Name: Technika chirurgiczna dla górnej ganglionektomii szyjki macicy w modelu mysim (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-02T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 30 s
Description: Poznaj technikę chirurgiczną górnej ganglionektomii szyjnej w modelu mysim do badania układu współczulnego. Ta metoda umożliwia selektywną ablację adrenergiczną z minimalnymi efektami ubocznymi.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Q. W. był wspierany przez NIH T32CA009685. R. J. W. był wspierany przez NIH R01CA219534. Memorial Sloan Kettering Cancer Center Core Facilities było wspierane przez NIH P30CA008748.

Opisane tutaj procedury dla zwierząt zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt w Memorial Sloan Kettering Cancer Center. Wykorzystano tu ośmiotygodniowe samce i samice myszy NSG. Zwierzęta zostały pozyskane ze źródła komercyjnego (patrz tabela materiałów). Narzędzia są sterylizowane, dezynfekowana jest chirurgiczna powierzchnia robocza, dezynfekowana jest powierzchnia skóry zwierzęcia, a chirurg nosi sterylne rękawiczki przez cały czas trwania zabiegu.
1. Przygotowanie myszy i przygotowanie przedoperacyjne
<ol>
	<li>W dniu poprzedzającym zabieg znieczulij mysz 2% izofluranem w komorze indukcyjnej (3,75 szerokości x 9 głębokości x 3,75 wysokości, patrz tabela materiałów). 
	UWAGA: Chirurgiczną płaszczyznę znieczulenia uzyskuje się zwykle w ciągu 3-5 minut, w zależności od indywidualnego zwierzęcia. Ocenić adekwatność znieczulenia przez uszczypnięcie palca u nogi i w razie potrzeby zwiększyć zawartość procentową izofluranu.
	<ol>
		<li>Ogol brzuszną część szyi lub użyj chemicznego środka do usuwania włosów zgodnie z instrukcjami producenta (patrz tabela materiałów).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>W dniu zabiegu znieczulić mysz 2% izofluranem w komorze indukcyjnej. Ocenić adekwatność znieczulenia przez uszczypnięcie palca u nogi i w razie potrzeby zwiększyć zawartość procentową izofluranu.</li>
	<li>Podawać 2 mg/kg meloksykamu podskórnie w celu prewencyjnego znieczulenia ogólnoustrojowego. Stosować miejscowo maść okulistyczną (patrz tabela materiałów), aby zapobiec urazom oczu i suchości w znieczuleniu.</li>
	<li>Umieść mysz pod mikroskopem preparacyjnym po jej grzbietowej stronie i zapewnij wsparcie termiczne. Utrzymuj znieczulenie wziewne za pomocą 2%-2,5% izofluranu za pomocą precyzyjnego waporyzatora i stożka na nos. Delikatnie zabezpiecz obie kończyny przednie hipoalergiczną taśmą (patrz Tabela materiałów).</li>
	<li>Ogoloną, brzuszną część szyi oczyść jodonem powidonu, a następnie przetrzyj 70% alkoholem. Powtórz ten proces jeszcze dwa razy. Upewnij się, że pole operacyjne jest wolne od luźnych włosów. 
	UWAGA: Można również użyć pary krótkich zakrzywionych kleszczy. Upewnij się, że używasz pary cienkich lub okulistycznych kleszczyków, aby odpowiednio pracować w tej ograniczonej przestrzeni. Dodatkowa konfiguracja przedoperacyjna może być dołączona zgodnie z wytycznymi instytucji. </li>
</ol>
2. Sekcja
<ol>
	<li>Wykonaj 1,5 cm nacięcie skóry w linii środkowej na brzusznej stronie szyi za pomocą małych nożyczek od około 2 mm poniżej podbródka do 2 mm powyżej wcięcia mostka.</li>
	<li>Cofnij krawędzie skóry na boki za pomocą kleszczy, aby odsłonić leżącą pod spodem powięź i ślinianki podżuchwowe. Oddziel skórę od leżącej pod spodem powięzi, wkładając spiczaste nożyczki pod skórę z każdej strony i rozprowadzając. Pociągnij gruczoły podżuchwowe doogonowo za pomocą kleszczy, aby odsłonić leżące poniżej mięśnie.</li>
	<li>Zlokalizuj połączenie tylnego brzucha mięśnia dwubrzuścowego i mięśnia omohyoidalnego (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 1A, czarne kółko). Przednia żyła szyjna biegnie podłużnie i bocznie do mięśnia omohyoidalnego. 
	UWAGA: Mięsień omohyoidalny pokrywa tchawicę wzdłużnie, podczas gdy mięsień dwubrzuścowy leży poprzecznie w czaszkowym aspekcie tchawicy (<silna klasa = "xfig">Rysunek 1C).
	<ol>
		<li>Włóż końcówkę kleszczy pod kątem 45° w tym skrzyżowaniu, bocznie do przedniej żyły szyjnej, aby przebić i rozprowadzić otwór w leżącej nad nim głębokiej powięzi szyjnej.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Pozostaw to okno utworzone w kroku 2.3.1 otwarte za pomocą kleszczy ustawionych pod kątem 45°. Rozszerz ten otwór szerzej, wykonując manewry rozpierania z parą zakrzywionych kleszczy w drugiej ręce.</li>
</ol>
3. Identyfikacja i resekcja ganglionu
<ol>
	<li>Zlokalizuj górny ganglion szyjny (SCG) na bocznej ścianie odsłoniętej przestrzeni. Ma postać okrągłej, perłowej tkanki. 
	UWAGA: Jeśli SCG nie zostanie zidentyfikowany, tkanki w tej przestrzeni muszą być zbadane bardziej bocznie i dokładniej. SCG można łatwo pomylić z tłuszczem, który często występuje w tym regionie. Tłuszcz ma lekko żółty odcień, podczas gdy SCG wydaje się perłowobiały.</li>
	<li>Drugą ręką podtrzymując otwór kleszczami, delikatnie chwyć SCG kleszkami i wyciągnij go z otworu, aby był lepiej widoczny.</li>
	<li>Gdy SCG znajdzie się w polu widzenia, chwyć boczną podstawę SCG, gdzie nadal jest przymocowany do otaczających tkanek. Drugą ręką powoli i delikatnie cofnij SCG w kierunku brzusznym i ogonowym.
	<ol>
		<li>Cofnij SCG wiele razy, aby stopniowo usuwać ganglion. Podczas tego manewru utrzymuj ganglion w stanie nienaruszonym, aby upewnić się, że nie pozostały żadne resztki ganglionu. 
		UWAGA: Delikatnie pociągnij ganglion, ponieważ na tym etapie może wystąpić krwawienie. Jeśli wystąpi niewielkie krwawienie, użyj utlenionej regenerowanej celulozy lub małego paska sterylnej gazy, aby utrzymać ciśnienie nad otworem przez 30 s do 1 minuty. Następnie powoli podnieś gazę i ponownie oceń. W razie potrzeby powtórz proces utrzymywania nacisku nad otworem, aż krwawienie ustanie.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Powoli zwolnij pozostałe kleszcze przytrzymujące podstawę ganglionu. Sprawdź, czy nie ma krwawienia, szukając gromadzącej się krwi. 
	UWAGA: Lekkie sączenie w tym czasie jest normalne. Monitoruj i upewnij się, że nie ma uporczywego lub znaczącego krwawienia przed zamknięciem i zakończeniem zabiegu. W takim przypadku należy przytrzymać nacisk na otwór, jak opisano w kroku 3.3.1.</li>
	<li>Przesuń gruczoły ślinowe z powrotem do ich normalnych pozycji anatomicznych. Przybliżyć i zamknąć skórę za pomocą prostych, przerywanych szwów nylonowych 5-0 (patrz tabela materiałów).</li>
	<li>Umieść mysz w czystej klatce, aby umożliwić pełne wyzdrowienie ze znieczulenia. 
	UWAGA: Może minąć 5-15 minut, zanim mysz w pełni wybudzi się ze znieczulenia. Nie pozostawiaj myszy bez opieki, dopóki nie odzyska wystarczającej przytomności, aby utrzymać pozycję leżącą mostka. Nie umieszczaj myszy w klatce z innymi myszami, dopóki w pełni nie wyzdrowieje. Oceń mysz pod kątem rekonwalescencji pooperacyjnej co najmniej raz na 24 godziny przez 72 godziny.</li>
</ol>

