Name: Trójwymiarowa hodowla unaczynionej termogenicznej tkanki tłuszczowej z fragmentów mikronaczyniowych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-03T13:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 24 s
Description: Poznaj metodę hodowli trójwymiarowej unaczynionej termogenicznej tkanki tłuszczowej z fragmentów mikronaczyniowych. Protokół umożliwia tworzenie funkcjonalnego tłuszczu beżowego z pojedynczego źródła komórek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr Acosta jest wspierany przez granty National Institutes of Health CA148724 a TL1TR002647. Dr Gonzalez Porras jest wspierany przez National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases of the National Institutes of Health, pod numerem nagrody F32-0DK122754. Prace te były częściowo wspierane przez National Institutes of Health (5SC1DK122578) oraz Wydział Inżynierii Biomedycznej Uniwersytetu Teksańskiego w San Antonio. Wyłączną odpowiedzialność za treść ponoszą autorzy i nie muszą one reprezentować oficjalnych poglądów National Institutes of Health. Figury zostały częściowo stworzone za pomocą Biorender.com.

<ol><li>Cohen, P., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+and+beige+fat%3A+molecular+parts+of+a+thermogenic+machine%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Brown and beige fat: molecular parts of a thermogenic machine.</a> Diabetes. 64 (7), 2346-2351 (2015).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+adipose+tissue+transplantation+reverses+obesity+in+Ob%2FOb+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Brown adipose tissue transplantation reverses obesity in Ob/Ob mice.</a> Endocrinology. 156 (7), 2461-2469 (2015).</li>
<li>Tharp, K. M., Stahl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+beige+adipose+tissue+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Bioengineering beige adipose tissue therapeutics.</a> Frontiers in Endocrinology. 6, 164(2015).</li>
<li>Barquissau, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White-to-brite+conversion+in+human+adipocytes+promotes+metabolic+reprogramming+towards+fatty+acid+anabolic+and+catabolic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Metabolism%22%5BJournal%5D)">White-to-brite conversion in human adipocytes promotes metabolic reprogramming towards fatty acid anabolic and catabolic pathways.</a> Molecular Metabolism. 5 (5), 352-365 (2016).</li>
<li>Kim, S. H., Plutzky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+fat+and+browning+for+the+treatment+of+obesity+and+related+metabolic+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+%26+Metabolism+Journal%22%5BJournal%5D)">Brown fat and browning for the treatment of obesity and related metabolic disorders.</a> Diabetes & Metabolism Journal. 40 (1), 12-21 (2016).</li>
<li>Lizcano, F., Vargas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+beige+adipocyte+and+possible+therapy+for+type+2+diabetes+and+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Biology of beige adipocyte and possible therapy for type 2 diabetes and obesity.</a> International Journal of Endocrinology. 2016, 9542061(2016).</li>
<li>Mulya, A., Kirwan, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+and+beige+adipose+tissue%3A+therapy+for+obesity+and+its+comorbidities%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology+and+Metabolism+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Brown and beige adipose tissue: therapy for obesity and its comorbidities.</a> Endocrinology and Metabolism Clinics of North America. 45 (3), 605-621 (2016).</li>
<li>Murphy, C. S., Liaw, L., Reagan, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+tissue-engineered+adipose+constructs+for+modeling+disease%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">In vitro tissue-engineered adipose constructs for modeling disease.</a> BMC Biomedical Engineering. 1, 27(2019).</li>
<li>Srivastava, S., Veech, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+and+brite%3A+The+fat+soldiers+in+the+anti-obesity+fight%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Brown and brite: The fat soldiers in the anti-obesity fight.</a> Frontiers in Physiology. 10, 38(2019).</li>
<li>Samuelson, I., Vidal-Puig, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+brown+adipose+tissue+in+a+human+in+vitro+context%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Studying brown adipose tissue in a human in vitro context.</a> Frontiers in Endocrinology. 11, 629(2020).</li>
<li>Wang, C. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-engineered+human+brown-like+adipocytes+prevent+diet-induced+obesity+and+ameliorate+metabolic+syndrome+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">CRISPR-engineered human brown-like adipocytes prevent diet-induced obesity and ameliorate metabolic syndrome in mice.</a> Science Translational Medicine. 12 (558), (2020).</li>
<li>Kaisanlahti, A., Glumoff, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Browning+of+white+fat%3A+agents+and+implications+for+beige+adipose+tissue+to+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Browning of white fat: agents and implications for beige adipose tissue to type 2 diabetes.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 75 (1), 1-10 (2019).</li>
<li>Sato, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+capillary+networks+from+rat+microvascular+fragments+in+vitro%3A+the+role+of+myofibroblastic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Development of capillary networks from rat microvascular fragments in vitro: the role of myofibroblastic cells.</a> Microvascular Research. 33 (2), 194-210 (1987).</li>
<li>Laschke, M. W., Später, T., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+fragments%3A+More+than+just+natural+vascularization+units%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Microvascular fragments: More than just natural vascularization units.</a> Trends in Biotechnology. 39 (1), 24-33 (2021).</li>
<li>Hoying, J. B., Boswell, C. A., Williams, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+potential+of+microvessel+fragments+established+in+three-dimensional+collagen+gels%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biology-Animal%22%5BJournal%5D)">Angiogenic potential of microvessel fragments established in three-dimensional collagen gels.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 32 (7), 409-419 (1996).</li>
<li>Acosta, F. M., Stojkova, K., Brey, E. M., Rathbone, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+straightforward+approach+to+engineer+vascularized+adipose+tissue+using+microvascular+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">A straightforward approach to engineer vascularized adipose tissue using microvascular fragments.</a> Tissue Engineering. Part A. 26 (15-16), 905-914 (2020).</li>
<li>Acosta, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipogenic+differentiation+alters+properties+of+vascularized+tissue-engineered+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Adipogenic differentiation alters properties of vascularized tissue-engineered skeletal muscle.</a> Tissue Engineering. Part A. 28 (1-2), 54-68 (2021).</li>
<li>Strobel, H. A., Gerton, T., Hoying, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+adipocyte+organoid+model+using+isolated+human+microvessel+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">Vascularized adipocyte organoid model using isolated human microvessel fragments.</a> Biofabrication. 13 (3), 035022(2021).</li>
<li>Acosta, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+functional+vascularized+beige+adipose+tissue+from+microvascular+fragments+of+models+of+healthy+and+type+II+diabetes+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Engineering functional vascularized beige adipose tissue from microvascular fragments of models of healthy and type II diabetes conditions.</a> Journal of Tissue Engineering. 13, 20417314221109337(2022).</li>
<li>Gonzalez Porras, M. A., Stojkova, K., Acosta, F. M., Rathbone, C. R., Brey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+human+beige+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Engineering human beige adipose tissue.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 10, 906395(2022).</li>
<li>Herold, J., Kalucka, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+adipose+tissue%3A+The+interplay+between+adipose+and+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in adipose tissue: The interplay between adipose and endothelial cells.</a> Frontiers in Physiology. 11, 1861(2021).</li>
