Transdermalny pomiar szybkości filtracji kłębuszkowej u prosiąt wentylowanych mechanicznie

TGFR oferuje ocenę funkcji nerek w czasie rzeczywistym. W porównaniu z tradycyjnymi markerami, TGFR może wielokrotnie monitorować zmiany w czynności nerek u tych samych zwierząt. Dodatkowo technika ta nie wymaga pobierania krwi ani moczu.

Dzięki niedawnym postępom w ksenotransplantacji, więcej badań będzie prowadzonych z wykorzystaniem modelu trzody chlewnej. Wierzymy więc, że to narzędzie będzie niezbędne w badaniach translacyjnych i jest bardziej prawdopodobne, że zostanie wykorzystane klinicznie w nadchodzących latach. Eksperyment przeprowadza się na prosiętach w wieku od trzech do siedmiu dni.

Zwierzęta są podatne na hipotermię, hipowolemię i inne powikłania wynikające z operacji. W związku z tym wymagane jest ścisłe monitorowanie przez cały czas trwania procedury. Metodologia wymaga również praktyki, ponieważ obejmuje tracheostomię i kaniulacje naczyń.

Po przygotowaniu zwierzęcia do zabiegu użyj ostrza chirurgicznego, aby wykonać pionowe nacięcie przyśrodkowe o długości od pięciu do sześciu centymetrów, ponieważ jelito ślepe u świń leży w lewym dole przylędźwiowym. Wypreparuj warstwy ściany brzucha, unikając uszkodzenia powierzchownych naczyń nadbrzusza. Po nacięciu warstwy otrzewnej użyj retraktora, aby poprawić dostęp do struktur wewnątrz jamy brzusznej i zidentyfikować spiralną okrężnicę w lewym górnym kwadrancie brzucha.

Aby zlokalizować jelito ślepe, prześledź spiralną okrężnicę doogonowo i grzbietowo. Spiralna okrężnica u podstawy jelita ślepego jest połączona z kością biodrową. Podwiązać jelito ślepe tuż dystalnie do połączenia krętniczo-kątniczego.

Za pomocą igły o rozmiarze 18 wykonaj siedem nakłuć w jelicie ślepym i wyciśnij kał do okolicy otrzewnej. Zamknij warstwy brzuszne jedwabnym szwem 3/0, używając prostych ściegów przerywanych lub ciągłych. Zszywacz może być również użyty do zamknięcia warstwy skóry, jeśli jest dostępna.

Po ośmiu godzinach od podwiązania jelita ślepego rozpocznij transdermalny pomiar GFR. Użyj oprogramowania MB Service w wersji 3.0, aby dostosować częstotliwość próbkowania na urządzeniu GFR. Za pomocą złącza USB podłącz urządzenie transdermalne GFR do komputera.

Otwórz oprogramowanie MB Service. Kliknij przycisk Połącz i ustaw czas na 4 000 milisekund. Kliknij przycisk Zapisz, aby zapisać ustawienia, a następnie kliknij przycisk Rozłącz.

Przymocuj dwustronne plastry samoprzylepne z przezroczystym okienkiem po jednej stronie urządzenia. Podłącz baterię do urządzenia, upewniając się, że dioda elektroluminescencyjna znajduje się nad przezroczystym okienkiem, aby umożliwić wykrycie znacznika. Po podłączeniu baterii natychmiast przyklej plaster samoprzylepny z urządzeniem na miejscu.

Upewnij się, że jest dobrze zabezpieczony. Ponieważ prosięta są głęboko znieczulone, taśma może być niepotrzebna do utrzymania urządzenia na miejscu. Przygotować 50 miligramów na mililitr roztworu FITC-sinistrin z solą fizjologiczną i pobrać odpowiednią dawkę do strzykawki.

Podłączyć strzykawkę z lekiem po jednej stronie kranu trójdrożnego, a spłukiwanie solą fizjologiczną po drugiej stronie kranu. Wciśnij FITC-sinistrin, a natychmiast po nim pięć mililitrów soli fizjologicznej bolus przed zamknięciem trójdrożnego kurka do żyły prosiąt. Trzymaj urządzenie przymocowane do prosiącia przez cztery godziny.

Aby uniknąć artefaktów ruchowych w tym czasie, trzymaj prosię pod narkozą, jak opisano w rękopisie. Po upływie czterech godzin wyjmij urządzenie i natychmiast odłącz akumulator. Podłącz przezskórne urządzenie GFR do komputera za pomocą złącza USB dostarczonego przez dostawcę.

Otwórz oprogramowanie MB lab, aby pobrać dane z urządzenia. Aby zapisać nieprzetworzone dane, kliknij przycisk Połącz i wybierz opcję odczytu. Następnie poczekaj, aż urządzenie zakończy czytanie.

Kliknij zmień nazwę i na koniec kliknij Zapisz. Przetwarzaj i oceniaj zapisane dane w oprogramowaniu analitycznym zgodnie z instrukcjami zawartymi w instrukcji. Krótko mówiąc, otwórz MB studio i kliknij załaduj, aby zaimportować zapisane dane.

Dostosuj pozycje przesunięcia, startu i końca za pomocą automatycznych znaczników. W razie potrzeby usuń artefakty. Wybierz model trzykomorowy i kliknij przycisk dopasowania, aby uzyskać odczyt pokazujący klirens FITC-sinistrin w ciągu kilku minut i obliczyć TGFR za pomocą tego równania.

Zarówno zwierzęta pozorowane, jak i z sepsą miały porównywalną wagę. Po 12 godzinach sepsy w grupie z sepsą zaobserwowano zwiększony poziom białka C-reaktywnego w surowicy, markera sepsy. Krzywe klirensu FITC-sinistryny przedstawiono dla prosiąt pozorowanych i septycznych 12 godzin po operacji.

Szamba z upośledzoną czynnością nerek wykazywały zwiększoną powierzchnię pod krzywą. Prosięta z posocznicą wykazywały upośledzony klirens FITC-sinistryny, co wskazuje na ostre uszkodzenie nerek. Średni okres półtrwania FITC-sinistrin w grupach pozorowanych i sepsy wynosił odpowiednio 114 i 537 minut.

Średni GFR w grupie pozorowanej był istotnie wyższy niż w grupie sepsy. Stężenie kreatyniny w surowicy po godzinie zero i 12 godzinach było podobne w grupie pozorowanej. Jednak po 12 godzinach zaobserwowano znaczny wzrost poziomu kreatyniny u świń septycznych .

Upewnij się, że akumulator jest prawidłowo podłączony do prosiąt. Jeśli baterie zostaną wyjęte, urządzenie nie będzie działać. Spróbuj wstrzyknąć FITC-sinistrin w jednym płynnym bolusie, aby zapobiec wielokrotnym pikom.

Upewnij się również, że urządzenie jest prawidłowo podłączone do prosiąt, aby zapobiec artefaktom ruchu. Dzięki pomiarowi GFR w czasie rzeczywistym możemy prawidłowo ocenić czynność nerek w celu wykrycia AKI we wczesnym stadium i ewentualnej oceny badanych środków terapeutycznych.