<ol><li>Magnon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomic+nerve+development+contributes+to+prostate+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autonomic nerve development contributes to prostate cancer progression.</a> Science. 341 (6142), 1236361(2013).</li>
<li>Zhao, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Denervation+suppresses+gastric+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Denervation suppresses gastric tumorigenesis.</a> Science Translational Medicine. 6 (250), 115(2014).</li>
<li>Zahalka, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenergic+nerves+activate+an+angio-metabolic+switch+in+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Adrenergic nerves activate an angio-metabolic switch in prostate cancer.</a> Science. 358 (6361), 321-326 (2017).</li>
<li>Amit, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+p53+drives+neuron+reprogramming+in+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Loss of p53 drives neuron reprogramming in head and neck cancer.</a> Nature. 578 (7795), 449-454 (2020).</li>
<li>Renz, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+signaling+via+muscarinic+receptors+directly+and+indirectly+suppresses+pancreatic+tumorigenesis+and+cancer+stemness%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Cholinergic signaling via muscarinic receptors directly and indirectly suppresses pancreatic tumorigenesis and cancer stemness.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1458-1473 (2018).</li>
<li>Lucido, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innervation+of+cervical+carcinoma+is+mediated+by+cancer-derived+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecologic+Oncology%22%5BJournal%5D)">Innervation of cervical carcinoma is mediated by cancer-derived exosomes.</a> Gynecologic Oncology. 154 (1), 228-235 (2019).</li>
<li>Peterson, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal+cell+carcinoma+preferentially+arises+from+stem+cells+within+hair+follicle+and+mechanosensory+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Basal cell carcinoma preferentially arises from stem cells within hair follicle and mechanosensory niches.</a> Cell Stem Cell. 16 (4), 400-412 (2015).</li>
<li>Maronde, E., Stehle, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mammalian+pineal+gland%3A+Known+facts%2C+unknown+facets%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">The mammalian pineal gland: Known facts, unknown facets.</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 18 (4), 142-149 (2007).</li>
<li>Yamazaki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+of+circadian+organization+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Rhythms%22%5BJournal%5D)">Ontogeny of circadian organization in the rat.</a> Journal of Biological Rhythms. 24 (1), 55-63 (2009).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((S100%2B+cells%3A+A+new+neuro-immune+cross-talkers+in+lymph+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">S100+ cells: A new neuro-immune cross-talkers in lymph organs.</a> Scientific Reports. 3 (1), 1114(2013).</li>
<li>Dieguez, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+protects+the+retina+from+experimental+nonexudative+age-related+macular+degeneration+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pineal+Research%22%5BJournal%5D)">Melatonin protects the retina from experimental nonexudative age-related macular degeneration in mice.</a> Journal of Pineal Research. 68 (4), 12643(2020).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+superior+cervical+ganglionectomy+attenuates+the+progression+of+%CE%B2-aminopropionitrile-induced+aortic+dissection+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Bilateral superior cervical ganglionectomy attenuates the progression of β-aminopropionitrile-induced aortic dissection in rats.</a> Life Sciences. 193, 200-206 (2018).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+superior+cervical+sympathetic+ganglion+in+ischemia+reperfusion-induced+acute+kidney+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">The role of the superior cervical sympathetic ganglion in ischemia reperfusion-induced acute kidney injury in rats.</a> Frontiers in Medicine. 9, 792000(2022).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+cervical+ganglionectomy+alters+gut+microbiota+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Superior cervical ganglionectomy alters gut microbiota in rats.</a> American Journal of Translational Research. 14 (3), 2037-2050 (2022).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Adrenergic+signaling+induces+Notch-mediated+salivary+gland+progenitor+cell+control%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">β-Adrenergic signaling induces Notch-mediated salivary gland progenitor cell control.</a> Stem Cell Reports. 16 (11), 2813-2824 (2021).</li>
<li>Boyd, A., Aragon, I. V., Abou Saleh, L., Southers, D., Richter, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cAMP-phosphodiesterase+4+%28PDE4%29+controls+%CE%B2-adrenoceptor-+and+CFTR-dependent+saliva+secretion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Journal%22%5BJournal%5D)">The cAMP-phosphodiesterase 4 (PDE4) controls β-adrenoceptor- and CFTR-dependent saliva secretion in mice.</a> Biochemical Journal. 478 (10), 1891-1906 (2021).</li>
<li>Smith, B., Butler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+long-term+propranolol+on+the+salivary+glands+and+intestinal+serosa+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">The effects of long-term propranolol on the salivary glands and intestinal serosa of the mouse.</a> The Journal of Pathology. 124 (4), 185-187 (1978).</li>