<li>McCarthy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat-On-A-Chip+models+for+research+and+discovery+in+obesity+and+its+metabolic+comorbidities%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+B%3A+Reviews%22%5BJournal%5D)">Fat-On-A-Chip models for research and discovery in obesity and its metabolic comorbidities.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 26 (6), 586-595 (2020).</li>
<li>Klingelhutz, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffold-free+generation+of+uniform+adipose+spheroids+for+metabolism+research+and+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Scaffold-free generation of uniform adipose spheroids for metabolism research and drug discovery.</a> Scientific Reports. 8 (1), 523(2018).</li>
<li>Yang, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolically+active+three-dimensional+brown+adipose+tissue+engineered+from+white+adipose-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Metabolically active three-dimensional brown adipose tissue engineered from white adipose-derived stem cells.</a> Tissue Engineering. Part A. 23 (7-8), 253-262 (2017).</li>
<li>Vaicik, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogel-based+engineering+of+beige+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry+B%22%5BJournal%5D)">Hydrogel-based engineering of beige adipose tissue.</a> Journal of Materials Chemistry B. 3 (40), 7903-7911 (2015).</li>
<li>Tharp, K. M., Stahl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+beige+adipose+tissue+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Bioengineering beige adipose tissue therapeutics.</a> Frontiers in Endocrinology. 6, 164(2015).</li>
<li>Tharp, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-assisted+transplantation+of+functional+beige+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Matrix-assisted transplantation of functional beige adipose tissue.</a> Diabetes. 64 (11), 3713-3724 (2015).</li>
<li>Harms, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+human+white+adipocytes+cultured+under+membranes+maintain+identity%2C+function%2C+and+can+transdifferentiate+into+brown-like+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Mature human white adipocytes cultured under membranes maintain identity, function, and can transdifferentiate into brown-like adipocytes.</a> Cell Reports. 27 (1), 213-225 (2019).</li>
<li>Frueh, F. S., Später, T., Scheuer, C., Menger, M. D., Laschke, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+murine+adipose+tissue-derived+microvascular+fragments+as+vascularization+units+for+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of murine adipose tissue-derived microvascular fragments as vascularization units for tissue engineering.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55721(2017).</li>
<li>Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+adipose+tissue%3A+Function+and+physiological+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Brown adipose tissue: Function and physiological significance.</a> Physiological Reviews. 84 (1), 277-359 (2004).</li>
<li>Unser, A. M., Tian, Y., Xie, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opportunities+and+challenges+in+three-dimensional+brown+adipogenesis+of+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Advances%22%5BJournal%5D)">Opportunities and challenges in three-dimensional brown adipogenesis of stem cells.</a> Biotechnology Advances. 33, 962-979 (2015).</li>
<li>Dani, V., Yao, X., Dani, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+fat+tissues+and+iPSC-derived+energy+expenditure+adipocytes+to+counteract+obesity-driven+metabolic+disorders%3A+Current+strategies+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Reviews+in+Endocrine+%26+Metabolic+Disorders%22%5BJournal%5D)">Transplantation of fat tissues and iPSC-derived energy expenditure adipocytes to counteract obesity-driven metabolic disorders: Current strategies and future perspectives.</a> Reviews in Endocrine & Metabolic Disorders. 23 (1), 103-110 (2022).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+microvascular+fragments+as+vascularization+units+for+dental+pulp+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived microvascular fragments as vascularization units for dental pulp regeneration.</a> Journal of Endodontics. 47 (7), 1092-1100 (2021).</li>
<li>McDaniel, J. S., Pilia, M., Ward, C. L., Pollot, B. E., Rathbone, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+multilineage+potential+of+cells+derived+from+isolated+microvascular+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Characterization and multilineage potential of cells derived from isolated microvascular fragments.</a> Journal of Surgical Research. 192 (1), 214-222 (2014).</li>
<li>Gealekman, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depot-specific+differences+and+insufficient+subcutaneous+adipose+tissue+angiogenesis+in+human+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Depot-specific differences and insufficient subcutaneous adipose tissue angiogenesis in human obesity.</a> Circulation. 123 (2), 186-194 (2011).</li>
<li>Altalhi, W., Hatkar, R., Hoying, J. B., Aghazadeh, Y., Nunes, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+I+diabetes+delays+perfusion+and+engraftment+of+3D+constructs+by+impinging+on+angiogenesis%3B+which+can+be+rescued+by+hepatocyte+growth+factor+supplementation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Type I diabetes delays perfusion and engraftment of 3D constructs by impinging on angiogenesis; which can be rescued by hepatocyte growth factor supplementation.</a> Cellular and Molecular Bioengineering. 12 (5), 443-454 (2019).</li>
<li>Altalhi, W., Sun, X., Sivak, J. M., Husain, M., Nunes, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+impairs+arterio-venous+specification+in+engineered+vascular+tissues+in+a+perivascular+cell+recruitment-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Diabetes impairs arterio-venous specification in engineered vascular tissues in a perivascular cell recruitment-dependent manner.</a> Biomaterials. 119, 23-32 (2017).</li>
<li>Laschke, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+microvascular+fragments+from+aged+donors+exhibit+an+impaired+vascularisation+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22European+Cells+%26+Materials%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived microvascular fragments from aged donors exhibit an impaired vascularisation capacity.</a> European Cells & Materials. 28, 287-298 (2014).</li>
<li>Später, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularization+of+microvascular+fragment+isolates+from+visceral+and+subcutaneous+adipose+tissue+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Vascularization of microvascular fragment isolates from visceral and subcutaneous adipose tissue of mice.</a> Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 19 (1), 161-175 (2021).</li>
<li>Später, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+microvascular+fragments+from+male+and+female+fat+donors+exhibit+a+comparable+vascularization+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived microvascular fragments from male and female fat donors exhibit a comparable vascularization capacity.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 9, 777687(2021).</li>
<li>Laschke, M. W., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+simpler%2C+the+better%3A+tissue+vascularization+using+the+body%27s+own+resources%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">The simpler, the better: tissue vascularization using the body's own resources.</a> Trends in Biotechnology. 40 (3), 281-290 (2022).</li>
<li>Yang, F., Cohen, R. N., Brey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+co-culture+conditions+for+a+human+vascularized+adipose+tissue+model%5BTitle%5D)+AND+%22Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Optimization of co-culture conditions for a human vascularized adipose tissue model.</a> Bioengineering. 7 (3), 114(2020).</li>
<li>Pilkington, A. -C., Paz, H. A., Wankhade, U. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beige+adipose+tissue+identification+and+marker+specificity-Overview%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Beige adipose tissue identification and marker specificity-Overview.</a> Frontiers in Endocrinology. 12, 599134(2021).</li>
<li>Chiou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffold+architecture+and+matrix+strain+modulate+mesenchymal+cell+and+microvascular+growth+and+development+in+a+time+dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Scaffold architecture and matrix strain modulate mesenchymal cell and microvascular growth and development in a time dependent manner.</a> Cellular and Molecular Bioengineering. 13 (5), 507-526 (2020).</li>
</ol>

