Name: Innowacyjna wkładka drukowana w 3D zaprojektowana z myślą o prostych hodowlach komórkowych 2D i 3D (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T13:35:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Poznaj innowacyjną wkładkę drukowaną w 3D do hodowli komórkowych 2D i 3D. Ta metoda umożliwia badanie komunikacji między keratynocytami a komórkami śródbłonka z zachowaniem wysokiej żywotności.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie zostało przeprowadzone we współpracy z BASF Beauty Care Solutions. Pani Charlie Colin-Pierre jest doktorantką finansowaną przez BASF /CNRS.
Pragniemy podziękować Panu Mehdi Sellami za koncepcję wkładek drukowanych w 3D.

UWAGA: Wkładki 3D (<silna klasa="xfig">Rysunek 1A) są zamawiane komercyjnie i są drukowane przy użyciu żywicy fotopolimerowej, która jest biokompatybilna z hodowlą komórkową i autoklawowaniem (patrz Tabela Materiałów). W tej sekcji opisano szczegółowy protokół ustanawiania modelu kokultury przez wstawki (patrz Rysunek 1B). Podano również kilka przykładów zastosowań.
1. Umieszczenie wysterylizowanej wkładki w płytkach 6-dołkowych
<ol>
	<li>Wymieszaj dwa składniki dostarczone w zestawie (patrz tabela materiałów), krzem spożywczy (odczynnik A) i katalizator (odczynnik B), w stosunku 10:1 (v/v) zgodnie z instrukcjami producenta. (<silna klasa="xfig">Rysunek 1Ba). Użyj szpatułki sterylizowanej 70% etanolem, aby wymieszać dwa składniki. 
	UWAGA: Objętość przygotowywanej mieszaniny krzemu zależy od liczby wkładek do zamocowania. Nadmiar katalizatora może spowodować zbyt szybkie krzepnięcie mieszaniny krzemu.</li>
	<li>Nałóż wkładki na silikonową mieszankę za pomocą pęsety tak, aby mieszanina była równomiernie rozprowadzona na dolnej krawędzi wkładek (<silna klasa = "xfig">Rysunek 1Bb). Umieść wkładki w dołkach płytki 6-dołkowej i delikatnie dociśnij wkładki, aby upewnić się, że wkładki są w bliskim kontakcie z płytką, aby uniknąć wycieku pożywki do hodowli komórkowej (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 1Bc).</li>
	<li>Umieścić płytkę w temperaturze 37 °C, aby wspomóc proces krzepnięcia krzemu przez 1 h. 
	UWAGA: Czas krzepnięcia zależy od ilości dodanego katalizatora.</li>
	<li>Po zestaleniu wysterylizować płytki z wkładkami, zanurzając je w kąpieli etanolowej 70% na 30 min do 1 h.</li>
	<li>Alkohol należy odpipetować i pozostawić płytkę do wyschnięcia (z otwartą pokrywą) na noc w kapturze do hodowli komórkowych. 
	UWAGA: Alkohol musi zostać całkowicie odparowany przed wykonaniem następnego kroku, aby uniknąć utrwalenia komórek i toksyczności. Gotowa do użycia płytka zawierająca wkłady może być przechowywana przez kilka dni przed użyciem w suchych i sterylnych warunkach w temperaturze pokojowej.</li>
</ol>
2. Powłoki takie jak poli-L-lizyna lub poli-HEMA (Opcjonalny krok)
UWAGA: W tym eksperymencie nie przeprowadza się powlekania, a kroki są podane w celu poinformowania o możliwości pokrycia wkładek.
<ol>
	<li>Przygotuj roztwór powlekający zgodnie z instrukcjami producenta.</li>
	<li>Weź pod uwagę objętość 200-400 μl dla największych przegródek i objętość 50-100 μl dla najmniejszych przegródek do powlekania wkładki. Dodaj roztwór powlekający do poszczególnych przegródek.</li>
	<li>Pozostaw powłokę do wyschnięcia zgodnie ze wskazaniami producenta w sterylnych warunkach.</li>
</ol>
3. Rozmieszczenie komórek
<ol>
	<li>Hodowlę keratynocytów zewnętrznej osłonki korzenia (KORS) i ludzkich komórek mikronaczyniowych śródbłonka skóry (HDMEC) zgodnie z zaleceniami producenta. Przygotować zawiesinę komórkową, gdy komórki osiągną zbieżność.
	<ol>
		<li>Wyrzucić pożywkę z kolb i dodać 5 ml trypsyny w celu odłączenia komórek (patrz tabela materiałów).</li>
		<li>Umieścić kolbę zawierającą KORS w temperaturze 37 °C z 5% CO2 przez 5 minut. Inkubować kolbę zawierającą HDMEC przez 5 minut w temperaturze pokojowej.</li>
		<li>Roztwór trypsyny zawierający KORS zmieszać z 5 ml pożywki z mezenchymalnych komórek macierzystych (MSCM) uzupełnionej 5% płodową surowicą bydlęcą (FBS) i czynnikami wzrostu (podłoże podstawowe z zestawem suplementów, patrz tabela materiałów). Roztwór trypsyny zawierający HDMEC zmieszać z 5 ml pożywki z komórek śródbłonka (ECM) uzupełnionej 5% FBS i czynnikami wzrostu (patrz tabela materiałów).</li>
		<li>Przenieś komórki do 15 ml sterylnej stożkowej probówki. Odwirować zawiesiny KORS i HDMEC o sile 200 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej.</li>
		<li>Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić komórki w 2 ml odpowiedniej pożywki.</li>
		<li>Zmieszać 10 μl zawiesiny komórek z 10 μl barwnika błękitu trypanowego (patrz tabela materiałów).</li>
		<li>Dodać 10 μl mieszanki do komory szkiełka liczącego.</li>
		<li>Włóż szkiełko zliczające do systemu liczenia komórek (patrz tabela materiałów) i wykryj numer komórki oraz żywotność.</li>
		<li>Przygotować zawiesinę komórek o stężeniu 0,5 x 105 komórek/ml w odpowiednim podłożu. 
		UWAGA: Jeśli różne typy komórek wymagają różnych czasów przylegania i/lub osiągnięcia idealnej konfluencji, wysiewanie komórek można wykonać w różnych punktach czasowych w zależności od typu komórek.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Rozprowadzić 800 μl do 1 ml zawiesiny komórek do poszczególnych dużych komór i 100-150 μl do poszczególnych małych komór za pomocą pipety.
	<ol>
		<li>Wysiewaj KORS w 1 x 105 komórek/ml w MSCM uzupełnionym 5% FBS i czynnikami wzrostu w jednym z dużych kompartmentów.</li>
		<li>Nasiona HDMEC w ECM uzupełnione 5% FBS i czynnikami wzrostu w ilości 2,5 x 103 komórek/ml w małych przedziałach i 1,25 x 105 komórek/ml w drugiej dużej komorze. 
		UWAGA: Test proliferacji można przeprowadzić w małych kompartmentach, a testy migracji i żywotności można przeprowadzić w dużych komorach. Zagęszczenie wysiewanych komórek zostało zoptymalizowane zgodnie z zaleceniami producenta. Takie stężenie pozwala na dobrą żywotność komórek po 24-48 godzinach inkubacji.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Umieścić płytkę do hodowli komórkowej w temperaturze 37 °C z 5% CO2 lub w zwykłych warunkach, aby umożliwić przyleganie komórek i/lub dojrzewanie. 
	UWAGA: Inkubować komórki przez 24-48 godzin bez zmiany pożywki. W razie potrzeby medium w komorach można zmienić niezależnie.</li>
</ol>
4. Implementacja kokultury ( <silna klasa="xfig">Rysunek 1Bd)