<li>Sucharov, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Adrenergic+receptor+antagonism+in+mice%3A+A+model+for+pediatric+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">β-Adrenergic receptor antagonism in mice: A model for pediatric heart disease.</a> Journal of Applied Physiology. 115 (7), 979-987 (2013).</li>
<li>Ding, C., Walcott, B., Keyser, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+alpha1-+and+beta1-adrenergic+modulation+of+lacrimal+gland+function+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The alpha1- and beta1-adrenergic modulation of lacrimal gland function in the mouse.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 48 (4), 1504-1510 (2007).</li>
<li>Grisanti, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prior+%CE%B2-blocker+treatment+decreases+leukocyte+responsiveness+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Prior β-blocker treatment decreases leukocyte responsiveness to injury.</a> JCI Insight. 5 (9), 99485(2019).</li>
<li>Alito, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomic+nervous+system+regulation+of+murine+immune+responses+as+assessed+by+local+surgical+sympathetic+and+parasympathetic+denervation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologica%2C+Pharmacologica+et+Therapeutica+Latinoamericana%22%5BJournal%5D)">Autonomic nervous system regulation of murine immune responses as assessed by local surgical sympathetic and parasympathetic denervation.</a> Acta Physiologica, Pharmacologica et Therapeutica Latinoamericana. 37 (3), 305-319 (1987).</li>
<li>Yun, H., Lathrop, K. L., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+central+role+for+sympathetic+nerves+in+herpes+stromal+keratitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">A central role for sympathetic nerves in herpes stromal keratitis in mice.</a> Ophthalmology & Visual Science. 57 (4), 1749-1756 (2016).</li>
<li>Haug, S. R., Heyeraas, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+sympathectomy+on+experimentally+induced+pulpal+inflammation+and+periapical+lesions+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effects of sympathectomy on experimentally induced pulpal inflammation and periapical lesions in rats.</a> Neuroscience. 120 (3), 827-836 (2003).</li>
<li>Savastano, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardized+surgical+technique+for+rat+superior+cervical+ganglionectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A standardized surgical technique for rat superior cervical ganglionectomy.</a> Journal of Neuroscience Methods. 192 (1), 22-33 (2010).</li>
<li>Garcia, J. B., Romeo, H. E., Basabe, J. C., Cardinali, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+superior+cervical+ganglionectomy+on+insulin+release+by+murine+pancreas+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Autonomic+Nervous+System%22%5BJournal%5D)">Effect of superior cervical ganglionectomy on insulin release by murine pancreas slices.</a> Journal of the Autonomic Nervous System. 22 (2), 159-165 (1988).</li>
<li>Ziegler, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+sympathetic+denervation+attenuates+myocardial+inflammation+and+improves+cardiac+function+after+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Local sympathetic denervation attenuates myocardial inflammation and improves cardiac function after myocardial infarction in mice.</a> Cardiovascular Research. 114 (2), 291-299 (2017).</li>
<li>Getsy, P. M., Coffee, G. A., Hsieh, Y. H., Lewis, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+superior+cervical+ganglia+modulate+ventilatory+responses+to+hypoxia+independently+of+preganglionic+drive+from+the+cervical+sympathetic+chain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">The superior cervical ganglia modulate ventilatory responses to hypoxia independently of preganglionic drive from the cervical sympathetic chain.</a> Journal of Applied Physiology. 131 (2), 836-857 (2021).</li>
<li>Dieguez, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+cervical+gangliectomy+induces+non-exudative+age-related+macular+degeneration+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Superior cervical gangliectomy induces non-exudative age-related macular degeneration in mice.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (2), 031641(2018).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperactivation+of+sympathetic+nerves+drives+depletion+of+melanocyte+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hyperactivation of sympathetic nerves drives depletion of melanocyte stem cells.</a> Nature. 577 (7792), 676-681 (2020).</li>
<li>Pirzgalska, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sympathetic+neuron-associated+macrophages+contribute+to+obesity+by+importing+and+metabolizing+norepinephrine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Sympathetic neuron-associated macrophages contribute to obesity by importing and metabolizing norepinephrine.</a> Nature Medicine. 23 (11), 1309-1318 (2017).</li>
<li>Kajimura, D., Paone, R., Mann, J. J., Karsenty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxo1+regulates+Dbh+expression+and+the+activity+of+the+sympathetic+nervous+system+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Foxo1 regulates Dbh expression and the activity of the sympathetic nervous system in vivo.</a> Molecular Metabolism. 3 (7), 770-777 (2014).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Protokół ten opisuje mysi model do chirurgicznej jednostronnej ablacji danych wejściowych CC. Technika ta pozwala na badanie skutków unerwienia adrenergicznego w różnych warunkach. Ponadto wycięty ganglion współczulny może być również hodowany w kulturze matrigelowej 3D do eksperymentów in vitro 30.
Badania z udziałem SCGx przeprowadzono głównie na szczurach, ponieważ ich większa anatomia pozwala na łatwiejszą wizualizację anatomiczną i preparację. Podczas gdy ...

