Name: Bioluminescencyjne monitorowanie przeżywalności przeszczepu w adoptywnym modelu transferowym cukrzycy autoimmunologicznej u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: Poznaj bioluminescencyjną metodę monitorowania przeżywalności przeszczepu komórek NIT-1 w modelu cukrzycy typu 1 u myszy NOD-SCID. Ta technika umożliwia badanie mechanizmów autoimmunologicznych ataków i identyfikację celów terapeutycznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dziękujemy dr Erica P. Cai i dr Yuki Ishikawa za opracowanie metody opisanej w tym protokole (patrz odnośnik 11). Badania w laboratoriach S.K. i P.Y. są wspierane przez granty z National Institutes of Health (NIH) (R01DK120445, P30DK036836), JDRF, Harvard Stem Cell Institute i Beatson Foundation. T.S. był wspierany przez stypendium podoktorskie z National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases (NIDDK) (T32 DK007260-45), a K.B. był częściowo wspierany przez stypendium Fundacji Mary K. Iacocca.

<ol><li>Katsarou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+1+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Type 1 diabetes mellitus.</a> Nature Reviews Disease Primers. 3, 17016(2017).</li>
<li>Shapiro, A. M., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+pancreatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nature Reviews Endocrinology. 13 (5), 268-277 (2017).</li>
<li>Pagliuca, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+functional+human+pancreatic+beta+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Generation of functional human pancreatic beta cells in vitro.</a> Cell. 159 (2), 428-439 (2014).</li>
<li>Russ, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+induction+of+human+pancreatic+progenitors+produces+functional+beta-like+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Controlled induction of human pancreatic progenitors produces functional beta-like cells in vitro.</a> EMBO Journal. 34 (13), 1759-1772 (2015).</li>
<li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+diabetes+with+insulin-producing+cells+derived+in+vitro+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Reversal of diabetes with insulin-producing cells derived in vitro from human pluripotent stem cells.</a> Nature Biotechnology. 32 (11), 1121-1133 (2014).</li>
<li>Vertex Announces Positive Day 90 Data for the First Patient in the Phase 1_2 Clinical Trial Dosed With VX-880, a Novel Investigational Stem Cell-Derived Therapy for the Treatment of Type 1 Diabetes. Businesswire. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.businesswire.com/news/home/20211018005226/en/Vertex-Announces-Positive-Day-90-Data-for-the-First-Patient-in-the-Phase-12-Clinical-Trial-Dosed-With-VX-880-a-Novel-Investigational-Stem-Cell-Derived-Therapy-for-the-Treatment-of-Type-1-Diabetes">https://www.businesswire.com/news/home/20211018005226/en/Vertex-Announces-Positive-Day-90-Data-for-the-First-Patient-in-the-Phase-12-Clinical-Trial-Dosed-With-VX-880-a-Novel-Investigational-Stem-Cell-Derived-Therapy-for-the-Treatment-of-Type-1-Diabetes</a> (2021).</li>
<li>Gamble, A., Pepper, A. R., Bruni, A., Shapiro, A. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+journey+of+islet+cell+transplantation+and+future+development%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">The journey of islet cell transplantation and future development.</a> Islets. 10 (2), 80-94 (2018).</li>
<li>Pearson, J. A., Wong, F. S., Wen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+Non+Obese+Diabetic+%28NOD%29+mouse+model+in+autoimmune+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">The importance of the Non Obese Diabetic (NOD) mouse model in autoimmune diabetes.</a> Journal of Autoimmunity. 66, 76-88 (2016).</li>
<li>Hamaguchi, K., Gaskins, R. H., Leiter, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIT-1%2C+a+pancreatic+%CE%B2-cell+line+established+from+a+transgenic+NOD%2FLt+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">NIT-1, a pancreatic β-cell line established from a transgenic NOD/Lt mouse.</a> Diabetes. 40 (7), 842-849 (1991).</li>
<li>Christianson, S. W., Shultz, L. D., Leiter, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptive+transfer+of+diabetes+into+immunodeficient+NOD-scid%2Fscid+mice%3A+Relative+contribution+of+CD4%2B+and+CD8%2B+T-cells+from+diabetogenic+versus+prediabetic+NOD.NON-Thy1a+donors%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Adoptive transfer of diabetes into immunodeficient NOD-scid/scid mice: Relative contribution of CD4+ and CD8+ T-cells from diabetogenic versus prediabetic NOD.NON-Thy1a donors.</a> Diabetes. 42 (1), 44-55 (1993).</li>
<li>Cai, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+in+vivo+CRISPR+screen+identifies+RNLS+as+a+target+for+beta+cell+protection+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Genome-scale in vivo CRISPR screen identifies RNLS as a target for beta cell protection in type 1 diabetes.</a> Nature Metabolism. 2 (9), 934-945 (2020).</li>
<li>Parent, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+deletion+of+human+leukocyte+antigens+protects+stem+cell-derived+islets+from+immune+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Selective deletion of human leukocyte antigens protects stem cell-derived islets from immune rejection.</a> Cell Reports. 36 (7), 109538(2021).</li>
<li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+acute+xenogeneic+graft-versus-host+disease%2C+but+retention+of+T-cell+function+following+engraftment+of+human+peripheral+blood+mononuclear+cells+in+NSG+mice+deficient+in+MHC+class+I+and+II+expression%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Lack of acute xenogeneic graft-versus-host disease, but retention of T-cell function following engraftment of human peripheral blood mononuclear cells in NSG mice deficient in MHC class I and II expression.</a> FASEB Journal. 33 (3), 3137-3151 (2019).</li>
<li>Abdulreda, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+type+1+diabetes+immunopathology+using+eye-transplanted+islets+in+NOD+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of type 1 diabetes immunopathology using eye-transplanted islets in NOD mice.</a> Diabetologia. 62 (7), 1237-1250 (2019).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie pozostają w konflikcie interesów.