UWAGA: Implementacja kokultury odpowiada czasowi, w którym dodawane jest wspólne medium. Dodanie unikalnego podłoża dla wszystkich typów komórek w różnych przedziałach zapewnia możliwość parakrynnej komunikacji między komórkami ze względu na obecność okien komunikacyjnych (jajowatych otworów w ściankach wkładek wydrukowanych w 3D). Aby zaimplementować kokulturę, wykonaj kroki 4.1–4.3.
<ol>
	<li>Opróżnij pożywkę hodowlaną z różnych przegródek wkładek za pomocą pipety. W przypadku hodowli komórek sferoidalnych 3D pożywkę należy bardzo delikatnie wyrzucić.</li>
	<li>Przepłukać komórki 1 ml ciepłego PBS o temperaturze 37 °C w dużych komorach i 200 μl ciepłego PBS o temperaturze 37 °C w małych komorach. Zapewnij delikatne mycie, aby nie odczepić komórek.</li>
	<li>Dodaj 3 ml popularnego podłoża wybranego tak, aby było kompatybilne ze wszystkimi typami komórek. 
	UWAGA: W tym badaniu stosuje się podstawowy ECM (bez FBS i czynników wzrostu). Upewnij się, że nośnik zakrywa wszystkie przedziały (poziom powyżej okien komunikacyjnych [jajowate otwory w ścianach], jak pokazano na Rysunek 1A).</li>
	<li>Umieścić płytkę zawierającą kokultury w temperaturze 37 °C z 5% CO2 na 24-48 godzin.</li>
</ol>
5. Obserwacja, liczenie i skrobanie komórek
<ol>
	<li>Obserwuj morfologię i policz liczbę komórek różnych kompartmentów podczas eksperymentu pod mikroskopem optycznym po 24-48 godzinach inkubacji. 
	UWAGA: Oczekiwana liczba komórek zależy od użytych typów komórek (rozmiar, morfologia itp.) oraz od wielkości komory. W tym eksperymencie w dużych komorach liczy się od 0,5 x 106-1 x 106 KORS / ml do 0,25 x 10 6-0,75 x 106 HDMEC / ml.</li>
	<li>Odłącz komórki za pomocą trypsyny do liczenia zawiesiny komórek. 
	UWAGA: W przypadku roztworu do oddzielania komórek należy wziąć pod uwagę objętość 100-500 μl dla największych przegródek i objętość 10-50 μl dla najmniejszych przegródek.</li>
	<li>Sprawdź żywotność, stosując barwienie błękitem trypanowym (patrz kroki 3.1.6-3.1.8).</li>
</ol>
6. Czyszczenie wkładek do recyklingu
<ol>
	<li>Wyjmij wkładki z płytki 6-dołkowej pod koniec eksperymentu, lekko przekręcając (Rysunek 1Be).</li>
	<li>Usuń silikon z wkładek, ściągając go. W razie potrzeby użyj szpatułki, aby usunąć pozostały silikon przyklejony do ścianek wkładek (<silna klasa="xfig">Rysunek 1Bf).</li>
	<li>Umyj wkładki konwencjonalnymi detergentami do hodowli komórkowych i środkami czyszczącymi (example podane w Tabeli Materiałów).</li>
	<li>Wysterylizuj wkładki do wykorzystania w przyszłości w autoklawie (cykl stały, 121 °C przez 20 min) lub zanurzając je w kąpieli 70% etanolowej na 1 h. 
	UWAGA: Na tym etapie opisano dwa przykłady możliwych testów (testy proliferacji i migracji) przy użyciu wkładek wydrukowanych w 3D (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 1Bd).</li>
</ol>
7. Test proliferacji komórek - Test WST-1
<ol>
	<li>Wykonaj kroki 1-3.1, aby wyhodować komórki. 
	UWAGA: Postępuj zgodnie z krokiem opisanym w tej sekcji, aby wdrożyć system kohodowli w celu zbadania wpływu sekretomu KORS na proliferację HDMEC. Komórki KORS służą do porównywania danych opublikowanych wcześniej8.
	<ol>
		<li>Wysiewaj KORS w 1 x 105 komórek/ml w mezenchymalnym podłożu komórek macierzystych (MSCM) uzupełnionym 5% FBS i czynnikami wzrostu w dużych kompartmentach.</li>
		<li>Umieścić płytkę do hodowli komórkowej w temperaturze 37 °C z 5% CO2 na 24 godziny.</li>
		<li>Zasiać HDMEC w pożywce z komórkami śródbłonka (ECM) uzupełnionymi o 5% FBS i czynniki wzrostu w ilości 2,5 x 103 komórek/ml w małych przedziałach.</li>
		<li>Umieścić płytkę do hodowli komórkowej w temperaturze 37 °C z 5% CO2 na 24-48 godzin.</li>
		<li>Wyrzucić pożywkę ze wszystkich komór i wdrożyć system kohodowli poprzez dodanie 3 ml nieuzupełnionej podstawowej pożywki ECM (wspólna pożywka do hodowli komórkowych dla wszystkich komór wkładek wydrukowanych w 3D).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Rozcieńczyć WST-1 w pożywce ECM do hodowli komórek powszechnych (końcowe rozcieńczenie 1:10) w celu przygotowania roztworu WST-1. 
	UWAGA: Dla objętości roztworu WST-1 należy przygotować co najmniej 500 μl dodatkowego roztworu do ślepej próby.</li>
	<li>Wyrzucić pożywkę do hodowli komórkowych z wkładki przez pipetowanie.</li>
	<li>Dodaj roztwór WST-1 do wybranych przegródek (150 μl dla małych przegródek i 600 μl dla dużych komór). Umieścić płytkę w temperaturze 37 °C z 5% CO2 .</li>
	<li>Po optymalnym 30-minutowym czasie inkubacji komórek przenieś 100 μl pożywki inkubacyjnej z każdego warunku na 96-dołkową płytkę.</li>
	<li>Ocenić reakcję kolorymetryczną za pomocą czytnika mikropłytek w zakresie od 420 nm do 480 nm.
	<ol>
		<li>Umieść płytkę na czytniku mikropłytek i kliknij przycisk edytuj nowy protokół.</li>
		<li>Należy wybrać konkretny typ płytki 96-dołkowej (patrz Tabela materiałów) i długość fali 450 nm.</li>
		<li>Kliknij przycisk rozpocznij pomiar.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
8. Test migracji komórek - urządzenie z dwiema komorami migracyjnymi
<ol>
	<li>Wykonaj kroki 1-3.1, aby wyhodować komórki. 
	UWAGA: Postępuj zgodnie z krokami opisanymi w tej sekcji, aby wdrożyć system kohodowli w celu zbadania wpływu sekretomu KORS na proliferację HDMEC.
	<ol>
		<li>Wysiewaj KORS w 1 x 105 komórek/ml w MSCM uzupełnionym 5% FBS i czynnikami wzrostu w jednym z dużych kompartmentów.</li>
		<li>Umieścić płytkę do hodowli komórkowej w temperaturze 37 °C z 5% CO2 na 24 godziny.</li>
		<li>Umieść urządzenie z dwiema komorami migracyjnymi w drugiej dużej komorze wkładek.</li>
		<li>Wysiewaj HDMEC w ECM uzupełnionym 5% FBS i czynnikami wzrostu w 7 x 105 komórek / studzienka urządzenia z dwiema komorami migracyjnymi.</li>
		<li>Umieścić płytkę do hodowli komórkowej w temperaturze 37 °C z 5% CO2 na 24 godziny.</li>
		<li>Wyrzuć pożywkę i urządzenie z dwiema komorami migracyjnymi po 24 godzinach lub w optymalnym czasie, w zależności od typu komórki, która migruje. Wdrożyć system kohodowli poprzez dodanie 3 ml nieuzupełnionego podstawowego ECM. 
		UWAGA: Postępuj ostrożnie, aby nie odłączyć komórek. Jeśli komórki są naprawdę wrażliwe na oderwanie wywołane dodaniem wspólnej pożywki, po dodaniu wspólnej pożywki zdejmij urządzenie z dwiema komorami migracyjnymi.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Obserwuj i zrób zdjęcie powierzchni pokrytej przez komórki w różnych punktach czasowych pod mikroskopem z kontrastem fazowym przy 10-krotnym powiększeniu. 