Wiele badań wykazało, że nerwy w mikrośrodowisku guza odgrywają aktywną rolę we wspieraniu progresji guza. Wykazano, że ablacja adrenergicznych nerwów współczulnych upośledza rozwój i rozprzestrzenianie się guza w raku prostaty i żołądka in vivo1,2,3, podczas gdy farmakologiczna blokada receptorów adrenergicznych hamuje wzrost guza w raku głowy i szyi4. Współczulne zajęcie neuronów zostało również opisane w progresji raka trzustki, szyjki macicy i raka podstawnokomórkowego5,6,7.
W obrębie układu współczulnego, górny zwój szyjny (SCG) jest jedynym zwojem pnia współczulnego, który unerwia głowę. SCG reguluje różne funkcje fizjologiczne, takie jak wydzielanie śliny i rytm okołodobowy, a także bezpośrednio unerwia węzły chłonne szyjki macicy8,9,10. SCG jest również zaangażowany w procesy patologiczne, takie jak zwyrodnienie plamki żółtej11 i postęp rozwarstwienia aorty12. Ponadto doniesiono, że resekcja SCG nasila ostre uszkodzenie nerek wywołane reperfuzją niedokrwienną13, a także zmienia mikrobiotę jelitową u szczurów14.
Całkowita ablacja SCG w modelu mysim stanowiłaby cenną technikę eksperymentalną umożliwiającą badania nad rakiem i autonomicznym układem nerwowym. Podczas gdy wiele badań wykorzystywało farmakologiczną blokadę receptora adrenergicznego jako ablację adrenergiczną15,16,17,18,19,20, resekcja chirurgiczna pozwala na pełną, jednostronną ablację adrenergiczną, unikając konieczności wielokrotnej interwencji farmakologicznej i związanej z nią strony effects21,22,23.
Chirurgiczna resekcja SCG została opisana w szczurach24, a większość raportów badających efekt górnej ganglionektomii szyjnej (SCGx) wykorzystuje model szczurzy. W porównaniu z modelem szczurzym, SCGx jest technicznie trudniejszy u myszy ze względu na mały rozmiar SCG. Jednak myszy są stosunkowo łatwiejsze w obsłudze, bardziej opłacalne i bardziej podatne na manipulacje genetyczne. Garcia i wsp. byli jednymi z pierwszych, którzy opisali SCGx u myszy i stwierdzono, że wpływa on na uwalnianie insuliny25. Niedawno Ziegler i in. opisali SCGx u myszy w oparciu o opublikowaną technikę opisaną dla szczurów24,26. Ten i inne artykuły opisują metodę, w której tętnica szyjna wspólna (CCA) jest najpierw identyfikowana i preparowana, a następnie SCG jest usuwana z rozwidlenia klasy CCA<sup="xref">21,22,27,28. W tym artykule opisano mniej inwazyjną i bezpieczniejszą technikę u myszy, która pozwala uniknąć rozwarstwienia CCA, minimalizując w ten sposób najpoważniejsze powikłanie tej procedury – krwawienie z urazu CCA.