Cukrzyca typu 1 jest wyniszczającą chorobą, na którą obecnie nie ma lekarstwa. Terapia zastępcza komórek beta stanowi obiecujące leczenie dla pacjentów z tą chorobą, ale krytyczną barierą dla tej strategii jest możliwość nawrotu ataku autoimmunologicznego na przeszczepione komórki beta. Inżynieria genetyczna komórek SC-beta w celu zmniejszenia ich widoczności immunologicznej lub podatności jest jednym z potencjalnych rozwiązań tego problemu. Opisano tutaj protokół nieinwazyjnego obrazowania przeszczepionych komórek beta ...

Cukrzyca typu 1 (T1D) jest spowodowana autoimmunologicznym niszczeniem komórek beta trzustki produkujących insulinę. Utrata masy komórek beta powoduje niedobór insuliny i hiperglikemię. Pacjenci z cukrzycą typu 1 polegają na wielu codziennych zastrzykach insuliny egzogennej i doświadczają epizodów ciężkiej hiperglikemii i hipoglikemii przez całe życie. Powikłania związane z tymi epizodami obejmują retinopatię cukrzycową, upośledzoną czynność nerek i neuropatię1.
Zastrzyki z insuliny są lekiem, ale nie lekarstwem na cukrzycę typu 1. Zastąpienie utraconej masy komórek beta może jednak potencjalnie odwrócić chorobę, umożliwiając pacjentom wytwarzanie własnej insuliny. Jednak podaż wysepek dawców zwłok jest ograniczona2. Wysepki pochodzące z komórek macierzystych (wysepki SC) mogą zapewnić praktycznie nieograniczoną podaż komórek beta do przeszczepu. Kilka grup wykazało, że ludzkie embrionalne komórki macierzyste (ESC) i indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste (iPSC) mogą być różnicowane w celu wytworzenia funkcjonalnych komórek podobnych do beta3,4,5. Obiecujące dane z wczesnych badań klinicznych wskazują, że komórki te zachowują swoją funkcję po przeszczepie i mogą umożliwić pacjentom stanie się niezależnymi od insuliny6. Konieczna jest jednak przewlekła immunosupresja, co zwiększa ich podatność na raka i infekcje. Ponadto leki immunosupresyjne mogą być cytotoksyczne dla przeszczepów w dłuższej perspektywie7. Aby wyeliminować potrzebę immunosupresji, wysepki SC mogą być genetycznie modyfikowane w celu ochrony przed nawracającymi chorobami autoimmunologicznymi, a także alloimmunologią po przeszczepie.
Badania nad komórkami macierzystymi są bardzo wymagające pod względem kosztów i pracy. Mysie linie komórkowe i modele zwierzęce są użytecznymi narzędziami do wstępnej identyfikacji i eksperymentalnej walidacji strategii ochrony przeszczepionych komórek przed autoimmunizacją. U myszy NOD rozwija się spontaniczna cukrzyca autoimmunologiczna z wieloma podobieństwami do ludzkiej cukrzycy typu 1 < klasa = "xref">8, a linia komórkowa insulinoma NIT-1 dzieli tło genetyczne z tym szczepem myszy 9. Cukrzyca może być adoptywnie przeniesiona na pokrewny szczep myszy NOD-scid z niedoborem odporności poprzez wstrzyknięcie splenocytów cukrzycowych od myszy NOD w celu czasowej synchronizacji początku cukrzycy u replikowanych myszy eksperymentalnych10. Model ten może być wykorzystany do stosunkowo szybkiej i niedrogiej identyfikacji celów genetycznych w celu dalszej walidacji na wyspach SC. Ostatnio metoda ta została zastosowana do identyfikacji i walidacji RNLS, celu, który okazał się chronić pierwotne ludzkie wyspy trzustkowe przed autoimmunizacją in vivo oraz wyspy trzustkowe pochodzące z iPSC przed stresem komórek beta in vitro11. Opisano tutaj prosty protokół przeszczepiania genetycznie modyfikowanych komórek NIT-1 i nieinwazyjnego monitorowania ich przeżycia w adoptywnym modelu transferowym cukrzycy autoimmunologicznej u myszy.