	UWAGA: Zdjęcia są wykonywane za pomocą mikroskopu z kontrastem fazowym (patrz Tabela materiałów). Zdjęcia są zapisywane w pamięci USB, a następnie analizowane przez wtyczkę narzędzia do gojenia ran w oprogramowaniu (patrz Spis materiałów).</li>
	<li>Zmierz odsłoniętą powierzchnię za pomocą klasycznego oprogramowania do analizy ilościowej.
	<ol>
		<li>Otwórz obraz w oprogramowaniu i aktywuj narzędzie do gojenia ran dostępne na liście makr.</li>
		<li>Kliknij przycisk m, aby zmierzyć odsłoniętą powierzchnię obrazu migracji.</li>
		<li>Odsłoniętą powierzchnię oblicza się według następującego wzoru: 
		Procent pokrycia = ([średni obszar bez komórek w T0 − obszar bez komórek w czasie T]/średni obszar bez komórek w T0) × 100. 
		UWAGA: Wkładki drukowane w 3D są całkowicie przystosowane do większości technik biologii komórki (takich jak test tworzenia pseudotubek, hodowle 3D) oraz do eksperymentów biochemicznych (takich jak ekstrakcja DNA, RNA, białka).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Regier, M. C., Alarid, E. T., Beebe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+towards+understanding+heterotypic+interactions+in+multi-culture+models+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Biology%22%5BJournal%5D)">Progress towards understanding heterotypic interactions in multi-culture models of breast cancer.</a> Integrative Biology. 8 (6), 684-692 (2016).</li>
<li>Doğan, A., Demirci, S., Apdik, H., Apdik, E. A., Şahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell+isolation+from+pulp+tissue+and+co-culture+with+cancer+cells+to+study+their+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell isolation from pulp tissue and co-culture with cancer cells to study their interactions.</a> Journal of Visualized Experiments. (143), e58825(2019).</li>
<li>Lin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+non-coding+RNA+UBE2CP3+enhances+HCC+cell+secretion+of+VEGFA+and+promotes+angiogenesis+by+activating+ERK1%2F2%2FHIF-1%CE%B1%2FVEGFA+signalling+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+%26+Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Long non-coding RNA UBE2CP3 enhances HCC cell secretion of VEGFA and promotes angiogenesis by activating ERK1/2/HIF-1α/VEGFA signalling in hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. 37 (1), 113(2018).</li>
<li>Soares, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+monoxide+modulation+of+microglia-neuron+communication%3A+Anti-neuroinflammatory+and+neurotrophic+role%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Carbon monoxide modulation of microglia-neuron communication: Anti-neuroinflammatory and neurotrophic role.</a> Molecular Neurobiology. 59 (2), 872-889 (2022).</li>
<li>Al Halawani, A., Abdulkhalek, L., Mithieux, S. M., Weiss, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tropoelastin+promotes+the+formation+of+dense%2C+interconnected+endothelial+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Tropoelastin promotes the formation of dense, interconnected endothelial networks.</a> Biomolecules. 11 (9), 1318(2021).</li>
<li>Mercatali, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+human+preclinical+model+of+osteoclastogenesis+from+peripheral+blood+monocytes+co-cultured+with+breast+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Development of a human preclinical model of osteoclastogenesis from peripheral blood monocytes co-cultured with breast cancer cell lines.</a> Journal of Visualized Experiments. (127), e56311(2017).</li>
<li>Orona, N. S., Astort, F., Maglione, G. A., Yakisich, J. S., Tasat, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+effect+of+air+particles+exposure+induce+Nrf2-dependent+cardiomyocyte+cellular+response+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect effect of air particles exposure induce Nrf2-dependent cardiomyocyte cellular response in vitro.</a> Cardiovascular Toxicology. 19 (6), 575-587 (2019).</li>
<li>Colin-Pierre, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glypican-1%2FHGF%2FC-met+and+glypican-1%2FVEGF%2FVEGFR2+ternary+complexes+regulate+hair+follicle+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The glypican-1/HGF/C-met and glypican-1/VEGF/VEGFR2 ternary complexes regulate hair follicle angiogenesis.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 781172(2021).</li>
<li>Toubal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+NC1+domain+of+type+XIX+collagen+inhibits+melanoma+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">The NC1 domain of type XIX collagen inhibits melanoma cell migration.</a> European Journal of Dermatology. 20 (6), 712-718 (2010).</li>
<li>Wu, A. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+growth+factors+and+internal+limiting+membrane+constituents+in+m%C3%BCller+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Role of growth factors and internal limiting membrane constituents in müller cell migration.</a> Experimental Eye Research. 202, 108352(2021).</li>
<li>Oudart, J. -B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmin+releases+the+anti-tumor+peptide+from+the+NC1+domain+of+collagen+XIX%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Plasmin releases the anti-tumor peptide from the NC1 domain of collagen XIX.</a> Oncotarget. 6 (6), 3656-3668 (2015).</li>
<li>Martinotti, S., Ranzato, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scratch+wound+healing+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Scratch wound healing assay.</a> Methods in Molecular Biology. 2109, 225-229 (2020).</li>
<li>Cattin, S., Ramont, L., Rüegg, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+in+vivo+validation+of+a+three-dimensional+multi-cellular+culture+model+to+study+heterotypic+interactions+in+colorectal+cancer+cell+growth%2C+invasion+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Characterization and in vivo validation of a three-dimensional multi-cellular culture model to study heterotypic interactions in colorectal cancer cell growth, invasion and metastasis.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 6, 97(2018).</li>
<li>Ma, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+spheroid+culture+of+adipose+stromal+vascular+cells+for+studying+adipogenesis+in+beef+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional spheroid culture of adipose stromal vascular cells for studying adipogenesis in beef cattle.</a> Animal. 12 (10), 2123-2129 (2018).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów finansowych.