<table><tbody><tr><td>Przeciwciało przeciw hydroksylazie tyrozyny</td><td>EMD Millipore</td><td>AB152</td><td></td></tr><tr><td>Sztuczne łzy Smar Maść okulistyczna</td><td>Akorn</td><td>59399-162-35</td><td></td></tr><tr><td>Curity 2 x 2-calowa gąbka z gazy 8-warstwowa, sterylna</td><td>Covidien</td><td>1806</td><td></td></tr><tr><td>Derf Uchwyt na igłę</td><td>Thomas Scientific</td><td>1177K00</td><td></td></tr><tr>Mikroskop <td></td><td></td><td></td><td>preparacyjny</td></tr><tr><td>Dumont #5/45 Kleszcze</td><td>Narzędzia do nauki</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze Dumont #7b</td><td>Narzędzia do nauki</td><td>11270-20</td><td></td></tr><tr><td>Cienkie nożyczki do szwów nylonowych ETHILON</td><td>Ethicon</td><td>698H</td><td></td></tr><tr><td>- ToughCut</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>Hipoalergiczna taśma chirurgiczna</td><td>3M Blenderm</td><td>70200419342</td><td></td></tr><tr><td>indukcji Komora, 2 litrowy</td><td>VetEquip</td><td>941444</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter</td><td>1001936060</td><td></td></tr><tr><td>Nair</td><td>Church & Dwight Co., Inc</td><td>40002957</td><td>chemiczny środek do usuwania włosów</td></tr><tr><td>NORADRENALINE RESEARCH ELISA</td><td>Labor Diagnostika Nord (Rocky Mountain Diagnostics)</td> <td>BA E-5200</td><td></td></tr><tr><td>NSG Mouse</td><td>Jackson Laboratory</td><td>JAX:005557</td><td></td></tr><tr><td>Powidonowo-jodowa pomadka wacinowa</td><td>PDI</td><td>S41350</td><td></td></tr><tr><td>Webcol Alkohol przygotowuje</td><td>Covidien</td><td>5110</td><td></td></tr></tbody></table>

