Manipulacja genetyczna krętka boreliozy Borrelia burgdorferi za pośrednictwem fagów

Protokół ten jest istotny, ponieważ opisuje inne ważne narzędzie do analizy biologii molekularnej czynnika boreliozy Borrelia burgdorferi. Główną zaletą tej techniki jest to, że dzięki zastosowaniu transdukcji fagowej zapewnia alternatywną metodę wprowadzania DNA do Borrelia burgdorferi bez konieczności stosowania impulsu elektrycznego, jak w przypadku elektroporacji. Metoda ta może zostać wykorzystana do uzyskania dalszych informacji na temat mechanizmów molekularnych wykorzystywanych przez Borrelia burgdorferi do utrzymywania się w cyklu enzootycznym i ostatecznie wywoływania boreliozy u ludzi.

Na początek zaszczepij 150 mikrolitrów odpowiedniego klonu Borrelia burgdorferi w 15 mililitrach BSK w szczelnie zamkniętych, sterylnych stożkowych probówkach wirówkowych w celu przeprowadzenia protokołu transdukcji. Następnie należy uzupełnić pożywkę antybiotykami o odpowiednim stężeniu lub kombinacją antybiotyków w celu selekcji i utrzymania heterologicznego DNA w klonie Borrelia burgdorferi i inkubować próbkę w temperaturze 33 stopni Celsjusza. Po wyrośnięciu kultury odwirować odpowiednią objętość kultury o stężeniu 6 000 G przez 10 minut.