Pośrednia komunikacja komórkowa jest powszechnie badana przy użyciu kondycjonowanych pożywek lub urządzeń systemu kohodowli. Przygotowanie kondycjonowanych pożywek jest czasochłonne na wczesnym etapie eksperymentów, a metoda ta ogranicza się do jednostronnych analiz efektów. Poprzednie badanie przeprowadzone przez Colin-Pierre i wsp.8 przy użyciu kondycjonowanych pożywek przeprowadzono na pośredniej komunikacji komórkowej między dwoma typami komórek (HDMEC i KORS). Dane z tego poprzednieg...

In vivo, komórki komunikują się ze sobą albo bezpośrednio (kontakt komórkowy), albo pośrednio (poprzez wydzielanie molekuł). Aby zbadać komunikację komórkową, można opracować różne modele kohodowli, takie jak bezpośrednia kokultura (różne typy komórek są w bezpośredniej interakcji w tym samym dołku) i kokultura z podziałem na przedziały (różne typy komórek są w pośredniej interakcji w różnych przedziałach systemu hodowli)1. Co więcej, kondycjonowane pożywki mogą być stosowane w systemach kohodowli, w których pośrednia interakcja jest możliwa dzięki wydzielanym cząsteczkom zawartym w kondycjonowanym pożywce typu komórki efektorowej, które są przenoszone do odpowiadającej komórki typu 1.
W przypadku badań nad komunikacją komórkową w warstwie parakrynnej, pośrednie systemy kohodowli dostarczają modeli, które silnie odzwierciedlają interakcje komórkowe in vivo. Systemy kokultury pośredniej zostały opracowane i skomercjalizowane, co pozwoliło na ustanowienie modeli współkultury pośredniej2,3. Niestety, większość pośrednich systemów kokultur zapewnia tylko dwa przedziały. Inne pośrednie systemy kokultur zapewniają wiele przedziałów, ale są one mniej skalowalne w porównaniu z systemem opisanym w niniejszym manuskrypcie. Niektóre z nich nie pozwalają na klasyczną wizualizację pod mikroskopem, a często prezentują konkretne metody aplikacji. W kilku badaniach komunikacja parakrynna między różnymi typami komórek jest badana przez model mediów warunkowych4,5,6,7. Jest to łatwiejszy sposób badania w porównaniu z pośrednimi systemami współhodowli, ponieważ nie wymaga ustanawiania konkretnych metod ani materiałów1. Z drugiej strony, przygotowanie kondycjonowanych pożywek jest czasochłonne i dostarcza informacji tylko na temat jednokierunkowej sygnalizacji komórkowej (efektor do odpowiedzi)1.
W tym artykule zaproponowano nowy, prosty sposób badania komunikacji komórkowej. Umożliwiając łączenie kilku typów komórek w bezpośredniej lub pośredniej interakcji oraz w formatach 2D lub 3D, drukowane wkładki oferują wiele korzyści w łatwym tworzeniu modeli współhodowli. Przystosowana do umieszczenia w dołkach płytek 6-dołkowych, wkładka wydrukowana w 3D jest okrągła i umożliwia podział studni na cztery komory (dwie duże komory i dwie małe komory; <silna klasa="xfig">Rysunek 1A). Wkładki drukowane w 3D charakteryzują się brakiem dna. W ten sposób ogniwa są w bezpośrednim kontakcie z płytką, na której umieszczona jest wkładka. Ponadto każda komora może być powlekana niezależnie od pozostałych. Co więcej, zachowanie komórek można łatwo śledzić pod mikroskopami optycznymi. Obecność okien komunikacyjnych w każdej ścianie wkładu pozwala na dodanie, w optymalnym czasie, wspólnego medium do wykonywania różnych eksperymentów kokultury. Można przeprowadzić liczne kombinacje kohodowli w celu zbadania bezpośredniej i/lub pośredniej komunikacji między kilkoma typami komórek. Na przykład można zaprojektować model pośredniej kohodowli między czterema różnymi typami komórek w monowarstwie i/lub 3D (sferoidy). Połączenie bezpośrednich i pośrednich modeli kohodowli można również przeprowadzić poprzez mieszanie różnych typów komórek w tym samym komorze. Wpływ złożonych struktur (organoidów, eksplantatów tkanek itp.) na różne typy komórek może być kolejnym przykładem modeli, które można wykonać. Co więcej, drukowane w 3D wkładki są kompatybilne z testami funkcjonalnymi biologii komórki (proliferacja, migracja, tworzenie pseudotubek, różnicowanie itp.) oraz z testami biochemicznymi (ekstrakcja DNA, RNA, białka, lipidów itp.). Wreszcie, drukowane w 3D wkładki zapewniają szeroki zakres schematów eksperymentalnych modeli kokultur z możliwością jednoczesnego łączenia różnych testów w tym samym eksperymencie w różnych przedziałach.
Niektóre pojemności wkładek wydrukowanych w 3D są prezentowane, aby potwierdzić je jako szybki i łatwy w użyciu model współkultury. W porównaniu z wcześniej opublikowanym badaniem przeprowadzonym na temat komunikacji komórek parakrynnych, wykazano zdolność wydrukowanych w 3D wkładek do bycia cennym modelem kohodowli. Aby ocenić ten punkt, porównano regulację proliferacji i migracji komórek śródbłonka przez keratynocyty między systemem wkładek drukowanych w 3D a klasycznym systemem wykorzystującym kondycjonowane pożywki. Wkładki drukowane w 3D pozwalają na szybkie uzyskanie podobnych rezultatów w porównaniu z konwencjonalnym systemem wykorzystującym kondycjonowane media. Rzeczywiście, drukowane w 3D wkładki zapewniają solidny model do badania interakcji komórek w obu kierunkach bez konieczności produkcji kondycjonowanych pożywek i z możliwością równoległego wykonywania testów proliferacji i migracji w tym samym eksperymencie.
Podsumowując, w tym artykule zaproponowano nowy i gotowy do użycia model do badania komunikacji komórkowej. Kompatybilne ze wszystkimi przylegającymi typami komórek, drukowane w 3D wkładki pozwalają na wykonywanie licznych kombinacji kohodowli, które mają na celu zbliżenie się do warunków in vivo.