technika chirurgiczna dla górnej ganglionektomii szyjki macicy w modelu mysim

Surgical Technique for Superior Cervical Ganglionectomy in a Murine Model

Coraz więcej dowodów sugeruje, że współczulny układ nerwowy odgrywa ważną rolę w rozwoju raka. Unerwienie adrenergiczne reguluje wydzielanie gruczołów ślinowych, rytm okołodobowy, zwyrodnienie plamki żółtej, funkcje odpornościowe i fizjologię serca. Sympatektomia chirurgiczna u myszy jest metodą badania skutków unerwienia adrenergicznego poprzez umożliwienie całkowitej, jednostronnej ablacji adrenergicznej przy jednoczesnym uniknięciu konieczności powtarzania interwencji farmakologicznej i związanych z nią skutków ubocznych. Jednak chirurgiczna sympatektomia u myszy jest technicznie trudna ze względu na mały rozmiar górnego zwoju szyjnego. W badaniu tym opisano technikę chirurgiczną służącą do niezawodnej identyfikacji i resekcji górnego zwoju szyjnego w celu ablacji współczulnego układu nerwowego. Pomyślna identyfikacja i usunięcie ganglionu są weryfikowane poprzez obrazowanie fluorescencyjnych zwojów współczulnych za pomocą myszy transgenicznej, identyfikację zespołu Hornera po resekcji, barwienie markerów adrenergicznych w wyciętych zwojach i obserwację zmniejszonej immunofluorescencji adrenergicznej w narządach docelowych po sympatektomii. Model ten umożliwia w przyszłości badania nad progresją nowotworu, a także innymi procesami fizjologicznymi regulowanymi przez współczulny układ nerwowy.

Ten protokół opisuje chirurgiczne usunięcie SCG w modelu mysim. <silna klasa="xfig">Rysunek 2 ilustruje anatomiczne punkty orientacyjne, w tym CCA, żyłę szyjną przednią i SCG. Po rozwarstwieniu (<silna klasa="xfig">Ryc. 2A) można zobaczyć prawą żyłę szyjną przednią biegnącą wzdłuż bocznej granicy tchawicy. Ponieważ znajduje się głębiej niż przednia żyła szyjna, lewa CCA i jej rozwidlenie na tętnicę szyjną wewnętrzną (ICA) i tętnicę szyjną zewnętrzną (ECA) są słabo widoczne tylko po stronie żyły. Podczas sprawdzania tego ...

Obecny protokół opisuje mysi model ablacji unerwienia adrenergicznego poprzez identyfikację i resekcję górnego zwoju szyjnego.

Technika chirurgiczna dla górnej ganglionektomii szyjki macicy w modelu mysim

Growing evidence suggests that the sympathetic nervous system plays an important role in cancer progression. Adrenergic innervation regulates salivary ...