<table><tbody><tr><td>0,05% trypsyna, 0,53 mM EDTA</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>293FT</td><td>Invitrogen</td><td>R70007</td><td>Szybko rosnący, wysoce transfekcyjny izolat klonalny pochodzący z ludzkich embrionalnych komórek nerkowych przekształconych za pomocą dużego antygenu T SV40</td></tr><tr><td>ACK Lysing Buffer</td><td>Gibco</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>Podkładki nasączone alkoholem, 70% alkoholu izopropylowego</td><td>B08NWF31DX pierwszej pomocy Amazon/Ever Ready</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka BD 5ml Końcówka Luer-Lok Igła do strzykawek</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide 26G x 5/8 (0,45 mm x 16 mm) Sub-Q</td><td>BD</td><td>305115</td><td></td></tr><tr><td>BD 1 mL TB Końcówka strzykawkowa</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Blasticidin S HCl</td><td>Corning</td><td>&nbsp; 30-100-RB</td><td></td></tr><tr><td>Sitko komórkowe premium SureStrain, 70 &micro; m, sterylne</td><td>Southern Labware</td><td>C4070</td><td>Lub użyj podobnego sterylnego sitka o wielkości porów 40-70um</td></tr><tr><td>Automatyczny licznik komórek CellDrop</td><td>Denovix</td><td>CellDrop BF-PAYG</td><td>Lub użyj podobnego urządzenia do liczenia komórek</td></tr><tr><td>Corning 100 ml roztworu penicyliny-streptomycyny, 100x</td><td>Corning</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>Jednorazowe pipety aspiracyjne, polistyren, sterylne, pojemność = 2 ml</td><td>VWR</td><td>414004-265</td><td>Lub użyj podobnej pipety zasysającej</td></tr><tr><td>D-Lucyferin, Sól potasowa, Klasa biologii molekularnej, Proszek, >99%</td> <td>Goldbio</td><td>LUCK-100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, wysoka glukoza, pirogronian, bez glutaminy</td><td>Probówki Gibco</td><td>10313039</td><td></td></tr><tr><td>Falcon BD, 50 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-49A</td><td></td></tr><tr><td>Surowica bydlęca</td><td>płodu Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze premium do tkanek, 1 x 2 zęby 5 cali, German</td><td>Steel Fisher Scientific</td><td>13-820-074</td><td></td></tr><tr><td>Pasek testowy glukozy w moczu</td><td>California Pet Pharmacy</td><td>u-tsg100</td><td>Lub użyj podobnego paska testowego do pomiarów glukozy w moczu/krwi</td></tr><tr><td>GlutaMAX&ndash; 1 (100x)</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Lampa grzewcza na podczerwień</td><td>Cole Parmer</td><td>03057-00</td><td>Lub użyj podobnej lampy na podczerwień&nbsp;</td></tr><tr><td>Strzykawka insulinowa 0,5 mL, U-100 29 G 0,5 w</td><td>Becton Dickinson</td><td>309306</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane, USP</td><td>Piramal Critical Care</td><td>6679401725</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Spectrum