<table><tbody><tr><td>Autoklaw</td><td>Getinge</td><td>APHP</td><td>Cykl stały, 121 &deg; C przez 20 min</td></tr><tr><td>Biomed Clear</td><td>Formlabs</td><td>RS-F2-BMCL-01</td><td>Wycisk wykonany przez firmę 3D-Morphoz (Reims, Francja)</td></tr><tr><td>Detergenty do hodowli komórkowych&nbsp;</td><td>Tounett</td><td>A18590/0116</td><td></td></tr><tr><td>Odczynnik do proliferacji komórek WST-1</td><td>Roche</td><td>11,64,48,07,001</td><td></td></tr><tr><td>Szkiełko liczące</td><td>NanoEnTek</td><td>EVE-050</td><td></td></tr><tr><td>Wkładka do hodowli 2 dołki w &mu;-naczyniu 35 mm</td><td>Ibidi</td><td>80206</td><td>urządzenie z dwiema komorami migracyjnymi.&nbsp;</td></tr><tr><td>Pożywka dla komórek śródbłonka</td><td>ScienCell</td><td>1001</td><td>Pożywka podstawowa +/- 25 ml płodowej surowicy bydlęcej (FBS, 0025), 5 ml suplementu na wzrost komórek śródbłonka (EKGS, 1052) i 5 ml roztworu penicyliny/streptomycyny (P/S, 0503).</td></tr><tr><td>EVE Automatyczny licznik komórek&nbsp;</td><td>NanoEnTek</td><td>NESCT-EVE-001E&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>EVOS XL Core</td><td>Fisher Scientific</td><td>AMEX1200</td><td>10-krotne powiększenie</td></tr><tr><td>Zestaw odczynników i katalizatorów do żywności silikonowej</td><td>Artificina</td><td>RTV 3428 A i B&nbsp;</td><td>(10:1)</td></tr><tr><td>Drukarka FORM 3B</td><td>Formlabs</td><td>PKG-F3B-WSVC-DSP-BASIC</td><td>Wycisk wykonany przez firmę 3D-Morphoz</td></tr><tr><td>Ludzkie komórki śródbłonka mikronaczyniowego skóry (HDMEC)</td><td>ScienCell</td><td>2000</td><td></td></tr><tr><td>Keratynocyty zewnętrznej osłonki korzenia (KORS)</td><td>ScienCell</td><td>2420</td><td></td></tr><tr><td>Macro Wound Healing Tool Software</td><td>ImageJ</td><td></td><td>Oprogramowanie służące do pomiaru odsłoniętej powierzchni (dla testy migracji)</td></tr><tr><td>Pożywka dla mezenchymalnych komórek macierzystych&nbsp;</td><td>ScienCell</td><td>7501</td><td>Pożywka podstawowa +/- 25 ml płodowej surowicy bydlęcej (FBS, 0025), 5 ml suplementu na wzrost mezenchymalnych komórek macierzystych (MSCGS, 7552) i 5 ml roztworu penicyliny/streptomycyny (P/S, 0503)</td></tr><tr><td>Czytnik mikropłytek Spectro star NANO</td><td>BMG Labtech</td><td></td><td>BMG Oprogramowanie BMG LABTECH</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Promocell</td><td>C-40232</td><td>Bez Ca2+ / Mg2+</td></tr><tr><td>Trypan Blue Stain</td><td>NanoEnTek</td><td>EBT-001</td><td></td></tr><tr><td>Trypsyna / EDTA</td><td>Promocell</td><td>C-41020</td><td>Inkubacja KORS w temperaturze 37 & stopni; C z 5% CO2 przez 5 min. Inkubacja HDMEC przez 5 minut w temperaturze pokojowej</td></tr><tr><td>96-dołkowa płytka Nunclon Delta Surface</td><td>Thermoscientific</td><td>167008</td><td></td></tr></tbody></table>