Autorzy deklarują, że badanie zostało przeprowadzone przy braku jakichkolwiek powiązań handlowych lub finansowych, które mogłyby być interpretowane jako potencjalny konflikt interesów.

Dziedzina inżynierii brunatno-beżowej tkanki tłuszczowej jest w dużej mierze niedojrzała 22,23,24,25,26,27,28, przy czym większość modeli tkanki tłuszczowej jest opracowywana dla białej tkanki tłuszczowej 8,22,31<sup class...

Celem tego protokołu jest opisanie podejścia do rozwoju unaczynionej beżowej tkanki tłuszczowej z pojedynczego, potencjalnie autologicznego źródła, fragmentu mikronaczyniowego (MVF). Wykazano, że brązowa i beżowa tkanka tłuszczowa wykazuje korzystne właściwości związane z regulacją metaboliczną; Jednak niewielka objętość tych magazynów tkanki tłuszczowej u dorosłych ogranicza potencjalny wpływ na metabolizm ogólnoustrojowy, szczególnie w stanach chorobowych, takich jak otyłość lub cukrzyca typu 21,2,3,4,5,6,7. Istnieje duże zainteresowanie brązowym/beżowym tłuszczem jako celem terapeutycznym w zapobieganiu szkodliwym skutkom metabolicznym związanym z otyłością i chorobami współistniejącymi8,9,10,11,12.
MVFs to struktury naczyń, które mogą być bezpośrednio izolowane z tkanki tłuszczowej, hodowane i utrzymywane w trójwymiarowej konfiguracji przez dłuższy okres czasu13,14,15. Wcześniejsze prace naszej grupy, a także innych, zaczęły wykorzystywać wielokomórkową i multipotencjalną zdolność MVF, szczególnie w odniesieniu do tworzenia tkanki tłuszczowej16,17,18. W ramach tej pracy wykazaliśmy niedawno, że MVF pochodzące z modeli gryzoni zdrowych i chorych na cukrzycę typu 2 19 oraz od ludzi (dorośli powyżej 50 roku życia)20 zawierały komórki zdolne do indukowania do tworzenia termogenicznej lub beżowej tkanki tłuszczowej.
To jest innowacyjne podejście, z którego wykorzystuje się MVF z jednego źródła, nie tylko zdolne do tworzenia beżowej tkanki tłuszczowej, ale także jej powiązanego i krytycznego składnika naczyniowego21. Zastosowanie tej techniki może być bardzo cenne dla badań poszukujących prostego podejścia do termogenicznego tworzenia tkanki tłuszczowej za pomocą inżynierii tkankowej. W przeciwieństwie do innych metod dążących do inżynierii beżowej tkanki tłuszczowej22,23,24,25,26,27,28, proces opisany w tym badaniu nie wymaga stosowania wielu typów komórek ani złożonych schematów indukcji. Unaczynione beżowe i białe modele tłuszczowe mogą być tworzone za pomocą MVF pochodzących ze źródeł gryzoni i ludzi, wykazując duży potencjał translacyjny. Produktem końcowym tego protokołu jest zmodyfikowana beżowa termogeniczna tkanka tłuszczowa o budowie i funkcji metabolicznej porównywalnej do brunatnej tkanki tłuszczowej. Ogólnie rzecz biorąc, protokół ten przedstawia ideę, że łatwo dostępne i możliwie autologiczne źródło MVF może być wartościową interwencją terapeutyczną i narzędziem do badania zaburzeń metabolicznych.

