważ jeden gram próbki w 50-mililitrowej probówce wirówkowej. Dodaj 0,1 mililitra 0,1 mola na litr roztworu cytrynianu trisodowego, aby dostosować pH gleby do 6,0 i odstawić próbkę na dwie minuty.Następnie dodaj 10 mililitrów 0,1 mola na litr roztworu metanolu kwasu siarkowego do probówki i wiruj próbkę przez dwie minuty, a następnie wstrząsaj przez 30 minut. Następnie wykonuj ekstrakcję ultradźwiękową przez 30 minut, jak pokazano wcześniej. Następnie odwirować próbkę o sile 9,390 G przez 10 minut.I za pomocą zakraplacza z plastikową końcówką przenieś supernatant do 50-mililitrowej probówki wirówkowej. Po dwukrotnym wykonaniu ekstrakcji połączyć supernatanty. Aktywuj ekstrakcję do fazy stałej lub wkład SPE pięcioma mililitrami metanolu, a następnie pięcioma mililitrami wody dejonizowanej.Po aktywacji dodać 10 mililitrów supernatantu z ekstrakcji próbki do wstępnie aktywowanego wkładu. Po tym, jak poziom roztworu próbki dotrze do górnej warstwy wkładów, wymyj matrycę próbki pięcioma mililitrami 1% roztworu kwasu mrówkowego, a następnie pięcioma mililitrami metanolu i wyrzuć eluenty. Następnie eluuj anality pięcioma mililitrami metanolu zawierającego 0,5% wody amoniakalnej.Przefiltruj eluent przez filtr membranowy o grubości 0,22 mikrona w celu analizy za pomocą UPLC-MS/MS. Aby przeprowadzić oczyszczanie próbki za pomocą adsorbentu, należy przygotować 10-mililitrową probówkę wirówkową z adsorbentem naruszającym GCB, PSA i C18 w stosunku od 10 do 20 do 15 miligramów. Następnie dodać dwa mililitry supernatantu otrzymanego po poddaniu próbki obróbce.Następnie należy wirować mieszaninę próbki i adsorbentu przez jedną minutę i odwirować przy 9,390 G przez osiem minut w temperaturze pokojowej. Przefiltrować jeden mililitr powstałego supernatantu przez filtr membranowy o średnicy 0,22 mikrona do fiolki z próbką przed analizą za pomocą UPLC-MS/MS. W badaniu uzyskano wyższy procent odzysku 15 alkaloidów pirolizydynowych ze świeżych liści herbaty, suszonych próbek herbaty i chwastów przy użyciu techniki oczyszczania adsorbentowego w porównaniu z metodą wkładu SPE.Odzysk alkaloidów w glebie przy użyciu oczyszczania adsorpcyjnego wynosił od 79 do 111%W świeżych liściach herbaty zebranych z pięciu miejsc pobierania próbek wykryto wyższą zawartość N-tlenku pośredniej niż senecjoniny. Senecioniny nie wykryto w dojrzałych liściach z pierwszego i drugiego miejsca pobierania próbek. Spośród 11 alkaloidów pirolizydynowych w glebie wykryto tylko N-tlenek pośredni, podczas gdy senecjonina i N-tlenek pośredni wykryto w różnych częściach roślin herbaty.Dodatkowo stwierdzono, że zawartość N-tlenku pośredniego w jednym pąku z dwoma liśćmi jest najwyższa. Próbując tego najpierw, najważniejszą rzeczą jest dodanie 0,1 mililitra 0,1 mola na litr roztworu cytrynianu trisodowego, aby dostosować pH gleby do 6,0. Metoda ta może być stosowana do analizy alkaloidów w innych roślinach jadalnych, a także zapewnia naturalną technikę badania źródła alkaloidów w nich.

source-route-pyrrolizidine-alkaloid-contamination-tea

Research

JoVE Journal

Environment

Środowisko

Przedstawiamy protokół szybkiego badania próbek środowiskowych pod kątem potencjału sideroforu, przyczyniającego się do biodostępności i obrotu mikroelementów w systemach lądowych.

Wysokoprzepustowe przesiewanie sideroforów z próbek środowiskowych: tkanek roślinnych, gleb masowych i gleb ryzosferowych

Ta praca przedstawia protokół tworzenia kultury zawiesiny komórkowej pochodzącej z liści herbaty (Camellia sinensis L.), która może być wykorzystana do badania metabolizmu zewnętrznych związków, które mogą być pobierane przez całą roślinę, takich jak insektycydy.