Współczulny układ nerwowy odgrywa ważną rolę w progresji raka i innych chorobach. Chirurgiczna sympatektomia jest cenną metodą badania tych procesów poprzez indukcję całkowitej jednostronnej ablacji adrenergicznej. Technika ta pozwala uniknąć skutków ubocznych związanych z farmakologicznym hamowaniem współczulnego układu nerwowego.Dodatkowo jest mniej inwazyjna niż wcześniej opisane metody, ponieważ pozwala uniknąć rozwarstwienia tętnicy szyjnej. Podczas wykonywania tej techniki może być trudno wejść do właściwej przestrzeni, w której znajduje się ganglion i odróżnić go od tłuszczu. W związku z tym niezbędne jest zidentyfikowanie punktu orientacyjnego i praktyki.Anatomia wygląda nieco inaczej, gdy jest w ruchu i nie jest preparowana, więc demonstracja wizualna stanowi lepszy przewodnik, jak zidentyfikować anatomiczny punkt orientacyjny, który jest kluczowy dla tej techniki. Zacznij od nałożenia miejscowej maści okulistycznej na znieczuloną mysz, aby zapobiec urazom oczu i suchości. Umieść mysz pod mikroskopem preparacyjnym po jej grzbietowej stronie i utrzymuj znieczulenie wziewne za pomocą precyzyjnego waporyzatora i stożka nosowego.Zabezpiecz obie kończyny przednie hipoalergiczną taśmą. Ogoloną brzuszną część szyi oczyść jodonem powidonu, a następnie przetrzyj 70% alkoholem. Po powtórzeniu procesu czyszczenia jeszcze dwa razy, umieść sterylną serwetę na polu operacyjnym.Następnie użyj małych nożyczek i wykonaj 1,5-centymetrowe nacięcie skóry w linii środkowej na brzusznej stronie szyi od około dwóch milimetrów poniżej podbródka do dwóch milimetrów powyżej wcięcia mostka. Oddziel skórę od leżącej pod spodem powięzi, wkładając spiczaste nożyczki pod skórę z każdej strony i rozprowadzając. Następnie cofnij krawędzie skóry na boki za pomocą kleszczy, aby odsłonić leżącą pod spodem powięź i ślinianki podżuchwowe.Pociągnij gruczoły podżuchwowe doogonowo kleszczami, aby odsłonić leżące pod spodem mięśnie. Następnie zlokalizuj połączenie tylnego brzucha mięśnia dwubrzuścowego i mięśnia omohyoidalnego. Włóż końcówkę kleszczy pod kątem 45 stopni w tym skrzyżowaniu bocznym do przedniej żyły szyjnej, aby przebić i rozprowadzić otwór w leżącej nad nim głębokiej powięzi szyjnej.Trzymaj to okno otwarte za pomocą kleszczy ustawionych pod kątem 45 stopni i rozszerz ten otwór szerzej, wykonując manewry rozpierania z parą zakrzywionych kleszczy w drugiej ręce. Zlokalizuj górny ganglion szyjny lub SCG na bocznej ścianie odsłoniętej przestrzeni. Drugą ręką podtrzymując otwór kleszczami, delikatnie chwyć SCG kleszkami i wyciągnij go z otworu, aby był lepiej widoczny.Gdy SCG znajdzie się w polu widzenia, chwyć boczną podstawę SCG, gdzie jest on nadal przyczepiony do otaczających tkanek. Drugą ręką powoli i delikatnie cofnij SCG w kierunku brzusznym i ogonowym wiele razy, aby stopniowo zwichnąć ganglion. Podczas tego manewru utrzymuj ganglion w stanie nienaruszonym, aby upewnić się, że nie pozostały żadne resztki ganglionu.Powoli zwolnij podstawę ganglionu i sprawdź, czy nie ma krwawienia, szukając gromadzącej się krwi. Po zakończeniu przesuń gruczoły ślinowe z powrotem do ich normalnych pozycji anatomicznych. Przybliż i zamknij skórę za pomocą prostych, przerywanych szwów nylonowych 5-0.Podczas rozwarstwienia prawa przednia żyła szyjna przebiegała wzdłuż bocznej granicy tchawicy. Kiedy transgeniczna mysz P0 tdTomato z czerwonymi neuronami fluorescencyjnymi została zbadana pod mikroskopem fluorescencyjnym, zaobserwowano fluorescencyjny nerw błędny biegnący bocznie do tętnicy szyjnej wspólnej, a fluorescencyjny SCG zaobserwowano przy rozwidleniu tętnicy szyjnej wspólnej bocznej do przedniej żyły szyjnej. Wycięty SCG u myszy transgenicznej został potwierdzony przez jego czerwoną fluorescencję w porównaniu z niefluorescencyjną kontrolą SCG.Barwienie immunofluorescencyjne potwierdziło obecność hydroksylazy tyrozyny, markera nerwów adrenergicznych. Po wycięciu zwoju szyjnego górnego zaobserwowano opadanie powieki, czyli opadanie powieki, co jest oznaką zespołu Hornera. Barwienie immunofluorescencyjne hydroksylazy tyrozynowej na prawym gruczole ślinowym podżuchwowym po wycięciu ganglionektomii szyjki macicy prawej górnej potwierdziło udaną ablację sygnalizacji adrenergicznej przy braku barwienia nerwów hydroksylazą tyrozyny.W przeciwieństwie do tego, lewy kontrolny gruczoł podżuchwowy zachował swój adrenergiczny wkład i nienaruszony barwnik nerwu hydroksylazy tyrozyny, co zostało również potwierdzone przez kwantyfikację. Kwantyfikacja ELISA noradrenaliny w gruczole ślinowym potwierdziła znaczne zmniejszenie ekspresji noradrenaliny w gruczole podżuchwowym po stronie górnej ganglionektomii szyjnej w przeciwieństwie do kontrolnej strony pozorowanej operacji. Zachowaj cierpliwość i delikatność podczas usuwania SCG.Usuwaj go powoli, w sposób fragmentaryczny. W przeciwnym razie tętnica szyjna połączona z SCG może łatwo ulec uszkodzeniu, co spowoduje krwawienie.

surgical-technique-for-superior-cervical-ganglionectomy-murine

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Niniejszy protokół opisuje sposób izolacji i hodowli pierwotnych neuronów współczulnych z zwojów szyjnych górnych (SCG) nowo narodzonych szczurów.