system obrazowania in vivo</td><td>Perkin Elmer</td><td>124262</td><td>Instrument do nieinwazyjnego zbierania bioluminescencyjnych obrazów przeszczepionych komórek</td></tr><tr><td>Oprogramowanie do analizy żywego obrazu</td><td>Perkin Elmer</td><td>128113</td><td>Oprogramowanie do zbierania i ilościowego oznaczania sygnału bioluminescencyjnego</td></tr><tr><td>Probówki do mikrowirówek seal-rite, 1,5 ml</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5510</td><td>Lub użyj podobnych sterylnych probówek do mikrowirówek</td></tr><tr><td>NIT-1</td><td>ATCC</td><td>CRL-2055</td><td>Trzustkowa linia beta-celll pochodząca od myszy NOD / Lt</td></tr><tr><td>NOD. Cg-Prkdcscid/J</td><td>Myszy z 001303 Jackson Laboratory</td><td></td><td>homozygotyczne pod względem ciężkiej spontanicznej mutacji złożonego niedoboru odporności&nbsp; Prkdcscid, potocznie określany jako&nbsp; scid, charakteryzują się brakiem funkcjonalnych limfocytów T i limfocytów B, limfopenią, hipogammaglobulinemią i normalnym mikrośrodowiskiem krwiotwórczym.</td></tr><tr><td>NOD/ShiLtJ</td><td>Laboratorium Jacksona</td><td>001976</td><td>Szczep myszy NOD/ShiLtJ (powszechnie nazywany NOD) jest poligenicznym modelem autoimmunologicznej cukrzycy typu 1</td></tr><tr><td>PBS, pH 7,4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010031</td><td>Bez wapnia, bez magnezu, bez czerwieni fenolowej</td></tr><tr><td>pCMV-VSV-G</td><td>Addgene</td><td>8454</td><td></td></tr><tr><td>pLenti-lucyferazy-blast</td><td>Wykonany we własnym</td> zakresie <td>Plazmid dostępny na życzenie</td><td>Zobacz plik uzupełniający 1</td></tr><tr><td>pMD2.G</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>pMDLg/pRRE</td><td>Addgene</td><td>12251</td><td></td></tr><tr><td>Polietyleninina, liniowa, MW 25 000, klasa transfekcji (PEI 25K)</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1014320</td><td></td></tr><tr><td>pRSV-Rev</td><td>Addgene</td><td>12253</td><td></td></tr><tr><td>Ogranicznik dla gryzoni, runda 1 w stylu miotły w</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-288-32A</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki z ostrym zakończeniem</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-940</td><td>Lub użyj innych nożyczek wykonanych z chirurgicznej stali nierdzewnej</td></tr><tr><td>Naczynia hodowlane poddane kulturom tkankowym</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS430167-20EA</td><td>Lub użyj innych sterylnych szalek Petriego poddanych hodowli komórkowych</td></tr><tr><td>Pęseta/Kleszcze, precyzyjna ze średnią końcówką</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-000-157</td><td></td></tr></tbody></table>

bioluminescencyjne monitorowanie przeżywalności przeszczepu w adoptywnym modelu transferowym cukrzycy autoimmunologicznej u myszy