<table><tbody><tr><td>Kwas aminokapronowy</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2504-100G</td><td>Dodany do DMEM w stężeniu 1 mg / ml</td></tr><tr><td>Nożyczki z końcówkami</td><td>Fisher scientific</td><td>12-000-172</td><td>Sterylizuj w autoklawie</td></tr><tr><td>Bovin Albumina surowicy (BSA)</td><td>Milipor</td><td>126575-10GM</td><td>Rozcieńczony w PBS do 4 mg / ml i 1 mg / ml</td></tr><tr><td>Kolagenaza typu 1</td><td>Fisher scientific</td><td>NC9633623</td><td>Rozcieńczony do 6 mg/ml w BSA 4 mg/ml, Trawienie tłuszczu mielonego</td></tr><tr><td>Deksametazon</td><td>Thermo Scientific</td><td>AC230302500</td><td>Rozcieńczony w etanolu w stężeniu podstawowym 2 mg/ml</td></tr><tr><td>Podkładki jednorazowe</td><td>Fisher scientific</td><td>23-666-062</td><td>Do wchłaniania płynów podczas operacji</td></tr><tr><td>Nożyczki preparacyjne</td><td>Fisher scientific</td><td>08-951-5</td><td>Sterylizuj w autoklawie</td></tr><tr><td>Dulbecco&prime; s Zmodyfikowany Orzeł i liczba pierwsza; s Medium (DMEM)</td><td>Fisher naukowy</td><td>11885092</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&prime; s Zmodyfikowany Orzeł i liczba pierwsza; s Mieszanka pożywki i składników odżywczych Szynka F-12 (DMEM/F12)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8062</td><td></td></tr><tr><td>Surowica bydlęca płodu&nbsp;</td><td>Fisher scientific</td><td>16140089</td><td>Dodano DMEM do 20% v/v.</td></tr><tr><td>Fibrynogen&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F8630-25G</td><td>Rozpuszczony w DMEM w stężeniu 20 mg/mL, Białko znajdujące się w osoczu krwi i główny składnik kolby hydrożelowej</td></tr><tr><td>, 250 ml</td><td>Fisher scientific</td><td>FB500250</td><td>Pozwala na trawienie tłuszczu przy użyciu dużej powierzchni</td></tr><tr><td>Kleszcze</td><td>Fisher scientific</td><td>50-264-21</td><td>Sterylizować w autoklawie, Do pracy z tkankami i filtrami</td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F6886</td><td>Rozcieńczony w etanolu przy stężeniu podstawowym 10 mM</td></tr><tr><td>Human MVF</td><td>Advanced Solutions Life Scienes, LLC</td><td>https://www.advancedsolutions.com/microvessels</td><td>W obecnym badaniu zastosowano ludzkie MVF (hMVF) wyizolowane od trzech różnych pacjentów (52-, 54- i 56-letnie kobiety).</td></tr><tr><td>Indometacyna&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I7378</td><td>Rozcieńczony w etanolu w stężeniu podstawowym 12,5 mM</td></tr><tr><td>Insulina z trzustki świni</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I5523</td><td>Rozcieńczony w 0,01 N HCl przy stężeniu podstawowym 5 mg/ml</td></tr><tr><td>MycoZap</td><td>Fisher scientific</td><td>NC9023832</td><td>Dodany w DMEM do 0,2% w/v, Mycoplasma Prophylactictic&nbsp;</td></tr><tr><td>Pennycylina/Streptomycyna (10 000 U/ml)</td><td>Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>Dodano do DMEM do 1% v/v.</td></tr><tr><td>szalki Petriego, polistyren (100 mm x 15 mm).</td><td>Fisher scientific</td><td>351029</td><td>3 do usuwania naczyń krwionośnych i mielenia mięsa, 8 (pokrywka) do wstępnego namaczania sit i 8 (naczynie) do stosowania podczas filtrowania za pomocą 500 lub 37 &mikro; M sita</td></tr><tr><td>szalki Petriego, polistyren (35 mm x 10 mm).</td><td>Fisher scientific</td><td>50-202-036</td><td>Do liczenia fragmentów</td></tr><tr><td>Bufor fosforanowy Sól fizjologiczna (PBS)</td><td>Fisher scientific</td><td>14-190-250</td><td>Rozcieńczony do 1x sterylną wodą dejonizowaną.</td></tr><tr><td>Maszynki do strzyżenia szczurów (trymer do zwierząt Andwin Mini Arco)</td><td>Fisher naukowy</td><td>NC0854141</td><td></td></tr><tr><td>Rosiglitazone</td><td>Fisher R0106200MG</td> naukowy <td></td><td>Rozcieńczony w DMSO przy stężeniu zapasu 10 mM</td></tr><tr><td>Nożyczki</td><td>Fine Science Tools</td><td>14059-11</td><td>1 do początkowego nacięcia, 1 do nacięcia najądrza, 1 do przycinania końcówki</td></tr><tr><td>Ekran&nbsp; 37 &mikro; M&nbsp;</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td>652222R</td><td>Pocięte na 3-calowe zaokrąglone kwadraty i wysterylizowane w tlenku etylenu, Uwięzienie fragmentów i usuwanie bardzo małych fragmentów / pojedynczych komórek i zanieczyszczeń</td></tr><tr><td>Screen 500 &micro; M&nbsp;</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td>652222F</td><td>Pocięte na 3-calowe zaokrąglone kwadraty i wysterylizowane w tlenku etylenu, Usuwa większe fragmenty/zanieczyszczenia</td></tr><tr><td>Ząbkowany Hemostat</td><td>Fisher scientific</td><td>12-000-171</td><td>Sterylizuj w autoklawie, Do zaciskania skóry przed nacięciem</td></tr><tr><td>Filtr Steriflip 0,22 &mu; m&nbsp;</td><td>Millipore</td><td>SE1M179M6</td><td></td></tr><tr><td>Trombin</td><td>Fisher scientific</td><td>6051601KU</td><td>Rozcieńczony w wodzie dejonizowanej do 10 U/ml, Stosowany jako czynnik krzepnący zamieniający fibrynogen w fibrynę</td></tr><tr><td>Hormon tarczycy (T3)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T2877</td><td>Rozcieńczony w 1N NaOH przy stężeniu zapasowym 0,02 mM</td></tr><tr><td>Szczury tłuszczowe cukrzycowe (ZDF) - otyłe (FA/FA) lub chude (FA/+) samce&nbsp;</td><td>Charles River</td><td>https://www.criver.com/products-services/find-model/zdf-rat-lean-fa?region=3611 https://www.criver.com/products-services/find-model/zdf-rat-obese?region=3611</td><td>Otrzymywany z Charles River (Wilmington, MA). Szczury zostały nabyte w wieku 4 tygodni i karmione Puriną 5008 aż do eutanazji (15-19 tygodnia życia). Poziomy glukozy (krew z bocznej żyły odpiszczelowej) były większe niż 300 mg/dl u wszystkich szczurów FA/FA wykorzystanych w badaniu. Wszystkie zwierzęta były trzymane w środowisku o kontrolowanej temperaturze z 12-godzinnym cyklem światła i ciemności i karmione ad libitum.</td></tr></tbody></table>