Protokół hodowli neuronów współczulnych z zwojów szyjnych górnych (SCG) szczura

Aby śledzić przebieg odpowiedzi immunologicznej w czasie u tej samej myszy, węzły chłonne można usuwać sekwencyjnie drogą chirurgiczną. W niniejszym materiale opisujemy sposób wykonania tej techniki.

Chirurgiczne usuwanie powierzchownych węzłów chłonnych u myszy

W tym filmie opisujemy procedurę dostarczania komórek nowotworowych pochodzenia ludzkiego do cisterna magna mózgu myszy. Ortotopowy model myszy może być wykorzystany do badania przerzutowego rozprzestrzeniania się raka do opon mózgowo-rdzeniowych.

Chirurgiczne wstrzyknięcie Cisterna Magna: metoda podawania komórek nowotworowych bezpośrednio do ośrodkowego układu nerwowego modelu mysiego

Prezentujemy protokół chirurgiczny szczegółowo opisujący, jak wykonać aksotomię cięcia lub zgniecenia nerwu twarzowego u myszy. Akskotomia nerwu twarzowego może być wykorzystana do badania fizjologicznej reakcji na uszkodzenie nerwu i testowania technik terapeutycznych.

Aksotomia nerwu twarzowego u myszy: model do badania reakcji neuronów ruchowych na uraz

Tutaj prezentujemy protokół heterotopowego przeszczepu aorty u myszy przy użyciu techniki mankietu bez szwów w mysim modelu szyjki macicy. Model ten może być wykorzystany do badania patologii leżącej u podstaw przewlekłej waskulopatii przeszczepu allogenicznego (CAV) i może pomóc w ocenie nowych środków terapeutycznych w celu zapobiegania jej powstawaniu.

Mysi model przeszczepu aorty szyjnej przy użyciu zmodyfikowanej techniki mankietu bez szwów

Tutaj opisujemy model mysiego ksenoprzeszczepu, który funkcjonalnie przypomina rezerwuar Ommaya u pacjentów. Opracowaliśmy mysi Ommaya w celu zbadania nowych metod leczenia powszechnie śmiertelnej choroby opon mózgowo-rdzeniowych.

Mysi model ksenoprzeszczepu Ommaya do badania terapii ukierunkowanej na chorobę opon mózgowo-rdzeniowych

Stereotaktyczna operacja celowania w miejsca mózgu u myszy zwykle obejmuje dostęp przez kości czaszki i jest prowadzona przez punkty orientacyjne czaszki. Poniżej przedstawiamy alternatywne podejście stereotaktyczne do celowania w ogonowy pień mózgu i górny odcinek szyjny rdzenia kręgowego za pomocą cisterna magna, które opiera się na bezpośredniej wizualizacji punktów orientacyjnych pnia mózgu.

Stereotaktyczne podejście chirurgiczne do mikroiniekcji ogonowego pnia mózgu i górnego odcinka szyjnego rdzenia kręgowego za pośrednictwem Cisterna magna u myszy

Ten protokół opisuje szczegółowe, niskonakładowe przygotowanie próbki do sekwencjonowania pojedynczego jądra, w tym sekcję górnych zwojów szyjnych i gwiaździstych myszy, dysocjację komórek, krioprezerwację, izolację jądra i kodowanie kreskowe hashtagów.

Izolacja i multipleksowanie jądra o niskim poziomie wejściowym z przeciwciałami kodowymi zwojów współczulnych myszy do sekwencjonowania RNA pojedynczego jądra

Naprawa tętnicy wewnątrzszyjnej w modelu mysim po wstrzyknięciu przywraca przepływ krwi do tętnicy bez negatywnego wpływu na dystrybucję wstrzykniętego materiału. Naprawa miejsca wstrzyknięcia ułatwia kolejne wstrzyknięcia przez tę samą tętnicę i zapobiega niedokrwieniu mózgu u szczepów myszy, które nie mają pełnego koła Willisa.

Ułatwienie powtórnych iniekcji do tętnicy szyjnej w modelach mysich za pomocą nowatorskiej techniki naprawy miejsca wstrzyknięcia

Ten manuskrypt przedstawia protokół chirurgicznego usuwania zazwojowych neuronów współczulnych odcinka lędźwiowego u myszy. Procedura ta ułatwi wiele badań mających na celu zbadanie roli unerwienia współczulnego w dystalnych celach tkankowych.

Chirurgiczna sympatektomia lędźwiowa u myszy

Poznaj technikę chirurgiczną górnej ganglionektomii szyjnej w modelu mysim do badania układu współczulnego. Ta metoda umożliwia selektywną ablację adrenergiczną z minimalnymi efektami ubocznymi.

Technika chirurgiczna dla górnej ganglionektomii szyjki macicy w modelu mysim

Przeglądaj więcej filmów