Bioluminescent Monitoring of Graft Survival in an Adoptive Transfer Model of Autoimmune Diabetes in Mice

Cukrzyca typu 1 charakteryzuje się autoimmunologicznym niszczeniem komórek beta trzustki produkujących insulinę. Obiecującym sposobem leczenia tej choroby jest przeszczepienie komórek beta pochodzących z komórek macierzystych. Modyfikacje genetyczne mogą być jednak konieczne w celu ochrony przeszczepionych komórek przed uporczywą autoimmunizacją. Mysie modele z cukrzycą są użytecznym narzędziem do wstępnej oceny strategii ochrony przeszczepionych komórek przed atakiem autoimmunologicznym. Opisano tutaj minimalnie inwazyjną metodę przeszczepiania i obrazowania przeszczepów komórkowych w adoptywnym modelu transferu cukrzycy u myszy. W tym protokole komórki z mysiej linii komórek beta trzustki NIT-1 eksprymujących transgen lucyferazy świetlika lucyferazy lucyferazy luc2 są przeszczepiane podskórnie do myszy z niedoborem odporności bez otyłości (NOD) z ciężkim złożonym niedoborem odporności (scid). Myszom tym jednocześnie wstrzykuje się dożylnie splenocyty od spontanicznie chorych na cukrzycę myszy NOD w celu przeniesienia autoimmunizacji. Przeszczepy są obrazowane w regularnych odstępach czasu za pomocą nieinwazyjnego obrazowania bioluminescencyjnego w celu monitorowania przeżycia komórek. Przeżywalność zmutowanych komórek jest porównywana z przeżywalnością komórek kontrolnych przeszczepionych tej samej myszy.

Przegląd protokołu przedstawiono na Rysunku 1. Można porównać przeżywalność dwóch linii komórkowych, np. mutanta i kontroli nietarczującej (non-targeting control), lub zmierzyć przeżywalność jednej linii komórkowej w wielu grupach myszy, np. myszy leczone lekiem w porównaniu z kontrolami leczonymi nośnikiem (vehicle). Rysunek 3A przedstawia trzy 8-tygodniowe samice myszy NOD-scid z przeszczepioną linią komórkową kontrolną nietarczującą (lewa strona) oraz mutante...

Ten protokół opisuje prostą i minimalnie inwazyjną metodę przeszczepiania i obrazowania komórek NIT-1 u myszy z nieotyłym cukrzycą (NOD) z ciężkim niedoborem odporności, którym podano splenocyty oczyszczone z myszy NOD z spontaniczną cukrzycą.

Bioluminescencyjne monitorowanie przeżywalności przeszczepu w adoptywnym modelu transferowym cukrzycy autoimmunologicznej u myszy

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease ...