trójwymiarowa hodowla unaczynionej termogenicznej tkanki tłuszczowej z fragmentów mikronaczyniowych

Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments

Inżynieria termogenicznej tkanki tłuszczowej (np. beżowej lub brązowej tkanki tłuszczowej) została zbadana jako potencjalna terapia chorób metabolicznych lub do projektowania spersonalizowanych mikrotkanek do badań przesiewowych i testów narkotykowych. Obecne strategie są często dość złożone i nie są w stanie dokładnie w pełni zobrazować wielokomórkowych i funkcjonalnych właściwości termogenicznej tkanki tłuszczowej. Fragmenty mikronaczyniowe, małe nienaruszone mikronaczynia składające się z tętniczki, żyłek i naczyń włosowatych odizolowanych od tkanki tłuszczowej, służą jako pojedyncze autologiczne źródło komórek, które umożliwiają unaczynienie i tworzenie tkanki tłuszczowej. W artykule opisano metody optymalizacji warunków hodowli w celu umożliwienia wytwarzania trójwymiarowych, unaczynionych i funkcjonalnych termogenicznych tkanek tłuszczowych z fragmentów mikronaczyniowych, w tym protokoły izolacji fragmentów mikronaczyniowych z tkanki tłuszczowej i warunków hodowli. Ponadto omówiono najlepsze praktyki, techniki charakteryzowania zmodyfikowanych tkanek, a także przedstawiono wyniki próbek zarówno z fragmentów mikronaczyniowych gryzoni, jak i ludzi. Podejście to ma potencjał do wykorzystania do zrozumienia i opracowania metod leczenia otyłości i chorób metabolicznych.

Tkanka tłuszczowa beżowa/brunatna posiada kilka kluczowych fenotypowych cech morfologicznych: jest wielokomórkowa/zawiera małe krople lipidów, posiada dużą liczbę mitochondriów (co jest przyczyną jej charakterystycznego „brunatnego” wyglądu in vivo), co wiąże się z wysokim wskaźnikiem zużycia tlenu/bioenergetyką mitochondrialną, jest silnie unaczyniona, wykazuje zwiększoną lipolizę/stymulowany insuliną wychwyt glukozy oraz, co najważniejsze, wykazuje wysoką ekspresję białka rozprzęgającego 1 (UCP1), białka mitoc...