innowacyjna wkładka drukowana w 3d zaprojektowana z myślą o prostych hodowlach komórkowych 2d i 3d

An Innovative 3D-Printed Insert Designed to Enable Straightforward 2D and 3D Cell Cultures

Klasyczne analizy pośredniej komunikacji między różnymi typami komórek wymagają użycia kondycjonowanych mediów. Co więcej, produkcja kondycjonowanych pożywek pozostaje czasochłonna i daleka od stanów fizjologicznych i patologicznych. Chociaż na rynku dostępnych jest kilka modeli kohodowli, pozostają one ograniczone do określonych testów i dotyczą głównie dwóch typów komórek. 
Tutaj używane są drukowane w 3D wkładki, które są kompatybilne z wieloma testami funkcjonalnymi. Wkład umożliwia rozdzielenie jednego dołka płytki 6-dołkowej na cztery komory. Można ustawić szeroki zakres kombinacji. Ponadto w każdej ścianie przedziałów zaprojektowano okienka, dzięki czemu możliwa jest potencjalna komunikacja międzykomórkowa między każdym przedziałem w pożywce hodowlanej w sposób zależny od objętości. Na przykład parakrynna komunikacja międzykomórkowa może być badana między czterema typami komórek w jednej warstwie, w 3D (sferoidy) lub poprzez połączenie obu. Ponadto w tej samej komorze można wysiewać mieszankę różnych typów komórek w formacie 2D lub 3D (organoidy). Brak dna w wkładkach wydrukowanych w 3D pozwala na zwykłe warunki hodowli na płytce, możliwe powlekanie na płytce zawierającej wkładkę oraz bezpośrednią wizualizację za pomocą mikroskopii optycznej. Wiele przedziałów daje możliwość niezależnego zbierania różnych typów komórek lub używania, w każdym przedziale, różnych odczynników do ekstrakcji RNA lub białek. W tym badaniu przedstawiono szczegółową metodologię wykorzystania nowej wkładki wydrukowanej w 3D jako systemu kohodowli. Aby zademonstrować kilka możliwości tego elastycznego i prostego modelu, w nowych wkładkach wydrukowanych w 3D przeprowadzono wcześniej opublikowane testy funkcjonalne komunikacji komórkowej, które okazały się powtarzalne. Drukowane w 3D wkładki i konwencjonalna hodowla komórkowa przy użyciu kondycjonowanych pożywek doprowadziły do podobnych wyników. Podsumowując, wkładka wydrukowana w 3D jest prostym urządzeniem, które można dostosować do wielu modeli kokultur z przylegającymi typami komórek.

W niniejszej pracy opisano zoptymalizowany system kokultury pozwalający na uzyskanie spójnych, wiarygodnych i istotnych danych, porównywalnych z wynikami otrzymywanymi metodami klasycznymi z wykorzystaniem pożywki warunkowanej. Wkładki wydrukowane w technologii 3D naśladują warunki mikrośrodowiska in vivo dla oddziałujących ze sobą różnych typów komórek, eliminując trudności oraz czasochłonne przygotowywanie pożywki warunkowanej na etapie wstępnym eksperymentów. Powtórzono wcześniej opublikowane badanie w celu a...

W tym artykule, nowo zaprojektowana wkładka wydrukowana w 3D jest przedstawiona jako model kokultury i zweryfikowana przez badanie parakrynnej komunikacji międzykomórkowej między komórkami śródbłonka a keratynocytami.

Innowacyjna wkładka drukowana w 3D zaprojektowana z myślą o prostych hodowlach komórkowych 2D i 3D

The classical analyses of indirect communication between different cell types necessitate the use of conditioned media. Moreover, the production of ...