Badanie metabolizmu sześciu ogólnoustrojowych insektycydów w nowo powstałej kulturze zawiesiny komórkowej pochodzącej z herbaty (Camellia Sinensis L.) Liście

Tutaj prezentujemy protokół do ustanowienia wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC), połączonej z chemicznym rozpoznawaniem wielu wzorów odcisków palców, który zapewnia nową strategię skutecznej identyfikacji prawdziwych odmian Clematidis Armandii Caulis i jego domieszek.

HPLC w połączeniu z chemicznym odciskiem palca do rozpoznawania wielu wzorców w celu identyfikacji autentyczności Clematidis armandii caulis

Przedstawiona tutaj jest metoda wzbogacania i analizy lotnych składników ekstraktów herbaty za pomocą wspomaganego rozpuszczalnikiem odparowywania smaku i ekstrakcji rozpuszczalnikowej, a następnie chromatografii gazowej i spektrometrii mas, która może być stosowana do wszystkich rodzajów próbek herbaty.

Analiza aromatu herbaty w oparciu o wspomagane rozpuszczalnikiem wzbogacanie aromatu

Prezentujemy metodę szybkiej spektrometrii mas (MS)/spektrometrii mas (MS) opartej na adnotacji i klasyfikacji alkaloidów tropanowych, przydatną zarówno do wstępnej dereplikacji próbek zawierających tropan jak i odkrywania nowych alkaloidów do izolacji.

Zastosowania tandemowej spektrometrii mas chromatografii cieczowej w badaniach nad produktami naturalnymi: alkaloidy tropanowe jako studium przypadku

Ten protokół przedstawia zweryfikowaną metodę chromatografii cieczowej, mobilności jonów i spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości, do określania obecności alkaloidów sporyszu w żywności, zgodnie z niedawno wydanym rozporządzeniem Komisji (UE) 2023/915.

Wykrywanie regulowanych alkaloidów sporyszu w matrycach spożywczych za pomocą chromatografii cieczowej - spektrometria ruchliwości jonów uwięzionych w elektronice - spektrometria mas czasu przelotu

Niniejsze badanie opracowało metodę chromatografii cieczowej wysokiej rozdzielczości połączoną ze spektrometrią mas z potrójnym kwarcykiem (HPLC-QQQ-MS) w celu identyfikacji i ilościowego określania alkaloidów tropanowych (hioscyjamina, anizodamina, skopolamina) w Anisodus tanguticus. Metoda ta okazała się szybką, dokładną i niezawodną dla analizy wysokowydajnej roślin leczniczych.

Skuteczną i szybką metodę HPLC-QQQ-MS do ilościowego oznaczania alkaloidów tropanowych w roślinach leczniczych

Ogólnym celem tego badania było pokazanie potencjalnego mechanizmu zanieczyszczenia krzyżowego patogenu Listeria monocytogenes przenoszonego przez żywność w sklepie delikatesowym. Metodologia ta może być stosowana w wielu różnych środowiskach do śledzenia zanieczyszczenia patogenami.

Śledzenie skażenia mikrobiologicznego w środowiskach handlu detalicznego za pomocą proszku fluorescencyjnego - przykład środowiska delikatesowego w handlu detalicznym

Metoda EPA 1615 wykorzystuje filtr elektrododatni do koncentracji enterowirusów i norowirusów w środowisku i wodach pitnych. Niniejszy manuskrypt opisuje procedurę pobierania próbek do analiz metodą 1615.

Metoda EPA 1615. Pomiar występowania enterowirusów i norowirusów w wodzie za pomocą hodowli i RT-qPCR. I. Pobieranie próbek wirusów

Opisujemy protokół filtracji próbek wody za pomocą wkładu filtrującego i ekstrakcji środowiskowego DNA (eDNA) bez konieczności rozcinania obudowy w celu wyjęcia filtra. Protokół ten został opracowany do metabarkodowania eDNA ryb, ale ma również zastosowanie do eDNA z innych organizmów.

Zastosowanie wkładu filtracyjnego do filtracji próbek wody i ekstrakcji środowiskowego DNA

Poznaj metodę wykrywania alkaloidów pirolizydynowych w herbacie i glebie. Technika adsorpcyjna zapewnia lepszą efektywność i niższe koszty niż ekstrakcja SPE.

Źródło i droga zanieczyszczenia alkaloidami pirolizydyny w próbkach herbaty

Przeglądaj więcej filmów