Opracowanie i charakterystyka modeli ksenoprzeszczepów anaplastycznego raka tarczycy oraz raka płaskonabłonkowego głowy i szyi pochodzących od pacjentów

Protokół ten pomaga w ustaleniu modeli ATC i HNSCC PDX, które lepiej odzwierciedlają niejednorodność guza, różnorodność molekularną i przewidują wyniki kliniczne. Technika jest prosta w obsłudze, ma wysoki wskaźnik sukcesu i może być również odpowiednia dla innych modeli PDX. Technika ta może być rozszerzona w kierunku badań przesiewowych wrażliwości na leki przeciwnowotworowe, aby kierować spersonalizowanym leczeniem pacjenta z rakiem.

Osoba, która nigdy nie wykonywała tej techniki, może napotkać pewne trudności i zaleca się zwrócenie uwagi na każdy szczegół schematu. Po pobraniu próbek guza ATC i HNSCC w 50-milimetrowej probówce wirówkowej zawierającej sterylny roztwór HTK, należy je zdezynfekować 75% alkoholem. Użyj wysterylizowanych kleszczy okulistycznych, aby przenieść tkankę nowotworową na sześciocentymetrową szalkę Petriego wypełnioną solą fizjologiczną i pokrój je na małe kawałki za pomocą ostrza.

Następnie przenieś kawałki na nową, sześciocentymetrową szalkę Petriego zawierającą sól fizjologiczną i owiń ją folią uszczelniającą. Umieść zawinięte naczynie w pojemniku na lód, zanieś je do wolnego od patogenów pomieszczenia dla zwierząt za pomocą nożyczek, kleszczy i igieł do zaszczepiania. Po znieczuleniu myszy usuń włosy z prawej bocznej części klatki piersiowej i zdezynfekuj obszar 75% alkoholem.

Użyj nożyczek, aby wykonać dwumilimetrowe nacięcie na środku prawej bocznej klatki piersiowej. Za pomocą kleszczy weź tkankę z szalki Petriego i umieść ją w igle trokarowej. Przytrzymaj mysz i napnij skórę w miejscu nakłucia.

Włóż trokar z kawałkiem guza do nacięcia do przestrzeni podskórnej, a następnie przejdź do tylnej części barku i popchnij rdzeń trokaru. Aby zarezerwować pozostałą tkankę za pomocą sterylnej gazy, usuń sól fizjologiczną z powierzchni guza, upewniając się, że nie jest nadmiernie mokra. Umieść od czterech do sześciu kawałków tkanki w dwumililitrowej probówce do krioprezerwacji komórek i dodaj jeden mililitr roztworu do krioprezerwacji do probówki.

Następnie umieść rurkę w gradientowym pudełku chłodzącym i zamroź ją w temperaturze minus 80 stopni Celsjusza przez noc. Na koniec przenieś go do ciekłego azotu. Do resuscytacji guzów modelu PDX należy raz w tygodniu używać suwmiarki do pomiaru długości i szerokości guza podskórnego.

Oblicz objętość guza i narysuj krzywą wzrostu guza. Następnie za pomocą nożyczek przeciąć uświęconą skórę myszy otaczającą guz. Usuń guz za pomocą kleszczy i umieść go na szalce Petriego.

Przeszczep guza należy wykonać do piątego pokolenia myszy, jak wykazano wcześniej. Wybierz tkankę nowotworową myszy ATC PDX generacji P5. Pokrój na dwa do czterech milimetrowych kawałków.

Zaszczepij te kawałki podskórnie, jak pokazano wcześniej, po prawej stronie nagiej samicy myszy BALB/c w wieku od czterech do sześciu tygodni. Kiedy guz rośnie od 50 do 150 milimetrów sześciennych, podziel myszy na trzy grupy. Po podaniu lenwatynibu, cisplatyny i grupy kontrolnej dwa razy w tygodniu, zmierz masę ciała myszy.

Zmierz również objętość guza. Analiza korelacji wykazała, że wskaźnik sukcesu konstrukcji modelu ATC PDX nie był zależny od wieku, płci, średnicy guza, stopnia zaawansowania guza i zróżnicowania. Wskaźnik wchłaniania guza w konstrukcji modelu HNSCC PDX wykazał, że stopień zróżnicowania był związany ze wskaźnikiem sukcesu modelu, podczas gdy inne parametry nie wpływały na wskaźnik wchłaniania guza.

Krzywe wzrostu guza dla każdego modelu PDX zilustrowały, że próbki ATC były stabilnie przekazywane do pokolenia P3, podczas gdy dwa przypadki próbek HNSCC nie utworzyły guzów po przejściu do pokolenia P1. Tempo wzrostu guza generacji P0 dla większości modeli PDX było stosunkowo wolniejsze niż dla późniejszych pasaży, prawdopodobnie ze względu na adaptację mikrośrodowiska myszy. W badaniu histopatologicznym wykazano, że guzy PDX zachowują cechy morfologiczne guzów pierwotnych.

Leczenie lenwatynibem istotnie hamowało wzrost guza i wykazało mniejszą masę guza w modelu ATC PDX w porównaniu z grupą kontrolną. Ponadto myszy leczone lenwatynibem nie wykazywały zauważalnych zmian w swojej całkowitej masie ciała. Nadmierne dawkowanie cisplatyny powodowało znaczną toksyczność, o czym świadczyła utrata masy ciała, a nawet śmierć.

Świeże guzy należy kilkakrotnie przemyć zwykłą solą fizjologiczną przed pokrojeniem na kawałki. Mieszanie próbek guza z biopsji i zaszczepianie ich prawdopodobnie spowoduje powstanie guza. Model ten może być używany do badań biologicznych nowotworów, badań przesiewowych leków, terapii spersonalizowanej.