Protokół ten może być wykorzystany do zbadania licznych badań kulturowych i zapewnić nowe narzędzie do badania bezpośredniej komunikacji komórkowej. To nowe urządzenie pozwala zaoszczędzić znaczną ilość czasu na tworzeniu modelu hodowli i ma zastosowanie do różnych typów komórek, które wymagają określonej powłoki lub nie. Rzeczywiście, cztery komory wkładek wydrukowanych w 3D pozwalają na hodowlę różnych typów komórek w monowarstwie lub w 3D w ten sam sposób z różnymi kombinacjami.Wkładki drukowane w 3D są trwalsze, bardziej elastyczne, skalowalne i mogą być wykorzystywane do projektowania modeli eksperymentalnych do badań nad fizjopatologiami, takimi jak immunologia czy androgeneza. Na początek wymieszaj dwa składniki, krzem spożywczy i katalizator dostarczony w zestawie w stosunku 10:1, używając szpatułki sterylizowanej 70% etanolem zgodnie z instrukcjami producenta. Nałóż wkładki na mieszankę silikonową za pomocą pęsety tak, aby mieszanina była równomiernie rozprowadzona na dolnej krawędzi wkładu.Umieść wkładki w dołkach sześciodołkowej płytki i delikatnie dociśnij, aby upewnić się, że wkładki są w bliskim kontakcie z płytką, aby uniknąć wycieku pożywki do hodowli komórkowych. Umieść płytkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza, aby wspomóc proces krzepnięcia krzemu przez godzinę. Po zestaleniu wysterylizuj płytki z wkładkami, zanurzając je w kąpieli 70% etanolowej na 30 minut do jednej godziny.Następnie wyrzuć alkohol przez pipetowanie i pozostaw płytkę do wyschnięcia na noc w kapturze do hodowli komórkowych. Aby wyhodować keratynocyty zewnętrznej osłonki korzenia i ludzkie komórki śródbłonka mikronaczyniowego skóry, wyrzuć pożywkę z kolb i dodaj pięć mililitrów trypsyny, aby odłączyć komórki. Umieścić kolbę zawierającą keratynocyty zewnętrznej osłonki korzenia w temperaturze 37 stopni Celsjusza z 5% dwutlenkiem węgla przez pięć minut i inkubować kolbę zawierającą ludzkie komórki śródbłonka mikronaczyniowego skóry przez pięć minut w temperaturze pokojowej.W sterylnej stożkowej probówce o pojemności 15 mililitrów wymieszaj roztwór trypsyny zawierający keratynocyty zewnętrznej osłonki korzenia z pięcioma mililitrami pożywki mezenchymalnych komórek macierzystych uzupełnionych 5% FBS i czynnikami wzrostu oraz ludzkimi komórkami śródbłonka mikronaczyniowego skóry z pięcioma mililitrami pożywki z komórek śródbłonka uzupełnionej 5% FBS i czynnikami wzrostu. Odwirować keratynocyty zewnętrznej osłonki korzenia i zawiesiny ludzkich komórek śródbłonka mikronaczyniowego skóry w temperaturze 200 G przez pięć minut w temperaturze pokojowej. Po odrzuceniu supernatantu ponownie zawiesić komórki w dwóch mililitrach odpowiednich pożywek.Wymieszaj 10 mikrolitrów zawiesiny komórek z 10 mikrolitrami niebieskiego barwnika trypanowego i dodaj 10 mikrolitrów mieszanki do komory szkiełka liczącego. Włóż szkiełko zliczające do systemu zliczania komórek i wykryj numer komórki oraz żywotność. Po przygotowaniu zawiesiny komórek w stężeniu 50 000 komórek na mililitr w odpowiednim podłożu, rozprowadzić 800 mikrolitrów na jeden mililitr zawiesiny komórek do poszczególnych dużych komór i od 100 do 150 mikrolitrów do poszczególnych małych komór za pomocą pipety.Zobacz keratynocyty w pożywce mezenchymalnych komórek macierzystych uzupełnionych 5% FBS i czynnikami wzrostu oraz ludzkie komórki śródbłonka mikronaczyniowego skóry w pożywce komórek śródbłonka, uzupełnione 5% FBS i czynniki wzrostu w małych i innych dużych przedziałach. Umieść płytkę do hodowli komórkowej w temperaturze 37 stopni Celsjusza z 5% dwutlenkiem węgla lub w zwykłych warunkach, aby umożliwić adhezję komórek i/lub dojrzewanie. Opróżnij pożywkę hodowlaną z różnych przegródek wkładek za pomocą pipety.Następnie przepłucz komórki jednym mililitrem ciepłego PBS o temperaturze 37 stopni Celsjusza w dużych komorach i 200 mikrolitrami w małych komorach. Dodaj trzy mililitry wspólnego podłoża wybranego tak, aby było kompatybilne ze wszystkimi typami komórek. Umieść płytkę zawierającą kokultury w temperaturze 37 stopni Celsjusza z 5% dwutlenkiem węgla na 24 do 48 godzin.Odłącz komórki za pomocą trypsyny do liczenia zawiesiny komórek i sprawdź żywotność za pomocą barwienia trypanem niebieskim. Po zaobserwowaniu morfologii policz liczbę komórek różnych przedziałów podczas eksperymentu pod mikroskopem optycznym po 24 do 48 godzinach inkubacji. Najpierw usuń wkładki z sześciodołkowej płytki pod koniec eksperymentu, lekko przekręcając, a następnie usuń silikon z wkładek, ściągając go.Umyj wkładki konwencjonalnymi detergentami do hodowli komórkowych i środkami czyszczącymi. Następnie wysterylizuj wkładki do wykorzystania w przyszłości w autoklawie lub zanurzając je w kąpieli z 70% etanolem na godzinę. Porównano fenotyp i żywotność komórek, przy czym 90% żywotności zaobserwowano w studzienkach sześciu płytek dołkowych, a przy 91% zaobserwowano w wydrukowanych w 3D wkładkach keratynocytów zewnętrznej osłonki korzeniowej.Żywotność ludzkich komórek śródbłonka mikronaczyniowego skóry wynosiła 85% w studzienkach płytki sześciodołkowej, podczas gdy 86% w wkładkach wydrukowanych w 3D. Pośrednia komunikacja komórkowa między keratynocytami a komórkami śródbłonka we wstawkach wydrukowanych w 3D wykazała, że w obecności keratynocytów we wkładkach proliferacja ludzkich komórek śródbłonka mikronaczyniowego skóry znacznie wzrosła 1,5-krotnie po 24 godzinach i 3,1-krotnie po 48 godzinach w porównaniu z kontrolą. Wykazano jednak, że keratynocyty pożywki zewnętrznej osłonki korzenia znacznie zwiększają proliferację ludzkich komórek mikronaczyniowych śródbłonka skóry o 1,5 razy po 24 godzinach i 2,1 razy po 48 godzinach.Wydrukowany w 3D model kohodowli wkładki został przetestowany w celu określenia wpływu keratynocytów na migrację ludzkich komórek śródbłonka mikronaczyniowego skóry. W warunkach kontrolnych komórki śródbłonka migrowały i po 24 godzinach pokryły około 44% powierzchni rany. W obecności keratynocytów zaobserwowano znaczny wzrost migracji komórek śródbłonka mikronaczyniowego skóry człowieka, co pokazuje, że 43%67%i 99% powierzchni rany zostało pokryte odpowiednio po trzech, 12 i 24 godzinach.Podobnie, migracja HDMEC zwiększa się w obecności keratynocytów pożywki zewnętrznej osłonki korzeniowej. Kluczowe jest zapewnienie uszczelnienia wkładu do płytki, aby zapobiec wyciekowi medium z komórek z jednej komory do drugiej. Można zastosować kilka zastosowań, takich jak proliferacja, migracja, testy tworzenia środków uspokajających, analiza DNA, RNA, białek i inne.

an-innovative-3d-printed-insert-designed-to-enable-straightforward-2d

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Opisujemy platformę opartą na chipie do trójwymiarowej hodowli komórek w mikrobioreaktorach. Jeden chip może pomieścić do 10 Mio. komórek, które mogą być hodowane w precyzyjnie określonych warunkach pod kątem przepływu cieczy, ciśnienia tlenu itp. w sterylnym, zamkniętym obiegu.