Protokół ten może pomóc w zrozumieniu mechanizmów ochrony przed atakami autoimmunologicznymi i identyfikacji celów terapeutycznych dla wymiany komórek beta w cukrzycy typu pierwszego. Główną zaletą tej techniki jest stosunkowo niski koszt, prostota metod hodowli komórek, przeszczepu i obrazowania, a także minimalna inwazyjność technik mysich. Osoby, które nigdy wcześniej nie wykonywały iniekcji do żyły ogonowej, mogą mieć trudności z wprowadzeniem igły do żyły.Należy poprosić o demonstrację przez eksperta przed pierwszym wstrzyknięciem. Na początek weź znieczuloną mysz i usuń włosy z jej grzbietowej strony za pomocą golarki elektrycznej z osłoną, odsłaniając około jednego cala na dwa cale skóry. Umieść ogoloną mysz z powrotem w komorze do powalania.Przed przeszczepem przenieś po jednej myszy na raz z komory na czystą powierzchnię wyposażoną w stożek nosowy z izofluranem i delikatnie wprowadź głowę myszy do stożka nosowego. Przetrzyj ogolony obszar wacikiem nasączonym alkoholem izopropylowym, aby usunąć luźne włosy i zdezynfekować skórę. Następnie pobierz ponad 300 mikrolitrów zawiesiny komórkowej do sterylnej strzykawki o pojemności jednego mililitra wyposażonej w igłę o rozmiarze

bioluminescent-monitoring-graft-survival-an-adoptive-transfer-model

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Opisano metodę niezawodnego przeszczepiania ludzkich komórek złośliwego guza pochewki nerwów obwodowych znakowanych lucyferazą do nerwu kulszowego myszy z niedoborem odporności. Omówiono również wykorzystanie obrazowania bioluminescencyjnego do wykazania prawidłowego przyjęcia przeszczepów nowotworowych oraz kryteria losowego przydziału zwierząt do grup badawczych.

Ortotopowe ksenoprzeszczepy ludzkich komórek złośliwego guza osłonki nerwów obwodowych znakowanych lucyferazą do testowania potencjalnych środków terapeutycznych in vivo

Niniejszy film prezentuje zastosowanie obrazowania bioluminescencyjnego in vivo do badania odpowiedzi immunologicznych po implantacji sztucznie wyhodowanej tkanki serca (EHT) u szczurów.

Obrazowanie bioluminescencyjne do oceny odpowiedzi immunologicznej po implantacji inżynieryjnej tkanki serca (EHT)

Przeszczepianie szpiku kostnego u myszy jest powszechnie stosowaną techniką badania mechanizmów immunologicznych sterujących chorobą przeszczep przeciw gospodarzowi u ludzi. Możliwość monitorowania wzorców migracji limfocytów T in vivo pozwala na szczegółową analizę rozwoju i utrwalania odpowiedzi limfocytów T podczas choroby przeszczep przeciw gospodarzowi.

Indukcja choroby przeszczep przeciw gospodarzowi i monitorowanie limfocytów T in vivo z wykorzystaniem modelu mysiego dopasowanego pod kątem MHC

Ten film demonstruje ortotopowy model raka trzustki, który wykorzystuje Matrigel do miejscowego dostarczania komórek i obrazowania bioluminescencji in vivo do nieinwazyjnego monitorowania progresji guza. Model ortotopowy jest odpowiedni zarówno dla modeli syngenicznych, jak i ksenoprzeszczepów i może być wykorzystany w badaniach przedklinicznych w celu zbadania wpływu nowych terapii przeciwnowotworowych na wzrost pierwotnego guza trzustki i przerzuty.

Bioluminescencyjny ortotopowy model myszy raka trzustki: nieinwazyjna technika monitorowania progresji raka u myszy

Ten film demonstruje metodę opartą na obrazowaniu, aby zwizualizować przeszczepione komórki beta z ekspresją lucyferazy do nieotyłej myszy z cukrzycą z niedoborem odporności. Wprowadzenie splenocytów od myszy z cukrzycą prowadzi do postępującego niszczenia komórek beta, co jest wizualnie potwierdzone spadkiem luminescencji po wprowadzeniu substratu.

Obrazowanie transgenicznych komórek beta u myszy z niedoborem odporności i prowokacją ze splenocytami cukrzycowymi

Źródło: Clark, A.J., et al. Obrazowanie bioluminescencyjne immunokompetentnego modelu zwierzęcego glejaka. J. Vis. Exp. (2016)Ten film przedstawia obrazowanie bioluminescencyjne w celu śledzenia progresji glejaka w immunokompetentnym modelu myszy, przy użyciu komórek nowotworowych eksprymujących lucyferazy i lucyferyny do nieinwazyjnego ilościowego określenia wzrostu guza.