Tutaj prezentujemy szczegółowy protokół opisujący wykorzystanie fragmentów mikronaczyniowych wyizolowanych z gryzoni lub ludzkiej tkanki tłuszczowej jako prostego podejścia do inżynierii funkcjonalnej, unaczynionej beżowej tkanki tłuszczowej.

Trójwymiarowa hodowla unaczynionej termogenicznej tkanki tłuszczowej z fragmentów mikronaczyniowych

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for ...

Protokół ten opisuje wytwarzanie trójwymiarowego, unaczynionego i funkcjonalnego tłuszczu termogenicznego z fragmentów mikronaczyniowych lub MVF. Obecne strategie inżynierii termogenicznej tkanki tłuszczowej są złożone i nie oddają w pełni jej wielokomórkowych i funkcjonalnych właściwości. MVF są pojedynczym źródłem komórek, które umożliwiają unaczynienie i tworzenie tkanki tłuszczowej.Będąc prostą metodą tworzenia biologicznych imitacji beżowego tłuszczu z wyłącznego źródła, MVF mają znaczny potencjał w promowaniu zrozumienia lub rozwoju metod leczenia otyłości i chorób metabolicznych. Odpowiednio ogolone i poddane eutanazji zwierzę poddane 70% etanolowi należy umieścić w pozycji leżącej na plecach i rozpocząć izolację tłuszczu pachwinowego. Podnieś skórę poniżej penisa za pomocą nożyczek i wykonaj nacięcie, zaczynając od środka i przecinając z boku, tworząc kształt litery V, a następnie zapętl się na tyłach zwierzęcia, aby uzyskać dostęp do całego złoga tłuszczu.Podczas cięcia upewnij się, że skóra jest oddzielona od tłuszczu, przecinając połączoną tkankę powięziową. Po odpowiednim przecięciu powięzi upewnij się, że tłuszcz pachwinowy z obu stron, rozciągający się od pachwiny w kierunku tyłu, jest widoczny. Następnie usuń tłuszcz z obu stron w oddzielnych stożkowych probówkach zawierających 10 mililitrów BSA w PBS, o stężeniu jednego miligrama na mililitr.Aby zebrać tłuszcz z najądrza, przetnij skórę brzucha, a następnie ostrożnie przetnij cienką warstwę otaczającą jądra. Delikatnie pociągnij tkankę tłuszczową za pomocą kleszczy i wytnij ją nożyczkami, unikając rozwarstwienia głównych widocznych naczyń krwionośnych. Teraz umieść usunięty tłuszcz w 50-mililitrowej stożkowej probówce zawierającej 10 mililitrów jednego miligrama na mililitr BSA w PBS.Aby wyizolować tylną tkankę tłuszczową podskórną, obróć szczura na brzuch i użyj dużych nożyczek, aby przeciąć grubą skórę pleców aż do skóry głowy, uważając, aby nie ciąć zbyt głęboko pod skórą. Przetnij powięź łączącą skórę z tkanką. Odróżnij podskórną tkankę tłuszczową, znajdującą się w okolicy śródłopatkowej, od brązowej tkanki tłuszczowej znajdującej się bliżej kręgosłupa przed wyizolowaniem i umieszczeniem podskórnej tkanki tłuszczowej w 50-mililitrowej stożkowej probówce zawierającej 10 mililitrów jednego miligrama na mililitr BSA w PBS.Podczas pracy wewnątrz biokaptura użyj kleszczy, aby umieścić wycięty tłuszcz na standardowej 100-mililitrowej szalce Petriego zawierającej 0,5 mililitra jednego miligrama na mililitr BSA w PBS. Usuń wszelkie widoczne naczynia krwionośne, mięśnie lub obce tkanki z tłuszczu. Za pomocą nożyczek miel tłuszcz przez 10 minut i sprawdź, czy nie ma grudek, dodając trochę więcej BSA.Kontynuować mielenie, jeśli to konieczne, przed przeniesieniem zawiesiny tłuszczu mielonego do sterylnej kolby o pojemności 250 ml za pomocą pipety o pojemności 10 mililitrów. Zwiększyć objętość w kolbie do 20 mililitrów, dodając wystarczającą ilość BSA do PBS. Teraz dodaj BSA w PBS do kolagenazy i homogenizuj roztwór, delikatnie nim potrząsając przed przefiltrowaniem sterylnie przez filtr z siatki nylonowej o grubości 0,22 mikrona.Natychmiast dodać wymaganą ilość roztworu kolagenazy do zawiesiny tłuszczu mielonego i trawić tłuszcz, potrząsając kolbą okrężnymi ruchami w łaźni wodnej o temperaturze 37 stopni Celsjusza przez odpowiedni czas. Przenieś strawiony tłuszcz do 50-mililitrowej stożkowej rurki oznaczonej jako strawiony tłuszcz lub tłuszcz mielony. Odwirować probówkę o stężeniu 400 G przez cztery minuty, aby odwirować fragmenty mikronaczyniowe lub MVF w czerwoną osadkę.Delikatnie zdekantować supernatant do 50-mililitrowej stożkowej rurki oznaczonej jako odpad, nie naruszając osadu. Następnie dodaj 10 mililitrów jednego miligrama na mililitr BSA w PBS do probówki zawierającej osad i wymieszaj zawiesinę osadu, delikatnie pipetując go dwukrotnie w górę iw dół, nie naruszając fragmentów. Teraz weź sitko o grubości 500 mikronów wstępnie namoczone na sterylnej szalce Petriego zawierającej pięć mililitrów jednego miligrama na mililitr BSA w PBS i umieść je na plastikowym uchwycie sita umieszczonym na nowej szalce Petriego.Odpipetować 10 mililitrów zawiesiny z probówki z strawionymi granulkami na sito w