Trójwymiarowa hodowla komórek na chipie w przepływowych mikrobioreaktorach

Zgłaszamy urządzenie i nową metodę badania komórek i embrionów. Pojedyncze komórki są precyzyjnie uporządkowane w układach mikrownękowych. Ich uwięzienie w 3D jest krokiem w kierunku środowisk 3D spotykanych w warunkach fizjologicznych i umożliwia orientację organelli. Kontrolując kształt komórki, ta konfiguracja minimalizuje zmienność zgłaszaną w standardowych testach.

Porządkowanie pojedynczych komórek i pojedynczych zarodków w zamknięciu 3D: nowe urządzenie do badań przesiewowych o wysokiej zawartości

W organizmach wielokomórkowych wydzielane rozpuszczalne czynniki wywołują reakcje różnych typów komórek w wyniku sygnalizacji parakrynnej. Systemy kohodowli typu insert oferują prosty sposób oceny zmian, w których pośredniczą wydzielane czynniki rozpuszczalne przy braku kontaktu komórka-komórka.

Opracowanie systemu kohodowli inkubacyjnej dwóch typów komórek przy braku kontaktu komórka-komórka

Tutaj opisujemy szybki i elastyczny protokół tworzenia sferoid 3D komórek poprzez agregację komórek. Można go łatwo dostosować do wielu typów komórek i nadaje się do stosowania w różnych zastosowaniach, w tym w testach migracji komórek, inwazji lub anoikis, a także do obrazowania i ilościowego określania interakcji komórka-macierz.

Wydajna i elastyczna metoda agregacji komórek do produkcji sferoidów 3D

Ten protokół opisuje platformę do produkcji samodzielnie składających się pierścieni tkankowych w różnych rozmiarach przy użyciu dostosowanej formy z tworzywa sztucznego wydrukowanej w 3D. Negatywy PDMS są utwardzane w formie wydrukowanej w 3D; następnie agaroza jest odlewana w utwardzonych negatywach PDMS. Komórki są wysiewane do powstałych studzienek agarozowych, gdzie agregują się w pierścienie tkankowe.

Wytwarzanie niestandardowych studzienek agarozowych do wysiewu komórek i samomontażu pierścieni tkankowych przy użyciu form drukowanych w 3D

Opracowaliśmy heterogeniczny model raka piersi składający się z unieśmiertelnionych komórek guza i fibroblastów osadzonych w biodrukowalnym biotuszu alginian/żelatyna. Model podsumowuje mikrośrodowisko guza in vivo i ułatwia tworzenie wielokomórkowych sferoid guza, dostarczając informacji na temat mechanizmów napędzających nowotworzenie nowotworów.

Biodrukowalny hydrożel alginianowo-żelatynowy 3D Systemy modelowe in vitro indukują tworzenie sferoidów komórkowych

Przedstawiamy procedurę kontrolowania początkowego kształtu klastra komórkowego w trójwymiarowej matrycy zewnątrzkomórkowej w celu uzyskania powtarzalnego formowania wzoru. Sześcienne urządzenie zawierające dwa różne hydrożele jest wykorzystywane do uzyskania wielokierunkowego obrazowania w celu tworzenia wzoru tkankowego.

Wstępna kontrola klastrów komórkowych 3D w hybrydowym urządzeniu do tworzenia sześcianów żelowych w celu tworzenia powtarzalnych wzorów

Opisujemy metodę konstruowania urządzeń do hodowli 3D i eksperymentowania z komórkami i organoidami wielokomórkowymi. Urządzenie to umożliwia analizę odpowiedzi komórkowych na sygnały rozpuszczalne w mikrośrodowiskach 3D ze zdefiniowanymi gradientami chemoatraktantu. Organoidy są lepsze niż pojedyncze komórki w wykrywaniu słabych hałaśliwych sygnałów.

Analiza 3D wielokomórkowych odpowiedzi na gradienty chemoatraktantu

Ten artykuł przedstawia protokół produkcji nowego typu substratu hodowlanego z setkami mikropojemników namm2, w których organoidy mogą być hodowane i obserwowane za pomocą mikroskopii o wysokiej rozdzielczości. Szczegółowo opisano również protokoły wysiewu komórek i barwienia immunologicznego.

Wysokoprzepustowa platforma do hodowli i obrazowania 3D organoidów

To badanie przedstawia opłacalną i efektywną metodologię generowania struktur komórkowych 3D za pomocą systemu opartego na stemplach do tworzenia mikrostudzienek w formach agarozowych. System sprzyja tworzeniu się jednolitych sferoidów/organoidów, poprawiając w ten sposób interakcje komórkowe. Takie podejście zmniejsza zmienność eksperymentalną i wspiera zastosowania w testowaniu leków i inżynierii tkankowej.

Generowanie trójwymiarowych sferoidów/organoidów z dwuwymiarowych kultur komórkowych przy użyciu nowatorskiego urządzenia do stemplowania

Poznaj innowacyjną wkładkę drukowaną w 3D do hodowli komórkowych 2D i 3D. Ta metoda umożliwia badanie komunikacji między keratynocytami a komórkami śródbłonka z zachowaniem wysokiej żywotności.

Innowacyjna wkładka drukowana w 3D zaprojektowana z myślą o prostych hodowlach komórkowych 2D i 3D

Przeglądaj więcej filmów