Obrazowanie bioluminescencyjne immunokompetentnego mysiego modelu glejaka

Lepsze zrozumienie biologii raka trzustki jest niezwykle potrzebne, aby umożliwić opracowanie lepszych opcji terapeutycznych w leczeniu raka trzustki. Aby odpowiedzieć na tę potrzebę, demonstrujemy ortotopowy model raka trzustki, który umożliwia nieinwazyjne monitorowanie progresji raka za pomocą obrazowania bioluminescencyjnego in vivo.

Bioluminescencyjny ortotopowy model progresji raka trzustki

Komórki glejaka GL261 dostarczają użytecznego immunokompetentnego modelu zwierzęcego glejaka. Celem tego protokołu jest zademonstrowanie właściwych technik monitorowania wzrostu guza wewnątrzczaszkowego za pomocą obrazowania bioluminescencyjnego in vivo oraz zweryfikowanie użyteczności komórek GL261 zmodyfikowanych lucyferazą do badania immunologii guza i podejść immunoterapeutycznych w leczeniu glejaka.

Obrazowanie bioluminescencyjne immunokompetentnego modelu zwierzęcego glejaka

Tutaj używamy obrazowania bioluminescencyjnego, rentgenowskiego i pozytonowej tomografii emisyjnej/tomografii komputerowej, aby zbadać, jak hamowanie aktywności mTOR wpływa na guzy szpiczaka kostnego przeszczepionego szpiczakiem kostnym w modelu ksenoprzeszczepu. Pozwala to na fizjologicznie istotne, nieinwazyjne i multimodalne analizy działania przeciwszpiczaka mózgu terapii ukierunkowanych na guzy szpiczaka kostnego przeszczepione szpiczakiem kostnym in vivo.

Multimodalna bioluminescencyjna i pozytroniczna tomografia emisyjna/tomografia obliczeniowa ksenoprzeszczepów szpiczaka mnogiego szpiku kostnego u myszy NOG

Choroba przeszczep przeciwko gospodarzowi jest poważnym powikłaniem po allogenicznym przeszczepie szpiku kostnego. Komórki dendrytyczne odgrywają kluczową rolę w patogenezie choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi. W niniejszym artykule opisano nowatorską platformę przeszczepu szpiku kostnego w celu zbadania roli komórek dendrytycznych w rozwoju choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi i efektowi przeszczep przeciwko białaczce.

Platforma do przeszczepiania szpiku kostnego w celu zbadania roli komórek dendrytycznych w chorobie przeszczep przeciwko gospodarzowi

Celem tego protokołu jest ciągłe monitorowanie dynamiki procesu wszczepiania ludzkich wysp trzustkowych oraz komórek gospodarza i dawcy. Osiąga się to poprzez przeszczepienie ludzkich wysp trzustkowych do przedniej komory oka (ACE) NOD. (Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4-Rag2-/-mysz, a następnie wielokrotne obrazowanie 2-fotonowe.

Podłużne obrazowanie in vivo i kwantyfikacja przeszczepu ludzkich wysp trzustkowych i komórek gospodarza w przedniej komorze oka

Poznaj bioluminescencyjną metodę monitorowania przeżywalności przeszczepu komórek NIT-1 w modelu cukrzycy typu 1 u myszy NOD-SCID. Ta technika umożliwia badanie mechanizmów autoimmunologicznych ataków i identyfikację celów terapeutycznych.

Bioluminescencyjne monitorowanie przeżywalności przeszczepu w adoptywnym modelu transferowym cukrzycy autoimmunologicznej u myszy (Wideo) | JoVE Journal

Bioluminescencyjne monitorowanie przeżywalności przeszczepu w adoptywnym modelu transferowym cukrzycy autoimmunologicznej u myszy

Przeglądaj więcej filmów