koncentrycznych okręgach. Umyć filtr dodatkowymi pięcioma mililitrami po jednym miligramie na mililitr BSA w PBS i wyrzucić go, zachowując filtrat wewnątrz szalki Petriego. Następnie umieść wstępnie namoczony sitko o grubości 37 mikronów nad plastikowym uchwytem sitka na nowej szalce Petriego.Za pomocą świeżej pipety przenieść filtrat z pierwszej filtracji na sito w koncentrycznych okręgach. Jak opisano wcześniej, umyj sito za pomocą BSA w PBS i tym razem wyrzuć filtrat, zachowując sito o grubości 37 mikronów. Wsuń sito o grubości 37 mikronów na nową szalkę Petriego zawierającą pięć mililitrów jednego miligrama na mililitr BSA w PBS.Usuń fragmenty, delikatnie stukając naczyniem o stożkowy uchwyt, nie rozlewając płynu. Przepłucz filtr dodatkowymi pięcioma mililitrami BSA w PBS. Następnie przenieś płyn z szalki Petriego do sterylnej 50-mililitrowej stożkowej probówki.Opłucz sitko o grubości 37 mikronów jeszcze kilka razy, dodając pranie do stożkowej rurki, aż całkowita zebrana objętość wyniesie od 15 do 20 mililitrów. Wyrzuć sitko po ostatnim płukaniu. Odetnij koniec końcówki pipety o pojemności 20 mikrolitrów za pomocą nożyczek.Delikatnie wstrząśnij probówką zawierającą płyn przed pobraniem dwóch porcji po 20 mikrolitrów za pomocą przeciętej końcówki pipety i odpipetuj każdą z porcji na czystą, 35-milimetrową szalkę Petriego. Policz liczbę fragmentów w próbce na każdej szalce Petriego za pomocą standardowego mikroskopu świetlnego i korzystając ze wzoru podanego w manuskrypcie, uzyskaj całkowitą liczbę wyizolowanych fragmentów mikronaczyniowych. Wirować pozostałą ciecz w 50-mililitrowej stożkowej probówce o masie 400 G przez cztery minuty, aby zebrać MVF.Po odwirowaniu zdekantować większość supernatantu z rurki stożkowej i za pomocą pipety usunąć niewielką objętość płynu pozostałą na brzegu probówki. Następnie dodaj trombinę do studzienek przeznaczonych do odlewania żeli. Odetnij końcówkę końcówki pipety o pojemności 200 mikrolitrów i za jej pomocą delikatnie ponownie zawieś MVF w fibrynonie, aby uzyskać pożądaną gęstość końcową.Odpipetować zawiesinę do roztworu trombiny w studzience i szybko homogenizować mieszaninę, pipetując w górę iw dół. Po odlaniu wszystkich żeli umieść płytkę studzienkową w inkubatorze w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla na około 15 minut, aby umożliwić sieciowanie żelu. Lipidy i zróżnicowane adipocyty obserwowano za pomocą obrazowania hydrożeli za pomocą mikroskopii konfokalnej przy użyciu BODIPY jako barwienia lipidowego.Hodowla nieunaczynionej tkanki tłuszczowej przy użyciu białych adipogennych lub beżowych pożywek adipogenicznych skutkowała powstaniem nieunaczynionej białej lub beżowej tkanki tłuszczowej, odpowiednio, zarówno z chudych, jak i cukrzycowych MVF pochodzących od gryzoni. Podobnie, hodowla unaczynionej tkanki tłuszczowej przy użyciu białych adipogennych lub beżowych pożywek adipogenicznych skutkowała powstaniem odpowiednio unaczynionej białej lub beżowej tkanki tłuszczowej z MVF pochodzących od gryzoni. Nieunaczynioną białą i beżową tkankę tłuszczową uzyskaną z ludzkich MVF obserwowano również za pomocą mikroskopii konfokalnej.Zdolność MVF do różnicowania się w beżową tkankę tłuszczową została potwierdzona genetycznie za pomocą RT-qPCR. Chude i cukrzycowe MVF gryzoni wystawione na bezpośrednie działanie białych adipogennych lub beżowych pożywek adipogennych oceniano pod kątem adipogenezy, termogenezy i angiogenezy. Ekspresja białka rozprzęgającego 1 zgodnie z oczekiwaniami była istotnie wyższa w beżowej tkance tłuszczowej.Podobny trend zaobserwowano u gryzoni narażonych na pośrednie białe lub beżowe pożywki adipogenne, a także u ludzkich MVF narażonych na bezpośrednie białe lub beżowe pożywki adipogenne. Wreszcie, z bioenergetyki mitochondrialnej wynikało, że funkcjonalnie beżowa tkanka tłuszczowa miała charakterystycznie wyższy poziom zużycia tlenu (OCR) we wszystkich przypadkach. Trawienie enzymatyczne tkanki tłuszczowej powinno być zoptymalizowane, aby konsekwentnie odtwarzać MVF o podobnej wielkości i jakości.Po trawieniu z MVF należy obchodzić się delikatnie, ze szczególną ostrożnością, aby uniknąć dalszego rozpadu fragmentów. Technika ta przyczyniła się do poprawy równowagi między wzrostem naczyń krwionośnych a różnicowaniem adipocytów, które okazały się zależne od wprowadzonych czynników.

three-dimensional-culture-vascularized-thermogenic-adipose-tissue

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

Tutaj prezentujemy protokół enkapsulacji komórek katabolicznych, które zużywają lipidy do produkcji ciepła w tkance tłuszczowej w jamie brzusznej i zwiększają rozpraszanie energii u otyłych myszy.

Enkapsulacja termogenicznych preadipocytów do przeszczepu do magazynów tkanki tłuszczowej

Przedstawiamy protokół izolowania fragmentów mikronaczyniowych pochodzących z tkanki tłuszczowej, które reprezentują obiecujące jednostki unaczynienia. Można je szybko wyizolować, nie wymagają przetwarzania in vitro, a tym samym mogą być stosowane do jednoetapowej prewaskularyzacji w różnych dziedzinach inżynierii tkankowej.

Izolacja fragmentów mikronaczyniowych pochodzących z mysiej tkanki tłuszczowej jako jednostek unaczynienia dla inżynierii tkankowej

Biała tkanka tłuszczowa (WAT) ma krytyczne braki w swoich obecnych pierwotnych modelach hodowli, co utrudnia rozwój farmakologiczny i badania metaboliczne. W tym miejscu przedstawiamy protokół wytwarzania układu mikrofizjologicznego tkanki tłuszczowej poprzez umieszczanie WAT między arkuszami komórek zrębu. Ta konstrukcja zapewnia stabilną i adaptowalną platformę dla podstawowej kultury WAT.

Platforma mikrofizjologiczna dla ludzkiego tłuszczu: warstwowa biała tkanka tłuszczowa

Ze względu na wysoką zawartość lipidów, tkanka tłuszczowa była trudna do wizualizacji przy użyciu tradycyjnych metod histologicznych. Adipo-Clear to technika oczyszczania tkanek, która umożliwia solidne znakowanie i wolumetryczne obrazowanie fluorescencyjne tkanki tłuszczowej w wysokiej rozdzielczości. W tym miejscu opisano metody przygotowania próbki, obróbki wstępnej, barwienia, czyszczenia i montażu do obrazowania.

Adipo-Clear: metoda oczyszczania tkanek do trójwymiarowego obrazowania tkanki tłuszczowej

Przedmiotem niniejszego badania jest zademonstrowanie techniki barwienia immunologicznego i wizualizacji jako idealnej metody do obrazowania 3D architektury tkanki tłuszczowej i komponentu komórkowego.

Wizualizacja struktury 3D białej tkanki tłuszczowej za pomocą barwienia całościowego

Tutaj prezentujemy mikrofragmentację ludzkiej tkanki tłuszczowej bez enzymów przy użyciu urządzenia systemu zamkniętego. Ta nowa metoda pozwala na uzyskanie submilimetrowych skupisk tkanki tłuszczowej nadających się do przeszczepu in vivo, hodowli in vitro oraz dalszej izolacji i charakterystyki komórek.

Mikrofragmentacja ludzkiej tkanki tłuszczowej do fenotypowania komórek i charakterystyki sekretomu

Opisujemy 3D ludzki system hodowli pozakomórkowej macierzy i adipocytów in vitro, który pozwala na analizę ról matrycy i adipocytów w przyczynianiu się do fenotypu metabolicznego tkanki tłuszczowej.

Ludzki model 3D zewnątrzkomórkowej hodowli macierzy i adipocytów do badania przesłuchów metabolicznych między macierzą a komórką

Tutaj opisujemy prostą, tanią i szybką metodę oczyszczania struktury 3D zarówno mysjej, jak i ludzkiej białej tkanki tłuszczowej za pomocą kombinacji markerów do wizualizacji układu naczyniowego, jąder, komórek odpornościowych, neuronów i białek płaszcza lipidowo-kropelkowego za pomocą obrazowania fluorescencyjnego.

Badanie struktury tkanki tłuszczowej poprzez oczyszczanie salicylanu metylu i obrazowanie 3D

Tutaj opisujemy izolację, hodowlę i indukcję adipogenną preadipocytów pochodzących z frakcji naczyniowej zrębu z mysiej tkanki tłuszczowej okołoaortalnej, co pozwala na badanie funkcji okołonaczyniowej tkanki tłuszczowej i jej związku z komórkami naczyniowymi.

Izolacja, hodowla i indukcja adipogenna preadipocytów pochodzących z frakcji zrębu naczyniowego z mysiej tkanki tłuszczowej okołooortalnej

Tutaj opisujemy protokół izolacji, hodowli i fenotypowania mikronaczyniowych komórek śródbłonka z ludzkiej podskórnej tkanki tłuszczowej (hSATMVECs). Dodatkowo opisujemy eksperymentalny model wzajemnego przenikania się hSATMVEC-adipocytów.

Badanie wzajemnych oddziaływań komórek śródbłonka tkanki tłuszczowej i adipocytów w ludzkiej podskórnej tkance tłuszczowej

Poznaj metodę hodowli trójwymiarowej unaczynionej termogenicznej tkanki tłuszczowej z fragmentów mikronaczyniowych. Protokół umożliwia tworzenie funkcjonalnego tłuszczu beżowego z pojedynczego źródła komórek.

Trójwymiarowa hodowla unaczynionej termogenicznej tkanki tłuszczowej z fragmentów mikronaczyniowych

Przeglądaj więcej filmów